Anda di halaman 1dari 4

PENDAHULUAN

Ada banyak laporan dalam literatur mengkhawatiran tentang pembusukan mikroba di


kulit telur. Hal ini menyebabkan kerugian serius akibat pembusukan telur dalam pemasaran .
Selain itu, diduga adanya Salmonella dan bakteri patogen lainnya telah menimbulkan
kekhawatiran. Telah dibuktikan berulang kali bahwa bakteri pembusuk dan mikroorganisme lain
mungkin dapat masuk ke telur sebagai akibat dari pencucian. Sementara itu ada kemungkinan
bahwa bakteri tertentu telat ada dalam telur sebelum peletakan, kecuali burung terkena penyakit ,
sumber pembusukan ini adalah kurangnya konsekuensi daripada faktor lingkungan setelah telur
telah diletakkan. Banyak jenis pembusuk yang telah diamati secara utuh – sel telur. Berbagai
organisme telah dicurigai sebagai penyebab dari tidak berwarna, hijau , pink, hitam, merah , dan
campuran pembusuk (Alford et al., 1950). Di antara beberapa organisme biasanya terkait dengan
jenis pembusukan yaitu Pseudomonas fluorescens, Proteus vulgaris, dan Serratia marcescens.

Salah satu spesies mikroba pathogen yang paling sering ditemui terkait dengan kulit telur
adalah Salmonella pullorum. Organisme ini tidak hanya telah diidentifikasi sebagai agen
penyebab diare putih pada ayam, namun juga dikaitkan dengan infeksi ovarium pada pullets dan
salmonellosis pada ungags.

Laporan yang ada dalam makalah ini dilakukan untuk menentukan apakah organisme (a)
paling sering dikaitkan dengan pembusukan telur atau (b) bertanggung jawab untuk penyakit
ayam akan menjadi banyak dan berkembang biak dalam albumen atau kuning telur dari telur
yang didinginkan. Organisme yang digunakan untuk inokulasi adalah S. marcescens, P. vulgaris,
P. fluorescens, dan S. pullorum. Tiga spesies yang pertama dipilih karena mereka memiliki peran
penting dalam pembusukan telur, sedangkan yang terakhir adalah dipilih karena maknanya
sebagai patogen unggas.

METODE EKSPERIMEN

Besar, bersih, telur kotor (62-65 g) diamankan dari Iowa State College Poultry Farm
dalam waktu 24 jam setelah peletakan yang digunakan dalam percobaan ini. Biasanya, telur
digunakan segera. Oleh karena itu jika ingin memegang telur selama beberapa jam, telur harus
tetap berada di suhu 4,4°C sampai mereka bisa diuji. Telur yang akan dipecahkan harus dicuci
secara manual. Setiap telur dipegang secara perlahan melalui sarung tangan karet steril atau
menggunaan penjepit steril. Penjepit ini dibuat dari potongan-potongan 2-kaki 1/8 inci kawat
galvanis membungkuk tajam di tengah, dengan sebuah cincin di setiap akhir dimana telur bisa
dimasukkan sebagian. Solusi pencucian dan membilas larutan dipertahankan pada suhu 43°C
untuk memastikan bahwa isi telur akan berkembang dari kondisi awal. Telur Sendiri direndam
dalam 0,5 persen Kleneg2 selama 2 sampai 3 menit dan disikat ringan untuk menghilangkan
partikel kotoran. Kemudian telur dibilas dengan air suling steril dan ditempatkan dalam 1:1000
Roccal3 solution selama 10 menit. Kelebihan proses sanitasi telah dicuci dari sel telur dengan air
suling steril, dan telur itu dicelupkan ke dalam 95 persen larutan etanol selama 1 menit. Setelah
dibersihkan menggunakan alkohol, telur dikeringkan dan residu dinyalakan untuk meninggalkan
permukaan yang kering. Tahapa akhir sel setelah bebas alkohol yang telah dikeringkan tidak
menghasilkan koagulasi apapun, terlihat dari albumen telur yang berdekatan dengan sel. Sekitar
90% dari kulit telur yang disterilkan dengan prosedur ini ditemukan untuk menjadi sterilisasi
bakteriologis. Metode ini dianggap lebih memuaskan daripada prosedur dijelaskan sebelumnya
dalam literature (Rettger, 1913; Standard Methods for the Examination of Dairy
Products,A.P.H.A., 1948; Gillespie and Scott, 1950).

Dalam percobaan sebelumnya, 70% etanol ( dalam berat) telah diterapkan. Harga (1939)
konsentrasi menunjukkan ini lebih dari jumlah kuman lain di alkohol, tapi prosedur itu
ditinggalkan ketika ditemukan bahwa solusi tersebut meninggalkan kelembaban pada kulit telur
setelah diberikan alkohol dan metode alkohol lainnya, bila digunakan tanpa perawatan lebih
lanjut, maka sterilisasi kulit telur akan gagal.

Isi telur telah dihilangkan oleh prosedur yang sama dengan yang dijelaskan oleh Wolk et
al. (1950) di mana sebagian dari kulit telur, di ujung kecilnya telur telah dihilangkan dengan
pinset steril. Telur kemudian dibalik diatas gelas steril dan isinya dikeluarkan dengan
menerapkan api ke bagian bawah telur. Menggunakan tindakan pencegahan aseptik, menyiapkan
pengenceran inokulum bakteri (seperti yang dijelaskan di bawah ini) diperkenalkan ke dalam
albumen atau kuning telur, dan gelas yang erat tertutup oleh cetakan selembar aluminium foil
steril selama pembukaan. Sampel disimpan pada 2, 10, dan 20°C dan dianalisis untuk flora
bakteri setelah 0, 2, 4, 7, 14, 30, dan 60 hari masa penyimpanan. Dalam uji coba awal, suhu
penyimpanan terendah dipilih adalah 0 C, tetapi fluktuasi 2 sampai 3 derajat di lemari
penyimpanan secara bergantian menghasilkan pembekuan dan pencairan di bagian albumen.
Kesulitan ini tidak dialami ketika suhu dipindahkan ke 2°C.

Untuk telur yang diinokulasi di kulit telur, prosedur berikut digunakan: Akhir besar telur
itu berturut-turut diusap dengan Kleneg, air steril, larutan Roccal, dan air steril. Setelah
pengobatan ini kulit telur dilindungi dengan menutup menggunakan handuk steril dan
dikeringkan. Dalam rangka memfasilitasi inokulasi dengan jarum suntik, kulit telur dilubangin
dengan bor melalui bagian yang telah disterilkan menggunakan steril 1/16” bit.

Organisme yang digunakan untuk inokulasi adalah S. marcescens (ISC 2G3), P. vulgaris
(ATCC 9920), P. fluorescens (NRRL B10), dan S. pullorum (WURB 3083). Untuk memastikan
pertumbuhan yang seragam, masing-masing spesies ditumbuhkan pada nutrien agar miring pada
suhu optimum untuk organisme itu dan dipindahkan setiap hari selama 3 hari berturut-turut
sebelum digunakan dalam tes. Karena organisme tumbuh pada tingkat yang berbeda, budaya P.
vulgaris dan P. fluorescens yang digunakan untuk tes setelah masa inkubasi bervariasi 12-14 jam,
sedangkan S. marcescens dan S. pullorum digunakan pada usia 14 sampai 18 jam. Kultur dicuci
dari agar miring dengan larutan Ringer steril. Jumlah sel dari setiap organisme akan diinokulasi
dalam telur dan ditentukan dengan hitungan mikroskopis langsung, menggunakan Neubauer
counting chamber, dan tabulasi bakteri diamati pada 80 kotak kecil. Suspensi ini diencerkan
untuk memberikan tiga tingkat inokulum mendekati 100, 10.000 atau 1.000.000 sel. Selain itu,
inokulum itu berlapis dalam nutrient agar dibentengi dengan 1% glukosa dan 0,3% ekstrak ragi
untuk menentukan jumlah sel yang layak diperkenalkan ke dalam telur. Pada tabel 1 ditunjukkan
angka perbandingan sel yang ditentukan dengan metode mikroskopis langsung dan plate count.
Sementara duplikat hasilnya tidak diperoleh dengan dua metode, angka ditentukan oleh jumlah
mikroskopis langsung yang dianggap cukup tepat untuk memberikan perkiraan perkiraan
inokulum.
TABLE 1. Perbandingan jumlah sel yang ditentukan oleh metode piring langsung mikroskopis
dan agar.

Number Estimated by
Organism Age of culture's Direct microscopic Agar Plate
(hr) method
Pseudomonas 12 100 73
fluorescens 14 100 101
Proteus vulgaris 13 100 103
18 100 78
Serratia marcescens 12 100 31
18 100 70
Salmonella pullorinii 12 100 50
14 100 85

Setelah penambahan inokulum, lubang kecil yang dibuat oleh pengeboran itu disegel
dengan tackiwax steril dan kemudian telur itu ditempatkan dalam penyimpanan. Telur dianalisis
pada 0, 2, 4, 7, 14, 30, dan 60 hari penyimpanan dengan menempatkan telur dipecahkan di steril
1 L Waring blendor jar dengan 200 ml air suling steril dan dicampurkan selama 1 menit pada
kecepatan yang ditetapkan transformator Varitran pada kecepatan sangat rendah (30 sampai 40
rpm).

Aliquot campuran telur-air ini yang berlapis di dibentengi nutrient agar dan diinkubasi
selama 3 atau 4 hari pada suhu optimum untuk organisme. Percobaan didirikan dalam rangkap
tiga untuk memberikan ulangan untuk penyimpanan pada 2, 10, dan 20°C. Setiap percobaan
diulang beberapa kali untuk memastikan bahwa hasil sesuai.

Setiap telur diperiksa untuk perubahan dalam warna, fluoresensi, atau kekeruhan.
Pengamatan dilihat dari baik putih dan kuning telur untuk menentukan apakah bakteri inokulum
tetap localized atau telah terinfeksi ke semua bagian dari isi telur. Juga, tes bau digunakan untuk
mendeteksi bau.