ENZIM

&
Aplikasinya
SISWATI SETIASIH
Lab Biokikmia Dept Kimia FMIPA UI

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 1

UI
 PENDAHULUAN ENZIM
• adalah katalis biologis yang berperan mesuport hampir semua
reaksi kimia untuk mempertahankan homeostatis tubuh
• umumnya merupakan protein (kecuali ribozym*) dapat
ditemukan dalam semua jaringan dan cairan tubuh, seperti :
- enzim intraseluler berperan mengkatalisis reaksi pada jalur metabolisme
- enzim membran plasma berperan meregulasi/mengendalikan
katalisis di dalam sel untuk merespon signal dari intrasel
- enzim dalam sirkulasi bertanggung jawab untuk mengendalikan proses
pembekuan darah
• Hampir setiap proses penting dari kehidupan sangat tergantung
pada aktivitas enzim

*) molekul RNA yg mengkatalisis reaksi pada ikatan fosfodiester pada RNA

yg lain

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 2

UI
 PENGENALAN ENZIM
enzim untuk kepentingan biomedis
• Senyawa polimer biologis, mengkatalisis proses yg dinamis dlm
kehidupan
• faktor penentu berlangsungnya berbag peristiwa fisiologis
• memegang peran sentral dalam keadaan sehat atau sakit
• Pemecah bhn makanan unt suplai energi
• perakitan senyawa kimia pembangun struktur sel (protein,
membran)
• DNA yg mengkode informasi gen
• Pemanfaatan energi unt menghasilkan pergerakan sel

Semua peristiwa di atas dpt terjadi karena adanya aktifitas enzim

yang sangat terkoordinasi dg sangat teliti
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 3
UI
 Early Enzyme Discoveries
• Keberadaan enzim telah dikenal baik lebih dari 1 abad
• Jon Jakob Berzelius (Swedish chemist, 1835) → senyawa
kimia dengan aktivitas katalitik.
• James B. Sumner (Cornell University, 1926) mendapat Nobel
Prize (1947) → urease (jack bean)

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 4

UI
 ENZIM
Konsep
 biokatalis yang diperlukan oleh semua sel hidup untuk
melaksanakan berbagai reaksi biokimia di dalam maupun diluar sel
 umumnya merupakan senyawa protein (kec ribozim)
 enzim bekerja dengan cara mengikat reaktan (substrat), kemudian
mengubahnya menjadi produk lalu melepaskan produk tsb,
dengan membebaskan kembali enzimnya
 Substrat tsb diikat pada sisi pengikatan substrat yang spesifik
dari molekul enzim, melalui interaksi dengan residu asam amino
yang menyusun enzim tsb
 Pers Reaksi :
E + S ES ES* P + E
ES* →senyawa antara (kompleks enzim –substrat ) dalam keadaan transisi

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 5

UI
 KARAKTERISTIK ENZIM

 bekerja sangat efisien

 memiliki derajat kespesifikan sangat tinggi
terhadap molekul substrat
 aktivitasnya dapat dikendalikan oleh suatu aktivator
atau inhibitor
 aktivitasnya dipengaruhi oleh perubahan struktur
tiga dimensinya (tergantung pd faktor lingkungan)
 memiliki sisi aktif/sisi katalitik sisi pengikatan
substrat yang spesifik dari molekul enzim

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 6

UI
Bagaimana enzim dibedakan dari katalis kimia dan
mengapa dalam tubuh terdapat ribuan enzim?

Enzim mengkatalisis reaksi dengan beberapa cara :

1. mempercepat reaksi lebih dari 109-1014 kali dibandingkan dg
tanpa enzim
2. Enzim bekerja hanya untuk satu senyawa dapat membedakan
molekul dg struktur yang sangat mirip dg substratnya yg
spesifiknya.
Misal :bentuk L untuk asam amino dan D untuk karbohidrat
3. Aktivitas enzim sangat mudah dikendalikan sedangkan katalis
biasa sulit dikontrol

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 7

UI
 Efisiensi kerja enzim
Kekuatan katalitik enzim
peningkatan laju reaksi diasumsikan ibarat 2 buah kotak
(berukuran 12 ft x 12ft x 8 ft) @ berisi 380 ribu bola golf yang
akan ”bereaksi” dengan melepaskan energi dan berubah menjadi
biru.
- jika pada kotak pertama tanpa enzim, maka laju reaksinya :
untuk 100 bola diperlukan waktu 1 tahun
- tetapi pada kotak yang lain, bila terdapat 1 molekul enzim,
maka : seluruh bola akan berubah menjadi biru dalam waktu
1 detik

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 8

UI
 SISI/PUSAT AKTIF ENZIM

sisi pengikatan
substrat/sisi katalitik

Substrat

ENZIM Produk
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 9
UI
 SISI/PUSAT AKTIF ENZIM

• Tempat terjadinya reaksi katalitik, dimana substrat terikat pada

molekul enzim membentuk komplek enzim-substrat yang akan
menghasilkan produk
• Menempati bagian yang relaif kecil dari total volume enzim
berupa celah/kantung kecil berbentuk tiga dimensi (hasil studi
difraksi sinar X)
• dibentuk oleh gugus gugus fungsi dari residu-residu asam amino
yang menyusunnya membuat setiap enzim menjadi selektif untuk
substratnya, dan hanya akan membentuk dan melepaskan produk
yang spesifik.

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 10

UI
 SISI/PUSAT AKTIF ENZIM

• Sisi pengikatan substrat merupakan bagian yang diperlukan

untuk seluruh interaksi antara substrat dan enzim.
• Sisi aktif enzim juga dibentuk oleh adanya interaksi lemah yang
dapat mendorong terjadinya keadaan transisi
• Kespesifikan dari pengikatan ini tergantung pada susunan atom
-atom yang terdapat pada pusat akatif yang tertata secara tepat
•Gugus fungsi dari suatu residu asam amino pada sisi aktif akan
mengaktifkan substrat dan menurunkan energi aktivasi.(energi
yang diperlukankan untuk membentuk senyawa antara dengan
energi tinggi/dalam posisi tidak stabil  keadaan transisi

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 11

UI
 SISI/PUSAT AKTIF ENZIM

 Sebagian energi yang digunakan untuk meningkatkan laju reaksi

berasal dari interaksi-interaksi lemah (seperti ikatan hidrogen dan
ikatan ionik) antara S dan E
 Energi ikatan (GB) dapat untuk menurunkan entropi substrat atau
untuk mengubah konformasi enzim (model induce-fit)
 Energi ikatan jg mempengaruhi kespesifikan enzim terhadap
substratnya

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 12

UI
 Contoh Spesifisitas Enzim Pada Substratnya
Residu asam amino yang membentuk sisi aktif suatu enzim dapat
menentukan kespesifikan molekul yang akan menjadi substrat
bagi enzim tersebut
Contoh, bentuk skematik sisi pengikatan substrat dari :

Val Thr
Asp

a) tripsin b) kimotripsin c) elastase

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 13

UI
 Contoh Spesifisitas Enzim Pada Substratnya

• Tripsin (sisi aktif : Asp bermuatan negatif) memotong

ujung C residu as. amino (bermuatan positif) Lys dan Arg

• Khimotripsin (sisi aktif relatif kecil : Gly dan Ser) memotong

ujung C residu as.amino dengan rantai samping besar : as.
amino aromatis dan hidrofob

• Elastase (sisi aktif relatif besar : Val dan Thr) memotong

ujung C residu as. amino dengan rantai samping pendek yang
tidak bermuatan : Gly dan Ala

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 14

UI
 KESPESIFIKAN ENZIM, dibedakan atas 4 tipe :
• Ikatan (linked) Spesifik
enzim hanya mengkatalisis satu tipe reaksi tertentu dengan
substrat yang mempunyai ikatan tertentu
contoh : Lipase mengkatalisis hidrolisis suatu ester  asam & alkohol
• Gugus Spesifik
enzim hanya mengkatalisis substrat dg gugus fungsi tertentu
(asam amino, fosfat, metil)
contoh : pepsin mengkatalisis putusnya ikatan peptida dg ggs tertentu
ggs aromatis dari residu asam aminonya)
• Absolut Spesifik
Satu enzim hanya mengkatalisis satu substrat (reaksi)
Contoh : urease mengkatalisis hidrolisis urea  CO2 dan NH3
• Stereo Spesifik
Enzim mengkatalisis substrat dg struktur stereokimia tertentu
Contoh : laktat dehidrogenase hanya dpt mengkatalisis oksidasi L-laktat
(tidak D-laktat)
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA
UI
15
 Enzyme Relative to Substrate Type
• Although enzymes are highly specific for the kind
of reaction they catalyze, the same is not always
true of substrates they attack. For example, while
succinic dehydrogenase (SDH) always catalyzes
an oxidation-reduction reaction and its substrate
is invariably succinic acid, alcohol dehydrogenase
(ADH) always catalyzes oxidation-reduction
reactions but attacks a number of different
alcohols, ranging from methanol to butanol.
Generally, enzymes having broad substrate

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 16

UI
 AKTIVITAS ENZIM
 Enzim tidak mengubah konstanta kesetimbangan reaksi yang
dikatalisisnya, namun mempercepat dicapainya kesetimbangan
 Enzim dapat meningkatkan laju reaksi kimia dgn cara menurun-
kan energi aktivasi* (G‡)
 energi yang diperlukan untuk membentuk senyawa
antara berada dlm keadaan transisi/reaktif* agar
dapat bereaksi menghasilkan produk

 Molekul enzim walaupun saat proses katalisis berlangsung

dapat mengalami modifikasi, namun pada akhir reaksi enzim tsb
akan dibebaskan dan kembali kebentuk semula.

*) memiliki energi bebas yg lb rendah dr energi aktivasi pd

reaksi tanpa enzim

**) keadaan dengan posisi tidak stabil

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 17
UI
 ENERGI AKTIVASI

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 18

UI
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 19
UI
 Transition State

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 20

UI
 AKTIVITAS ENZIM

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 21

UI
 ENERGI AKTIVASI
Profil energi reaksi perubahan A (substrat)
menjadi B (produk) yg dikatalisis dan reaksi
tanpa katalis.
Untuk menyederhanakan gambar, pengikatan
S oleh enzim (ES) tidak diperlihatkan.
∆G (energi aktivasi) adalah perbedaan energi
antara A pada ground state dan A* pada
keadaan transisi.
Keadaan transisi dari reaksi yang dikatalisis
berada pada level energi bebas yang lebih
rendah sehingga energi aktivasi dr reaksi yg
dikatalisis tsb menjadi kecil dan reaksi
berjalan lebih cepat.

∆G adalah sebuah ukuran dari efisiensi suatu

katalis yang dapat menentukan seberapa
besar kecepatan reaksi dari suatu reaksi yang
dikatalisis dengan reaksi tanpa katalis.

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 22

UI
 MODEL PENGIKATAN
ENZIM - SUBSTRAT
• MODEL LOCK & KEY (Emil Fisher)
menggambarkan kespesifikan yang sempurna dari interaksi
enzim-substrat, pusat aktif bersifat kaku, tidak
memperhitungkan adanya perubahan dinamis ketika terjadinya
proses katalitik.
• MODEL INDUCED FIT (Daniel Koshland)
enzim dapat mengubah bentuk sisi pengikatan substrat/pusat
aktif sehingga komplement dengan substrat pada saat substrat
substrat telah terikat. Substrat ketika mendekati molekul enzim
dapat menginduksi perubahan konformasi enzim. (analogi
tangan dengan sarung tangan)

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 23

UI
 PENGIKATAN ENZIM-SUBSTRAT
MODEL LOCK & KEY (Emil Fisher)
E + S ES ES* P + E

SUBSTRAT A

ENZIM BEBAS

ENZIM
+
C

PRODUK
ENZIM SUBSTRAT

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 24

UI
 PENGIKATAN ENZIM-SUBSTRAT
MODEL INDUCED FIT (Daniel Koshland)
SUBSTRAT A
ENZIM BEBAS

ENZIM

ENZIM SUBSTRAT

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPAPRODUK 25

UI
 PENGIKATAN SUBSTAT DG ENZIM

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 26

UI

This is lipase.
This enzyme hydrolyzes
esters of lipids which are
found in the interface
between lipid and water. In
water, access to the active
site serine is blocked by a
by a helix.
12/3/2017
ENZIM LIPASE
When lipase binds to Compare the position of the
the the interface helix in the free enzyme and in
created by its the enzyme-substrate
substrate, the helix complex.
moves allowing the
substrate to bind at
the active site.n
lipase
Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 27
UI
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 28
UI
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 29
UI
 Model PENGIKATAN SUBSTRAT-ENZIM

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 30

UI
PROSES KATALITIK ENZIM PADA PUSAT AKTIF

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 31

UI
PROSES KATALITIK
Model ENZIM
PENGIKATAN PADA PUSAT AKTIF
SUBSTRAT-ENZIMvv

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 32

UI
PROSES KATALITIK ENZIM PADA PUSAT AKTIF

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 33

UI
 Model
PROSES PENGIKATAN
KATALITIK ENZIM SUBSTRAT-
PADA PUSATENZIMv
AKTIF

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 34

UI
PROSES KATALITIK ENZIM PADA PUSAT AKTIF

- Proximity dan Strain effect

- Electrostatic effect
- Acid-base catalysis
- Covalent catalysis

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 35

UI
PROSES KATALITIK ENZIM PADA PUSAT AKTIF

1. Catalysis by proximity – for the molecules to react they

must come within bond-forming distance of one another.
When an enzyme binds substrate molecules at its active site, it
creates a region of high local substrate concentration. Enzyme-
substrate interactions orient reactive groups and bring them
into proximity with one another.
2. Acid base catalysis – the ionizable functional groups of
aminoacyl side chains of prosthetic groups contribute to
catalysis by acting as acids or bases
PROSES KATALITIK ENZIM PADA PUSAT AKTIF

• Catalysis by strain – enzymes that catalyze the lytic

reactions involve breaking a covalent bond typically bind
their substrates in a configuration slightly unfavorable for
the bond that will undergo cleavage
• Covalent Catalysis – involves the formation of a covalent
bond between the enzyme and one or more substrates which
introduces a new reaction pathway whose activation energy
is lower
 Basic Mechanism of Catalysis

3 basic types 1) Bond Strain Conformational change

2) Acid-base transfer Chemical reaction
3) Orientation Space arrangement

Concert Carboxypeptidase A Metal protease

Carboxypeptidase B Exopeptidase
Carboxypeptidase Y

Sequential Chymotrypsin Ser-protease

Trypsin Endopeptidase
Elastase

Juang RH (2004) BCbasics

 Concerted Mechanism of Catalysis
Carboxypeptidase A
Active (248)
(270)
site Tyr
Glu 3 4
pocket O-
ACTIVE Site for
COO - H SITE specificity
+
H
H O-
C N R 5
N C C
2
Substrate O-

Juang RH (2004) BCbasics

peptide 1 + COO - +Arg (145)
chain His
(196)
Zn Glu C-terminus
(72) Check for
His (69)
C-terminal
 Acid-Base Catalysis

Adapted from Nelson & Cox (2000) Lehninger Principles of Biochemistry (3e) p.252
Adapted from Alberts et al (2002) Molecular Biology of the Cell (4e)

Specific Induced to transition state

Acid-base
Catalysis + Acid +
N catalysis N
O H H
=

O
C

=
H O O
p.167

=
=
N +d C C H Both C
H H H N C H
N H N C
C
H O H O H H O H
-d H H H H
O H H
H H O - O O - O
Base C C
catalysis
Slow Fast Fast Very Fast
 KLASIFIKASI DAN NOMENKLATUR ENZIM
1. Penamaan non-sistemik (TRIVIAL)
Memberi akhiran –in, seperti : tripsisn rennin, ptyalin  tdk dapat
menerangkan hubungan antara enzim dengan substratnya, sifat
dan jenis reaksi yang dikatalisisnya
2. Nama Umum (common name)
Memberi akhiran –ase pada nama substrat atau pada tipe reaksi yg
dikatalisisnya, seperti :
- maltase (maltosa) - hidrolase (hidrolisis)
- lipase (lipid) - deaminase
3. Penamaan sistematis (The International Commission on Enzymes)
menjadi enam kelompok (kelas) utama, berdasarkan tipe reaksi
yang dikatalisisnya.
- kelas → dibagi lagi menjadi sub kelas
- sub kelas → dibagi lagi menjadi sub-sub kelas
- setiap enzim → memiliki nomor E.C. (Enzymes Commission) dan
suatu nama resmi dengan akhiran -ase.
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 41
UI
 Penamaan SISTEMATIS
(Enzymes Commission =EC)
Setiap enzim memilki nomor EC dg kode terdiri
atas 4 digit → berupa
- Digit 1 → kelas,
- Digit 2 → subkelas,
- Digit 3 → sub-subkelas dan
- Digit 3 → entry number

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 42

UI
Contoh
- Nama resmi enzim → ATP : D-glukosa 6-fosfotransferase
- Nama Umum → glukokinase
- Nomor komisi enzim → EC 2.7.1.2

Keterangan :
- Digit pertama (angka 2)
menunjukkan enzim klas 2 (transferase),
mengkatalisis pemindahan ggs fungsi

- Digit ke dua (angka 7)

merupakan sub-klas ke 7 dari klas transferase,  enzim
yang memindahkan ggs fosfat dari ATP ke D-glukosa

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 43

UI
- Digit ke tiga (angka 1)
Merupakan sub-sub kelas 1 dari sub kelas 7 pada kelas
transferase,  enzim yg memindahkan ggs fosfat dari
ATP ke cincin glukosa pada posisi ggs hidroksil (OH)
dari C 6 nya
- Digit ke empat (angka 2)
Enzim dengan tsb di atas (oleh Komisi Enzim diurutkan
dengan entry number 2 pada sub-sub kelas 2.7.1

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 44

UI
 KLASIFIKASI ENZIM

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 45

UI
OKSIDOREDUKTASE
• mengkatalisis reaksi redoks dalam tubuh yg penting dalam pembentukan
energi
• Banyak terdapat dlm mitokondria (tempat diproduksinya ATP
• Contoh :
1. Dehidrogenase (mengkatalisis penghilangan hidrogen dr substrat)
2. Oksidase (mengaktifkan oksigen shg nudah bergabung dg substat)
3. Katalase (mengkatalisis penguraian hidrogen peroksida menjadi air dan
O2)
4. Peroksidase (mengkatalisis penguraian organik peroksida menjadi air
dan H2O2)

TRANSFERASE
• Pemindahan gugus fungsi antara 2 substrat,
• Contoh : kinase (terlibat dlm pemindahan gugus fosfat)
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 46
UI
HIDROLASE/enzim hidrolitik
• Menghidrolisis karbohidrat
• Contoh :
1. Karbohidrase : ptialin, maltase, sukrase, laktase
2. Esterase : gastrik lipase, steapsin, fosfatase.
3. Protease : pepsin, tripsin, khimotripsin
4. Aminopeptidase
5. Karboksipeptidase

ENZIM DARI GINJAL

Jika tekanan darah turun (karena perdarahan or hipokalemia) 
renin akan disekresi ke dalam aliran darah.
Angitensinogen --- renin → angiotensin I ---- converting → angiotensin II
enzim

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 47

UI
 AKTIVITAS ENZIM
Banyak enzim memerlukan molekul kecil non-protein
sebagai kofaktor/koenzim untuk aktivitas katalitiknya
APOENZIM + KOENZIM → HOLOENZIM
bag protein bag non-protein (enzim aktif)
(tidak aktif)
Aktivitas enzim, diekspresikan sebagai laju reaksi (Vo)
dengan satuan standar unit aktivitas (U) --→
banyaknya enzim yg dapat mengubah substrat sebesar
1 mmol menjadi produk per menit di bawah kondisi optimum
Aktivitas spesifik adalah
- banyaknya unit aktivitas enzim per mg protein
- ukuran tingkat kemurnian enzim
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 48
UI
 Enzyme Activity Unit

S → P mmole

Product [P]
t
vo = [P] / min Slope
tan

Unit = mmole /min 0 10 20 30 40

Reaction time (min)

Juang RH (2004) BCbasics

Specific Activity Units y
Activity = Protein (mg) y = tan
x x
 Kcat
• Rate constant for rate limiting step
• Also called as turnover number, molecular activity.
• The number of [S] molecule in a unit time when the
enzyme is fully saturated with [S]
• Vmax=[kcat][ET]
– represent properties when [E] is saturated with substrate,
thus less informative in low [S]
– different enzyme may have same values
 KOENZIM
 suatu senyawa organik umumnya berasal dari vitamin
yang termodifikasi (mis, thiamin pirofosfat, piridoksal
fosfat, NADH) yang terikat lemah (non-kovalen) pada
bagian protein dari molekul enzim.
 dibutuhkan dalam jumlah kecil bagi diet manusia).
 Vitamin dibagi menjadi dua kelompok
- vitamin yang larut dalam air
- vitamin yang larut dalam lemak
Selain itu ada beberapa nutrien mirip vitamin (al, asam lipoat,
carnitin dan PABA) yang dapat disintesis dalam jumlah kecil
yang dapat memfasilitasi proses yg dikatalisis enzim.
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 51
UI
 Essensial ion Coenzym

Ion aktivator Ion metal Cosubstrat Gugus prostetik

Ikatannya lemah Ikatannya kuat Ikatannya lemah Ikatannya kuat

 PERAN KOENZIM

PRODUK

APOENZIM
HOLOENZIM
SUBSTRAT
KOENZIM

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 53

UI
 Role of Coenzymes

• The functional role of coenzymes is to act

as transporters of chemical groups from
one reactant to another. The chemical
groups carried can be as simple as the
hydride ion (H+ + 2e-) carried by NAD or the
mole of hydrogen carried by FAD; or they
can be even more complex than the amine
(-NH2) carried by pyridoxal phosphate
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 54
UI
Vitamin dan bentuk koenzimnya
 NADH is Structure of NAD+
shown in the box insert.
Structure of FAD
The -OH phosphorylated in NADP+ is
indicated by the red arrow.

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 56

UI
 VITAMIN LARUT DALAM LEMAK BENTUK KOENZIM

• Vitamin A Retinal
• Vitamin D 1,25-dihidroksikholekalsi-
ferol
• Vitamin E Belum diketahui
• Vitamin K Belum diketahui

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 57

UI
PENGUKURAN AKTIVITAS ENZIM
Jumlah enzim dapat ditentukan berdasarkan aktivitas katalitiknya
(S →P) bila :
- Persamaan reaksi yang dikatalisisnya telah
diketahui
- Tersedia prosedur analisis untuk mengukur substrat
yang hilang atau produk yang terbentuk
- kebutuhkan kofaktor/koenzim, pH dan suhu untuk
aktivitas optimum enzim
- Tersedia substrat dengan jumlah yang memadai
laju reaksi dapat ditentukan dengan
proporsional terhadap konsentrasi enzim (sec exp)

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 58

UI
 PENGUKURAN ENZIM
Aktivitas enzim dapat ditentukan berdasarkan perubahan
absorbansi pada l tertentu dari senyawa yang diukur :
- [S] atau [P]
- Koenzim yang terlibat dalam reaksi, seperti NADH atau
NADPH menjadi NAD+ atau NADP+
Contoh reaksi (Laktat dehidrogenase)

Laktat + NAD+ Piruvat + NADH

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 59

UI
PENGUKURAN ENZIM
- Reaksi yang digabung (coupling) dengan reaksi enzim kedua.
- Contoh:
glukosa oksidase dan peroksidase dapat digunakan untuk
mengukur kadar glukosa dalam darah
Glukosa + O2 + H2O

glukosa oksidase

Asam gluconat + H 2O 2
senyawa tak berwarna*)
Peroksidase
senyawa berwarna
*) senyawa chromogen (4-amino
antipirin) diokidasi oleh H2O2 menjadi
HO 2 berwaran yang dapat diukur dg
spektrofotometrer
12/3/2017 60
Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA
UI
 FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI
AKTIVITAS ENZIM

• Konsentrasi Substrat
• Konsentrasi Enzim
• pH
• suhu
• inhibitor
• aktivator

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 61

UI
 AKTIVITAS ENZIM

Pengaruh [S] terhadap laju reaksi (Vo), bila [E] konstan

- Pada [S] yang relatif rendah, Vo meningkat secara linier dengan
bertambahnya [S]
- Pada [S] yang lebih tinggi, Vo meningkat lebih kecil dengan
bertambahnya [S], akhirnya menghasilkan kurva yg rectanguler
hiperbola (dengan satu asimtot pada Vmaks).
Vo mendekati laju maksimum
- Penambahan S tidak lagi mempengaruhi laju reaksi karena
semua molekul enzim (E) telah jenuh oleh substratnya

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 62

UI
Increase Substrate Concentration
0 1 2 3 4 5 6 7 8
S
+
80 E
↓
60
P
Product

(in a fixed period of time)

40

20

0
0 2 4 6 8
Substrate (mmole)
Juang RH (2004) BCbasics
 FAKTOR-FAKTOR yang mempengaruhi AKTIVITAS
ENZIM

Vmaks

Vo

4x
[S]
Km 3x

2x
[S]

1x
Vo = laju reaksi awal
Vo

Kenaikan [E] : 1x ; 2x ; dst

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 64
UI
 FAKTOR-FAKTOR yang mempengaruhi
AKTIVITAS ENZIM
• pH  setiap enzim memiliki pH optimum  pada pH tsb laju reaksi
katalisisnya maksimum
 perubahan kecil dari nilai pH opt, cenderung menurunkan
aktivitas enzim  terjadi perubahan ionisasi dari ggs fungsi pada
pusat aktiv enzim
 perubahan pH yang besar  terjadi denaturasi protein enzim
 bentuk umum kurva hubungan Vo vs perubahan pH

pepsin kimotripsin
Vo

0 2 4 6 8
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 65
pH UI
 FAKTOR-FAKTOR yang mempengaruhi AKTIVITAS
ENZIM
• Suhu  meliputi 2 hal
Efek pertama : peningkatan suhu  meningkatkan laju reaksi
Efek pertama : peningkatan suhu yang lb tinggi  memutuskan
interaksi ikatan non kovalen  denaturasi
 Efek keseluruhan akan menghasilkan suatu kesetimbangan antara 2
efek tsb yang saling berlawanan
 Bila suhu diplot terhadap Vo, akan menghasilkan kurva dengan suhu
optimum tertentu
Vo

0 10 20 30 40
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA
oC) FMIPA 66
Suhu
UI (
 Pengaruh Aktivator dan Inhibitor

 Aktivator  senyawa yang meningkatkan aktivitas enzim

misal : ion logam
Zn2+  aktivator enzim karbonik anhidrase
Mg2+  aktivator enzim DNAase

 Inhibitor  senyawa yang menghambat aktivitas enzim

 Inhibitor non-spesifik : panas, pH
 Inhibitor spesifik : mis, CN- racun yang menghambat
aktivitas enzim citokrom oksidase

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 67

UI
 Beberapa unsur inorganik sebagai aktivator

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 68

UI
 ISOENZIM
Merupakan protein-protein dengan fungsi katalitik
yang sama, tetapi memiliki perbedaan dalam :
- struktur molekul,
- harga KM
- sifat fisik (misal pH isoelektrik )

contoh : - Laktat dehidrogenase (ada 5 bentuk)

- Creatin fosfokinase (ada 3 bentuk)

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 69

UI
 Isoenzim
• Isoenzim adalah enzim yang memiliki urut-
urutan asam amino berbeda tetapi dapat
mengkatalisis reaksi yang sama .
• Isoenzim dari jaringan spesifik sering kali
memiliki sifat/aktivitas katalitik sama dengan
peranan dan dalam jaringan yg berbeda
(seperti, glukokinase dan heksokinase)

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 70

UI
 ISOENZIM CK (Creatin fosfokinase)
• struktur protein dg 2 subunit dalam bentuk M (muskel)
atau B (brain)
• terdapat dalam 3 bentuk isoenzim :
1. CK-1 (BB)  ada di otak
2. CK-2 (MB)  hanya ada di jantung*
3. CK-3 (MM)  ada di otot skelet dan jantung
*) alat diagnostik untuk kerusakan jaringan (mis, myocardial infark)

• dapat ditentukan kadarnya dalam darah

• mengkatalisis reaksi :
creatin + ATP creatin fosfat + ADP
salah satu reaksi penting yg terlibat dalam metabolisme
energi pada jantung, otak dan otot
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 71
UI
 STRUKTUR PROTEIN ISOENZIM

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 72

UI
 ARTI KLINIS Kandungan LDH
KONDISI Kandungan isoenzim LDH
Infark miocardial LDH1 meningkat sedang
LDH2 meningkat sedikit
Hepatitis akut LDH5 meningkat drastis
LDH4 meningkat sedang
Muscular dystrophy LDH1 (meningkat)
LDH2 (meningkat)
LDH3 (meningkat)
Megaloblastic anemia LDH1 meningkat sangat tinggi

SCA LDH1 meningkat sedang

LDH2 meningkat sedang
Artritis LDH5 meningkat

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 73

UI
 KINETIKA ENZIM

• Mempelajari secara kuantitatif reaksi enzimats

• Mengukur laju reaksi (Vmaks) dan afinitas
enzim terhadap S (Km) dan I (Ki).
• Mempelajari mekanisme reaksinya

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 74

UI
 KINETIKA REAKSI ENZIM
Michaelis-Menten

• Hubungan antara laju reaksi dan konsentrasi substrat dapat

dijelaskan menurut persamaan Michaelis-Menten
• Suatu reaksi yang dikatalisis oleh enzim yang hanya memiliki
satu sisi pengiktan substrat per molekul enzim pers reaksi :
E + S ES E + P

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 75

UI
 Essential of Enzyme Kinetics

Steady State Theory

E + S E S E +P
In steady state, the production and consumption of
the transition state proceed at the same rate. So the
concentration of transition state keeps a constant.
Juang RH (2004) BCbasics
Constant ES Concentration at Steady State

S
P
Concentration

ES
E

Reaction Time
Juang RH (2004) BCbasics
 Lineweaver-Burk Plot
Pers linier Michaelis-Menten dapat digunakan untuk penentan
parameter kinetik Km & Vmax

Invert

factor

and simplify

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 78

UI
 A Real Example for Enzyme Kinetics
SubstrateProduct Velocity Double reciprocal
Data

no [S] Absorbance v (mmole/min) 1/S 1/v

1 0.25 0.21 → 0.42 4 2.08
2 0.50 0.36 → 0.72 2 1.56
3 1.0 0.40 → 0.80 1 1.35
4 2.0 0.46 → 0.92 0.5 1.16
(1) The product was measured by spectroscopy at 600 nm for 0.05 per mmole
(2) Reaction time was 10 min

Double reciprocal
2.0
Direct plot

1.0
v 1/v 1.0

Juang RH (2004) BCbasics

0.5 1.0 -3.8

00 1 2
[S] 0 -4 -2 0
1/[S]
2 4
 Konstanta M-M (Km )

Definisi/batasan
• Besarnya sama dg [S] pada laju reaksi 1/2 Vmaks yang
diperoleh pada konsentrasi enzim tertentu (ditentukan secara
eksperiment dg berbagai [S])
• Dapat berubah nilainya sesuai dengan kondisi percobaan
• Dapat digunakan untuk diagnosis klinik (mis, pd kelainan
fisiologis, mutasi gen dan adanya bentuk isoenzim)
• Bila - Km rendah  afinitas/pengikatan E dg S kuat/besar
- Km tinggi  afinitas/pengikatan E dg S kecil
• Merupakan ukuran tingkat kemurnian enzim (protein) hasil isolasi

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 80

UI
 Konstanta M-M (Km )

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 81

UI
 REGULASI & INHIBISI
REAKSI ENZIMATIS

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 82

UI
 ENZYME REGULATION
• Dalam living system (sel hidup) →terdapat ribuan reaksi kimia
yg dikatalisis enzim → tersusun menjadi rangkaian jalur
metabolisme (biokomia).
• Setiap jalur berisi urutan/tahap-tahapan reaksi → produk (P)
dari tahap awal reaksi akan menjadi substrat (S) untuk tahap
reaksi berikutnya dst.
• Sel hidup memiliki mekanisme regulasi yang canggih/kompleks
(sophisticated untuk mengatur jalur biokimia.
• Mengapa jalur-jalur biokimia tersebut harus diregulasi !!!
• Berikan alasannya

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 83

UI
 Mengapa jalur-jalur biokimia harus dikontrol
1. Ordered state (untuk menjaga keteraturan) :

2. Conservation of Energy

3. Responsiveness of Environmental state

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 84

UI
 REGULASI REAKSI ENZIMATIS
• Reaksi biologis yang melibatkan aktivitas enzim harus dapat
dikendalikan → regulasi fisiologis
• Sistem regulasi reaksi enzimatis dapat melalui :
1. Senyawa inhibitor (obat, agent toksik dll)
2. Allosteric regulations oleh end-product (enzim allosteric)
3. Fosforilasi atau modulator protein
4. Covalent modifications
Pemotongan proteolitik oleh zimogen/proenzim, spt:
protein yang terlibat dalam proses pembekuan darah)
5. Comparmentation/sistem pengkotakan enzim
6. Kontrol genetik (enzim induksi)
Ctt :
Produk atau inhibitor fisiologis dapat berkompetesi terhadap sisi
pengikatan substrat pd Siswati
12/3/2017 sisi aktif →DEPT
Setiasih menurunkan
KIMIA FMIPA laju reaksi 85
UI
 Pengendalian Aktivitas Enzim
• Pengendalian aktivitas enzim sangat diperlukan untuk
mempertahankan homeostasis
• Penyakit pada manusia, termasuk kanker, diabetes, cystic
fibrosis, dan penyakit Alzheimer →→ akibat adanya disfungsi
regulasi.
• Enzim allosterik merupakan enzim yang mengkatalisis jalur
yang menjadi pembatas kecepatan/rate-limiting →→ atau
disebut committed step.

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 86

UI
 Types of enzyme inhibition
• Reversible inhibition
Inhibitor ini dapat dihilangkan dari larutan dengan dialisis atau
diencerkan . Kompleks EI dapat terdesosiasi kembali dengan
cepat
– Competitive inhibition
– Noncompetitive inhibition
– Uncompetitive inhibition
– Mixed type inhibition
• Irreversible inhibition
Inhibitor mengikat gugus fungsi dari rantai samping asam amino
pada pusat aktif secara irreversibly
 Applications of inhibitors
• Negative feedback: end point or end product inhibition
• Poisons snake bite, plant alkaloids and nerve gases (inhibisi
ireversibel)
• Medicine
• sulphonamides, lovastatin, allopurinol
• BAL(British Anti Lewisite, dimercaprol) is used as an
antidote for heavy metal poisoning.
– Heavy metals act as enzyme poisons by reacting with the
SH groups
– BAL has several SH groups with which the heavy metal ions
bind and thereby their poisonous effects are reduced
 MODEL INHIBISI ENZIM
A. Inhibisi reversibel
1. Inhibisi Kompetitif (Competitive Inhibition )
- terjadi persaingan antara I (inhibitor) dengan S (substrat)
untuk menempati sisi aktif enzim (dpt terbentuk ES atau EI )
- inhibitor memiliki bentuk struktur yg mirip dg substrat.
- diatasi dengan meningkatkan [S]
2. Inhibisi Nonkompetitif (Noncompetitive Inhibition)
- molekul inhibitor mempunyai tempat pengikatan yang
berbeda dg S pd enzim, sehingga enzim dapat berikatan
dg S dan I bersama-sama (dpt terbentuk ES, EI atau ESI)
- Inhibitor dapat juga mengubah bentuk dr sisi aktif enzim
sehingga substrat tidak dapat berikatan lg dg enzim.
- tidak dapat diatasi dengan meningkatkan [S]
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 89
UI
 Lanjutan … MODEL INHIBISI ENZIM
3. Inhibisi Unkompetitif
- Inhibitor hanya berikatan dengan kompleks ES.
- menurunkan Vmaks dan Km
- contoh: inhibisi alkali fosfatase dari plasenta oleh phenilalanin

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 90

UI
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 91
UI
 sambungan MODEL INHIBISI ENZIM
B. Inhibisi irreversibel
- senyawa inhibitor berikatan dg enzim sangat kuat (ikatan kovalen)
→enzim kehilangan aktivitas katalitiknya
- contoh : senyawa organofosfat (DFP, diisoprofil fluoro fosfat) yg berikatan
dengan enzim kolinesterase yang menyebabkan enzim tsb inaktif

Sarin Nerve Gas Molecule

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 92

UI
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 93
UI
Activity Regulation of Glycogen Phosphorylase

Covalent modification

A A

T T
P
GP kinase P
P

P
GP phosphatase 1
P P
A A

arrett & Grisham (1999) Biochemistry (2e) p.679

spontaneously
ATP

Non-covalent
A
Glc-6-P Glucose
AMP Caffeine
Glucose
Caffeine
AA A
P
R R
P P

P
P
P

A
A A
 MODEL INHIBISI KOMPETITIF
a). Inhibisi kompetitif

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 95

UI
 MODEL INHIBISI KOMPETITIF

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 96

UI
 MODEL INHIBISI NON-KOMPETITIF
b). Inhibisi non-kompetitif

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 97

UI
 MODEL INHIBISI UN-KOMPETITIF
c.) Inhibisi un-kompetitif

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 98

UI
 MODEL INHIBISI ENZIM (MIXED INHIBITION)

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 99

UI
 Enzyme Inhibition (Mechanism)

I Competitive I Non-competitive I Uncompetitive

E
Cartoon Guide

Substrate
S S E I
S

E S I I
I
Compete for S I
Inhibitor active site Different site
Equation and Description

E + S→
← ES → E + P E + S← → ES → E + P E + S → ES → E + P
+ + + ←
+
I I I I
↓↑ ↓↑ ↓↑ ↓↑
EI EI + S → ESI ESI
[I] binds to free [E] only, [I] binds to free [E] or [ES] [I] binds to [ES] complex
and competes with [S]; complex; Increasing [S] can only, increasing [S] favors
increasing [S] overcomes not overcome [I] inhibition. the inhibition by [I].
Inhibition by [I].
Juang RH (2004) BCbasics
 Enzyme Inhibition (Plots)

I Competitive I Non-competitive I Uncompetitive

Vmax Vmax Vmax
Direct Plots

vo vo
Vmax’ Vmax’
I I I

Km Km’ [S], mM Km = Km’ [S], mM Km’ Km [S], mM

Vmax unchanged Vmax decreased
Double Reciprocal

Km increased Km unchanged Both Vmax & Km decreased

1/vo 1/vo 1/vo

I I I
Two parallel
Intersect lines
at Y axis 1/ Vmax Intersect 1/ Vmax 1/ Vmax
at X axis

1/Km 1/[S] 1/Km 1/[S] 1/Km 1/[S]

Juang RH (2004) BCbasics

 ENZIM ALLOSTERIK

Greek, allo = other; sretic = ruang/sisi

• Memilki sisi lain, selain sisi aktif, yang disebut sebagai sisi regulator
• Umumnya memiliki struktur protein dengan beberapa sub-unit (struktur
kuaterner-oligomer, dimer, trimer, tetramer dst) seperti, hemoglobin
• Dapat dikontrol oleh molekul effektor/modulator (aktivator atau inhibitor)
yang terikat pada sisi regulator sehingga aktivitas katalitiknya dapat
berubah
• Homotropic allosteric effector  modulatornya identik dengan substrat
Heterotropic allosteric effector  modulatornya tak identik dg substrat
• Feedback positif  modulatornya dpt meningkatkan aktivitas enzim
• Feedback negatif  modulatornya dpt menghilangkan aktivitas enzim
• Dapat berada dalam 2 bentuk konformasi, yaitu R (relaxed) dan T (taut).
Bentuk R memiliki afinitas terhadap substrat lebih besar dp bentuk T (substrat
hanya terikat pada bentuk R)
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 102
UI
 ENZIM ALLOSTERIK

E
Active site

Allosteric
site

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 103

UI
 Switching off
E
Active site

Allosteric
Substrate
site
cannot fit into the active site

Inhibitor molecule

Inhibitor fits into allosteric site

When the inhibitor concentration diminishes the
enzyme’s conformation changes back to its active
form. This is not competitive inhibition but it is
reversible
 ENZIM ALLOSTERIK
Contoh enzim allosterik
• ATCase (aspartat transcarbamoylse)  tdd 6 sub unit
 key enzim (bekerja pada tahap awal/committed step pada jalur
biosintesis senyawa pirimidin (CTP )
 CTP (merupakan produk akhir), bila meningkat kadarnya, akan
bertindak sebagai inhibitor allosterik (feedback inhibited)
terhadap enzim ini
 ATP (salah satu substrat pada tahap awal) melimpah, akan bertindak
sebagai aktivator allosterik, akan meningkatkan aktivitas
enzim

• Hemoglobin, tetramer dg 4 subunit, masing subunit memiliki sisi aktif

dapat berikatan dg O2, CO2, H+, DPG

A B  C  D  E
feedback inhibition
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 105
UI
 Feed back Inhibition

Accumulated product
binds at a site other
than the active site to
bring about
conformational
changes, so as to
inhibit the binding of
the substrate. The
rate of reaction
declines.
 FEEDBACK INHIBITION

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 107

UI
 Allosteric Modification (Negative)
• Phosphofructokinase
• The respiration pathway accelerates and ATP (the final product)
builds up in the cell
• As the ATP increases, more and more ATP fits into the
allosteric site of the phosphofructokinase molecules
• The enzyme’s conformation changes again and stops accepting
substrate molecules in the active site
• Respiration slows down
 Mechanism and Example of Allosteric Effect
Kinetics Models Cooperation
Allosteric site
R = Relax R Homotropic
(active) vo (+) S (+)
S

S
R Concerted
Allosteric site
[S]
R
(+) A T Heterotropic
vo (+)
S S (+)
R Sequential
X [S]
T
T = Tense I T Heterotropic
vo
(inactive)
(-) X
(-) X (-)
T Concerted
[S]
Juang RH (2004) BCbasics
 Allosteric Enzyme ATCase
Active relaxed form

Carbamoyl Aspartate Carbamoyl aspartat

phosphate COO- COO-

- - -

- - -
O CH2 O CH2
+

=
=

H2N-C-O-PO32- HN-C-COO- H2N-C- N-C-COO-

- ATCase

-
HH HH
Quaternary structure ATP

Feedback
CCC Catalytic subunits inhibition
CTP CTP CTP
R R R CTP
Regulatory subunits CTP CTP CTP
R R R
CCC Catalytic subunits Nucleic acid
Inactive tense form metabolism
Juang RH (2004) BCbasics
 TEKNOLOGI BIOSENSOR
Glukosa dalam
darah

Pengikatan
glukosa
menghasilkan
arus listrik Alat konversi
impuls

Reseptor
Glukosa

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 111

UI
 PEMANFAATAN BIOSENSOR

•Diagnosis klinik dan monitoring biomedis

•Agrikultur dan hortikultur
•Deteksi polutan dan kontaminan mikroba pada air
•Analisis dan kontrol fermentasi
•Monitoring gas dan cairan industri
•Pengukuran gas beracun pada industri pertambangan

12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 112

UI
 Basic Principles of Protein Purification

Cell Organelle
Homogenization

Small molecule Macromolecule Cell

Amino acid, Sugar,
Nucleotides, etc
Nucleic
Protein Carbohydrate (Lipid) Debris
acid

Ammonium sulfate fractionation

Size Charge Polarity Affinity

Ion exchange, Reverse phase
Gel filtration, Affinity
Chromatofocusing, chromatography, chromatography,
SDS-PAGE, HIC,
Disc-PAGE, Hydroxyapatite
Ultrafiltration Salting-out
Isoelectric focusing
Juang RH (2004) BCbasics
 Bisubstrate Reaction
• Single displacement
– Ordered BiBi:
• Most dehydrogenase reaction
– Random BiBi
• Creatine kinase
• Double displacement
– Transaminases, Ala aminotransferase, Asp
aminotransferase
Dehydrogenase Reaction

Lactate Dehydrogenase
Random BiBi Reaction

Creatine Kinase
Ping-pong BiBi

Aspartate
aminotransferase
 Latihan Soal
1. Enzim dapat diklasifikasikan berdasarkan hal
apa saja
2. Bedakan antara inhibisi reversible dan inhibisi
ireversibel
3. Berikan 1 contoh aplikasi dari masing-masing
tipe inhibisi tersebut
4. Apa yg Sdr. Ketahui tentang feedback
inhibition
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 119
UI
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 120
UI
12/3/2017 Siswati Setiasih DEPT KIMIA FMIPA 121
UI