Anda di halaman 1dari 9

Metabolites from endophytic fungus ; Pestalotiopsis clavispora isolated from

Phoenix reclinata leaf

ABSTRAK
Tiga metabolit sekunder; dihydroxanthenone AGI-B4, syndowinin B dan pitholide B
diisolasi untuk pertama kalinya dari ekstrak etil asetat beras padat budaya
Pestalotiopsis clavispora , diisolasi dari Phoenix reclinata Jacq. Familia, Arecaceae
dikumpulkan di Nigeria. Dalam proses pengisolasian metabolit sekunder dilakukan
dengan menggunakan kromatografi cair vakum dengan heksana pada gradien dengan
etil asetat pada interval 10% untuk mendapatkan 9 frasa yang berbeda kemudian yang
disatukan bersama menjadi 4 fraksi melalui lapisan tipis analisis kromatografi
menggunakan sistem pelarut heksana, heksana: etil asetat 9: 1, 8: 2, 7: 3
divisualisasikan di bawah sinar UV (ʎ 254 nm). Ketiga senyawa metabolit sekunder
yang berupa dihydroxanthenone AGI-B4, syndowinin B dan pitholide Bhasil dari
isolasi Phoenix reclinata Jacq dikarakterisasi dengan NMR, UV-VIS, dan LC-MS.

I. PENDAHULUAN
Beberapa laporan menunjukkan bahwa jamur endofit merupakan sumber senyawa
bioaktif. Dimana memiliki potensi besar aplikasi dalam pertanian, kedokteran dan
industri makanan. Pohon mangrove dan beberapa tanaman khusus adalah sumber daya
yang mengandung jamur endofit yang melimpah. Lebih dari 200 spesies berbeda dari
jamur endofit telah diisolasi dan diidentifikasi dari bakau yang juga telah dilaporkan
sebagai komunitas terbesar kedua dari jamur laut. Jamur endofit telah diakui sangat
penting dan sumber daya baru produk bioaktif alami dengan potensi besar dalam obat-
obatan, dimana senyawa bioaktif baru telah terisolasi dan telah menjadi dikenal sebagai
sumber bioaktif senyawa.
Pohon kurma liar atau Senegal kurma ( Phoenix reclinata, reclinata- Latin,
berbaring) adalah spesies tanaman berbunga di keluarga palm ( Arecaceae ) asli ke
Afrika tropis. Spesies kelapa sawit termasuk dalam jenis mentah daftar tanaman yang
digunakan untuk penyakit tertentu di studi terbaru dalam obat-obatan tradisional
Afrika. Ramuan dari akar reclinata Phoenix telah digunakan untuk memperbaiki
epilepsi, kelola impotensi dan disfungsi ereksi, meredakan sakit perut dan kolik di
Senegal dan sebagai obat untuk radang selaput dada.

METODELOGI

Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya daun phoenix reclinata, gel MN silica,
pelarut anisaldehida, etil asetat, n-heksan, 90% methanol,

Alat

Alat yang digunakan antara lain, cawan petri, spektrofotometer uv-vis, NMR, serangkaian alat
untuk kromatografi cair vakum, pelat gel silica, autoklaf dan incubator.

Prosedur Umum
1
H, 13 C dan 2D NMR direkam dalam pelarut yang dideuterisasi pada Bruker AVANCE
DMX 600 NMR spektrometer. Spektrum massa diukur pada LC-MS Agilent 1100 series
digabungkan dengan Thermoquest LCQ Deca XP (Finnigan). Analisis HPLC
dilakukan pada Dionex Sistem UltiMate 3000 HPLC (Thermo scientific) digabungkan
ke foto detektor dioda array (DAD-3000RS). Deteksi rutin dilakukan pada panjang
gelombang 235, 254, 280, dan 340 nm. Kolom pemisahan (125 × 4 mm) sebelumnya
diisi dengan Eurospher-10C18 (Knauer, Jerman) dan gradien yang digunakan (MeOH
/ asam format 0,1% dalam air) 0 mnt, 10% MeOH 5 mnt, 10% MeOH 35 menit, 100%
MeOH 45 mnt, 100% MeOH dengan laju aliran 1,0 mL/ menit. Pemisahan HPLC
dilakukan pada sistem HPLC semi preparative Lachrom-Merck Hitachi (Pompa L7100
dan detektor UV L7400). Kolom pemisahan (300 × 8 mm) diawali dengan Europhere
100-C18 (Knauer, Jerman) menggunakan laju aliran 5.0 mL/menit. Kolom
kromatografi dilakukan menggunakan gel MN MN Silica 60 M (0,04-0,063 mm).
Untuk Analisis TLC digunakan pelat Silika Gel 60 F 254, diikuti oleh deteksi di bawah
UV pada 254 dan 366nm dan observasi setelah penyemprotan dengan pereaksi
anisaldehida. Semua pelarut disuling sebelum digunakan, dan pelarut tingkat spektral
digunakan untuk spektroskopi pengukuran.
Koleksi tanaman
Daun Phoenix reclinata dikumpulkan dari hutan bakau hutan, Onne, Rivers State of
Nigeria pada Juni 2012. Dr. Omokafe A. Ugbogu dari Institut Penelitian Kehutanan
Nigeria (FRIN), Ibadan.
Isolasi dan identifikasi strain jamur
Strain jamur endofit diisolasi dari daun Phoenix reclinata yang segar lalu daun dibilas
dua kali secara steril dengan air suling dan selanjutnya disterilkan dengan direndam
kedalam 70% etanol selama 2 menit kemudian dibilas dalam air untuk memindahkan
jamur epifit yang mungkin ada. Sterilisasi dilakukan dengan mengoleskan daun ke
cawan petri yang telah terisi media agar malt selama 1 menit. Daun kemudian diiris
menjadi dengan ukuran 1 × 1 cm dan ditempatkan pada cawan yang mengandung
antibiotik untuk menghindari pertumbuhan bakteri (dengan komposisi 15 g / L ekstrak
malt, 15 g / L agar, 0,1 g / L streptomisin dan kloramfenikol 0,2 g / L dalam air suling
pH 7.4-7.8). Pelat diinkubasi selama beberapa hari pada suhu kamar (21 ° C) sampai
beberapa hifa tumbuh dari tanaman. Hifa dipindahkan ke cawan petri yang
mengandung media yang sama, diinkubasi lagi pada suhu kamar dan periksa
kemurnian kultur secara berkala. Kultur jamur diidentifikasi sebagai Pestalotiopsis
clavispora pada dasar protokol biologis molekuler, menggunakan amplifikasi dan
pengurutan wilayah transkripsi internal spacer (ITS).
Budidaya dan ekstraksi jamur
Sebanyak 100 g beras ditimbang dimasukkan ke labu Erlenmeyer, 110 mL air suling
ditambahkan kemudian diautoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit dan dibiarkan
dingin. Sebagian kecil miselium dipindahkan dalam kondisi steril ke media beras.
Strain jamur dibiarkan tumbuh di padatan media beras pada suhu kamar (21°C) selama
30 hari. Hasil dari budidaya jamur kemudian diekstraksi dengan 500 mL etil asetat tiga
kali dan ekstrak jamur etil asetat kasar diperoleh dari kultur padi padat P. clavispora
terkonsentrasi di vakum hingga kering untuk mendapatkan 2,5 g ekstrak.

Isolasi metabolit sekunder


Ekstrak etil asetat (2,5 g) dipartisi antara n- heksana dan 90% metanol. Metanol
90% (1,3 g) dikromatografi pada silika dengan kromatografi cair vakum menggunakan
heksana digradien dengan etil asetat pada interval 10% untuk mendapatkan 9 bagian
berbeda yang dikumpulkan bersama menjadi 4 fraksi melalui analisis kromatografi
lapisan tipis menggunakan pelarut heksana, heksana: etil asetat 9: 1, 8: 2, 7: 3
divisualisasikan di bawah sinar UV (ʎ 254 nm).
Berdasarkan profil TLC dan UV, 531 mg fraksi 2 (kombinasi heksana: etil asetat
(6:4, 5:5, 4:6) dipilih dan dikromatografi pada Sephadex LH-20 menggunakan
Dichloromethane : methanol (1:1). Pemurnian akhir pada sub-fraksi 1 dan 2 dilakukan
dengan preparatif terbalik-fase HPLC masing-masing menghasilkan senyawa 1 dan 2,
sedangkan fraksi 3 dielusi murni dari kolom. Struktur mereka dijelaskan dasar analisis
ekstensif NMR satu dan dua dimensi spektroskopi dan spektrometri massa resolusi
tinggi.

HASIL
Dihydroxanthenone, AGI-B4 (1)
Senyawa 1 (1mg) diisolasi sebagai bubuk kuning, 1 H NMR (600 MHZ, CD 3 OD) δ
(ppm). 6.76 (1H, s, H-2), 6.99 (1H, s H-4), 6.34, (1H, dd, H-5), 6.47 (1H, dd, H-6),
5.01 (1H, d, H-7), 4.15 (1H, d, H-8), 4.65 (2H, s, H-11), 3.69 (3H, s, HeH-13).

Syndowinin B
Senyawa 2 (5,1 mg) diisolasi sebagai jarum kuning. Itu menunjukkan Absorbansi UV
pada ʎ maks (MeOH) 236.4, 263.9, 294.0 dan 386 nm. Itu LC-MS menunjukkan
puncak ion kuasi-molekul pada m / z 317.1 [M + H] + (basa puncak) dan m / z 315.2
[MH] - (puncak dasar), masing-masing, menunjukkan berat molekul 316g / mol
dihitung untuk C 16 H 12 O 7 . 1 H NMR (600 MHZ, CD 3 OD) δ (ppm). 7.39 (1H, d,
J = 9.11 Hz, H-2), 7.53 (1H, d, J = 9,12 Hz, H-4), 6,75 (1H, s, H-5), 6,99 (1H, s, H-6),
4,68 (2H, s, H-11), 3,97 (3H, s, H-13). 13 C NMR (600 MHZ, CD 3 OD) δ (ppm)
163,4(C-1), 110.9 (C-2), 151.7 (C-3), 106.5 (C-4), 157.1 (C-4a), 122.2 (C-5),140.6
(C6), 66.5 (C-7), 46 (C-8), 110.9 (C-8a), 183.1 (C-9), 110.9 (C-9a), 158.0 (C-10 a),
66.5 (C-11), 171.9 (C-12), 54.5 (C-13).
Pitholide B
Senyawa 3 diisolasi sebagai minyak merah. Ini menunjukkan absorbansi UV di ʎ maks
(MeOH) 414.8nm. LC-MS positif dan negatif menunjukkan puncak ion molekul pada
m / z 387.2 [M + H] + (puncak basa) dan m / z 385.3 [MH] - (puncak basa), masing-
masing, menunjukkan berat molekul 386g / mol. LC-MS menunjukkan ion molekuler
pada m / z 794.9 [2M + Na] + menunjukkan rumus molekul C 22 H 26 O 6 . Data 13 C
menunjukkan tiga metil, enam metilen, empat metana dan sembilan kuaterner karbon
total C 22 H 25. 1 H NMR (600 MHZ, CD 3 OD) δ (ppm) 8,03 s (H-1), 7.90 (s, H-4),
4.52 (s, H-12), 2.38 (s, 3H, H-14), 9.79 (s, H-15), 1.38 (s, 3H, H-16), 2.84 (m, 2H, H-
18), 1.63 (m, 2H, H-19), 1.32 (m, 8H, H-20-23), 0,90 (t, 3H, H-24). 13 C NMR (600
MHZ, CD 3 OD) δ (ppm) 155.1 (C-1), 166.5 (C-3), 107.9 (C-4), 147.3 (C-5), 108.6
(C-6), 166.7 (C-7), 119.8 (C-8), 173 (C-9), 85 (C-11), 69.9 (C-12), 122.2 (C-13), 18.6
(q, C-14), 187,9 (C-15), 24 (C-16), 200,9 (C-17), 43,7 (C-18), 23,8 (C-19), 30.42 (C-
20), 30.4 (C-21), 33.0 (C-22), 22.2 (C-23), 14 (C-24).
DISKUSI
Sebanyak tiga senyawa diisolasi dari ekstrak jamur dari Phoenix reclinata.
Senyawa 1 diidentifikasi sebagai Dihydroxanthenone, AGI-B4 bila dibandingkan
dengan literatur. Pertama kali diisolasi dari Aspergillus sp dari tanah yang dikumpulkan
di Korea dan dilaporkan memiliki aktivitas anti-angiogenik. Senyawa 2 diidentifikasi
sebagai Syndowinin B yang sebelumnya diisolasi dari Aspergillus sydowi oleh
perbandingan dengan literature. Ini diketahui memiliki aktivitas penghambatan
terhadap otot myosin cahaya rantai kinase dan protein kinase C. Senyawa 3
diidentifikasi sebagai Pitholide B dengan membandingkan dengan literature data.
Pitholides adalah kelas struktural yang menarik dan adalah contoh pertama dari
kelompok ini yang diisolasi dari air garam budaya jamur yang berasal dari laut;
Pithomyces sp. Jamur pigmen telah dilaporkan menghasilkan warna beras merah yang
digunakan sebagai zat pewarna untuk persiapan makanan tertentu dan minuman
beralkohol di beberapa bagian Asia. Pitholide B tidak aktif dalam uji udang air asin
pada 0,2 mg / ml.

KESIMPULAN
Pitholide B pada awalnya diisolasi dari biakan laut tetapi ini Penelitian
menunjukkan bahwa dimungkinkan untuk mendapatkannya dari tanaman Phoenix
reclinata . Juga, dihydroxanthenone, AGI-B4 dan Syndowinin B yang sebelumnya
diisolasi dari Aspergillus sydowi juga diisolasi dari Phoenix reclinata untuk pertama
kalinya.
DAFTAR PUSTAKA

Aladea, G. O. et al. Metabolit dari jamur endofit; Pestalotiopsis clavispora diisolasi


dari Daun reclinata Phoenix. Jurnal Masa Depan ilmu Farmasi. 04
(2018):273-275.

Strobel,G., B. Daisy, U. Castillo, J. Harper, Produk alami dari mi endofitik


croorganisms, J. Nat. Melecut. 67 (2004) 257-268 .

Verma, V.C., RN Kharmar, GA Strobel, Keanekaragaman kimia dan fungsional dari


produk alami dari tumbuhan terkait jamur endofit. Nat. Melecut. Komunal.
(2009) 1511-1532 .

L. Zhou, J. Zhao, T. Shan, X. Cai, Y. Peng, Spirobisnaphthalenes dari jamur dan


kegiatan biologis, Mini Rev. Med. Chem 10 (2010) 977-989 .

L. Liu, Y. Li, S. Liu, Z. Zheng, X. Chen, H. Zhang, L. Guo, Y. Che, Kloropestolida ,


metabolit anti umor dengan kerangka spiroketal yang belum pernah terjadi
sebelumnya dari Pestalotiopsis fici , Org. Lett. 11 (13) (2009) 2836–2839 .
TUGAS FITOKIMIA
Metabolit dari jamur endofit; Pestalotiopsis clavispora diisolasi dari
Daun reclinata Phoenix
Gideon O. Aladea ,Jones O. Moody, AG Bakare, Olanrewaju R. Awotona, Saburi
Adesanya, Daowan Lai, Abdessamad Debbab, Peter Proksch.

OLEH:
NAMA : ALDI PRIAMBODO
NIM : 08031181621001

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SRIWIJAYA
2019