HALAMAN JUDUL

i
 LEMBAR PENGESAHAN

Laporan praktikum berjudul Tempe yang disusun oleh:

Kelompok : 3/Senin

Anggota : Dita Baeti Pridiana NIM :21030116120002

Ilham Nur Hakim Rambe NIM :21030116120050

Shulha Amaliyati Istikmala NIM :21030116120014

Telah disetujui oleh asisten pembimbing pengampu materi Tempe pada:

Hari :

Tanggal :

Semarang, 30 Agustus 2017

Mengetahui

Asisten Pembimbing Dosen Pembimbing

(Florence Kharisma) (Prof. Dr. Ir. Abdullah, MS)

NIM: 210301151301106 NIP: 19520312 197501 1 004

ii
 PRAKATA

Puji syukur diucapkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan
rahmat kepada penulis sehingga dapat menyelesaikan Laporan Praktikum Isolasi
Enzim Laboratorium Mikrobiologi Industri.

Terselesaikannya laporan praktikum ini tidak lepas dari bantuan beberapa

pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terimakasih kepada dosen pembimbing
Praktikum Mikrobiologi Industri Dr. Ing. Silviana, ST, MT, dosen pembimbing materi
Isolasi Enzim Prof. Dr. Ir. Abdullah, MS, bapak dan ibu laboran yang mendampingi di
laboratorium, koordinator asisten PDTK, Iqbal Ryan R, asisten laporan praktikum
Isolasi Enzim, Florence Kharisma Anggun Harlika, dan semua asisten yang telah
membimbing selama praktikum. Kepada teman-teman yang telah memberikan
motivasi dan kerjasama yang baik.

“Tiada Gading yang Tak Retak”. Penulis menyadari banyak kekurangan selama
Praktikum Isolasi Enzim ini. Semoga laporan ini dapat berguna bagi para pembaca.
Penulis memohon maaf apabila ada salah kata ataupun hal-hal yang kurang berkenan
di hati pembaca.

Semarang, 30 Agustus 2017

Penyusun

iii
 RINGKASAN

Enzim adalah senyawa protein dari makhluk hidup yang berperan sebagai
biokatalisator. Reaksi-reaksi enzimatik dibutuhkan agar sel dapat memperoleh nutrient
dalam keadaan terlarut yang dapat diserap ke dalam sel, memperoleh energi kimia yang
digunakan untuk biosintesis, perkembangbiakan, pergerakan, dan lain-lain. Isolasi enzim
adalah upaya memperoleh enzim dengan berbagai metode yaitu ; ekstraksi, separasi, dan
presipitasi.

Enzim dapat diproduksi oleh semua sel hidup seperti manusia, hewan, tumbuhan,
dan mikroba. Namun, enzim yang dihasilkan dari mikroba jauh lebih besar karena sifat dari
mikroba yang terus membelah diri dalam waktu singkat. Aktivitas katalitik enzim hanya
diperlihatkan jika dalam suatu sel yang utuh tetapi dapat diekstraksi tanpa kehilangan sifat
metabolitiknya. Oleh karena itu enzim dapat diselidiki di luar sel hidup. (Mutiara, 2004)

Bahan yang digunakan adalah bekatul, NaOH, Aspergillus Niger, glukosa, MgSO4,
KH2PO4, CaCl2, urea, aquadest, dan induser enzim. Alat yang digunkan adalah beaker
glass, centrifuge, cuvet, kertas saring, magnetic stirer, tabung reaksi, erlenmeyer
penghisap, termometer, gelas ukur, pengaduk, stopwatch, timbangan, indikator pH, dan
kompor listrik. Prosedur praktikum dimulai dari perispan bahan baku, pembuatan starter,
fermentasi, analisa hasil, dan uji kadar glukosa.

iv
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .................................................................................................................. i

LEMBAR PENGESAHAN .......................................................................................................ii

PRAKATA .............................................................................................................................. iii

RINGKASAN ........................................................................................................................... iv

DAFTAR ISI.............................................................................................................................. v

DAFTAR TABEL ....................................................................................................................vii

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................................. viii

BAB I PENDAHULUAN .......................................................................................................... 1

1.1Latar belakang ................................................................................................................... 1

1.2Tujuan Penulisan ............................................................................................................... 1

1.3Manfaat Penulisan .......................................................................................................2

BAB II TINJUAN PUSTAKA ..................................................................................................3

2.1Pengertian Umum Enzim.............................................................................................3

2.2Penggolongan Enzim...................................................................................................3

2.3Faktor Yang Mempengaruhu Kerja Enzim..................................................................5

2.4Cara Kerja Enzim.........................................................................................................7

2.5Metode Isolasi Enzim...................................................................................................9

2.6Sumber Enzim............................................................................................................10

2.7........ Teknologi Enzim........................................... .............................................................12

2.8 Penjelasan Kandungan Bahan.....................................................................................13
BAB III METODE PENELITIAN...........................................................................................14

3.1Bahan Dan Alat Yang Digunakan..............................................................................14

3.2Cara Kerja ....................................................................................................................... 15

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN..................................................................................17

4.1 Hubungan Waktu Inkubasi Dengan Aktivitas Enzim................................................17

4.2......................................... Hubungan Rasio Sampel Dengan Air Terhadap Aktivitas Enzim

4.3..................................... Hubungan Penambahan Volume Starter Terhadap Aktivitas Enzim

4.4.................................................... Hubungan Konsentrasi NaOH Terhadap Aktivitas Enzim

v
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................................. 12

LPORAN SEMENTARA ................................................................................... .................. A-1

LEMBAR PERHITUNGAN .............................................................................. .................. B-1

LEMBAR KUANTITAS REAGEN ................................................................... .................. C-1

LEMBAR PERHITUNGAN KUANTITAS REAGEN........................................................ D-1

REFERENSI.......................................................................................................................... E-1

vi
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Enzim Turunan Dari Jaringan Hewan.......................................................................... 10

Tabel 2.2 Enzim Turunan Tumbuhan............................................................................................11

Tabel 2.3 Enzim Mikroba Dan Aplikasi....................................................................................... 11

Tabel 2.4 Komponen Dalam Bekatul........................................................................................... 13

Tabel 3.1 Alat yang Digunakan................................................................................................... 14

Tabel 4.1 Hubungan Waktu Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim................................................ 17

Tabel 4.2 Hubungan Rasio Sampel Dengan Air Terhadap Aktivitas Enzim............................... 17

Tabel 4.3 Hubungan Penambahan Volume Starter Terhadap Aktivitas Enzim...........................

Tabel 4.4 Hubungan Konsentrasi Naoh Terhadap Aktivitas Enzim............................................

vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Pengaruh Suhu Terhadap Akrivitas Enzimatik. ..................................................... 5

Gambar 2.2 Kebergantungan Aktivitas Enzimatik Terhadap pH .............................................. 6

Gambar 2.3 Model Lock And Key Dari Fischer........................................................................ 8

Gambar 2.4 Model Induced Fit Dari Konshland ....................................................................... 9

Gambar 4.1 Hubungan Waktu Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim

Gambar 4.2 Hubungan Rasio Sampel Dengan Air Terhadap Aktivitas Enzim

Gambar 4.3 Hubungan Penambahan Volume Starter Terhadap Aktivitas Enzim

Gambar 4.4 Hubungan Konsentrasi Naoh Terhadap Aktivitas Enzim

viii
vii
vii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Enzim adalah senyawa protein dari makhluk hidup yang berperan sebagai
biokatalisator. Reaksi-reaksi enzimatik dibutuhkan agar sel dapat memperoleh nutrient
dalam keadaan terlarut yang dapat diserap ke dalam sel, memperoleh energi kimia yang
digunakan untuk biosintesis, perkembangbiakan, pergerakan, dan lain-lain. Isolasi enzim
adalah upaya memperoleh enzim dengan berbagai metode yaitu ; ekstraksi, separasi, dan
presipitasi.

Struktur Enzim yang tersusun menjadi dua bagian yang saling berpasangan yaitu
apoenzim dan gugus prostetik Apoenzim adalah bagian protein enzim yang sifatnya tak
tahan panas, dan berfungsi sebagai menentukan kekhususan dari enzim. Koensim adalah
ko-faktor molekul organik kecil yang tahan panas dan mengandung ribosa dan fosfat serta
larut dalam air. Koensim dapat disebut dengan gugus prostetik apabila terikat oleh
apoenzim, tetapi koenzim mudah terpisah dari apoenzim. Fungsi koenzim adalah sebagai
penentu sifat dan reaksinya.

Selain dimanfaatkan sebagai biokatalisataor, enzim banyak berperan dalam industri

komersial dalam bidang pangan maupun medis dan farmakologi. Seperti ; Industri
Deterjen, Enzim Untuk Konversi Pati, Produksi Bahan Bakar Alkohol ,Tekstil Aplikasi,
Enzim Untuk Industri Pakan, Enzim Untuk Industri Makanan, Pengolahan Lemak dan
Minyak, Enzim Untuk Sintesis Organik. Untuk memproduksi enzim dalam jumlah besar
dan mempunyai aktivitas yang tinggi, perlu diperhatikan faktor-faktor penting seperti
kondisi pertumbuhan, cara isolasi, cara pemurnian serta jenis substrat yang digunakan agar
diperoleh enzim dengan tingkat kemurnian tinggi.

1.2 Tujuan Penulisan

1. Mengisolasi enzim dari bekatul

2. Menghitung aktivitas enzim

3. Membandingkan aktivitas enzim dalam bekatul

1.3 Manfaat Penulisan

Manfaat praktikum yang diperoleh adalah dapat mengisolasi enzim dari suatu
makhluk hidup sehingga kebutuhan akan enzim yang masih tergolong mahal dapat
terpenuhi. Hal ini akan membantu mansyarakat maupun industri untuk menghasilkan

1
 produk baik makanan maupun medis yang memanfaatkan enzim dengan menghemat biaya
produksi dan mempermudah proses.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pengertian Umum Enzim

Enzim berasal dari bahasa Yunani yang “enzyme” berarti “di dalam sel”. Enzim
dalah senyawa protein berbentuk bulat (globular) yang terdiri dari rantai-rantai
polipeptida. Fungsi enzim adalah sebagai katalisator yang mempercepat reaksi kimia 108
sampai 1011 kali lebih cepat dibandingkan tanpa menggunakan katalis. Dalam
menjalankan fungsinya enzim akan menempel pada permukaan zat yang akan
membentuk kompleks enzim substrat dan pada akhir reaksi terbentuk enzim kembali
yang akan menurunkan energi aktivasi suatu reaksi kimia.
E+S ES E+P

E = Enzim S = Substrat P = Produk

Enzim dapat diproduksi oleh semua sel hidup seperti manusia, hewan, tumbuhan,
dan mikroba. Namun, enzim yang dihasilkan dari mikroba jauh lebih besar karena sifat dari
mikroba yang terus membelah diri dalam waktu singkat. Aktivitas katalitik enzim hanya
diperlihatkan jika dalam suatu sel yang utuh tetapi dapat diekstraksi tanpa kehilangan sifat
metabolitiknya. Oleh karena itu enzim dapat diselidiki di luar sel hidup. (Mutiara, 2004)

Holoenzim adalah enzim yang lengkap, terdiri dari apoenzim dan gugus prostetik.
Namun, tidak semua apoenzim dan gugus prostetik menyatu. Ketika bagian gugus prostetik
lepas disebut dengan koenzim. Contoh koenzim adalah beberapa jenis vitamin.

2.2 Sifat-Sifat Enzim

Sebagai senyawa protein enzim memiliki karakteristik untuk setiap reaksi kimia
yang terlibat. Beberapa sifat-sifat enzim diantaranya:
a. Enzim bekerja spesifik. Setiap enzim akan mengkatalisis beberapa reaksi biokimia
tertentu untuk mengubah substat menjadi produk dan terbentuk kembali pada akhir
reaksi. Misalnya enzim katalase menguraikan hidrogen peroksida (H2O2) menjadi air
dan O2 sedangkan enzim lipase menguraikan lemak + air menjadi gliserol + asam
lemak.

b. Termolabil. Kerja enzim sangat dipengaruhi suhu. Ketika suhu meningkat maka kerja
enzim akan meningkat. Namun apabila suhu reaksi melebihi suhu kerja enzim maka

2
 akan terdenturasi atau enzim akan rusak dan suhu rendah menyebabkan enzin non-
aktif.

c. Enzim aktif dalam jumlah sedikit. Dalam reaksi biokimia hanya sejumlah kecil enzim
yang dibutuhkan untuk mengubah sejumlah besar substat.

d. Bekerja secara bolak-balik. Enzim tidak menentuka arah reaksi tetapi hanya
mempercepat reaksi sehingga tercapai kesetimbangan. Hal ini dikarenakan enzim
dapat menguraikan senyawa atau memebentuk senyawa tertentu.

2.3 Penggolongan Enzim

Enzim dapat diklasifisikan sebagai dikelompokkan berdasarkan tempat bekerja dan
cara bekerja.

Berdasarkan tempat bekerjanya, enzim dibagi menjadi dua:

a. Endoenzim

Adalah enzim yang bekerja di di dalam sel atau intraseluler. Enzim ini banyak bekerja
dalam pembentukan energi berupa ATP dan sintesis sel.

b. Eksoenzim

Adalah enzim yang bekerja di luar sel atau interseluler. Umumnya berfungsi untuk
menghidrolisis senyawa besar menjadi lebih kecil sehingga dapat masuk melewati
membran sel. Enzim ini tidak digunakan dalam proses kehidupan sel.

Berdasarkan cara bekerja, enzim dapat diklasifisikan sebagai berikut:

a. Oksidareduktase

Enzim yang bekerja dengan bereaksi secara oksidasi dan reduksi sehingga terjadi
transfer elektron.

b. Transferase

Enzim yang bekerja mengkatalisis pemindahan molekul ke molekul lain.

c. Liase

Enzim yang bekerja pengambilan atau penambahan gugusan gugusan molekul

tanpa mengalami peristiwa hidrolisis.

d. Isomerase

Enzim yang mengkatalisis reaksi isomerisasi. Contohnya rasemase dan epimerase.

3
2.4 Metode Isolasi Enzim
Isolasi enzim adalah suatu upaya untuk mendapatkan enzim dari sumbernya dengan
berbagai metode. Sebelum melakukan isolasi enzim, perlu mengetahui lokasi terdapatnya
enzim pada sumbernya. Selanjutnya yang perlu diperhatikan adalah enzim serupa yang
berasal dari sumber berbeda maka berbeda pula jumlah,karakteristik dan aktivitas katalitik
enzim walaupun katalisasi reaksinya sama. Pada isolasi enzim, waktu uji aktivitas dengan
ukuran / porsi yang berbeda-beda. Agar isolasi enzim membuahkan hasil yang lebih akurat,
uji aktivitas harus dilakukan dalam waktu yang relatinf singkat. (Paul, et. al., 1985). Enzim
dapat diperoleh dengan mengisolasi dari sumbernya. Enzim yang telah diisolasi ini dapat
dimanfaatkan lebih lanjut dalam bidang industri maupun kesehatan Untuk mengeluarkan
enzim dari sumbernya perlu dilakukan isolasi yang dapat dilakukan cara.

Metode isolasi enzim yang sering digunakan adalah ekstraksi, koagulasi,

sentrifugasi, filtrasi, dan kromatografi (Susi, 2002).

a. Ekstraksi

Penggunaan metode ekstraksi ditentukan oleh jenis sumbernya. Contoh paling

umum sumber enzim yang biasa diperoleh dengan metode ekstraksi yaitu; biji-bijian.
Ekstrak enzim dari biji-bijian dapat diekstraksi dengan mencampur tepung biji-bijian pada
media cair,kemudian diaduk,lalu enzim dari bagian tanaman yang bersifat lunak diekstraksi
dengan dipotong-potong kecil,dipress kemudian disaring dengan kain biasa. Sedangkan
untkuk mengekstrak enzim dari daun dan biji-bijian dengan cara digiling, lalu
dihomogenisasi dalam media cair, atau langsung diblender. Dalam ekstraksi enzim dari
tanaman digunakan bufer untuk mempertahankan harga pH. Beberapa pH yang dapat
digunakan misal: bufer tris-hidroksimetil amino metan, bufer glisin dan bufer fosfat.
(Joseph, at all, 1994).

b. Separasi

Separasi adalah metode isolasi enzim berdasarkan pemisahan melalui ukuran,

jumlah,kelarutan, dan posisi bagian ikatan enzim. Metode separasi enzim dapat dilakukan
sebagai berikut ;

1) berdasarkan ukuran atau massa : centrifugasi, gel filtrasi, dan dialysis dengan atau
ultrafiltration skala pada umumnya kecil.
2) Berdasarkan kepolarannya : metode ion-exchange chromatography,
chromatofocusing, ekeltroforesis, isoelektric focusing, dan hydrophobic
chromatography dengan skala yang ditargetkan biasanya skala kecil.
3) Baerdasarkan kelarutannya : change in pH, change in ionic strength, dan penurunan
dielektrik konstan dengan skalanya biasanya besar.

4
 4) Berdasarkan struktur enzimnya : afnitas kromatografi, afnitas elution, dye-ligand
chromatography, immunoadsorption, dan covalent chromatography dengan target
skala biasanya kecil. (Wardayani Ari, Ahsanatun Syahidawati, 2012)
c. Presipitasi

Presipitasi atau proses pengendapan ekstrak enzim yang dikenal untuk memurnikan
enzim antara lain ;

1) presipitasi dengan pengaturan pH,

2) peningkatan kekuatan ion,
3) penurunan kekuatan ion dan
4) penggunaan pelarut organik.
Presipitasi yang paling banyak digunakan adalah dengan peningkatan kekuatan ion
atau lebih dikenal dengan nama salting out (Harris dan Angal, 1989). Salting out adalah
fenomena pengendapan protein akibat adanya kelebihan garam (Wang, 2005). Salah satu
contoh garam yang sering digunakan yaitu ammonium sulfat karena kelarutannya yang
tinggi, murah, rendahnya toksisitas terhadap sebagian besar enzim dan mempunyai efek
menstabilkan pada beberapa enzim (Chaplin, 2004)

2.5 Penjelasan Kandungan Bahan

Bekatul adalah lapisan terluar dari bulir beras yang terbungkus oleh sekamnya dan
merupakan produk sampingan. Bekatul memilki nutrisi yang cukup baik dan memiliki
harga jual yang ekonomis. Pada dasarnya, bekatul dihasilkan melalui proses penggilingan
atau penumbukan padi untuk dijadikan beras. Pada tahap inilah bekatul yang merupakan
lapisan terluar yang menyelimuti endospermas (isi) dipisahkan dengan endosperma beras
agar dapat diolah menjadi nasi. Ketika padi kehilangan bagian sekam pada proses
penggilingan (pengelupasan kulit), maka akan diperoleh brown rice (beras pecah kulit)
yang terdiri atas bran, endosperma, dan embrio. Dalam hal ini, ada dua lapisan yaitu dedak
yang merupakan bagian bran yang kasar sedangkan bekatul merupakan bagian bran yang
halus. Selama proses penggilingan padi dengan basis satu kilogram menjadi beras akan
diperoleh 16-28% sekam padi, 2-4% bekatul, 6-10% dedak, dan sekitar 60% endosperma
(beras nasi).

Tabel 2.1 Komponen dalam bekatul (Widyastuti Laras Ayni, dkk ,2010)

Komponen Banyaknya
Protein 13,11 % -17,19 %
Lemak 2,52 % - 5,05 %
Karbohidrat 67,58 % - 72,74 %
Serat Kasar 370,91 - 387,3

5
 Selain kandungan diatas, bekatul juga kaya akan vitamin B1 (Thiamin) yang
bermanfaat untuk mencegah dan mengobati penyakit beri-beri. dikarenakan memiliki
kandungan gizi yang cukup tinggi, maka bekatul aman untuk dikonsumsi. (Wulandari Mita
dan Erma Handarsari, 2010)

2.6 Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Enzim

Beberapa faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim adalah sebagai berikut:
a. Suhu
Enzim dapat mempercepat terjadinya reaksi kimia pada suatu sel hidup. Dalam
batas-batas suhu tertentu, kecepatan reaksi yang dikatalisis enzim akan meningkat seiring
dengan naiknya suhu. Reaksi yang paling cepat terjadi pada suhu optimum (Rodwell,
1987). Suhu yang terlalu tinggi akan menyebabkan enzim terdenaturasi (Poedjiadi, 1994).
Pada suhu 0oC, enzim menjadi tidak aktif dan dapat kembali aktif pada suhu normal (Lay
dan Sugyo, 1992). Hubungan antara aktivitas enzim dengan suhu ditunjukkan dalam
Gambar 2.1

Gambar 2.1 Hubungan aktivitas enzim dengan suhu (Rodwell, 1987)

b. pH

Enzim pada umumnya bersifat amfolitik, yang berarti enzim mempunyai konstanta
disosiasi pada gugus asam maupun gugus basanya, terutama gugus terminal karboksil dan
gugus terminal amino. Perubahan kereaktifan enzim diperkirakan merupakan akibat dari
perubahan pH lingkungan (Winarno, 1989). Hubungan kecepatan reaksi dengan pH
ditunjukkan pada Gambar 2.

6
 Gambar 2.2 Hubungan kecepatan reaksi dengan pH (Winarno, 1989)

c. Konsentrasi enzim

Semakin tinggi konsentrasi enzim maka kecepatan reaksi akan meningkat hingga
batas konsentrasi tertentu. Namun, hasil hidrolisis substrat akan konstan dengan naiknya
konsentrasi enzim. Hal ini disebabkan penambahan enzim sudah tidak efektif lagi (Reed,
1975). Hubungan antara laju reaksi enzim dengan konsentrasi enzim ditunjukkan dalam
Gambar 3.

Gambar 2.3 Hubungan laju reaksi dengan

konsentrasi enzim (Reed, 1975)

d. Konsentrasi substrat

Kecepatan reaksi enzimatis pada umumnya tergantung pada konsentrasi substrat.

Kecepatan reaksi akan meningkat apabila konsentrasi substrat. meningkat. Peningkatan
kecepatan reaksi ini akan semakin kecil hingga tercapai suatu titik batas yang pada
akhirnya penambahan konsentrasi subtrat hanya akan sedikit meningkatkan kecepatan
reaksi (Lehninger, 1982).

e. Aktivator dan inhibitor

Beberapa enzim memerlukan aktivator dalam reaksi katalisnya. Aktivator adalah

senyawa atau ion yang dapat meningkatkan kecepatan reaksi enzimatis. Komponen kimia
yang membentuk enzim disebut juga kofaktor. Kofaktor tersebut dapat berupa ion-ion
anorganik seperti Zn, Fe, Ca, Mn, Cu, Mg atau dapat pula sebagai molekul organik
kompleks yang disebut koenzim (Martoharsono, 1997).

7
 Menurut Wirahadikusumah (1989), inhibitor merupakan suatu zat kimia tertentu

yang dapat menghambat aktivitas enzim. Pada umumnya cara kerja inhibitor adalah

dengan menyerang sisi aktif enzim sehingga enzim tidak dapat berikatan dengan substrat

sehingga fungsi katalitiknya terganggu (Winarno, 1989).

2.7 Reaksi Cara Kerja Enzim

Cara kerja enzim dapat dijelaskan dengan dua teori, yaitu teori kunci-gembok (lock
and key theory) dan teori kecocokan yang terinduksi (induced fit theory), ditunjukkan
dalam Gambar 4.

Gambar 2.4 Teori kunci-gembok dan teori kecocokan induksi (Page, 1997)

Menurut teori kunci-gembok, enzim dan substrat bergabung bersama membentuk

kompleks, seperti kunci yang masuk dalam gembok. Hal ini dikarenakan adanya

kesesuaian bentuk ruang antara substrat dengan sisi aktif enzim, sehingga sisi aktif enzim

cenderung kaku. Di dalam kompleks, substrat dapat bereaksi dengan energi aktivasi yang

rendah. Setelah bereaksi, kompleks lepas dan melepaskan produk serta membebaskan

enzim. Sedangkan menurut teori kecocokan yang terinduksi, sisi aktif enzim merupakan

bentuk yang fleksibel. Ketika substrat memasuki sisi aktif enzim, bentuk sisi aktif

termodifikasi melingkupi substrat membentuk kompleks. Ketika produk dihasilkan,

maka enzim akan dilepaskan dalam bentuk bebas dan dapat bereaksi kembali dengan

substrat yang baru.

8
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Bahan dan Alat yang Digunakan

1. Bahan yang Digunakan

a. Bekatul 40 gram g. CaCl2

b. NaOH 0,5 M h. NaCl

c. Aspergillus Niger i. Urea 0.,6 gram

d. Glukosa j. Aquadest

e. MgSO4 k. Induser Enzim

f. KH2PO4

2. Alat yang Digunakan

Tabel 3.1 Alat yang Digunakan
Kompor Listrik Timbangan
Digital

Gelas Ukur Stopwatch

pH Meter Pengaduk

Centrifuge Cuvet

Kertas Saring Magnetic Stirer

Tabung Reaksi Erlenmeyer

9
 Penghisap

Termometer

3.2 Cara Kerja

Persiapan Bahan Baku

a. Haluskan bekatul yang diperoleh dengan mortar, setelah halus timbang 6,3 gram (variabel
1,2,3) dan 3,6 gram, masukkan dalam beaker glass
b. Bahan direndam kedalam larutan NaOH 0,5 M (variabel 1,2,3) dan 1 M (variabel 4),
kemudian dipanaskan pada suhu 90 ℃ selama 1 jam
c. Setelah itu keringkan menggunakan oven pada suhu 110 ℃ dan didiamkan selama 1 malam.

Pembuatan Starter

a. Media inokulum dibuat dengan cara menyiapkan 200 ml larutan media dalam erlenmeyer.
Media terdiri dari 10 gr/L glukosa, 1 gr/L NaCl, 2 gr/L KH2PO4, 0,2 gr/L CaCl2, 1,7 gr/L
MgSO4 dan Aspergillus Niger ditambahkan kedalam campuran.
b. Starter diinkubasi menggunakan shaker pada temperaturnya ruangan selama 1 malam.

Fermentasi

a. Sampel dicampur menggunakan air dengan rasio bekatul-air 6 gram (variabel 1,2,4) dan 9
gram (variabel 3) kemudian diaduk.
b. Atur pH larutan 4
c. Tambahkan kedalam larutan starter sebanyk 15 ml (variabel 1,3,4) dan 20 ml (variabel 2)
serta urea sebanyak 0,6 gr
d. Fermentasi dilakukan secara aerob selama 1 malam pada shaker.

Analisa Hasil

a. Hasil dari fermentasi di sentrifugasi pada kecepatan 2500 rpm selama 20 menit.
b. Kemudian disaring menggunakan pompa vakum dan diperoleh filtratnya (Crude enzim)
c. Filtrat yang diperoleh sebaanyak 15 ml dicampur dengan CMC sebanyak 15 ml
d. Kemudian campuran tersebut diinkubasi selama 10, 20, 30, 40, dan 50 menit
e. Sebelum dan setelah inkubasi lakukan uji kadar glukosa pada sampel bekatul

10
Uji Kadar Glukosa

a. Membuat larutan glukosa standar dengan melarutkan 2,5 gram glukosa dalam 1 liter
aquadest. Standardisasi glukosa standar dengan mencampur 5 ml glukosa standar dengan
5 ml fehling A dan 5 ml fehling B. Campuran ini kemudian dipanaskan sampai 70 oC dan
dititrasi dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir hilang. Kemudian
ditambah 2 tetes MB (methylen blue) dan dilanjutkan titrasinya sampai warna merah bata.
Mencatat kebutuhan titran (F).
b. Kemudian sebanyak 15 ml sampel diambil, ditambahkan 5 ml fehling A, 5 ml fehling B,
dan 5 ml glukosa standar. Campuran ini kemudian dipanaskan sampai 70oC dan dititrasi
dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir hilang. Kemudian ditambah 2
tetes MB dan dilanjutkan titrasinya sampai warna merah bata. Mencatat kebutuhan titran
(M) dan kadar glukosa dapat dihitung dengan persamaan:

𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑉𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛
(𝐹−𝑀) 𝑥 𝑥
𝑉𝑡𝑖𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑉𝑑𝑖𝑎𝑚𝑏𝑖𝑙
C= 𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
x 2,5

Glukosa standar = 2,5 gram dalam 1 liter = 2,5 mg/mL

F = harus dalam mL
M = harus dalam mL
Maka C (konsentrasi glukosa) = mg/mL

𝐶
Aktivitas Enzim = 𝑇 x BM x 1000 x 1 unit/1μmol
Dimana:
C = konsentrasi glukosa per Ml ekstrak enzim
T = Waktu Inkubasi (menit)
1 unit enzim = besarnya aktivitas enzim yang dibutuhkan untuk membebaskan 1μmol
glukosa per menit per mL enzim

DAFTAR PUSTAKA

Wahono, S.K., V.T., Darsih C., D., Ferdiansyah A., dan Hermawan. Journal Of Energy Procedia,
vol 65 pp. 331-336

11
Wenserly M.C.A., Martin, C., G.J.M., dah Gouveia, E.R. 2013. Increase In Etanhol Production
from Sugarcane Bagasse Based On Combined Pretreatments and Fed-Batch Enzymatic Hydrolisis.
Journal Of Bioresource Technology, vol. 128, pp. 448-453

12
13