GENERAL:
PARTICULARES:
INTRODUCCIÓN
Desde el punto de vista bioquímico una fermentación se define como un proceso mediante el
cual las sustancias orgánicas (sustratos) sufren una serie de cambios químicos (reducciones y
oxidaciones) que producen energía. Al finalizar la fermentación se presenta una acumulación
de varios productos, unos más oxidados (aceptaron electrones) y otros más reducidos
(donaron electrones) del sustrato, con un balance total de energía positivo. Esta energía es
utilizada en el metabolismo de los microorganismos. (1)
Desde el punto de vista comercial, las fermentaciones se pueden obtener tomando en cuenta
los productos que se obtendrán, entre ellos se pueden mencionar:
Las levaduras son unos hongos que pertenecen al grupo de los ascomicetos, cuya característica
es el aparato reproductor en forma de asca, o sea, una célula especial de paredes recias que
contienen, en su interior, una serie de otras pequeñas células; las ascosporas, reproductoras.
La causa de la fermentación alcohólica fue demostrada por Pasteur, quien descubrió que ésta
no era más que el resultante de un fenómeno bioquímico, la vida de un ser vivo unicelular, la
levadura, el cual, en lugar de tomar el oxígeno que precisa para su proceso respiratorio
directamente del aire, lo toma de otra sustancia, en este caso la glucosa o la fructosa del
mosto a las que descompone. Este tipo de respiración propia de muchos organismos vivos,
entre ellos las levaduras, recibe el nombre de respiración anaerobia. (5)
Las levaduras, al carecer de clorofila, no pueden realizar la síntesis de los hidratos de carbono,
sino que tienen que encontrarlos ya formados en el medio donde se desarrollan, en este caso
el mosto.
Para su respiración, las levaduras pueden coger el oxígeno del aire, respiración aerobia o bien
de una sustancia donde se encuentre combinado, respiración anaerobia, en este caso de los
azúcares.
Dentro del grupo de los ascomicetos, las levaduras pertenecen a la familia de las
sacaromicetáceas, cuyas características comunes son: ser unicelulares, de forma esférica u
ovoide, presentarse libres o formando colonias filamentosas, cubiertas de una membrana
celulósica fina que va aumentando de tamaño a medida que se desarrolla; en el interior, se
encuentra el protoplasma de constitución albuminoidea y, en el centro, el núcleo de forma
esférica y junto a él una gran vacuola que contiene las sustancias de reserva para su
metabolismo: enzimas, vitaminas, compuestos fosfóricos, hidratos de carbono, etc.
La reproducción de las levaduras, además de la ya citada por ascas que tiene origen sexual,
puede ser de forma sexuada por escisión y por gemación. (2)
Su fórmula química es CH3-CH2-OH, principal producto de las bebidas alcohólicas como el vino
(un 15% aproximadamente), la cerveza (5%) o licores (hasta un 50%).
Además de usarse con fines culinarios (Bebida alcohólica), el etanol se utiliza ampliamente en
muchos sectores industriales y en el sector farmacéutico, como principio activo o excipiente de
algunos medicamentos y cosméticos (es el caso del alcohol antiséptico 70º GL y en la
elaboración de ambientadores y perfumes).
La resistencia al alcohol parece aumentar en las personas adultas, de mayor peso y de menor
altura, mientras que los niños son especialmente vulnerables. Se han comunicado casos de
bebés que murieron por intoxicación debida a la inhalación de vapores de etanol tras haberles
aplicado trapos impregnados de alcohol. La ingesta en niños puede conducir a un retardo
mental agravado o a un subdesarrollo físico y mental. También se han realizado estudios que
demuestran que si las madres ingerían alcohol durante el embarazo, sus hijos podían ser más
propensos a tener el síndrome de alcohólico fetal.
Información general del microorganismo
Reino Fungi
DivisiónAscomycota
Clase Hemiascomycetes
Orden Saccharomycetales
Familia Saccharomycetaceae
Género Saccharomyces
Especie S. cerevisiae
TABLA 1
͞S. CEREVISIAE͟ es uno de los modelos más adecuados para el estudio de problemas
biológicos. Es un sistema eucariota, con una complejidad sólo ligeramente superior a la de la
bacteria pero que comparte con ella muchas de sus ventajas técnicas. Además de su rápido
crecimiento, la dispersión de las células y la facilidad con que se replican cultivos y aíslan
mutantes, destaca por un sencillo y versátil sistema de transformación de ADN. Por otro lado,
la ausencia de patogenicidad permite su manipulación con las mínimas precauciones. (5)
Por estas razones, S. Cerevisiae se ha convertido en una importante herramienta a gran escala
de análisis de genómica funcional, proporcionando un punto de partida para el análisis de
organismos eucariotas más complejos. Al ser un organismo unicelular con una tasa de
crecimiento rápida, la levadura se puede utilizar para los estudios de células que resultarían
muy complicados o costosos en organismos multicelulares.
Las utilidades industriales más importantes de esta levadura son la producción de cerveza, pan
y vino, gracias a su capacidad de generar dióxido de carbono y etanol durante el proceso de
fermentación. Básicamente este proceso se lleva a cabo cuando esta levadura se encuentra en
un medio muy rico en azúcares (como la D-glucosa). En condiciones de escasez de nutrientes,
la levadura utiliza otras rutas metabólicas que le permiten obtener un mayor rendimiento
energético, y por tanto no realiza la fermentación.
Desde el punto de vista científico, este microorganismo se ha empleado como modelo simple
de la célula eucariota. Esto se debe a una serie de ventajas como su facilidad de cultivo y su
velocidad de división celular (aproximadamente dos horas). (2)
MATERIALES Y EQUIPOS
1 Balanza Granataria.
1 Olla Licuadora
1 Colador
1 Cuchillo
1 Tabla de picar
2 Agitadores
1 Tubo condensador.
1 Mechero
1 Espátula
1 Papel filtro
1 Indicadores de pH (0-14)
1 Pizeta
1 Refrigerante
2 soporte universal
MATERIA PRIMA
La materia prima que se utilizará para producir nuestro metabolito (Alcohol Etílico) será la
Piña, ya que es una fruta típica de la región.
Al igual que para el resto de los cultivos, la deficiencia en nitrógeno retrasa el crecimiento,
apareciendo plantas ͞enanizadas͟ y amarilleamiento en las hojas; la producción de fruto y
tallos se ve afectada. Rara vez se observan deficiencias de fósforo, pero en caso de ser
acusadas, el rendimiento se ve afectado negativamente. La carencia de potasio se manifiesta
por la aparición de puntos amarillos en las hojas. La zona basal de las hojas jóvenes debe
contener al menos un 3,2 % de K sobre materia seca (s.m.s.).
La piña es una fruta no climatérica por lo que tiene baja velocidad de respiración que declina
lentamente después de su cosecha. Las piñas deben cosecharse cuando adquieren madurez de
consumo debido a que no continúan madurando después de la cosecha. (2)
La exposición de las piñas a temperaturas inferiores a 7ºC puede producir daño por frio, lo
recomendable es almacenarlas en temperaturas que oscilen entre 7-10°C (45-50°F). Las frutas
maduras son menos susceptibles que las inmaduras o las parcialmente maduras por lo que se
recomienda una temperatura de 10-13°C (50-55°F) para su mejor conservación.
Su consumo es de años atrás y las presentaciones más comunes son en rebanadas o trozos de
almíbar, purés o jugos.
Debido a sus características es recomendable procesarla lo mas rápido posible para minimizar
su deterioro, así la cantidad de fruta almacenada debe ser mínima.
Enfermedades
Pudrición por Thielaviopsis (pudrición negra): causada por Thielaviopsis paradoxa, siendo la
enfermedad más grave de postcosecha; puede comenzar en el tallo y avanzar a través de la
mayor parte de la pulpa con sólo un oscurecimiento ligero de la piel como síntoma externo.
Este oscurecimiento se debe a la salida de agua de la piel que se encuentra sobre las porciones
dañadas de la pulpa. A medida que la pulpa se ablanda, la piel encima de ella se rompe
fácilmente bajo una presión ligera.
Fermentación por levaduras: causada por Saccharomyces spp, generalmente se le asocia con
fruta sobremadura. Las levaduras entran a la fruta a través de heridas. La pulpa se vuelve
blanda, de color amarillo brillante y pierde continuidad debido a la presencia de cavidades con
gas (bióxido de carbono y otros compuestos volátiles producto de la fermentación). (4)
ALCOHOL DE PIÑA
RECEPCIÓN
LAVADO Y SELECCIÓN
EXTRACCIÓN DE LA PULPA
Filtrado DESTILADO A 78 °C
ENVASADO
PROCEDIMIENTO
Preparación
1._ Se esteriliza el recipiente donde se llevara a cabo la fermentación, al igual que los
materiales a utilizar como el agitador utilizado para homogenizar la solución a preparar.
2._ Nuestra materia prima a utilizar, que en este caso es la piña se lava perfectamente y se
retira por completo la cascara.
3._ Procedemos a picar la piña pues, ya que se utilizara solo la pulpa de esta. Se licua con 250
ml de agua natural y 100 gr de piloncillo.
4._ Licuada la piña esta se coloca dentro del recipiente esterilizado anteriormente y se le
agrega 7 gr de levadura y se agita hasta incorporarla bien.
1._ Transcurridos los cuatro días de fermentación, se filtra la solución fermentada de piña para
obtener solo líquido y eliminar los excesos de piña.
2._En un matraz balón de 250 ml agregar la solución fermentada de piña habiendo sido
anteriormente filtrada.
RESULTADOS
Recepción: consiste en cuantificar la materia prima que entra al proceso, es necesario usar
balanzas limpias y calibradas.
Lavado y selección: el lavado se efectúa con agua clorada, y la selección con base a la
maduración de la piña además, que no haya materia prima defectuosa.
Extracción de la pulpa: se hace pasando la fruta por un despulpador o bien licuándola para
facilitar la extracción. En la extracción de la pulpa se pueden agregar pequeñas cantidades de
agua para facilitar su molido.
Estandarizado: la pulpa extraída de la extracción o licuado se le debe adicionar azúcar o
piloncillo. Estos son carbohidratos que facilitarán la fermentación.
Preparación del cultivo: el cultivo se hace separando la pulpa se inocula con levadura del tipo
͞SACCHAROMYCES CEREVISIAE͟ (levadura para panificar). Se vierte la pulpa licuada en un
recipiente limpio; debe incorporar bien la levadura al mosto agitándolo homogéneamente.
Una vez colocado en un matraz el líquido filtrado anteriormente se prepara para destilarlo y
así poder obtener el alcohol de piña.
Filtrado: el filtrado se hace con la ayuda de filtros o coladores finos con diámetro de 0.45 µm,
para eliminar residuos de pulpa o levadura y obtener solamente el liquido que es el que
utilizaremos para destilarlo.
Al término de haber destilado el líquido que se fermentó durante tres días se obtuvo 8 ml de
alcohol, el cual fue recogido en un matraz, posteriormente se almacena en un recipiente (un
frasco de 10 ml) previamente esterilizado.
Temperatura: 27 - 32 ºC
Acidez: 4 ч pH ч 5
Glucosa + Levaduras ї Etanol + Dióxido de Carbono
espeso
espeso
CONCLUSIÓN
De igual manera, así como en este proyecto, en la industria productora de Alcohol estos
microorganismos son una parte vital en sus procesos de producción.
Por último podemos mencionar la gran diversidad de microorganismos que existen y que son
o pueden ser utilizados en la producción de una gran variedad de metabolitos, los cuales son
una mano de obra muy barata en la industria; por muchos factores, podríamos nosotros como
futuros ingenieros químicos poner algo de atención a esta área que para nuestra percepción es
una de las ramas más interesantes en la ingeniería química, y aprovechar mas las materias
primas que tenemos.
BIBLIOGRAFÍA
3. PERRY Robert H., ͞Manual del Ingeniero Químico͟ 7ma ed. España: Editorial McGraw-
Hill, 2004.
4. SUAREZ LEPE, José Antonio; IÑIGO LEAL, Baldomero, ͞Microbiología Enológica͟ 2 ed.
España: Editorial Mundi-Prensa 1992.
ANEXOS
RECUPERACIÓN DE PRODUCTOS.
Una vez realizada la fermentación, hemos de recuperar el producto que hemos ganado. Las
técnicas para recuperar el producto son similares a las usadas en la industria química
convencional, pero con la salvedad que nuestro producto es biológico, por lo que no podremos
usar ninguna técnica que pueda inactivar el producto. También hemos de tener presente la
localización de nuestro producto, de manera que si queremos la célula o un producto
sintetizado por ellas las técnicas variaran, igual que variaran si el producto es intracelular o
extracelular.
Otro aspecto que se ha de tener en cuenta y no olvidar nunca es que estamos en la industria,
lo que implica que buscamos rentabilidad, de manera que no podremos usar algunas técnicas.
En general, la recuperación puede suponer el 20% del costo del producto, pero en productos
con un alto valor añadido puede llegar al 95% del total.
2. Concentración
Existen una serie de etapas en el proceso de recuperación del producto, una vez concluido la
fermentación y tenemos el medio de cultivo con el producto y los organismos.
Podemos iniciar el proceso de extracción en base al tamaño del producto. Podemos tener
diferentes tamaños. En función de cuál sea el tamaño se usará un método u otro. Existen
diferentes protocolos, basados en diferentes principios, ya sean el tamaño, la carga, el peso, se
usará uno u otro como criterio de selección.
Veremos ahora una serie de métodos, basados en el tamaño. Estos métodos están ordenados
en función de tamaño, de manera que los primeros sirven para partículas más grandes que los
últimos.
Existen otras técnicas de separación, que cada día son más importantes a nivel biotecnológico.
i. Cromatografía de intercambio iónico: el producto tiene una carga eléctrica, sea cual
sea. Se llena de resina catiónica o aniónica, según sea el caso, en una columna. El producto
quedará retenido entonces por carga. El tipo de resina dependerá de la carga del producto.
k. Cromatografía de afinidad: es las más fina de todas las técnicas, pero por lo tanto, la
más cara. Se usa una columna con un sustrato muy afín al producto, como puede ser la
relación antígeno- anticuerpo, o enzima- sustrato. Se busca interacciones muy especificas
entre sustrato- producto.
Las principales operaciones de recuperación en la que con las etapas en que son utilizadas son:
SEPARACIÓN DE SÓLIDOS
Eléctrica Electroferesis
ROTULAR CELULAR: Rotura mecánica, lisis física, lisis química, lisis enzimática.
Hay seis métodos físicos principales para separar los componentes de una mezcla, eligiéndose
uno u otro según que la mezcla sea sólida o líquida, y según las características de sus
componentes:
ͻ Por filtración: separamos un sólido del líquido en el que está suspendido, vertiendo la
mezcla en un embudo con un filtro poroso por el que el líquido puede penetrar fácilmente. Así
podemos separar arena y agua.
ͻ
ͻ Por decantación: separamos dos líquidos de diferentes densidades, vertiendo la
mezcla en un embudo de decantación; cuando ha reposado y se han formado dos capas,
abrimos la llave inferior del embudo y dejamos caer el más denso, quedando el menos denso
en el embudo. Así separamos una mezcla de aceite y agua, por ejemplo.
ͻ Por evaporación: si en una mezcla líquida conseguimos que uno de los componentes se
evapore, quedando el otro.
La determinación de los factores que limitan la glicólisis fermentativa del etanol son complejos
debido a la interrelación existente y a la naturaleza de los parámetros intervinientes durante el
proceso de fermentación. Algunos de ellos se deben tener en cuenta en la fermentación
alcohólica industrial. En las limitaciones que surgen durante el proceso se pueden enumerar
algunos de los más importantes como son:
ͻ Contacto con el aire: Una intervención de oxígeno (por mínima que sea) en el proceso
lo detiene por completo (es el denominado Efecto Pasteur). Esta es la razón por la que los
recipientes fermentadores se cierren herméticamente.
Deben considerarse los siguientes pasos para una buena fermentación de la piña:
3. No deben mezclarse frutos enfermos, inmaduros o sobre madurados con los frutos
sanos. Las cajas de fermentación o cestos deben limpiarse previamente al inicio del proceso,
eliminando restos, hongos o insectos que puedan estar presentes.
6. El proceso debe durar el tiempo necesario, pues si este se disminuye, muchos frutos
quedan sin fermentar y si se aumenta, ocurrirá la sobre fermentación que provoca malos
olores y cambios en la masa que perjudican significativamente la calidad del producto final.
ETANOL (anhidro)
Alcohol etílico
CH3CH2OH/C2H5OH
PELIGROS FISICOS
PELIGROS QUIMICOS
Reacciona lentamente con hipoclorito cálcico, óxido de plata y amoníaco, originando peligro
de incendio y explosión. Reacciona violentamente con oxidantes fuertes tales como, ácido
nítrico o perclorato magnésico, originando peligro de incendio y explosión.
VIAS DE EXPOSICION
RIESGO DE INHALACION
Por evaporación de esta sustancia a 20°C se puede alcanzar lentamente una concentración
nociva en el aire.
PROPIEDADES FISICAS
Como todos los seres vivos, las levaduras tienen necesidades precisas en cuanto al medio en
que viven y a su nutrición. Son muy sensibles a la temperatura, necesitan oxigeno, una
alimentación apropiada en azúcares, en elementos minerales, en sustancias nitrogenadas y en
factores de crecimiento
Influencia de la aireación.
Las levaduras tienen necesidad de oxígeno para desarrollarse, pero ellas se adaptan durante
un cierto tiempo a la vida anaeróbica.
La necesidad de oxígeno es indirecta ya que las levaduras deben tener oxígeno para sintetizar
los esteroles y asimilar ciertos ácidos grasos. Los esteroles son sustancias con una cadena de
carbonos y una función alcohol y son el origen de varias hormonas y vitaminas de una
importancia considerable. Al comenzar la fermentación las primeras generaciones de
levaduras aprovechan las reservas de esteroles de las células madres y después de los
esteroles del medio natural. Debido a esto es necesaria la realización de remontares abiertos
donde se oxigena el vino en parte.
Influencia de la Acidez
Tiene gran influencia sobre diversos microorganismos que viven en el medio fermentativo y
compiten de tal manera que la acidez favorece a algunos y perjudica a otros. La acidez normal
de los vinos, pH que va de 2.8 a 3.7 , no influye sobre las levaduras en cuanto a su actividad
fermentativa ni su multiplicación, pero esta acidez imposibilita el desarrollo ( multiplicación y
actividad) de microorganismos indeseables de tal manera que el pH natural de los mostos es
un factor de selección favorable para las levaduras.
A partir de los 13 grados GL la fermentación alcohólica es lenta y difícil, así las levaduras son
incapaces de terminar la fermentación en mostos que tienen 16 grados GL de alcohol
probable. Esto debido principalmente al estrés que sufre la levadura con a los niveles de
alcohol a nivel de la permeabilidad de membrana.
GLOSARIO
Muchas de las bacterias están dotadas de unos filamentos locomotores, que se llaman flagelos
cuando son largos y escasos, y cilios cuando son más cortos y numerosos.
Levadura: Hongo microscópico, unicelular, con un núcleo que encierra los cromosomas
portadores de la información genética en forma de una molécula de ADN. Cada célula mide
aproximadamente 5micrometros en su longitud mayor; se produce por vía asexual, mediante
gemación.
Escala de pH: La escala de pH nos muestra cómo de ácida o básica es una sustancia. Aquí
aparecen varias sustancias con el valor de su pH: cuanto más próximo a cero, más ácida es la
sustancia, y cuanto más próximo a 14, más básica.
Acido láctico: El ácido ы-láctico se produce a partir del pirúvato a través de la enzima lactato
deshidrogenado (LDH) en procesos de fermentación.
Anaerobios: organismos que no necesitan oxígeno (O2) para desarrollarse, a diferencia de los
organismos aerobios.
http://www.buenastareas.com/ensayos/Bioprocesos-De-Separacion/655019.html