TOPIK 6.

KULTUR ANTERA PEPAYA SECARA IN VITRO UNTUK

MENGHASILKAN TANAMAN HAPLOID

DR. NI MADE ARMINI WIENDI

PENDAHULUAN

Tanaman haploid adalah tanaman yang memiliki jumlah kromosom sama

dengan jumlah kromosom gametofitik pada sel sporofitiknya. Tanaman haploid
secara alami ditemukan pada tanaman Datura stramoniumoleh Blakelsee bersama
tim nya pada tahun 1922. Tanaman haploid ini diduga terjadi akibat mutasi spontan
melalui partenocarpi atau apomiktik (Bajaj 1983). Kejadian terbentuknya tanaman
haploid sangat kecil di alam. Kegunaan dari tanaman haploid ini dalam pemuliaan
sangat penting :

1. Untuk mempelajari gen dan sifat yang dikontrol. Peran sebuah gen akan
mudah dipelajari bila ada dalam kondisi homozigot
2. Mendeteksi terjadinya mutasi. Pada umumnya mutasi bersifat resesif
sehingga sulit untuk dideteksi pada tanaman normal dimana gen tersebut ada
dalam kondisi dominan
3. Perakitan galur murni melalui penggandaan kromosom dari tanaman haploid.
Tanaman galur murni dipakai sebagai tanaman tetua dalam merakit varietas
hibrida.

Tanaman haploid dikelompokan kedalam 2 grup yaitu:

1. Monohaploid (monoploid). Bila memiliki setengah jumlah kromosom dari
tanaman diploid.
2. Polihaploid. Bila memiliki setengah dari jumlah kromosom sporofitik dari
tanaman poliploid. Kejadian ini disebabkan terjadinya pertumbuhan gamet
betina atau gamet jantan yang tidak mengalami fertilisasi. Kecilnya
kejadian terbentuknya tanaman haploid maka dilakukan induksi dengan
cara melakukan stress suhu, senyawa kimia, polinasi yang terlambat, atau
iradiasi. Cara- cara ini keberhasilannya masih sangat rendah. Kejadian
terbentuknya tanaman haploid secara in vivo dapat ditingkatkan
frekuensinya melalui berbagai cara yaitu:
1. Gynogenesis. Tanaman haploid diperoleh dari perkembangan dari sel
telur yang tidak mengalami fertilisasi dengan menggunakan pollen
yang telah diradiasi, atau menggunakan pollen dari species lain. Dalam
kasus gynogenesis ini ada kemungkinan menghasilkan tanaman
triploid bila yang berkembang adalah sel endosperma sedangkan
embrionya mengalami aborsi.
 2. Androgenesis. Pada kasus ini sel telur yang nukleusnya tereliminasi,
dan tanaman haploid berkembang dari sel telur yang membawa
nukleus gamet jantan.
3. Eliminasi genom. Pada kasus ini terjadi eliminasi genom akibat
intergenerik atau interspesifik. Setelah terjadi fertilisasi akan terjadi
eliminasi salah satu genom dan embrio hanya berkembang dengan
satu genom sehingga dihasilkan tanaman haploid.
4. Semigamy. Pada kasus ini nukleus dari sel telur dan nukleus dari
gamet jatan membelah secara terpisah satu dengan yang lain,
sehingga dihasilkan tanaman haploid kimera
5. Perlakuan bahan kimia. Dengan memberikan bahan kimia seperti
chlorampenicol, para-fluor-phenilalanine, maleic hydrazide, dapat
menyebabkan sel mengalami eliminasi kromosom.
6. Pemberian perlakuan suhu tinggi atau suhu rendah
7. Radiasi dengan sinar x-ray atau sinar UV

Dengan metode kultur jaringan, perakitan tanaman haploid menjadi lebih

mudah melalui pengkulturan antera yang mengandung pollen pada media yang
sesuai. Pollen merupakan organ generatif yang jumlah kromosomnya setengah dari
kromosom sel somatiknya akibat dari proses meiosis. Telah banyak peneliti yang
berhasil mendapat tanaman haploid pada berbagai jenis tanaman seperti famili
cruciferaceae, solanaceae, liliaceae, graminae, dan lain-lain. Pada teknik kultur
antera faktor yng perlu diperhatikan adalah umur fisiologi bunga, dihitung sejak
terbentuk bakal bunga sangat menentukan fase yang tepat untuk menginduksi
pollen mengalami androgenesis

Tujuan dari percobaan ini adalah melatih mahasiswa untuk mengisolasi

antera dari bunga dan meanam antera secara in vitro untuk diinduksi menjadi
tanaman haploid secara androgenesis.

Bahan dan alat:

-bahan tanaman berupa kuncup bunga pepaya jantan pada berbagai umur
fisiologi

-media N6 (dari komposisi Nitsch) + 0.5 mg/L NAA + 2 mg/L Kinetin + 30 g/L
dan pH 6.5

- Alkohol 70%

- alat tanam yang digunakan adalah pinset

 Cara kerja

1. Pisahkan putik bunga jantan dari tanaman pepaya sesuai ukurannya.

Ukuran kuncup bunga berkolerasi dengan umur bunga
2. Sterilisasi kuncup bunga denga cara mencelupkan bunga kedalam alkolol
70% lalu dilewatkan di atas api bunsen, lalu diamkan sampai apinya
padam
3. Lakukan hal yang sama seperti nomor 2 sebanyak 2 kali
4. Buka kuncup bunga dengan pinset dan buang korolla nya secara hati-hati
agar anteranya tidak rusak
5. Lepaskan anteradari tangkai bunga dan tanam pada media kultir N6
6. Kultur antera selanjutnya disimpan dalam gelap selama 2 bulan untuk
menginduksi pertumbuhan kalus
7. Antera yang berasal dari kuncup bunga yang berukuran sama dikulurkan
di dalam botol yang sama

Pegamatan

1. Ukuran bunga (panjang korolla) jumlah antera per bunga an warna antera
2. Jumlah antera yang tetap kuning, dan jumlah yang coklat
3. Jumlah kultur yang kontaminasi
4. Saat terbentuk kalus dan jumlah antera yang membentuk kalus
 TOPIC 6.
ANTHER CULTURE FOR HAPLOID PLANTS IN PAPAYA

By: Dr. NI MADE ARMINI WIENDI

INTRODUCTION
Haploid plants are plants that have the same chromosome number with the
number of gametofitic chromosomes, or half number of chromosome from sporofitic
cells. Haploid plants are naturally found in the plant Datura stramonium by Blakelsee
with his team in 1922. Haploid plants is thought to occur as a result of spontaneous
mutation through partenocarpi or apomiktik (Bajaj 1983). Genesis formation of
haploid plant is very small in nature. The utilization of these haploid plants in
breeding is very important:
1. To study the genes and traits are controlled. The role of a gene to be easy to
study in homozygous level.
2. To detect the occurrence of mutation. In general, the mutation is recessive so it is
difficult to detect in normal plants in which the gene was present in the dominant
state.
3. This link pure strain through chromosome doubling of haploid plants. Plants used
as a pure strain in the parent plant to assemble hybrid varieties.

Haploid plants are grouped into two groups, namely:

1. Monohaploid (monoploid). When the plants has a half of the number of
chromosomes of a diploid plant.
2. Polihaploid. When the plants has a half the number of sporofitic chromosomes of
polyploid plants. This incident caused by the growth of female gametes or male
gametes that do not conceive. Problability ofproduce haploid plants is low, then
we can inducting by performing stress temperature, chemical compounds,
pollination late, or irradiation. The success of these ways are still very low.
Genesis formation in vivo haploid plants can be increased in frequency through
various ways:
1. Gynogenesis. Haploid plants derived from the development of the egg cell
that does not fertilization using a pollen that have been irradiated, or use
pollen from other species. In the case of this gynogenesis no possibility of
generating plants when growing triploid endosperm cells while the embryo is
aborted.
2. Androgenesis. In this case the egg cell nucleus is eliminated, and the haploid
plants develop from eggs that carry the male gamete nucleus.
3. Elimination genome. In the case of this occurred due to the elimination of
intergeneric or interspecific genome. After fertilization will occur elimination of
one genome and embryo develops only with one genome to produce haploid
plants.
 4. Semigamy. In this case the nucleus of the egg and the nucleus of gametes
blasphemy splitting separately from one another, so that the resulting haploid
Kimera plant
5. Chemicals treatment. By providing such chemicals chlorampenicol, para-
fluorine-phenilalanine, Maleic hydrazide, can cause cells chromosome
elimination.
6. Provision of treatment high temperatures or low temperatures
7. Radiation with X-ray beam or UV rays
With the method of tissue culture, haploid plant assembly becomes easier
through culturing anthers containing pollen on appropriate media. Pollen is the
generative organ half the number of chromosomes of the cell chromosomes
somatiknya a result of the process of meiosis. Many researchers have managed to
obtain haploid plants in various types of crops such as crucifers family, solanaceae,
Liliaceae, graminae, and others. On anther culture technique yng factor to consider
is the age of physiological interest, interest will be calculated from the form will
determine the proper phase to induce pollen experience androgenesis
The purpose of this experiment is to train students to isolate anther of the flower
and anther meanam induced in vitro to be a haploid plants are androgenesis.

Materials and tools

• flower buds of male papaya plants at various ages physiology

• Media N6 (of composition Nitsch) + 0.5 mg / L NAA + 2 mg / L Kinetin + 30 g /
L and pH 6.5
• Alcohol 70%
• pinset
Procedurs

1. Separate the pistil of male flower of the papaya plant based on their size. Size
correlated with the age of the flower buds.
2. Sterilization flower buds premises dipping into alkolol 70% and then passed
over a Bunsen flame, and let until the fire is extinguished
3. Do the same as the number 2 by 2 times
4. Open the flower buds with pinset and remove the corolla carefully so as not
damaged anther
5. Remove the anther from flower stalks and planted on culture media N6
6. Culture of anther then stored in the dark for 2 months to induce callus growth
7. Anther from the flower buds that has the same size planted in the same bottle

Observations
1. The size of flower (long of corolla), number per flower's anther and anther
color
2. The amount of the fixed yellow anthers, and the amount of brown anthers
3. The amount of culture contamination
4. When formed callus and number of anther callus