PENGARUH PERTUMBUHAN BAKTERI E.

coli TERHADAP
MEDIA KALDU LAKTOSA DENGAN BERBAGAI
KONSENTRASI

Muhamad Zalil Efendi, Rahma Dalia, Riani Zulisma Fitri, Yulpa Wulandari

Program Studi Biologi Fmipa Universitas Negeri Padang

ABSTRAK
Bakteri membutuhkan nutrisi, sumber energi dan kondisi lingkungan
tertentu untuk pertumbuhannya termasuk E.coli. salah satu media tumbuh bakteri
E.coli tersebut adalah Media EMB (Agar Eosin Methylene Blue Agar), yaitu
media selektif untuk menumbuhkan bakteri gram negatif pada umumnya dan
digunakan untuk isolasi dan diferensiasi bakteri non fecal coliform dan fecal
coliform. Salah satu komposisi penyusun EMB adalah laktosa. Kaldu laktosa bisa
digunakan sebagai media tumbuh untuk bakteri E. coli karena fungsinya untuk
meyediakan sumber karbohidrat untuk difermentasi bakteri sehingga dapat
membedakan koloni bakteri yang bisa memfermentasi laktosa dengan koloni
bakteri yang tidak memfermentasi laktosa. Pada penelitian ini digunakan kaldu
laktosa dengan konsentrasi berbeda yaitu 25%, 50%, 75%, dan 100% untuk media
tumbuh E.coli . metode yang digunakan adalah EMB dengan melihat warna hijau
metalik pada petridish yang menandakan bakteri tersebut dapat
memfermentasikan laktosa dan dilanjutkan dengan pewarnaan gram. Tetapi pada
penelitian ini mengalami kegagalan karena adanya kontaminasi , sehingga bakteri
E.coli yang tumbuh pada kaldu laktosa tidak dapat dihitung jumlah koloninya.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pertumbuhan E.coli dalam
media kaldu laktosa dengan konsentrasi berbeda.
Key word: Kaldu laktosa, konsentrasi, pertumbuhan E.coli

PENDAHULUAN Harga media Nutrient Agar (NA)

Bakteri membutuhkan nutrisi,
sumber energi dan kondisi
lingkungan tertentu untuk
pertumbuhannya. Media Nutrient
Agar (NA) sering digunakan untuk
media biakan bakteri di
laboratorium. Media NA dibuat dari
3 g ekstrak daging, 5 g pepton, 1000
ml air, dan 15 g agaragar. Ekstrak
daging dapat digantikan dengan air
kaldu yang dibuat dari 1 kg daging
segar bebas lemak yang direbus
dengan air sampai diperoleh air
kaldu 2000 ml, kemudian ditambah
0.5% natrium klorida (Irianto, 2014).
relatif mahal yaitu RP 1.223.000,-
setiap 500 g. Selain itu, untuk
mendapatkan media NA hanya dapat
dibeli di toko bahan kimia atau di
laboratorium mikrobiologi. Hal ini
menjadi kendala untuk beberapa
sekolah di daerah tertentu, sehingga
mendorong peneliti untuk
menemukan media dari bahan yang
mudah didapat, harganya murah, dan
terdapat sumber nutrisi untuk
pertumbuhan bakteri.
Nutrisi yang dibutuhkan
untuk pertumbuhan mikroorganisme
yaitu karbon, nitrogen, unsur non
logam (sulfur, fosfor), unsur logam
(Ca++,Zn++,Na +,K+,Cu++,Mn ++,
Mg++ dan Fe+2+3), vitamin, air,
energi (Cappuccino, 2014). Bakteri
membutuhkan sumber-sumber
makanan yang mengandung C, H, O
dan N yang berguna untuk menyusun
protoplasma (Dwidjoseputro, 2005).
Karbon merupakan substrat utama
untuk metabolisme bakteri, sehingga
dapat jadikan sebagai sumber nutrisi
bakteri. Sumber karbon dapat
diperoleh dari karbohidrat, protein
dan lemak.
E. coli merupakan bakteri
Gram negatif berbentuk batang
pendek, tumbuh baik pada
MacConkey agar (MCA) dengan
koloni berbentuk bulat dan cembung,
bersifat memfermentasikan laktosa.
Escherichia coli memiliki panjang
sekitar 2 μm, diameter 0,7 μm, lebar
0,4-0,7 μm, dan bersifat anaerob
fakultatif. Escherichia coli
membentuk koloni yang bundar,
cembung, dan halus dengan tepi yang
nyata.
Beberapa peneliti telah
berhasil membuat media
pertumbuhan mikroorganisme dari
sumber daya alam yang mudah
ditemukan. Seperti pemanfaatan
tumbuhan polong-polongan yaitu
kacang tunggak, kacang hijau, dan
kacang kedelai hitam yang
digunakan sebagai media
pertumbuhan mikroorganisme .
Media yang berasal dari sayuran
seperti wortel, buncis, tomat, dan
labu juga dapat digunakan sebagai
media pertumbuhan mikroorganisme.
Media pertumbuhan
mikroorganisme adalah suatu bahan
yang terdiri atas campuran nutrisi
(nutrient) yang digunakan oleh suatu
mikroorganisme untuk tumbuh dan
berkembangbiak pada media
tersebut. Mikroorganisme
memanfaatkan nutrisi pada media
berupa molekul-molekul kecil yang
dirakituntuk menyusun komponen sel-
nya. Dengan media pertumbuhan juga
bisa digunakan untuk mengisolasi
mikroorganisme, identifikasi dan
membuat kultur murni. Komposisi
media pertumbuhan dapat
dimanipulasi untuk tujuan isolasi dan
identifikasi mikroorganisme tertentu
sesuai dengan tujuan masing-masing
pembuatan suatu media. Media
adalah suatu bahan yang terdiri dari
campuran zat-zat hara (nutrient) yang
berguna untuk membiakkan mikroba.
Dengan mempergunakan bermacam-
macam media dapat dilakukan
isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-
sifat fisiologis dan perhitungan
jumlah mikroba.
Lactose broth
digunakansebagai media untuk
mendeteksi kehadiran koliform
dalam air, makanan, dan produk
susu, sebagai kaldu pemerkaya (pre-
enrichment broth) untuk Salmonellae
dan dalam mempelajari fermentasi
laktosa oleh bakteri pada umumnya.
Pepton dan ekstrak beef
menyediakan nutrient esensia luntuk
memetabolisme bakteri.Laktosa
menyediakan sumber karbohidrat
yang dapat difermentasi untuk
organism koliform.
 Media Eosin Methylene Blue 1 ose dan diinkubasi pada tabung
(EMB) mempunyai keistimewaan yang berisi media Brilliant Green
mengandung laktosa dan berfungsi Lactose Broth(BGLB) dan tabung
untuk memilah mikroba yang durham. dengan inkubasi dilakukan
memfermentasikan laktosa seperti E. pada suhu 37ºC selama 2 x 24
Coli sehingga nanti akan jam.Selanjutnya jumlah tabung yang
menghasilkan warna hijau positif berupakekeruhan dan
metalik.Oleh karena itu, penelitian gelembung gas dalam tabung
ini dilakukan untuk mengetahui durham dihitung dan dicocokkan
pengaruh pertumbuhan bakteri dengan tabelperhitungan
terhadap media laktosa dengan MPN.Masing-masing biakan positif
konsentrasi berbeda. pada uji konfirmasi bakteri E coli
,diambil satu sengkelit dan
METODE diinokulasikan pada media Eosin
Kegiatan ini dilakukan di Methylene Blue Agar (EMBA),dan
Laboratorium Mikrobiologi FMIPA diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24
Universitas negeri Padang. jam.Pertumbuhan E. coli ditandai
Pembiakan E.coli dilakukan dengan dengan pertumbuhan koloni yang
Menggunakan medium LB (Lactosa berwarna hijau dengan kilap logam
Broth) konsentrasi 75%, uji penegas dan bintik biru kehijauan, Koloni
menggunakan medium BGLB yang tumbuhpada medium EMBA
(Brillian green laktosa broth), uji selanjutnya dilakukanpewarnaan
kesempurnaan menggunakan gram untuk melihat bentuk
medium EMBA(Eosin methylen blue sertawarna yang terbentuk.
agar), dan grampewarnaan untuk Warna merah menandakan gram
membedakan bakteri grampositif dan negatif sedangkan warna ungu
gram negatif. menunjukkan gram positif.
dan gelembung gas dalam
tabung durham,selanjutnya diambil

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pada penelitian ini menggunakan media kaldu laktosa dengan konsentrasi
yang berbeda untuk pertumbuhan bakteri E. Coli, didapatkan hasil sebagai
berikut:
Tabel 1. Hasil pertumbuhan bakteri E. coli pada media kaldu laktosa dengan
konsentrasi berbeda
Jenis Konsentrasi Media kaldu laktosa
bakteri 25% 50% 75% 100%
E. Coli 0 0 0 0

*mengalami kontaminasi
 Berikut ini adalah gambar hasil penelitian pengaruh pertumbuhan bakteri
E. Coli pada media kaldu laktosa dengan konsentrasi berbeda :

Kaldu laktosa 25% kaldu laktosa 50% kaldu laktosa 75% kaldu laktosa 100%
Gambar 1. pertumbuhan bakteri E. Coli pada media kaldu laktosa dengan
konsentrasi berbeda.
Praktikum ini membahas dengan koloni bakteri yang tidak
mengenai pengaruh pertumbuhan memfermentasi laktosa. Interprestasi
bakteri E. Coli terhadap media kaldu dari praktikum ini adalah untuk
laktosa dengan berbagai konsentrasi menguji kualitas air untuk
yaitu 25%, 50%, 75%, dan 100%. membedakan bakteri non
Media kaldu laktosa merupakan fecal coliform dan fecal coliform
salah komposisi penyusun media yang menandakan kemungkinan
EMB (Agar (Eosin Methylene Blue kontaminasi mikroorganisme
Agar), yaitu media selektif untuk patogen dalam sampel air (adanya
menumbuhkan bakteri gram negatif Escherichia coli di sungai / sampel
dan pada umumnya dan digunakan air menunjukkan kemungkinan
untuk isolasi dan diferensiasi bakteri kontaminasi tinja di sungai / sampel
non fecal coliform dan fecal air, begitu juga dengan
coliform. Media EMB dapat adanya bakteri patogen usus
digunakan untuk membedakan antara lainnya).
koloni bakteri yang dapat Berdasarkan hasil penelitian,
memfermentasi laktosa dengan yang semua media kaldu laktosa dengan
tidak dapat memfermentasi laktosa. berbagai konsentrasi yang
Di media EMB juga ditambahkan digunakan untuk pertumbuhan E.coli
sukrosa untuk membedakan antara mengalami kontaminasi. Dapat
koloni bakteri coliform yang mampu dilihat pada setiap petri yang berisi
memfermentasi sukrosa lebih cepat E.coli dengan kaldu laktosa berwarna
dari laktosa dengan koloni bakteri coklat kehitaman. Artinya bakteri
yang tidak mampu memfermentasi E.coli tidak dapat memfermentasikan
sukrosa. laktosa. Hal ini bisa terjadi karena
Kaldu laktosa yang beberapa faktor seperti kontaminasi
digunakan sebagai media tumbuh oleh bakteri lain, kurang steril dalam
bagi E. Coli berfungsi untuk melaksanakan prosedur kerja, dan
meyediakan sumber karbohidrat keadaan lingkungan sekitar yang
untuk difermentasi bakteri sehingga kurang mendukung.
dapat membedakan koloni bakteri Hasil seharusnya yang
yang bisa memfermentasi laktosa didapatkan adalah bakteri E.coli
yang memfermentasi laktosa dapat
menghasilkan asam, dalam kondisi
asam akan menghasilkan warna
kompleks berwarna ungu gelap atau
warna hijau metalik. Warna hijau
metalik ini merupakan indikator dari
bakteri yang dapat memfermtasi
laktosa dengan kuat dan/atau bakteri
yang dapat memfermentasi sukrosa
(khas pada bakteri coliform fecal).
Pada bakteri yang memfermentasi
laktosa dengan lambat akan
menghasilkan asam dengan jumlah
yang sedikit sehingga koloni akan
berwarna coklat atau merah muda.
Pada bakteri yang tidak dapat
memfermentasi laktosa koloni akan
berwarna merah muda atau
transparan.
Jika hasil pengamatan
menunjukan positif mengandung
E.coli , maka akan dilanjutkan
dengan pewarnaan gram. Pewarnaan
gram merupakan proses untuk
mendeteksi dan mengidentifikasi
bakteri. Perbedaan pada gram positif
dan gram negatif terjadi karena
penyusun peplidoglikan dan struktur
selnya berbeda. Pewarnaan gram
dapat menggunakan metilen blue
atau safranin, jika warnanya biru atau
keunguan maka itu adalah gram
negatif, sedangkan gram positif
berwarna merah muda. E. Coli
merupakan bakteri gram negatif yang
berbentuk batang , memiliki sedikit
lapisan peptidogligan dan tidak
mengandung asam pada dinding
selnya namun mengandung sejumlah
polisakarida dan lebih rentan
terhadap kerusakan mekanik dan
kimia.
Apabila praktikum yang
dilaksanakan berhasil maka E.coli
yang menghasilkan warna hijau
metalik pada setiap konsentrasi kaldu
laktosa akan dihitung jumlah
koloninya. Fungsinya adalah untuk
melihat pengaruh berbagai
konsentrasi kaldu laktosa terhadap
pertumbuhan E.coli. sehingga dapat
ditentukan pada konsentrasi berapa
E.coli bisa tumbuh dengan baik.
Berdasarkan teori-teori dapat
disimpulkan bahwa E.coli akan
tumbuh dengan baik dalam jumlah
koloni yang banyak apabila
nutrisinya terpenuhi salah satunya
adalah jika konsentrasi kaldu
laktosanya juga tinggi.
SARAN
Kepada penelitian selanjutnya
disarankan untuk lebih hati-hati dan
teliti dalam melaksanakan prosedur
kerja supaya tidak mengalami
kontaminasi. Selain itu juga
diharapkan bisa melakukan inovasi
baru pada media pertumbuhan
bakteri tidak hanya laktosa tetapi
juga bisa menggunakan bahan-bahan
lain seperti umbi-umbian atau
polong-polongan.
DAFTAR PUSTAKA
Anisah.2015. Media Alternatif untuk
Pertumbuhan Bakteri
Menggunakan Sumber
Karbohidrat yang Berbeda.
Surakarta: UMS.
Arulanantham, R., Pathmanathan, S.,
Ravimannan, N., & Niranjan,
K. 2012. “Alternative Culture
Media for Bacterial Growth
Using Different Formulation
 of Protein Sources”. Journal
of Natural Product and Plant
Resourse, 2 (6): 697-700.
Berde, C. V., & Berde, V. B. 2015.
“Vegetable Waste as
Alternative Microbiological
Media for Laboratory and
Industry”. World Journal of
Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences, 4
(5), 1488-1494.
Cappuccino, J. G., & Sherman, N.
2013. Manual Laboratorium
Mikrobiologi. Jakarta: Buku
Kedokteran EGC.
Deivanayaki M, & Iruthayaraj, A.
2012. “Alternative Vegetable
Nutrient Source for Microbial
Growth”. International
Journal of Biosciences (IJB),
2 (5) : 47-51.
Jutono, J. Soedarsono, S. Hartadi, S.
Kabirun, S. Suhadi, D. dan
Soesanto. 1980. Pedoman
Praktikum Mikrobiologi
Umum.
Yogyakarta:Departemen
Mikrobiologi
Fakultas PertanianUGM.
Lay, W. B. 1994. Analisis Mikroba
di Laboratorium.Jakarta:
Raja Grafindo Perkasa.
Lehninger. 1995. Dasar –
dasar Biokimia, Jilid I.
Jakarta:Erlangga.
Pelczar. M.J dan Chan, E.C.S. 1988.
Dasar-dasar Mikrobiologi.
Jakarta:UI Press.
Robert, S.B., E.G.D. Murray, L.R.
dan Smith. Bergey’s Manual
of
Determinative Bacteriology.
USA:WaverlyPressInc.
Sale, A.J., 1961, Laboratory Manual
on Fundamental Principle Of
Bakteriology, Toronto
:MacGrewHill.Inc,
Suriawiria, U. 1985. Dasar-Dasar
Mikrobiologi.Bandung:Angk
asa.