DBO, DQO, SÓLIDOS, NITRÓGENO, GRASAS Y ACEITES

1. DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO[1]

La demanda bioquímica de oxígeno (DBO) es el método de laboratorio usado con

mayor frecuencia para medir cantidades de materia orgánica (en general mayores
a 1mg/L) en el campo de tratamiento de las aguas residuales. Si existe suficiente
oxígeno disponible, la descomposición biológica aerobia de un desecho orgánico
continuará hasta que el desecho se haya consumido. Tres actividades más o
menos diferenciadas pueden ocurrir. Primero, una parte del desecho se oxida a
productos finales y con ellos los microorganismos obtienen energía para el
mantenimiento de las células y la síntesis de nuevo tejido celular.
Simultáneamente, otra fracción del desecho se conviene en tejido celular nuevo
empleando la energía liberada durante la oxidación. Por último, cuando se
consume la materia orgánica, las nuevas células empiezan a consumir su propio
tejido celular con el fin de obtener energía para el mantenimiento celular; este
tercer proceso es llamado respiración endógena. El término usado para
representar los desechos orgánicos es COHNS (el cual representa los elementos
carbono, oxigeno, hidrógeno, nitrógeno y azufre), y para el tejido celular es
C 5H7NO2; los tres procesos se definen por las siguientes reacciones químicas:

Oxidación
COHNS + O2 + bacterias → CO 2 + H 2 O + NH 3 + otros productos + energía

Síntesis
COHNS + O2 + bacterias + energía → C5 H 7 NO2

Respiración endógena
C 5 H 7 NO 2 + 5O 2 → 5CO 2 + NH 3 + 2 H 2 O
En la prueba estándar de DBO, una pequeña muestra de agua residual se coloca
en una botella winkler (volumen de 300 mi). La botella se completa a volumen
usando agua saturada con oxígeno y con los nutrientes requeridos para
crecimiento biológico. Antes de tapar la bote]la se mide la concentración de
oxigeno. Después de incubar la botella por cinco días a 20”C, la concentración de
oxígeno disuelto se mide de nuevo. La DBO de la muestra es la diferencia entre
los valores de concentración de oxígeno disuelto, expresado en miligramos por
litro, dividido por la fracción decimal del volumen de muestra usada. Cuando la
muestra a analizar contiene bajas concentraciones de microorganismos, se
adiciona un inóculo para poder realizar el ensayo de la DBO.

Cuando el agua de dilución no contiene inóculo

OD1 − OD 2
DBO =
P

Cuando el agua de dilución contiene inóculo

(OD1 − OD 2 ) − ( B1 − B2 ) f
DBO =
P

donde
OD1 = oxígeno disuelto de la muestra diluida inmediatamente después de ser
preparada, mg/L
OD2 = oxígeno disuelto de la muestra diluida después de cinco días de incubación
a 200C, mgIL
B1 = oxigeno disuelto del blanco (agua de dilución con inóculo) antes de la
incubación, mg/L
B2 = oxígeno disuelto del blanco después de la incubación, mg/L
f = fracción en volumen de agua de dilución con inóculo
P = fracción en volumen de agua residual contenida en la muestra
1.1 MÉTODO DE ANÁLISIS DE LA DBO[2]

1.1.1 Método de la incubación

El método consiste en la incubación de las muestras en botellas herméticamente
cerradas para evitar la entrada de aire, durante 5 días a 20ºC. Se mide el oxígeno
disuelto al iniciar y finalizar la incubación. La DBO es la diferencia entre el OD
inicial y el OD final.

1.1.2 Muestreo y almacenamiento

Se recomienda analizar inmediatamente o enfriar la muestra a 4ºC, hasta por 6
horas, antes de analizarla se lleva a 20 ºC. Las muestras compuestas se
mantienen a 4ºC y una vez se tenga la mezcla (periodos máximos de 24horas) se
analiza inmediatamente.

1.1.3 Materiales y equipos

a. Para el agua de dilución

• Solución tampón de fosfatos
• Solución de cloruro cálcico
• Solución de cloruro férrico
• Solución de cloruro de amonio

b. Para preparar la muestra

• Solución de ácido sulfúrico
• Solución de hidróxido de sodio
• Solución de sulfito sódico
• Solución de nitrificación
 c. Para OD
• Solución de sulfato manganoso
• Reactivo alcali-yoduro-nitruro
• Ácido sulfúrico
• Solución de almidón
• Solución de dicromato de potasio

d. Semilla
• Población de microorganismos

e. Materiales
• Botellas winkler de 200 a 300mL de capacidad
• Incubadora con temperatura controlada de 20ºC

1.1.4 Diagrama de flujo

Prepara el agua de dilución: volumen de agua necesario +

1mL de cada solución por cada litro

Si es necesario se debe inocular el agua de dilución

Para obtener un pH entre 6.4 y 8, tratar la muestra con ácido

sulfúrico o con hidróxido de sodio.

Adicionar Na 2SO3, si existe cloro residual

Ajuste la temperatura a 20ºC

Adicionar inhibidores de nitrificación si es necesario

 Diluir la muestra en la botella o en recipientes graduados

Llenar por duplicado, primero con agua de dilución hasta la

mitad, luego con el volumen de muestra seleccionado y
terminar de llenar con el agua de dilución

Mezclar bien con varilla de vidrio y llenar dos botellas con

agua de dilución para el blanco

Medir el OD inicial de una botella con muestra y de otra con

agua de dilución

Tapar las botellas herméticamente con sello hidráulico y

colóquelas a incubar a 20ºC durante 5 días

Mida el OD de la muestra y del blanco a los 5 días

 2. DEMANDA QUÍMICA DE OXÍGENO[2]

Es la cantidad de oxígeno que sustancias reductoras, como la materia orgánica,

presentes en un agua residual necesitan para descomponerse, sin la intervención
de microorganismos. La DQO no diferencia la materia orgánica biológicamente
oxidable y la biológicamente inerte.

a + 8d − 3c
C n H a Ob N c + dCr2 O 7
−2
(8d + c ) H + → nCO 2 +
+
H 2 O + cNH 4 + 2dCr +3
2
donde
2n a b c
d = + + −
3 6 3 2

2.1 MÉTODO DE ANÁLISIS

Oxidación con dicromato de potasio. Se utiliza en exceso y se titula con Sulfato
Ferroso Amoniacal (FAS) la cantidad que no reaccionó. Se realiza un blanco para
corregir materia orgánica que está presente en reactivos o agua para diluciones.
Se utiliza como indicador la ferroína que pasa de color rojo fuerte a verde.

2.1.1Diagrama de flujo del procedimiento

1. Utilizar dos matraces, uno para el blanco y otro para la muestra, y a cada uno:
1.1 Añadir 25 ml de K 2Cr2O7 0,25 N
1.2 Agregar 0,8 g de HgSO4
1.3 Adicionar 70 ml de H2SO4 - Ag 2SO4, cuidadosamente
1.4 Agregar lentamente 5 ml de H2SO4 concentrado
2. Por último, medir entre 10 y 50 ml de muestra problema, dependiendo de la
procedencia, y completar con 40 ml de agua destilada. Verter este volumen en
el matraz correspondiente a la muestra, el cual ya contiene los reactivos.
Tomar 50 ml de agua destilada (blanco) y adicionarlos al matraz
correspondiente al blanco. Agitar los matraces de tal modo que no se noten
dos fases.

3. Colocar los matraces en digestión a reflujo, 2h. Enfriar al chorro de agua (no
directo).

4. Estandarizar el FAS (que se utilizará como titulante), así:

- Preparar:
5 ml de K2Cr2O7 0,25 N. 2,5 ml de H2SO4 concentrado. 50 ml de agua
destilada. 3-4 gotas de ferroína como indicador
- Valorar con FAS, hasta que la mezcla tome color café rojizo. Anotar el
volumen gastado.
(VDicromato * N Dicromato )
N FAS =
V FAS gastado

5. Titular con el FAS (en el mismo balón) utilizando ferroina como indicador, todo
el contenido de los dos matraces. El punto final de la titulación se ve con el
cambio de color azul-verdoso a marrón. Si cuando se adicionen los reactivos la
mezcla toma un color verdoso, se debe desechar la muestra y comenzar de
nuevo, tomando una alícuota menor.

6. Cálculos:
(VFas − VFas )* N
mg Fas
DQO ( )= Blanco Muestra * 8 . 000
L Vmuestra
 3. SÓLIDOS [1]

El agua residual contiene una variedad de materiales sólidos. La clasificación de

los diferentes tipos de sólidos se encuentra en la siguiente tabla. Una primera
etapa de filtración separa los sólidos suspendidos totales (SST) de los sólidos
totales (ST).

Se presume que los sólidos volátiles (SV) representan la materia orgánica, a pesar
de que parte de la materia orgánica no se incinere y de que algunos compuestos
inorgánicos se descompongan a altas temperaturas. De manera que tanto los ST
como los SST poseen fracciones de sólidos fijos y volátiles, y en forma similar los
sólidos disueltos totales (SDT) también tengan sólidos fijos y volátiles.
3.1 MÉTODO DE ANÁLISIS
Gravimétrico

3.1.1 Material y equipo

- Balanza analítica
- Estufa
- Mufla
- Plancha de calentamiento
- Desecador
- Equipo de filtración al vacío
- Cápsulas de porcelana
- Papel de filtro Whatman
- Conos Imhoff graduados
- Probeta de 50 ml

3.1.2 Sólidos totales y suspendidos

Consideraciones generales

Agitar la muestra.

Para sólidos suspendidos (SS), se debe

utilizar papel de filtro especial, (934 -AHTM,
con partículas de retención de 47 mm Ø,
marca Whatman), el cual se introduce en
una cápsula de porcelana; antes de iniciar el
procedimiento.

Para sólidos totales (ST), no se utiliza papel

de filtro; se toma un volumen de 50 ml por la
misma capacidad de la cápsula.
 Procedimiento

En la mufla, someter ambas cápsulas a 550

ºC, durante 20 min.

Introducir en un desecador para enfriarlas

durante aproximadamente 45 min – 1 h.

Pesar las cápsulas.

(Este es el peso inicial W 1).

SÓLIDOS TOTALES SÓLIDOS SUSPENDIDOS

Agitando la muestra, tomar una alícuota Hacer montaje de filtración al vacío.

de 50 ml (V m).

En el filtro magnético, colocar el papel de

Someter a calentamiento hasta filtro con la parte corrugada hacia arriba
sequedad; si es posible, en bajo en una
hornilla o estufa, con el fin de evitar
derrames y no se pierda muestra y en la
cápsula respectiva.
Lavar el filtro con 20 ml de agua
destilada.

Agitando la muestra, tomar un volumen

(V m), excluyendo partículas que flotan o
material no homogéneo, así:
- Si es agua potable o cruda: 200 ml.
- Si es agua residual industrial o
doméstica: 25 ó 50 ml.
 Lavar el filtro con 3 porciones de agua
destilada (10 ml) cada una.

Después de filtrar, pasar el papel filtro

nuevamente a la cápsula.

Someter ambas cápsulas en la estufa a 105

ºC durante 1 h.

Pasar las cápsulas por un desecador para

enfriar aproximadamente 20-30 min.

Someter cuantas veces sea necesario ambas

0
cápsulas a 105 C, por 30 minutos seguidos
de 20 min. En el desecador, hasta obtener un
peso constante con +/- 0.0005 de exactitud.
Este es el peso final (W 2) para determinación
de Sólidos totales y Sólidos suspendidos.

Luego en la mufla, someter las cápsulas, salientes del

paso anterior a 550 ºC, durante 20 min.

Pasar las cápsulas por un desecador para

enfriar aproximadamente durante 45 min. –

Pesar las cápsulas. Este es el peso final (W 3)

para determinación de Sólidos totales
volátiles y Sólidos suspendidos volátiles.
3.1.3 Sólidos disueltos

Se calculan por diferencia entre los Sólidos Totales y los Sólidos Suspendidos:

SDt = STt – SSt t: Totales

SDv = STv – SSv v: Volátiles
SDf = STf - SSf f: Fijos

3.1.4 Sólidos sedimentables

Agitar la muestra.

Tomar 1 L de muestra y colocarlo en un cono

Imhoff graduado. Dejarlo por 1 h (tener en
cuenta la hora de agregar la muestra).

Después de 30 min., agitar la muestra con un

agitador de vidrio, en el sentido de las
manecillas del reloj.

Medir la cantidad de sólidos sedimentables a

los 45 minutos y dejar en reposo hasta
completar la hora.

En la parte inferior del cono, se lee la

cantidad de sedimentos (ml). La lectura se
efectúa así: ml/L/h (mililitros de sedimento por
litro de muestra, por espacio de tiempo en
horas).

NOTA: Cuando se tienen muestras blancas o muy limpias, el dato se toma como: < 0,1 ml/L/h ó
0 ml/L/h.
3.2 CÁLCULOS

3.2.1 Sólidos totales

W1 caps.vacía _________ mg W 2__________ mg STt = [(W 2-W1 )/Vm]

Vm __________________ L W 3___________ mg STf = [(W 3-W1 )/Vm]
STv = [(W2-W3)/Vm]

3.2.2 Sólidos suspendidos

W1 cápsula-disco ___________mg W 2 __________ mg SSt = [(W 2-W1 )/Vm]

Vm _____________________ L W3 __________ mg SSf = [(W 3-W1 )/Vm]
SSv = [(W 2 -W3)/Vm]

3.2.3 Sólidos disueltos

SD t = STt - SSt = ______________ mg/L

SD f = STf - SSf = _______________ mg/L
SD v = STv - SSv =_______________ mg/L

3.2.4 Sólidos sedimentables

Vm ________ L Vss 45' _________ ml Vss =______________ ml/L/h

 4. NITRÓGENO[1]

Dado que el nitrógeno es esencial para el crecimiento biológico, recibe el nombre

de nutriente. Debido a que el nitrógeno es esencial para la síntesis de proteínas,
se necesitan conocer datos sobre la presencia de este nutriente a la hora de
evaluar el tratamiento del agua residual mediante procesos biológicos. El
contenido total de nitrógeno está compuesto por nitrógeno amoniacal, nitritos,
nitratos y nitrógeno orgánico.

El nitrógeno amoniacal existe en solución acuosa tanto en forma de ión amonio

como en forma de amoniaco, dependiendo del pH de la solución. Para valores de
pH superiores a 9.3, el equilibrio se desplaza hacia la derecha predominando el
amoniaco, mientras que para valores por debajo de 9.3 existe un predominio de la
concentración del ión amonio.

El nitrógeno en forma de nitrito es bastante inestable y fácilmente oxidado a la

forma de nitrato. Es un indicador de contaminación altamente tóxico para muchos
peces y otras especies acuáticas.

El nitrógeno en forma de nitrato, la especie química del nitrógeno más oxidada que
se encuentra en aguas residuales, se determina por lo común por métodos
colorimétricos. Los nitratos pueden reducirse a nitritos en el estómago de los niños
y, de esta forma, unirse a la hemoglobina ocasionando una reducción en la
transferencia de oxigeno a nivel celular que se manifiesta en el color azulado de la
piel.

El nitrógeno orgánico se determina por el método de Kjeldahl. El nitrógeno

orgánico presente en la muestra se convierte en amoniaco para luego ser
destilado y medido por Nesslerización.
4.1 NITRÓGENO AMONIACAL

Abra totalmente el g rifo de agua

Presione el botón de encendido del Buchi 320

Lave el equipo internamente, destilando en el Buchi 320 agua pura.

Destile primero el blanco y luego la muestra.

Tome 50 ml de muestra y 50 ml de agua destilada en un tubo de destilación.

“Añada agente declorante (5 gotas de tiosulfato) si se trata de agua potable.”

Adicione 25 ml de solución buffer de borato y 2 gotas de fenolftaleina.

Conecte el tubo al equipo de destilación

Prepare en un erlenmeyer 50 ml de solución de ácido bórico y 5 gotas de

indicador mixto, para recoger el destilado.

Diluya las muestras en el tubo de digestión con agua destilada hasta 50 ml,
adicione NaOH hasta viraje a rosado.

Inicie la destilación

Mientras destila mantenga la alargadera sumergida en la solución absorbente

de ácido bórico.

Destile hasta recoger 200 ml, retire el adaptador del destilado. Continúe 2
minutos de enjuague en otro erlenmeyer.

Titule con H2SO4 0.01N para muestras con poco contenido de nitrógeno o
0.1N para aguas residuales, hasta viraje del indicador de verde a violeta.

Tenga en cuenta el volumen gastado para la muestra y el blanco.

4.2 NITRÓGENO TOTAL (NKT)

Tome 50 ml de muestra y 50 ml de agua destilada, en dos

tubos de digestión por separado.

Adicione 10 ml de H2SO4 concentrado y 2 perlas de

ebullición a cada tubo de digestión.

Adicione 1gr de catalizador de selenio.

Caliente en el digestor Buchi 320 hasta que deje de emitir vapores, y

tome un color verde leve y luego 15 minutos más.

Abra totalmente el grifo de agua.

Presione el botón de encendido del Buchi 320.

Lave el equipo, destilando agua destilada en el Buchi 320.

Destile primero el blanco y luego la muestra.

Enfrié las muestras que vienen del digestor y agregue 1 gota de fenoftaleina.

Prepare en un erlenmeyer, 50 ml de solución de ácido bórico y

5 gotas de indicador mixto, para recoger destilado.

Pulsando los botones correspondientes, diluya las muestras en el tubo de

digestión, con agua libre de amonio hasta 50 ml. Adicione suficiente NaOH
directamente desde el Buchi, hasta coloración rosada.
 Inicie la destilación a una rata de 6 – 10 ml/min.

Mientras destila, mantenga la alargadera sumergida en la

solución absorbente de ácido bórico 50 ml.

Destile hasta recoger 200 ml. Retire el adaptador del

destilado. Continúe 2 minutos para enjuague.

Titule con H 2SO4 0.01N par muestras con poco contenido de

nitrógeno ó 0.1N para aguas residuales, hasta viraje de
indicador de verde a violeta.

Tenga en cuenta el volumen de ácido gastado para la

muestra y para el blanco.
4.3 NITRITOS

Si la muestra contiene sólidos suspendidos, filtre a través de

una membrana de 0.45 µm.

Tome 50 ml de muestra y 50 ml de agua destilada

separadamente. O una alícuota, si la concentración de nitritos
es elevada y complete a 50 ml con agua desionizada.

Agregue 1 ml de a -naftilamina y 1 ml de ácido sulfanico.

Mezcle bien y deje media hora en reposo protegido de la luz.

Lea la absorbancia a 543 nm, calibrando primero el equipo con el

blanco (ABS=0).

Determine la concentración de nitritos utilizando la curva patrón.

4.4 NITRATOS

Tome 10 ml de muestra y 10 ml de agua destilada para el blanco.

Evapore hasta sequedad. Deje enfriar.

Agregue 2 ml de ácido fenoldisulfónico.

Agregue poco agua para hacer el lavado de las paredes (máximo

25 ml).

Llevar la solución al balón de aforo

Agregue 25 ml de amoniaco para alcanzar el pH, despacio y

cuidadosamente, con pipeta.

Agite con varilla de vidrio. Afore a 100 ml.

Lea la absorbancia a 410 nm. Calibrando primero el equipo

con el blanco.

Determine la concentración, utilizando curva patrón.

 5. GRASAS Y ACEITES[1]

La expresión grasas y aceites es muy usada para referirse a aceites, grasas, ceras
y otros constituyentes similares encontrados en las aguas residuales. El contenido
de grasas y aceites en aguas residuales se determina por extracción de la muestra
de residuo con triclorotrifluoroetano (las grasas y aceites son solubles en el
triclorotrifluoroetano). Otras sustancias pueden ser extraídas por este método,
como algunos derivados del petróleo, entre ellos kerosene, aceites lubricantes y
aceites de materiales bituminosos. En términos químicos, las grasas y aceites de
origen vegetal o animal son similares, pues básicamente son ésteres compuestos
de ácidos grasos, alcohol y glicerol (glicerina). De estos triglicéridos, aquellos que
se encuentran en estado líquido a temperatura ambiente se denominan aceites, y
los que pertenecen en estado sólido se llaman grasas.

5.1 PROCEDIMIENTO

Tómese alrededor de 1 litro de muestra en el frasco de vidrio y

márquese el nivel de la muestra en éste.

Acidúlese a PH 2 o inferior ( 5 ml HCl son suficientes).

Instálese el equipo de filtración.

Prepárese el filtro que consiste en un disco de muselina cubierto

con papel de filtro. Humedezca el papel y presione para
asegurar un buen sello.

Fíltrese 100 ml de la solución de diatomácea, lávese con unas 3

porciones y déjese el vacío hasta que no pase más agua a
través del filtro.
 Utilícense pinzas para pasar el filtro a un vidrio de reloj.

Límpiense el interior y la tapa del frasco que contiene la muestra

y la parte inferior del embudo buchner, para remover cualquier
capa de grasa o aceite. Recójase todo el material sólido.

Enróllese todo el papel filtro que contenga muestra y encájese

en el dedal de extracción del papel.

Límpiese el vidrio de reloj, añádase los trozos de papel al dedal.

Séquese el dedal de extracción en el horno a 103 º C durante 30

min.

Llénese el dedal con lana de vidrio o perlas de ebullición.

Colóquese el dedal en el extractor soxhlet, que debe tener previamente el

matraz tarado, extráigase el aceite y la grasa con hexano, a una velocidad
de 20 ciclos/ hora durante 4 horas contadas a partir del primer ciclo.

Destílese el solvente en un baño maría o en una plancha de

calentamiento a 70 º C.

Colóque se el balón sobre un baño de vapor a 70 º C durante 15 min y

hágase pasar aire a través de la muestra, aplicando vacío durante 1 min.

Enfríese en el desecador durante 30 min para luego ser pesado.

Hágase un ensayo en blanco de la misma forma que se realizó el

análisis
 BIBLIOGRAFÍA

[1] CRITES R. Y TCHOBANOGLOUS G. Tratamiento de aguas residuales en

pequeñas poblaciones. Mc Graw Hill. Colombia 2000. Páginas , 33, 34, 50, 58, 59,
67 y 70.

[2] LONDOÑO C. ADELA. Módulos de la línea de profundización en ingeniería

ambiental. Modulo 2. Manizales 2001. Páginas 17-20.