Anda di halaman 1dari 9

BAB 1

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Satu tetes darah, satu kantong darah bisa menyelamatkan satu kehidupan, satu nyawa
manusia dengan donor darah. Karena itu setiap pendonor diberikan pengetahuan tentang
darah, cara menjadi donor darah yang berguna dan proses pengolahan donor darah, syarat
donor darah yang baik, seleksi donor, alur donor darah di PMI.
Donor darah diambil pada setiap orang sekitar 250ml, maksimal 450 ml. Darah yang
sudah terkumpul di Reagen (kantong darah) biasa didapatkan mobil unit PMI per harinya
600-800 kantung darah yang beredar, belum lagi yang donor darah langsung di PMI. Cukup
banyak kalau dilihat dari jumlahnya, namun semua darah itu harus melalui proses skrining
IMLTD/Infeksi Menular Lewat Transfusi (pemeriksaan sekorologi darah).
Terdapat dua metode dalam penyaringan darah yaitu NAT dan CLIA, NAT untuk
memeriksa virus dalam darah dan metode CLIA untuk mendeteksi anti bodi dalam darah.
Proses IMLTD berlangsung kurang lebih 8-10 jam dan akan menghasilkan komponen darah
PRC (darah merah pekat), WB (darah lengkap), TC (trombosit pekat), FFP(fresh frozen
plasma) biasanya untuk pasien kanker atau luka bakar, AHF, WE, PRC rendah, Leukosit,
Cairan Plasma, Buffy coat.
Adanya pelayanan BPJS Kesehatan maupun Ketenagakerjaan, kini kebutuhan darah
meningkat. Sehingga dibutuhkan peningkatan kualitas pelayanan darah tidak hanya
kecepatan dan efisensi tapi juga keamanannya. Caranya, screening darah PMI akan
menggunakan metoda baru, yakni Chemiluminescence Immuno Assay (CLIA). Sebelumnya
PMI melakukan screening darah yang akan diberikan kepada pasien menggunakan
metoda enzym linked immuno sorbent assay (Elisa).
Belakangan diketahui metoda CLIA lebih unggul dibanding Elisa ketika
dimanfaatkan untuk meneliti kandungan HIV, HCV, HBSAG, dan Siphilis di dalam darah
dari pendonor. PMI Kota Magelang telah membuktikan, salah satu dari empat jenis penyakit
lolos dari Elisa ternyata ketahuan ketika di-screening menggunakan metoda Clia. Untuk bisa
menyaring darah menggunakan metoda Clia dibutuhkan alat modern berharga sekitar Rp 2,5
miliar.

1
Bagi PMI yang memberikan atau meminta darah tidak ragu atas kualitas darah yang
diberikan atau diminta. ‘’Metoda Clia selangkah lebih maju dibanding Elisa. Kita perlu
berembuk untuk mendapatkan kesepakatan yang baik,’’kata Direktur UDD PMI Kota
Magelang, dokter Panca Kuncoro. Dia menambahkan, dengan Sehubungan dengan itu PMI
Kota Magelang sejak 1 Juni menggunakan metoda Clia. Tujuannya untuk meningkatkan
mutu layanan transfusi darah. Karena itu menarik untuk dikaji masalah metode CLIA dalam
pemeriksaan darah.
B. Rumusan Masalah
Adapun rumusan masalah dalam makalah ini adalah:
1. Apa yang dimaksud dan bagaimana prinsip kerja dari metode CLIA?
2. Bagaimana perbandingan metode CLIA dan ELISA?
3. Apa saja kelebihan dari metode CLIA?
C. Tujuan
Adapun tujuan dari makalah ini adalah:
1. Untuk dapat memahami prinsip kerja dari metode CLIA.
2. Untuk dapat memahami perbandingan metode CLIA dan ELISA.
3. Untuk dapat memahami kelebihan dari metode CLIA.

2
BAB II
PEMBAHASAN

A. Metode CLIA (Chemiluminescence Immunoassay)

Metoda CLIA dalam uji saring darah menggunakan substrat chemiluminescent yang
bereaksi dengan berbagai enzim yang digunakan untuk penanda. Metode ini sangat populer
karena tingginya sensitivitas serta limit deteksi yang rendah.

Reaksi chemiluminescence enzimatik nantinya akan menghasilkan cahaya. Saat ini


sistemnya menggunakan derivatif dari luminol dengan peroksidase dan H2O2 atau sistem
enzimatik lainnya yang menghasilkan H2O2. Lalu ditambah penambah turunan dari fenol,
seperti p-iodofenol, yang meningkatkan emisi cahaya sampai 2.800 kali.

Inkubasi
Pembuatan kurva standar dari e Blocking
sampel antigen yang konsentrasinya
Penambahan protein
telah diketahui pada plate mikrotiter
pekat (Bovine Serum
Albumin)

Penambahan serum yang


Pencucian plate Inkubasi kadar asam uratnya akan
diamati

Penambahan Pencucian plate Masukan ke dalam alat


antibodi sekunder kromogenik

Masukan ke dalam spektrofotometer untuk uji kuantitatif Amati

3
Reaksi luminol oksidatif mungkin menandakan pertumbuhan jumlah gangguan
spesifik. Sistem lain menggunakan turunan dari alkaline phosphatase dan adamantyl
dioxetane, AMPPD, yang tidak memerlukan emisi cahaya dari molekul lain, berbeda dengan
luminol membutuhkan senyawa oksidatif. AMPPD substrat adalah panel dari kelompok
adamantyl sebagai stabilizer dari seluruh molekul, link dioxetane sebagai sumber energi,
ester fosforil sebagai situs untuk belahan enzimatik dan kelompok fenil untuk
chemiluminescence. substrat baru ini dimungkinkan pengembangan tes yang sangat sensitif
tes RIA sensitivitas superior (~ 0,1 pg / mL)
Tes immunochemical dalam uji saring darah dengan deteksi oleh
electrochemiluminiscenta didasarkan pada penggunaan kompleks ruthenium (II) tris
(bipyridyl) [Ru (BPY) 3] 2+ dengan tripropylamine (TPA) yang menghasilkan cahaya
sehubungan dengan siklus elektrokimia reaksi reduksi oksidasi : Ru (BPY) 32+ memiliki
situs reaktif untuk konjugasi dengan analit. Ini digunakan untuk mengaktifkan agen, seperti
N-Hydroxysuccinimide (NHS). Karena agen dapat dengan mudah digabungkan dengan
kelompok amino dari protein, haptens atau asam nukleat. Hal ini dimungkinkan untuk
menerapkan teknologi dalam berbagai analit.
Emisi cahaya dimulai dengan menerapkan kompleks imun tegangan listrik (termasuk
Ru kompleks) yang melekat pada mikropartikel dilapisi streptavidin. Keuntungan dari listrik
memulai reaksi chemiluminescent adalah bahwa seluruh reaksi dapat tepat dikontrol. Ada
tiga prinsip metode:
1. The "sandwich"
Sampel pasien awal dicampur dengan Ac Ac ditambah dengan biotin dan diberi
label dengan Ru (konjugat); Setelah inkubasi campuran dilapisi mikropartikel
paramagnetik menambahkan streptavidin (fase padat); Setelah inkubasi kedua campuran
reaksi disedot ke dalam sel pengukuran, dan konjugasi gratis dihapus; masih
menggunakan listrik untuk merangsang ruthenium dan menghasilkan sinyal yang akan
memungkinkan deteksi kompleks Ag-Ab; jumlah cahaya yang dihasilkan berbanding lurus
dengan jumlah Ag dalam sampel.

4
2. Prinsip Kompetitif
Spesimen awal yang dicampur dan Ag ditambah dengan biotin; Setelah inkubasi
pertama menambahkan Ac terkonjugasi dengan Ru kompleks dan dilapisi streptavidin
mikropartikel paramagnetik; Ac terkonjugasi pasangan dengan situs masih kosong dari
terbiotinilasi Ag, dan seluruh mikropartikel kompleks mengikat interaksi streptavidin-
biotin melalui; Setelah inkubasi kedua campuran reaksi dilewatkan ke dalam sel
pengukuran; kompleks imun magnetik bergerak pada permukaan elektroda dan komponen
terikat dihapus dengan mencuci; Reaksi chemiluminescence dirangsang secara elektrik,
dan jumlah cahaya yang dihasilkan berbanding terbalik dengan konsentrasi Ag dalam
sampel. The "bridging" mirip dengan "sandwich", tetapi dimaksudkan untuk mendeteksi
Ac dan termasuk Ag dan Ag-label terbiotinilasi Ru.
B. Perbandingan Prinsip Kerja CLIA dan ELISA
Prinsip EIA dan CLIA adalah sama. Perbedaannya hanya dalam model deteksi dari
kompleks imun yang terbentuk, yakni terbentuknya warna pada EIA dan pengukuran cahaya
yang terbentuk oleh reaksi kimia pada CLIA.
Sistem reseptor ELISA dan EIA mengukur konsentrasi substansi sangat rendah
hingga beberapa nanograms (10-9 gram). Sensitifitas ini tidak cukup untuk mendeteksi
beberapa substansi dan metode alternatif yang telah ditemukan salah satunya adalah CLIA
yang mana dapat mengukur konsentrasi dalam femtogram. CLIA bergantung pada deteksi
sinar yang dipancarkan dan diasosiasikan dengan penghilangan energy dari substansi
elektronik sebagai akibat reaksi elektrokimia. Sebuah contoh dari bekas chemiluminescent
adalah ester konjugasi dari acridinium, terhadap protein, polipeptida, dan molekul organic
lainnya.
CLIA hampir sama dengan teknik EIA dan ELISA kecuali bahwa pengujian enzim
reseptor akhir digantikan dengan bekas chemiluminescent diikuti oleh pengukuran dari emisi
cahaya sebagai akibat dari reaksi kimia. EIA, dengan sensitifitas yang tinggi akan mendeteksi
petanda target dari infeksi. Reagen yang telah dievaluasi dengan baik untuk tujuan diagnostik
maupun uji saring harus memenuhi standar. EIA dan CLIA cocok untuk pemeriksaan sampel
dalam jumlah besar dan membutuhkan beberapa peralatan khusus. Pemeriksaan ini bisa
dikerjakan secara manual atau sistem otomatik yang spesifik (sistem tertutup).

5
EIA dan CLIA mempunyai solid phase yang berbeda untuk melakukan imobilisasi
terhadap antigen atau antibodi. Umumnya solid phase yang digunakan adalah:
1. Bagian dasar atau sisi dari microwell polystirene
2. Bagian permukaan dari polystyrene atau bahan lain
3. Microparticle
4. Permukaan dari alat disposable khusus yang digunakan pada sistem reagen otomatik,
bervariasi tergantung pabrik, namun umumnya polystyrene.
C. Kelebihan CLIA
Metode CLIA merupakan metoda yang menggunakan deteksi sinar yang dipancarkan
dan diasosiasikan dengan penghilangan energi dari substansi elektronik sebagai akibat reaksi
elektrokimia. Adapun manfaat dan kelebihan metoda CLIA antara lain:
1. Kinerja uji yang lebih baik
Keuntungan dari metode ini adalah CLIA "kata sensitivitas dan jangkauan dinamis,
yang memungkinkan deteksi konsentrasi rendah analit, dan karena itu diagnosis awal
penyakit" (IVD Teknologi Oktober 2004). Monobind manfaat Luminol di reagen pencari
mereka, dalam rangka untuk meningkatkan kekuatan sinyal dan menciptakan
dugotrajajniju reaksi cahaya yang lebih kuat daripada yang disebabkan oleh substrat
lainnya. Oleh karena itu, metode tes ini lebih sensitif terhadap 100.000 kali dibandingkan
dengan metode ELISA.
Metode berbagai CLIA dinamis telah ditingkatkan dibandingkan dengan metode
ELISA memiliki jelas linearnošdu sposobnošdu dan diferensiasi sinyal. Bahkan,
sedangkan metode ELISA dapat tidak jelas Vedu Absorbance OD dari 3.0, yang
membutuhkan pengenceran sampel, metode CLIA dapat membaca tahu rentang dinamis,
yang secara signifikan meningkatkan tes linearitas. Juga, rendah "wallpaper", yaitu.
background memberikan kemungkinan interpretasi yang lebih jelas dari konsentrasi
rendah analit (metode CLIA memiliki sinyal / rasio kebisingan yang tinggi).
2. Usia komponen tes yang lebih lama
Substrat tes CLIA memiliki umur simpan dari 3 tahun, jauh lebih baik daripada tes
yang didasarkan pada metode RIA dan sejenisnya.

6
3. Hasil cepat diperoleh
Masa inkubasi berkurang dalam kaitannya dengan metode ELISA (biasanya 30 atau
bahkan lebih menit), dan dengan demikian meningkatkan waktu berguna teknisi dan
meningkatkan produktivitas mereka.
4. Prosedur tes mudah diadaptasi
Tes CLIA dilakukan dengan cara yang sama seperti tes ELISA. Satu-satunya
perbedaan adalah bahwa metode CLIA tidak ada solusi berhenti, dan semakin pendek
waktu inkubasi. Mengingat hal ini, kita dapat menyimpulkan bahwa itu adalah proses
yang sangat sederhana mengadaptasi pengguna ELISA tes. Beberapa sebab metode
CLIA perlu menjadi referensi dalam uji saring darah yaitu:
a. Keamanan dan keandalan hasil,
b. Plat identik untuk semua tes clia (memungkinkan bagi kombinasi tes yang berbeda),
c. Mencuci identik dan sinyal reagen untuk semua tes,
d. Tes clia memiliki kecepatan eksekusi 30-45 menit dibandingkan dengan uji elisa, yang
memberikan hasil dalam penerbitan periode sesingkat mungkin.
e. Sangat tepat dalam interpretasi rentang konsentrasi yang sangat rendah (tes sensitivitas
yang tinggi).
f. Interpretasi yang tepat dari zona konsentrasi tinggi penggunaan pendekatan kurva
software kalibrasi (tanpa perlu pengenceran sampel tambahan dan pengujian ulang)
g. Kalibrasi ulang kurva hanya dalam dua poin (hemat bahan kalibrasi dan reagen cangkir
piring)
h. Berbagai tes, dilengkapi panel combi (dengan kemungkinan pengguna untuk membuat
sendiri kombinasi yang paling tepat dari tes yang berbeda)

7
BAB III
PENUTUP
A. Kesimpulan
Adapun kesimpulan dari makalah ini adalah:
1. Metoda CLIA dalam uji saring darah menggunakan substrat chemiluminescent yang
bereaksi dengan berbagai enzim yang digunakan untuk penanda. Reaksi
chemiluminescence enzimatik nantinya akan menghasilkan cahaya. Lalu ditambah
penambah turunan dari fenol, seperti p-iodofenol, yang meningkatkan emisi
cahaya sampai 2.800 kali.
2. Prinsip EIA dan CLIA adalah sama. Perbedaannya hanya dalam model deteksi dari
kompleks imun yang terbentuk, yakni terbentuknya warna pada EIA dan pengukuran
cahaya yang terbentuk oleh reaksi kimia pada CLIA.
3. Adapun manfaat dan kelebihan metoda CLIA antara lain: kinerja uji yang lebih baik,
usia komponen tes yang lebih lama, hasil cepat diperoleh, prosedur tes mudah diadaptasi.

8
DAFTAR PUSTAKA

http://www.sfatulmedicului.ro/profile-analize/metode-automate-de-determinare-a-markerilor-
imunologici-74
http://kimiaunipa.blogspot.co.id/2010/06/aplikasi-klinik-enzim.html
http://spiritia.or.id/tj/bacatj.php?tjno=09112101
http://joevha.blogspot.co.id/2011/06/makalah-tentang-perlayanan-tranfusi.html
http://medilinux.blokspot.com/2009/2/koplikasi-transfusi-darah.html
http://analisqmateri.blogspot.co.id/2010/09/mikrositik.html