Strain ditanam pada medium GMY (ekstrak ragi 0,01%, asam casamino 0,05%,

K2HPO4 × 3H2O 0,075%, KH2PO4 0,015%, urea 0,1%, MOPS 1,04%, MgSO4 × 7H2O
0,1%, larutan trace elements 0,001% v: v, pH 7,0) yang dilengkapi dengan 0,1%
glukosa (30 ° C, 150 rpm) selama 24 jam, dan kemudian, isoeugenol ditambahkan
hingga konsentrasi 1% v: v. Produk potensial dipisahkan dengan pengasaman (hingga
pH2,0 dengan H2SO4), dan mengekstraksi seluruh kultur tiga kali dengan etil asetat.
Fraksi organik dikumpulkan, dikeringkan dengan natrium sulfat anhidrat, disaring, dan
dikeringkan dengan rotary evaporator (Rotavapor RE121, Buchi, Swiss). Ekstrak
kemudian dilarutkan dalam 10 ml metanol dan dianalisis dengan kromatografi gas FID
(HewlettPackard 5890) yang dilengkapi dengan kolom kapiler SPB1 (30 m, 0,25 mm id,
0,25 mm (Supelco, Bellefonte, PA)), gas pembawa N2 (1,7 ml min − 1), rasio split 60: 1,
suhu injeksi. 250 ° C, suhu deteksi. 300 ° C. Suhu oven awal adalah 100 ° C (2 mnt),
dan meningkat pada kecepatan 10 ° C mnt - 1 hingga suhu akhir 230 ° C

Kultur ditanam selama 48 jam (30 ° C, 150 rpm, dalam medium GMY). Sel dipanen
(10.000 rpm, 10 menit, 4 ° C), dan dicuci dengan 0,05 mM dapar fosfat pH 7,0. Sel-sel
yang dicuci diencerkan dalam buffer yang sama dengan konsentrasi sekitar 100 g
(berat basah) l-1. Ekstrak bebas sel disiapkan dengan sonication (3 menit, micro
tippower level 4, 50% cycle, 4 ° C (W-375-Heat systems Ultrasonics, New York)) diikuti
oleh sentrifugasi (15.000 rpm, 20 menit, 4 ° C ). Supernatan digunakan sebagai ekstrak
bebas sel. Isoeugenol (1%) ditambahkan ke 1 ml ekstrak bebas sel, dan campuran
diinkubasi selama 48 jam pada 30 ° C dan 150 rpm. Produk biotransformasi diekstraksi
dengan etil asetat, dan dianalisis segera oleh GC.