Laporan Patologi Ikan PDF

Laporan Praktikum Hari/Tanggal: Rabu/31 Desember 2014
M.K Patologi Ikan Dosen: Dr. Sri Nuryati, S.Pi., M.Si
PATOLOGI IKAN
DISUSUN OLEH:
ARDANA KURNIAJI
C151140261
ILMU AKUAKULTUR
SEKOLAH PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2014
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis haturkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan
berkah, rahmat, dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan Laporan
Praktikum Patologi ikan. Praktikum Patologi ikan dilaksanakan di Laboratorium
Kesehatan Ikan Departemen BDP Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut
Pertanian Bogor.
Penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada
keluarga tercinta yang senantiasa mendoakan kesuksesan bagi penulis dalam
penyelesaikan laporan ini. Terimakasih kepada dosen pengampuh mata kuliah
Patologi ikan atas bimbingan dan ilmu yang diberikan selama praktikum, tidak lupa
penulis juga mengucapkan terimakasih untuk seluruh anggota kelompok atas
kerjasamanya dalam praktikum patologi ikan ini.
Penulis sadar jika dalam penyusunan laporan ini masih terdapat banyak sekali
kekurangan dan salah, mohon kiranya dimaafkan dan diilhami sebagai contoh yang
baik agar di kemudian hari tidak di ulangi. Semoga laporan ini dapat memberi
manfaat bagi semua pihak yang membacanya. Terima kasih.
Bogor, Desember 2014
Ardana Kurniaji
C151140261
RIWAYAT HIDUP
Penulis bernama lengkap Ardana Kurniaji, dilahirkan pada

tanggal 9 Juni 1992 di Desa Woimenda Kabupaten Kolaka
Provinsi Sulawesi Tenggara. Penulis adalah anak pertama dari
dua bersaudara pasangan Abdul Kadir, A.Pi., M.Si dan Nining
Syamsinar. Penulis mengawalii pendidikan formalnya di SDN
05 Mandonga dan selesai pada tahun 2004, kemudian
melanjutkan studinya di SMP Negeri 3 Kendari pada tahun
2004 dan berhasil menyelesaikan studinya pada tahun 2007.
Pada tahun yang sama melanjutkan studinya di SMA Negeri 4
Kendari dan berhasil menyelesaikan studinya pada tahun
2010. Penulis meraih gelar sarjana pada tahun 2014 di Universitas Halu Oleo
(UHO) Kendari, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Program Studi Budidaya
Perairan. Saat ini penulis tengah melanjutkan studi magister di Sekolah
Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor (IPB), Mayor Ilmu Akuakultur. Selama
mengenyam studinya, berbagai prestasi akademik dan non akademik pernah diraih
seperti menjadi siswa juara umum, meraih penghargaan mahasiswa dengan Indeks
Prestasi (IP) tertinggi dan mengikuti berbagai kompetisi kejuaraan seperti Lomba
Debat Bahasa Inggris Se-Sulawesi (2013), mendapat juara II Lomba Karya Tulis
Ilmiah ajang PORSIAF (2011) dan menjadi utusan Universitas Halu Oleo dalam
ajang Mahasiswa Berprestasi Tingkat Nasional (2013). Sejak duduk dibangku
sekolah dasar, penulis aktif diberbagai organisasi diantaranya pernah menjadi
pengurus OSIS 2005/2006, pengurus Siswa Gemar Matematika (SIGMA)
2007/2008, Ketua Umum Kerohanian Islam (ROHIS) 2008/2009, Sekretaris Ikatan
Silaturahim Pelajar Islam (ISPI) 2009/2010, Pengurus Badan Koordinasi Lembaga
Dakwah Kampus (BKLDK) 2010/2011, Ketua Umum Amphiprion Scientific Club
(ASC) 2011/2012, Ketua Umum Badan Eksekutif Mahasiswa (BEM) FPIK UHO
2013/2014 dan Anggota Fisheries English Club (FEC) dan Langkoe Diving Club
(LDC) FPIK UHO, serta aktif di Lembaga Swadaya Masyarakat (LSM) yang
berorientasi pada pengembangan potensi wilayah pesisir yakni Yayasan Bina Laut
Indonesia (YBLI). Selain mengikuti organisasi, penulis juga aktif membimbing
berbagai kegiatan penulisan karya tulis ilmiah sejak tahun 2011, seperti
membimbing mahasiswa dalam pembuatan Proposal Program Kreativitas
Mahasiswa (2011-2012) yang diselenggarakan oleh Direktorat Penelitian dan
Pengabdian Masyarakat (DP2M) Ditjen Dikti, asisten praktikum mata kuliah
Avertebrata Air, Ekologi Perairan, Biologi Umum, Ikhtiologi, Fisiologi Hewan Air
dan Penyakit Ikan. Disamping itu, penulis juga pernah aktif mengikuti
International Project yang diselenggarakan Universitas Halu Oleo bekerjasama
dengan Australian AID tahun 2012-2013 serta aktif dalam penulisan buku-buku
ilmiah. Salah satu buku yang pernah ditulis adalah buku “Membumikan Kreativitas
Ilmiah” bersama Bapak La Ode Abdul Rajab Nadia, S.Pi., M.Sc dan menulis salah
satu artikel ilmiah pada Prosiding Seminar Internasional The 8th CRISU-CUPT
International Confrence tahun 2013.
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ..................................................................................... i
KATA PENGANTAR ................................................................................... ii
RIWAYAT HIDUP........................................................................................ iii
DAFTAR ISI .................................................................................................. iv
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................... v
DAFTAR TABEL.......................................................................................... vi
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. vii
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang .................................................................................... 1
B. Tujuan ................................................................................................... 4
II. METODE PRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat ................................................................................ 5
B. Alat dan Bahan .................................................................................... 5
C. Prosedur Praktikum ................................................................................ 6
III. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Pengamatan .................................................................................... 19
1. Hasil Uji Refleks .............................................................................. 19
2. Hasil Inventarisasi Parasit ............................................................... 20
3. Hasil Uji Bakteri A. hydrophila menggunakan KIT API 20 E......... 20
4. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri (TPC) ........................................ 21
5. Hasil Pengamatan Darah ................................................................. 22
6. Hasil Uji Histopatologi..................................................................... 23
7. Uji Potensi Dengan Metode Cracking, PCR, Elektroforesis ............ 25
B. Pembahasan ............................................................................................. 26
1. Uji Refleks........................................................................................ 26
2. Inventarisasi Parasit.......................................................................... 28
3. Uji Bakteri A. hydrophila menggunakan KIT API 20 E .................. 31
4. Perhitungan Koloni Bakteri (TPC) ................................................... 31
5. Pengamatan Darah............................................................................ 34
6. Uji Histopatologi .............................................................................. 45
7. Uji Potensi Dengan Metode Cracking, PCR, Elektroforesis ............ 48
IV. SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan ................................................................................................. 50
B. Saran ........................................................................................................ 51
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1 Ikan Lele (Clarias sp.) Uji yang digunakan dalam praktikum .................. 19
2 Hasil Histologi Otot ................................................................................... 23
3 Hasil Histologi Ginjal. ............................................................................... 24
4 Hasil Histologi Insang.............................................................................. 24
5 Hasil Histologi Hati ................................................................................... 25
6 Hasil Elektroforesis dari Pengujian Potensi dengan metode Cracking ..... 25
7 Grafik Hemoglobin (Hb) ........................................................................... 35
8 Gambar 8 Grafik Hematokrit (Ht) ............................................................. 36
9 Sel Darah Merah ........................................................................................ 38
10 Jumlah Sel Darah Merah ........................................................................... 38
11 Sel Darah Putih .......................................................................................... 40
12 Pengamatan Sel Darah Putih ..................................................................... 40
13 Aktifitas Fagositik ..................................................................................... 42
14 Sel darah ikan mas strain ........................................................................... 44

DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1 Hasil Uji Refleks Ikan Lele ..................................................................... 19
2 Hasil pengamatan pada pemeriksaan parasit ............................................. 20
3 Hasil pengamatan pada pengujian bakteri ................................................. 21
4 Hasil Perhitungan Koloni Bakteri .............................................................. 21
5 Hasil Pengamatan Ikan Paska Injeksi ........................................................ 22
6 Hasil pengamatan darah ikan lele kontrol ................................................. 23
7 Hasil pengamatan darah ikan lele injeksi .................................................. 23

I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia adalah salah satu negara yang memiliki lahan budidaya ikan dan
udang yang luas sehingga Indonesia memiliki potensi besar dalam pengembangan
dan peningkatan hasil produksi budidaya. Untuk memenuhi permintaan pasar yang
terus meningkat baik di pasar lokal maupun pada tingkat internasional sangat perlu
diperhatikan kualitas dan kuantitas hasil budidaya yang akan diproduksi karena
mempengaruhi permintaan konsumen. Usaha perikanan terutama budidaya telah
berkembang pesat dan diusahakan secara intensif dengan ciri padat penebaran yang
tinggi dan lingkungan yang terkontrol. Hal ini memerlukan manajemen yang baik
agar menghasilkan komoditas yang berkualitas. Dalam pengelolaannya, seringkali
terdapat kendala yang berpeluang menghambat kelancaran usaha budidaya. Salah
satu kendala tersebut adalah penyakit yang berimplikasi negatif terhadap produktifitas
komoditas budidaya.
Penyakit ikan disebabkan oleh tiga komponen utama yakni lingkungan,
pathogen dan kondisi organisme itu sendiri. Penyakit yang disebabkan oleh
perubahan parameter lingkungan merupakan penyakit non infeksius yang disebabkan
oleh pola manajemen lingkungan budidaya yang tidak baik, sedangkan penyakit yang
diakibatkan oleh pathogen merupakan penyakit infeksius yang biasanya berasal dari 4
golongan organisme yakni parasit, fungi, bakteri dan virus. Penyakit biasanya
menyebabkan perubahan fungsi fisiologis bagi ikan baik fenotip maupun genotip.
Oleh sebab itu, upaya pencegahan dan pengobatan terus dilakukan sebagai solusi
untuk meminimalkan dampak kerugian dalam budidaya ikan.
Salah satu ikan yang menjadi komoditas dalam budidaya air tawar adalah ikan
lele. Ikan lele (Clarias sp.) adalah ikan air tawar yang telah dibudidayakan secara
tradisional, semi intensif maupun secara intensif. Ikan Lele banyak ditemukan di
Benua Afrika dan Asia Tenggara. Komoditas perikanan ini terhadap perairan umum
yang berair tawar. Penyebaran, yaitu de negara Indonesia, Thailand, Filiphina, dan
China. Ikan Lele di beberapa negara, khususnya di Asia telah diternakkan dan
dipelihara dikolam. Penyebaran nama ikan lele berbagai negara berbeda-berbeda.
Ikan lele ada yang dikenal dengan keli. Habitat atau lingkungan hidup lele banyak
ditemukan perairan air tawar, didaratan rendah sampai sedikit payau. Lele jarang
menampakkan aktifitasnya pada siang hari dan lebih menyukai tempat gelap, agak
dalam dan teduh. Hal ini karena lele adalah binatang nokturnal, yaitu mempunyai
kecendrungan beraktivitas dan mencari makan pada malam hari. Ikan lele relatif
tahan terhadap kondisi lingkungan yang kualitas airnya buruk. Pada kondisi kolam
dengan padat penebaran yang tinggi dan kendungan oksigennya sangat minimpun lele
masih dapat bertahan hidup (Mahyudin 2008).
Dalam pembudidayaan ikan lele, seringkali ditemukan berbagai penyakit yang
timbul. Hal ini diantaranya diakibatkan oleh penyakit-penyakit infeksius. Salah satu
penyakit bacterial yang sering ditemukan adalah penyakit yang diakibatkan oleh
bakteri Aeromonas hidrophylla. Bakteri ini biasanya menyebabkan penyakit Motile
Aeromonas Septicemia (MAS), hemorraghic septicemia, ulcer disease atau red-sore
disease (White 1989 dalam Wahjuningrum dkk. 2013). Bakteri A. hidrophylla hidup
di air tawar yang mengandung bahan organic yang tinggi. Ciri utama adalah
bentuknya yang batang, berukuran 1-4 x 0,4-1 mikron bersifat gram negatif dan
fakultatif aerobik. Bakteri ini bisa bertahan hidup pada suhu lingkungan 15-30oC dan
dengan pH antara 5,5-9.
Bakteri A. hidrophylla menyerang beberapa jenis ikan air tawar. Serangan
bakteri ini seringkali menyebabkan kerugian bagi pembudidaya. berbagai upaya
pencegahan telah dilakukan, baik dengan pemberian antibiotik, aplikasi fitofarmaka
dan probiotik serta penggunaan bahan lainnya. Namun penyakit bacterial ini masih
menjadi hambatan bagi para pembudidaya. Serangan bakteri ini baru terlihat apabila
ketahanan tubuh ikan menurun akibat stress yang disebabkan oleh perubahan
parameter lingkungan, kekurangan pakan, serta penanganan ikan lain yang kurang
baik. Penularan bakteri ini juga terjadi secara cepat melalui air, kontak badan, kontak
dengan peralatan tercemar atau karena pemindahan ikan yang sebelumnya terserang
A. hydrophilla dari suatu tempat ketempat lain. Menurut Kordi (2004) ikan yang
terserang bakteri A. hydrophilla akan memperlihatkan gejala klinis seperti tubuh
berubah menjadi gelap, kemampuan berenang menurun, mata ikan rusak dan agak
menonjol, sisik terkuak, seluruh siripnya rusak, insang berwarna merah keputihan
serta ikan akan nampak selalu dipermukaan karena insangnya rusak sehingga sulit
mendapatkan oksigen.
Berdasarkan uraian tersebut, upaya untuk mengetahui secara langsung kondisi
ikan yang terserang bakteri A. hydrophilla baik dengan mengamati gejala klinis,
mengetahui populasi bakteri yang virulen terhadap ikan dan mengamati jaringan
secara histopatologi perlu untuk dilakukan. Oleh sebab itu, paraktikum ini penting
untuk dilakukan dengan maksud untuk meninjau tingkat virulensi yang disebabkan
oleh bakteri A. hydrophilla pada ikan lele (Clarias sp.).
1.2 Tujuan
Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui teknik diagnose ikan dan
menelusuri tingkat virulensi infeksi bakteri A. hydrophilla pada ikan lele (Clarias sp.)
melalui pengamatan reflex ikan, pemeriksaan parasit, pengamatan gambaran darah
pasca injeksi A. hydrophilla, perhitungan bakteri pada organ dan pengamatan
histologi.
II. METODOLOGI
2.1 Waktu dan Tempat
Praktikum patologi ikan dilaksanakan dalam dua tahapan, tahapan pertama

adalah pengujian sebelum injeksi bakteri meliputi uji refleks dan pemeriksaan parasit.
Kemudian tahapan kedua adalah pengujian pasca injeksi bakteri meliputi perhitungan
bakteri pada organ ikan, pengamatan gambaran darah dan pengamatan histologi.
Praktikum dimulai dari tanggal 24 September sampai 24 Desember 2014. di
Laboratorium Lingkungan dan Laboratorium Kesehatan Ikan, Departemen Budidaya
Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
2.2 Alat dan Bahan
Alat dan bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah terbagi dalam
setiap tahapan berbeda. Adapaun alat dan bahan pada setiap tahapan adalah sebagi
berikut:
2.2.1 Pemeliharaan Ikan
Pemeliharaan ikan dilakukan di laboratorium lingkungan dengan

menggunakan perlengkapan budidaya meliputi akuarium, aerasi, selang sifon, ember
dan waring. Adapun bahan yang digunakan adalah ikan lele (Clarias sp.), pakan, air,
PK (Kalium Permanganat), sabun dan plastik.
2.2.2 Pemeriksaan Parasit
Alat dan bahan yang digunakan dalam laboratorium kesehatan ikan meliputi
perlengkapan untuk pemeriksaan parasit yakni 1 set alat bedah, mikroskop, preparat,
cwan petri, akuades.
2.2.3 Penginjeksian dan Pengujian Bakteri
Untuk selanjutnya dilakukan penginjeksian bakteri A. hydrophilla dengan

menggunakan alat dan bahan meliputi biakan bakteri A. hydrophilla, larutan
fisiologis, alat suntik, tabung ependof, bunsen dan Kit Api 20E untuk pengujian
bakteri yang menggunakan bahan TDA, NIT1, VP 2, JAMES.
2.2.4 Perhitungan Bakteri pada Organ
Untuk perhitungan bakteri pada organ ikan digunakan alat dan bahan meliputi
ikan lele yang telah diinjeksi A. hydrophilla, alat bedah, timbangan, tabung ependof,
alkohol, larutan fisiologis, media selektif Rhimler Shotts, batang penyebar dan
bunsen, serta inkubator.
2.2.5 Pengamatan Darah
Untuk pengamatan darah digunakan alat dan bahan pada setiap tahapan. Pada
tahapan cara pengambilan darah meliputi ikan, antikoagulan (Na-sitrat 3,8%), kapas
beralkohol, suntik (syringe), gelas obyek dan gelas tutup. Pada tahapan diferensiasi
leukosit adalah darah, larutan methanol, pewarna giemsa, kertas penyerap/tissue,
gelas obyek, tabung perendam gelas obyek dan baki. Pada tahap perhitungan
hemoglobin (Hb) menggunakan alat dan bahan yang meliputi darah, larutan HCL 0,1
N, tissue, akuades, seperangkat alat metode sahli dan pipet pasteur. Sedangkan alat
dan bahan yang digunakan dalam perhitungan kadar hematokrit meliputi darah,
crytoceal, alat sentrifugasi, tabung mikrohematokrit (pipa kapiler berlapis/anti
koagulan), penggaris. Untuk perhitungan eritrosit digunakan darah, larutan Hayem’s,
Haemocytometer tipe Nieubair dan untuk perhitungan leukosit digunakan darah,
larutan turk’s, Haemocytometer tipe neubauer, pensil gambar, pensil warna.
2.2.6 Pengamatan Histologi
Pada pengamatan histologi digunakan alat dan bahan meliputi sampel dua
ikan lele, alat bedah, larutan NBF, alkohol 70%, 80%, 90%, 95%, 100%, Xylol, Xylol
1, Xylol 2, Xylol 3, phenol dan xylene, parafin (casette), mikrotom, pewarna
Hematoxyline Eosin (HE) dan mikroskop, Tissue Float Bath, Slide Drying Bench,
Larutan fisiologis.
2.3 Prosedur
Kegiatan praktikum patologi ikan mencakup persiapan wadah dan media,

persiapan, pemeriksaan status kesehatan ikan melalui uji reflex, pemeriksaan parasit
ikan, penginjeksian Aeromonas hydrophyla, pengamatan pasca injeksi bakteri,
penghitungan bakteri pada organ ikan, dan pembuatan dan pengamatan preparat
histology.
1. Persiapan wadah dan media

2. Persiapan ikan
3. Pemeriksaan status kesehatan ikan melalui uji reflex
4. Pemeriksaan parasit ikan,
5. Penginjeksian Aeromonas hydrophyla
6. Pengamatan pasca injeksi bakteri
7. Penghitungan bakteri pada organ ikan,
8. Pembuatan dan pengamatan preparat histologi
9. Pengamatan darah
10. Uji Potensi Dengan Metode Cracking, PCR, Elektroforesis
2.3.1 Persiapan Wadah dan Media
Persiapan wadah diawali dengan persiapan wadah dan media. Persiapan

wadah dilakukan dengan cara membersihkan akuarium dengan menggunakan sabun,
dibilas sampai bersih, dan berikutnya didesinfeksi dengan larutan PK (kalium
permanganate: (KMnO4). Setelah bersih dilakukan pengisian air dan diaerasi untuk
memberikan suplai oksigen pada media pemeliharaan. Akuarium disiapkan sebanyak
dua buah yang masing-masing digunakan untuk memelihara ikan lele tanpa perlakuan
injeksi (control) sedangkan yang lain untuk memelihara ikan dengan perlakuan
injeksi bakteri A. hydrophyla.
2.3.2 Persiapan Ikan
Ikan yang digunakan adalah ikan lele dengan ukuran panjang 10-12 cm.
sebanyak 15 ekor ikan dimasukan ke dalam masing-masing akuarium. Ikan tersebut
selanjutnya diberi pakan berupa pellet komersial sebanyak 2 kali sehari secara ad
satiation. Ikan tersebut dipelihara sampai siap diinjeksi dengan bakteri setelah
sebelumnya diperiksa setatus kesehatannya.
2.3.3 Pemeriksaan Status Kesehatan Ikan: Uji Reflex
Uji reflex perlu dilakukan untuk melihat status dasar kesehatan ikan secara
mikroskopis eksternal. Uji reflex ini mencakup reflex renang, pertahanan, ekor dan
mata.
1. Beri kejutan pada ikan minsalnya dengan menepuk dinding akuarium (wdah
pemeliharaaan ikan ) lalu amati apakah ikan tersebut lari atau diam saja.
2. Ambil ikan tersebut dan pegang erat-erat, amati apakah ikan tesebut
memberontak atau diam saja.
3. Pegang bagian kepala dan biarkan posisi badan menggantung, amti sirip ekornya
apakah mengembang atau tidak.
4. Balikan ikan tersebut dengan posisi ventral dibagian atas, amati matanya, amati
pupil matanya bergerak kea rah ventral atau diam saja. Catat hasilnya dan
simpulkan kondisi kesehatan ikan tersebut.
2.3.4 Pemeriksaan Parasit
Pemeriksaan terhdap parasit meliputi pemeriksaan ektoparasit dan

endoparasit.
1. Lakukan pemeriksaan ikan untuk mengetahui abnormalitas morfologi ikan akibat

infestasi ikan
2. Matikan ikan terlebih dauhulu, letakkan ikan di dalam cawan petri yang berisi air
secukupnya, kondisikan ikan yang diperiksa untuk kekurangan air sehingga
parasit terutama ektoparasit tetap berada pada habitat aslinya.
3. Kerik lendir pada bagian kulit/sisik dan sirip, letakkan di atas gelas obyek dan
beri air secukupnya, amati menggunakan mikroskop.
4. Periksa bagian ooperculum, buka operculum dan amati organ insang.
5. Potong bagian insang dengan menggunakan gunting, letakkan di atas gelas obyek
dan beri air secukupnya dan amati menggunakn mikroskop.
6. Identifikasi ektoparasit berdasarkan bentuk morfologi dan pergerakan parasit
7. Bedah ikan, ambil jaringan otot dan bikin sayatan setipis mungkin, amati
mengguanak mikroskop
8. Amati keberadaan parasit di permukaan organ (diamati langsung, bias dengan
bantuan kaca pembesar) maupun di dalam organ (hati, ginjal, empedu, usus)
dengan cara mencacah organ tersebut secara perlahan-lahan. Amati dengn
menggunakan mikroskop.
9. Identifikasi endoparasit yang diperoleh
10. Gambarlah parasit yang diperoleh.
11. Hitung prevalensi dan intensitas parasit:
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑖𝑘𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑡𝑒𝑟𝑖𝑛𝑓𝑒𝑘𝑠𝑖 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡

Prevalensi= 𝑥 100%
𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑖𝑘𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑝𝑒𝑟𝑖𝑘𝑠𝑎
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑝𝑒𝑟𝑜𝑙𝑒ℎ

Intensitas =
𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑖𝑘𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑟𝑎𝑛𝑔 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡
2.3.5 Penginjeksian Aeromonas hydrophyla
Bakteri A. hydrophyla yang diinjeksi ke ikan harus divalidasi terlebih dahulu

untuk membuktikan bahwa bakteri tersebut benar merupakan bakteri A. hydrophyla
pembuktian dapat dilakukan baik melalui uji fisiologis dan biokimia secara manual
maupun menggunakan kit API 20E.
Setelah terbukti bakteri tersebut memang bakteri A. hydrophyla maka bakteri
tersebut siap diinjeksi ke ikan dengan kosentrasi 108 cfu. Bakter diinjeksikan
sebanyak 0,1 ml secara IM ke tubuh ikan lele.
2.3.6 Pengamatan Pasca Injeksi
Parameter yang diamati pasca injeksi adalah respon refleksikan uji, respon
terhadap pakan, gejala klinis dan jumlah iakn yang mati. Pengamatan dilakukan
setiap hari dan hasilnya dicatat.
2.3.7 Penghitungan bakteri pada organ ikan

1. Ambil ikan perlakuan yang ada di akuarium baik ikan yang diinjeksi maupun
tidak diinjeksi
2. Bedah ikan dan ambil organ ginjal, timbang bobot organ ginjal tersebut
3. Gerus organ ginjal dengan mortar steril dan tambahkan larutan fisiologis
sebanyak 1 ml
4. Tambahkan sebanyak 9 ml larutan fisiologis, encerkan secara berseri sehingga
didapatkan kosentrasi 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5.
5. Ambil dari masing-masing seri pengenceran sebanyak 0,5 ml, tuang di media
selektif Rhimler Shotts, inkubasi selama 24 jam
6. Hitung jumlah koloni yang tumbuh di media selektif tersebut. Untuk memenuhi
persyaratan statistic maka koloni yang dihitung adalah yang jumlahnya 30-300
koloni per cawan. Jumlah organisme yang terdapat dalam sampel asal ditentukan
dengan menggunakan jumlah koloni yang terbentuk dengan faktor pengenceran
pada cawan yang bersangkutan.
2.3.8 Pembuatan dan Pengamatan Preparat Histologi
Tujuan dari histologi adalah untuk memperbanyak sayatan tipis dari jaringan
hewan yang selanjutnya dapat diuji dengan dengan bantuan mikroskop cahaya.
Histology dapat dijadikan sebagai langkah awal untuk mendiagnosis suatu penyakit
minsalnya pada molusca dan crustacea. Histology juga dapat berfungsi sebagai
penunjang bagi uji mikrobiologis yang lain. Untuk mendapatkan hasil yang terbaik
maka perlu diperhatikan tentang pemilihan larutan fiksatif yang digunakan; ukuran
jaringan yang akan diuji, durasi untuk proses pembuatan preparat serta reagen untuk
pewarnaan.
Pembuatan preparat histologis dilakukan dengan lima tahap, yakni penentuan
jaringan, fiksasi jaringan, proses perlakuan jaringan (dehidrasi, klining, impregnasi,
embedding dan bloking), pemotongan jaringan dan pewarnaan jaringan. Jaringan
yang diambil adalah jaringan yang terkena luka atau dicurigai terluka, seperti urat
daging, ginjal, limpa dan hati. Organ-organ tersebut dipotong setebal 2 - 3 mm3
(fiksatif Bouin) dan 3 - 4 mm3 atau 4 - 5 mm3 (fiksatif BNF) agar larutan fiksatif
meresap.
Jaringan yang diambil adalah jaringan yang terkena luka atau dicurigai
terluka, seperti urat daging, ginjal, limpa dan hati. Organ - organ tersebut dipotong
setebal 2 - 3 mm3 (fiksatif Bouin) dan 3 - 4 mm3 atau 4 - 5 mm3 (fiksatif BNF) agar
larutan fiksatif meresap. Tujuan fiksasi jaringan adalah agar mendekati atau sama
dengan keadaan asalnya, mencegah kerusakan jaringan baik karena otolisis atau
bakteri pembusukan, mencegah proses osmosis dan penciutan jaringan, melindungi
jaringan pada waktu dilakukan proses, membentuk tekstur jaringan sehingga
memudahkan pemotongan, mengaktifkan jaringan sehingga mudah diwarnai.
Setelah difiksasi, dilakukan proses dehidrasi yang berfungsi untuk
mengeluarkan cairan dalam sel dengan direndam bahan kimia mulai dari konsentrasi
rendah ke konsentrasi tinggi. Bahan kimia yang digunakan berupa alkohol 70%-
100%,. Proses dehidrasi dimulai dari perendaman dengan alkohol 70% selama 2 jam,
dilanjutkan dengan perendaman alkohol 80% selama 2 jam, alkohol 90% selama 2
jam dan alkohol 100% selama 2 jam. Selanjutnya adalah proses clearing bertujuan
untuk mengeluarkan alkohol dan memasukan xylol dalam organ. Proses clearing
diawali dengan perendaman alkohol : xylol (1:1) selama ½ jam, xylol I ½ jam, xylol
II ½ jam dan xylol III ½ jam. Setelah proses clearing dilakukan proses impregnasia
yakni dengan cara merendam sampel dalam parafin pada titik cair 65-70°C dengan
perbandingan xylol dan parafin 1:1 selama ¾ jam. Proses embedding merupakan
proses pemasukan parafin ke dalam sel dengan cara merendam sampel dalam parafin
I selama ¾ jam, parafin II selama ¾ jam dan parafin III selama ¾ jam. Selanjutnya
proses bloking yang bertujuan untuk mencetak jaringan sehingga mudah dipotong.
Pemotongan jaringan dilakukan dengan menggunakan mikrotom. Setelah
dipotong, jaringan dimasukan ke air suam-suam kuku sehingga pita potongan
jaringan mengapung dan bisa dipotong untuk selanjutnya ditata dalam gelas objek.
Terdapat tiga tahap pewarnaan jaringan yakni hidrasi yang berfungsi mengeluarkan
parafin, pewarnaan menggunakan H-E (hemotoksilin-eosin) dan dehidrasi yang
berfungsi untuk mengeluarkan air agar jaringan tidak mudah rusak.
Prosedur yang dilakukan dalam pengambilan darah adalah sebagai berikut:

letakkan ikan dengan menghadap ke sebelah kiri, isi alat suntik dengan Na-sitrat
sedikit, bilas dan buang kembali lalu darah diambil pada bagian vena caudalis yaitu
pembuluh darah terbesar ini yang terletak tepat di bagian ventral tulang vertebrae
(tulang punggung).
I. Cara Pengambilan Darah
1. Letakkan ikan dengan kepala menghadap ke sebelah kiri

2. Isi alat suntik dengan N-Sitrat sedikit, bilas dan buang kembali lalu darah diambil
pada bagian vena caudalis yaitu pembuluh darah terbesar yang terletak tepat
dibagian ventral tulang vertebrata (tulang punggung).
3. Tusukan jarum di atas antara anus dan ujung sirip anal. Tusukan horizontal kea
rah cranial sampai mengenai tulang vertebrata.
4. Tarik jarum sedikit, lalu tariklah pengisap jarum suntik sampai darah terhisap
sebatas yang diinginkan.
5. Cabut jarum dan alat suntik, tutup bekas suntikan dengan kapas beralkohol.
Dengan memegang alat suntik antara ibu jari dan telunjuk goyangan ke kiri -
kanan agar darah tercampur rata dengan antikoagulan. Cairan darah ini siap dan
disimpan juga di lemari es sebelum digunakan.
II. Preparat Ulas untuk Diferensial Leukosit
- Pembuatan Preparat Ulas

1. Pegang gelas obyek dengan telunjuk dn ibu jari
2. Teteskan sedikit darah pada gelas obyek bersih (A) bagian sebelah kanan.
3. Letakkan gelas obyek lain (B) disebelah kiri tetesan darah membentuk sudut 30o.
Tarik gelas obyek ke kanan sampai menyentuh darah tersebut.
4. Setelah darah menyebar sepanjang tepi gelas obyek B, dorong gelas obyek
tersebut ke kiri dengan tetap membentuk sudut 30o bila tetesan darah sedikit dan
diseret cepat (jangan sampai menindas sel darah). Tujuan dari tindakan ini adalah
agar ulasan darah pada gelas obyek tipis sehingga darahnya kelak mudah
diamati, selain itu agar sel-sel darah yang diulas tidak pecah karena tertindas.
Setelah itu ulasan dikeringudarakan untuk memudahkan pengamatan maka darah
dapat diwarnai dengan pewarna giemsa.
- Pembuatan Darah dengan Giemsa

1. Darah yang baru diulas digelas obyek dikeringudarakan (fiksasi udara),
kemudian fiksasi dalam larutan methanol selama 10 menit.
2. Setelah difiksasi, genangi dengan zat pewarna berupa larutan giemsa
(pengenceran 1:60) selama 60 menit, setelah selesai zat pewarna dibuang.
3. Cucilah dengan akuades dan keringkan kemudian ditutup dengan Canada balsam
atau entellan, tutup dengan gelas penutup, setelah itu amati dibawah mikroskop.
4. Jenis-jenis sel leukosit dihitung dengan cara mengamati sebanyak 5 lapang
pandang dan masing-masing jenis leukosit yang terhitung dikelompokkan dan
dipresentasi menurut jenisnya. Satuannya adalah persen (%).
- Pengamatan
1. Isikan hasil perhitungan anda ke dalam tabel 4 dibawah ini
2. Berikan kesimpulan dan interpretasi terhadap data tersebut
III. Perhitungan Kadar Hemoglobin (Hb)
Pengukuran kadar hemoglobin (Hb) dapat dilakukan dengan metode Sahli

yang mengkonversikan darah kedalam bentuk asam hematin (warna coklat) setelah
darah ditambah dengan asam khlorida dan nereaksi dengan asam khlorida tersebut.
Prosedur pengukuran kada hemoglobin :
1. Darah diisap dengan pipet sahli sampai skla 20 mm3 atau pada skal 0,2 mL,
bersihkan ujung pipet dengan kertas tissue.
2. Pindahkan darah dalam pipet ke dalam tabung Hb-meter yang telah diisi HCL 0.1
N sampai skla 10, aduk selama 3 sampai 5 menit.
3. Tambahkan aquades sampai warna darah dan HCL tersebut seperti warna larutan
standar yang ada dalam Hb meter tersebut
4. Baca skla yaitu dengan melihat permukaan cairan dan dicocokkan dengan skla
tabung sahli yang dilihat pada skla jalur gr % yang berarti banyaknya
hemoglobin dalam gram per 100 ml darah
IV. Perhitungan Kadar Hematokrit
Prosedur penghitungan kadar hematokrit:
1. Celupkan salah satu ujung tabung mikrohematokrit ke dalam tabung yang berisi
darah sehingga darah akan merambat secara kapiler sampai mencapai ¾ bagian
tabung.
2. Tutup ujung tabung tersebut yang telah berisi darah dengan cytoceal dengan cara
menancapkan ujung tabung ke dalam cytoceal kira-kira sedalam 1 mm, sehingga
terbentuk sumbat cytoceal.
3. Sentrifugasi tabung mikrohematokrit dengan kecepatan 3000 rpm swlama menit
dengan posisi tabung yang bervolume sam berhadapan dan yang bersumbat ada
di sebelah luar agar putaran sentrifuge seimbang.
4. Nilai kadar hematokrit dengan cara mengukur panjang bagian darah yang
mengendap serta panjang total volume darah yang terdapat di dalam tabung.
Persentasikan panjang bagian endapan disbanding dengan panjang volume darah
dalamtabung tersebut dalam satuan persen (%). Kadar hematokrit ini
mencerminkan banyaknya sel darah (digambarkan dengan padatan/endapan)
dalam cairan darah.
V. Perhitungan Sel Darah Merah (Eritrosit Total)
1. Darah dihisap dengan pipet yang berisi bulir pengaduk warna merah sampai
kepala skala 1 (pipet untuk mengukur jumlah sel darah merah).
2. Tambahkan larutan hayem’s sampai skala 101,pengadukan darah didalam pipet
dilakukan dengan mengayunkan tangan yang memegang pipet seperti
membentuk angka delapan selama 3-5 menit sehingga darah tercampur rata.
Larutan hayem’s ini berfungsi untuk mematikan sel-sel darah putih.
3. Buang dua tetes pertama larutan darah dalam pipet, elanjutnya teteskan pada
Haemocytometer tipe Neubauer dan tutup dengan gelas penutup.
4. Hitung jumlah sel darah merah dengan bantuan mikroskop dengan pembesaran
400 kali. Jumlah eritrosit tetap dihitung sebanyak 10 kotak kecildan konversikan
menurut jumlah total kotak kecil sehingga didapatkan sel darah merah per mili
liter.
5. Pengamatan data diisi kedalam tabel dan berikan kesimpulan terhadap data
tersebut
VI. Perhitungan Sel Darah Putih (Total Leukosit)
1. Hisap darah dengan pipetyang berisi bulir pengaduk berwarna putih sampai skala
0,5
2. Tambahkan larutan Turk’s sampai skala 11, pipet diayun membentuk angka 8
sama dengan pengadukan untuk penghitungan jumlah sel darah merah selama 3-
5 menit sehingga darah bercampur rata. Larutan Turk’s ini bersifat asam yang
akan mengakibatkan lisisnya sel darah merah sehingga yang tertinggal hanya sel
darah putih.
3. Buang dua tetes pertama larutan darah dari dalam pipet, kemudian teteskan
larutan pada haemocytometer tipe neubaur kemudian ditutup dengan gelas
penutup.cairan akan memenuhi ruang hitung secara kapiler.
4. Hitung jumlah sel darah putih/leukosit total dengan bantuan mikroskop dengan
pembesaran 400X.jumlah leukosit total dihitung dengan cara menghitung sel
yang terdapat dalam 5 kotak besar, lalu konversikan angka tersebut menurut
jumlah total kotak besar sehingga didapatkan jumlah sel darah putih per mili
liter.
5. Diisikan data kedalam tabel dan beri kesimpulan
2.3.10 Uji Potensi Dengan Metode Cracking, PCR, Elektroforesis

I. Cracking
 Persiapan
1. Pembuatan larutan cracking buffer
2. Pembuatan larutan loading cracking buffer
3. Persiapan larutan EDTA 10 mM 10 µL
4. Pembuatan media TSA
 Bahan pembuatan larutan cracking buffer

Saccharose 0.2 g
5 M NaOH 40 µL
10 % SDS 50 µL
 Prosedur pembuatan larutan cracking buffer
a. Saccharose ditimbang terlebih dahulu sebanyak 0.2 g dan
dimasukkan ke dalam mikrotube
b. Tambahkan Ion Exchange Water (IEW) sebanyak 500 µL,
kemudian di vortex hingga larut
c. Tambahkan 40 µL 5 M NaOH dan 50 µL 10%SDS ke dalam larutan
tersebut
d. Tambahkan IEW hingga volume mencapai 1 mL (410 µL)
Keterangan : Apabila tidak langsung digunakan, larutan dapat
disimpan pada suhu ruang (37ºC) dengan masa
peyimpanan maksimal selama 1 minggu
IEW 500 µL
Saccharos
e 0.2 g
Vortex hingga
larut
 5 M NaOH 40 µL
 10 % SDS 50 µL
 IEW 410 µL
 Prosedur pembuatan larutan loading cracking buffer

a. 6 kali loading buffer dicampurkan dengan 4 M KCl dengan
perbandingan 1 : 1
b. Simpan pada suhu ruang hingga akan digunakan
 Prosedur Cracking
a. Siapkan mikrotube sesuai dengan jumlah sampel, kemudian lakukan
penomoran
b. Goreskan bakteri menggunakan tusuk gigi yang telah disterilkan di atas
Bunsen pada setiap mikrotube
c. Selanjutnya, tusuk gigi tersebut langsung digoreskan pada media TSA
sesuai dengan nomor sampel
d. Setelah selesai digores, masukkan :
1. EDTA 10 mM : 10 µL
2. Cracking buffer : 10 µL
e. Teteskan loading cracking buffer secukupnya ( ± 1 µL) pada tutup bagian
dalam
f. Diamkan selama 5 menit
g. Setelah 5 menit mikrotube di spindown dan di vortex, kemudian di
sentrifuge selama 5 menit dengan kecepatan 12.000 rpm
h. Elektroforesis pada 0.7 % agarose
II. PCR
a. Siapkan mikrotube streril 200 µL sesuai dengan jumlah sampel dan beri
penomoran
b. Siapkan mikrotube steril 600 µL sebanyak 1 buah
c. Masukkan Readymix + dye sebanyak 5 µL/sampel ke dalam mikrotube
600 µL (banyaknya jumlah Readymix + dye sesuai dengan jumlah
sampel)
d. Tambahkan Ion Exchange Water (IEW) sebanyak 2 µL/sampel
e. Tambahkan Primer F dan R (masing - masing sebanyak 1 µL/sampel),
kemudian pipetting
f. Pindahkan premix ke dalam masing – masing mikrotube 200 µL sebanyak
9 µL/tube (on ice)
g. Tambahkan sampel sebanyak 1 µL/tube (jumlah setiap tube 10 µL),
kemudian di vortex
h. Masukkan ke dalam mesin PCR
i. Setelah selesai, lakukan pembacaan dengan menggunakan elektroforesis
III. Elektroforesis
a. Siapkan Erlenmeyer sesuai dengan kebutuhan
b. Timbang agarose sebanyak 1 gram
c. Tambahkan 10x TBE + ETBR sebanyak 100 µL
d. Panaskan agarose dalam microwave hingga homogen dan mendidih
e. Dinginkan pada suhu ruang hingga suam kuku
f. Siapkan template agarose
g. Masukkan agarose ke dalam template yang telah disisipkan cetakan
sumur
h. Setelah agar mengeras, masukkan agar kedalam alat elektroforesis
i. Masukkan sampel sebanyak 1 – 1.5 µL ke dalam masing – masing sumur
(dimulai pada sumur ke-2)
j. Masukkan marker sebanyak 1 – 1.5 µL ke dalam sumur pertama
k. Running alat elektroforesis (200 V, 10 mA, 30 menit)
l. Setelah selesai, dokumentasikan hasil elektroforesis
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1 Hasil Pengamatan
Hasil yang diperoleh dari praktikum ini dapat dilihat pada tabel yang berbeda
berdasarkan hasil pengujian dan pengamatan.
3.1.1 Hasil Uji Refleks
Uji refleks dilakukan untuk melihat status dasar kesehatan ikan secara
makroskopis eksternal. Uji refleks mencakup refleks gerak, pertahanan, ekor dan
mata. Berdasarkan hasil pengamatan uji refleks, ikan lele yang digunakan dalam
kondisi sehat. Adapun hasil pengujian refleks ikan dapat dilihat pada Tabel 1 sebagai
berikut:
Tabel 1. Hasil Uji Refleks Ikan Lele
No. Parameter Hasil
1 Refleks Gerak Gerak aktif saat ikan diangkat
2 Pertahanan Ikan berusaha melepaskan diri/berontak
3 Ekor Digerakkan kencang saat ikan diangkat
4 Mata Pupil mata bergerak
5 Tingkah Laku Menghindar saat akuarium ditepuk
Adapun gambaran ikan yang digunakan dapat dilihat pada Gambar 1 sebagai
berikut:
Gambar 1 Ikan Lele (Clarias sp.) Uji yang digunakan dalam praktikum
3.1.2 Hasil Inventarisasi Parasit
Hasil pengamatan pemeriksaan parasit pada praktikum dapat dilihat pada
Tabel 2 sebagai berikut:
Tabel 2. Hasil pengamatan pada pemeriksaan parasit

Nama
No. Gambar Organ Ikan
Parasit
1. Trichodina sp Lendir dan Lele
insang
2. Dactylogyrus Insang Mas dan

sp. lele
3. Argulus sp Lendir Mas
Keterangan: Pervalensi = 100%

Intensitas = Tricodina sp: 3 ind/ekor, Dactylogyrus sp: 2 ind.ekor,
Argulus sp.: 1 ind/ekor
3.1.3 Hasil Uji Bakteri Aeromonas hydrophila menggunakan KIT API 20 E
Hasil pengamatan pengujian bakteri pada praktikum dapat dilihat pada Tabel
3 sebagai berikut:
Tabel 3. Hasil pengamatan pada pengujian bakteri
3.1.4 Distribusi bakteri A. hydrophila pada organ ginjal ikan lele
Hasil pengamatan perhitungan koloni pada praktikum dapat dilihat pada Tabel
4 sebagai berikut:
Tabel 4. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri

Hasil
Hari Total Hasil Total
Perhitungan
(Pasca Pengenceran koloni Perhitungan koloni Gambar
TPC
infeksi) Kontrol TPC Kontrol Injeksi
Kontrol
3 10-2 TBUD TBUD TBUD TBUD
10-3 TBUD TBUD TBUD TBUD
10 10-1 31 6,2 x 103 0 -
10-4 0 - 35 7 x 106
10-5 0 - 2 -
10-6 0 - 2 -
10-7 1 - 0 -
3.1.5 Hasil Pengamatan Pasca Injeksi
Hasil pengamatan pengamatan ikan pasca injeksi pada praktikum dapat dilihat
pada Tabel 5 sebagai berikut:
Tabel 5. Hasil Pengamatan Ikan Paska Injeksi
Hari Tingkah Laku Pola Kematian Survival Rate

ke- Kontrol Injeksi Kontrol Injeksi Kontrol Injeksi
1 Aktif Aktif 0 ekor 0 ekor 100% 100%
2 Aktif Pasif 0 ekor 2 ekor 100% 80%
Keterangan: Aktif: Ikan tampak bergerak aktif dan tampak normal, Pasif: Ikan
tampak lemah, nafsu makan menurun dan terjadi borok pada kulit ikan
3.1.6 Hasil Pengamatan Darah
Parameter darah ikan lele yang diinjeksi bakteri A. hydrophila yang diamati
pada praktikum ini meliputi: hemoglobin, hematokrit, sel darah merah, sel darah
putih, aktivitas fagositik, dan diferensial leukosit. Adapun hasil pengamatan pada
gambaran darah ikan lele kontrol dapat dilihat pada tabel 6 sebagai berikut:
Tabel 6 Hasil pengamatan darah ikan lele kontrol
SDM SDP Diferensial Leukosit (%)
Hb Ht AF
No Hari (x105 (x105
(g/%) (%) (%) Limfosit Neutrofil Monosit
sel/mm3) sel/mm3
1 H0 9 30,30 38,7 1,78 34 61 21 18
2 H3 8 34,37 28,5 2,90 28 77 15 8
3 H6 5 25,53 27,0 6,26 36 72 18 10
4 H9 5 17,50 8,95 3,55 43 58 28 14
5 H12 6 17,39 39,9 5,80 34 62 25 13
Adapun hasil pengamatan pada gambaran darah ikan lele injeksi dapat dilihat
pada tabel 7 sebagai berikut:
Tabel 7 Hasil pengamatan darah ikan lele injeksi

SDM SDP Diferensial Leukosit (%)
Hb Ht AF
No Hari (x105 (x105
(g/%) (%) (%) Limfosit Neutrofil Monosit
sel/mm3) sel/mm3
1 H0 16 38,46 29,4 84,3 41 73 14 13
2 H3 10 46,34 26,5 3,00 38 50 31 19
3 H6 7 23,07 8,05 9,37 51 48 38 14
4 H9 4 21,42 8,80 10,85 45 42 35 23
5 H12 11 37,50 16,9 11,70 43 50 29 21
3.1.7 Hasil Uji Histopatologi
Hasil pengamatan pengamatan histologi pada praktikum dapat dilihat pada

gambar jaringan organ sebagai berikut:
1. Pengamatan pada Jaringan Otot
A B
Gambar 2 (A) otot kontrol, (B) otot setelah diinjeksi. perbesaran masing-masing 10x.
jaringan mengalami perubahan patologis yakni (V) Vakuolisasi adalah
volume hepatosit membesar, nukleus rata-rata hanya satu terletak di
tengah sel
2. Pengamatan pada Jaringan Ginjal
A B
Gambar 3 Jaringan ginjal (A) kontrol, (B) pasca injeksi. perbesaran 10x. (A)
Menunjukkan ginjal ikan lele dalam keadaan normal, Tubulus distal (T)
dan Jaringan Hematopoetik (JH) dalam kondisi normal. (B)
Menunjukkan ginjal ikan paska infeksi, bagian Tubulus distal (T) dan
jaringan hematopoetik (JH), terjadi perubahan patologi berupa artropi
(A), yaitu ketidaknormalan jumlah dan volume sel atau penyusutan sel,
tubulus distal mengalami kerusakan degenerasi hialin
3. Pengamatan pada Jaringan Insang

A B
Gambar 4 Insang (A) kontrol, (B) pasca injeksi. (A). Menunjukkan arcus insang
dalam kondisi normal. (B) menunjukkan kondisi arcus insang pasca
infeksi yang menunjukkan terjadinya hemoragi (pendarahan dari dinding
vaskula) terjadi pada jaringan konektif dan jaringan otot pada arcus
insang
4. Pengamatan pada Jaringan Hati
A j B
Gambar 5 Hati (A) kontrol, (B) pasca injeksi, jaringan mengalami perubahan
patologis yakni (N) Nekrosis yakni kematian sel dan (H) Hemoragi atau
keluarnya darah dari kardio vaskuler
3.1.8 Hasil Uji Potensi Dengan Metode Cracking, PCR, Elektroforesis

Hasil pengamatan uji Potensi Dengan Metode Cracking, PCR, Elektroforesis
pada praktikum dapat dilihat pada Gambar 1 sebagai berikut
M 5 5’ 6 6’ -
Keterangan
M : Marker (KAPPA® DNA Ladder)
300 bp 5 : Sampel Ginjal I
5’ : Sampel Ginjal II
6 : Sampel Darah
6’ : Sampel Darah II
- : Kontrol Negatif
Gambar 6 Hasil Elektroforesis dari Pengujian Potensi dengan metode Cracking

3.2 Pembahasan
Ikan lele (Clarias sp.) adalah ikan yang termasuk dalam golongan catfish.
Ikan lele mudah beradaptasi meskipun dalam lingkungan yang kritis, misalnya
perairan yang kecil kadar oksigennya dan sedikit air. Ikan lele juga termasuk ikan
omnivor, yaitu pemakan segala jenis makanan tetapi cenderung pemakan daging atau
karnivora. Secara alami ikan lele bersifat nokturnal, artinya aktif pada malam hari
atau lebih menyukai tempat yang gelap, tetapi dalam usaha budidaya ikan lele dibuat
beradaptasi menjadi diurnal. Dalam praktikum ini, ikan lele yang normal diinjeksikan
bakteri pathogen A. hyrophilla yang akan menunjukkan sejauh mana virulensi dan
tingkat perubahan patologis yang ditimbulkan serangan bakteri pada ikan lele.
Diketahui bersama bahwa bakteri A. hydrophilla merupakan salah satu bakteri
pathogen yang menyebabkan penyakit pada ikan air tawar seperti ikan lele. Bakteri
ini dapat menyebabkan penyakit motile aeromonas septicaemia pada ikan lele.
3.2.1 Refleks Ikan

Uji refleks merupakan pengujian patologis yang dilakukan pada persiapan
untuk status dasar kesehatan ikan secara makroskopis eksternal. Hasil pengujian
menunjukkan ikan pada kotrol dan ikan pada akuatium uji tampak normal. Hal ini
dapat diketahui dengan hasil pengamatan gerak dimana ikan dapat bergerak aktif saat
diangkat diatas permukaan air, kemudian pada pengujian pertahanan, ikan tampak
berusaha melepaskan diri/beontak saat diangkat dan menggerakkan ekornya secara
cepat diikuri dengan pergerakan kepala. Selanjutnya pengamatan dalam air, ikan
tampak menggerakkan pupil mata dan menghindar saat dinding akuarium ditepuk.
Hal ini sesuai dengan pernyataan Agustina dkk. (2006) bahwa ikan dikatakan sehat
jika menunjukkan refleks yang aktif berupa pergerakan aktif saat diangkat, nafsu
makan yang baik dan menghindar cepat saat akuarium ditepuk.
Ikan yang sehat mengindikasikan kondisi yang normal dengan lingkungan dan
organisme patogen di lingkungannya. Timbulnya serangan wabah penyakit tersebut
pada dasarnya sebagai akibat terjadinya gangguan keseimbangan dan interaksi antara
ikan, lingkungan yang tidak menguntungkan ikan dan berkembangnya patogen
penyebab penyakit. Kemungkinan lainnya adalah adanya atau masuknya agen
penyakit ikan obligat yang ganas (virulen) meskipun kondisi lingkungannya relatif
baik. Serangan bakteri A. hydrophila pada budidaya ikan mas di Indonesia terjadi
sejak tahun 1980. Ikan sehat dan ikan sakit dapat dibedakan berdasarkan warna tubuh
ikan, tingkah laku ikan atau kelainan fungsi tubuh ikan dan respon refleks ikan. Jika
dilihat dari warna tubuh, perbedaan ikan yang sehat dengan yang sakit akan terlihat
jelas. Dimana ikan yang sehat warna tubuhnya akan terang sedangkan yang sakit akan
berubah menjadi pucat atau berubah warna dari warna aslinya. Tingkah laku ikan atau
kelainan fungsi tubuh juga dapat menentukan perbedaan ikan sehat dan sakit yaitu
ikan sehat biasanya lebih aktif gerakannya dibandingkan ikan sakit. Apabila
seharusnya ikan sebut memiliki tingkah laku aktif tiba-tiba berubah menjadi tidak
aktif bisa dimungkinkan ikan tersebut sakit.
Ada beberapa refleks ikan yang dapat dipakai untuk mentukan apakah ikan
tersebut sehat atau sakit dalam suatu populasi. Adapun refleks ikan yang biasa
diperiksa yaitu :
 Refleks ekor
Pemeriksaan ikan menggunakan refleks ekor yaitu dengan memegang ikan
terbaring pada satu sisinya, maka ekor dari ikan yang sehat akan mengembang tegak
berdiri seperti kipas, sedangkan ikan yang sakit ekornya lemas dan terkulai ke bawah.
 Refleks lari
Pemeriksaan ikan menggunakan refleks lari yaitu dengan menepuk
permukaan air, bila setelah air ditepuk-tepuk dan ikannya dapat lari, maka ikan
tersebut sehat, tetapi bila ikan diam saja di tempat, ada kemungkinan ikan tersebut
sakit. Selain itu dapat menggunakan hentakan kaki pada air kolam serta senter atau
lampu sorot pada malam hari secara mendadak.
 Refleks mata
Pemeriksaan ikan menggunakan refleks mata yaitu dengan memegang ikan
dibagian tubuhnya sedemikian rupa sehingga perutnya menghadap ke atas. Perhatikan
pupil matanya, ikan yang sehat pupil mata akan bergerak dan melihat ke atas (kearah
ventral tubuh ikan), tetapi pada ikan yang sakit maka pupil matanya tetap diam saja
tidak bergerak.
 Refleks pertahanan
Pemeriksaan ikan menggunakan refleks pertahanan yaitu dengan memegang

bagian kepala ikan dan biarkan bagian dadanya tergantung, maka ikan yang sehat
akan menggelepar bergerak-gerak ingin lepas dari pegangan. sedangkan ikan yang
sakit ekornya akan terkulai dan diam lemas.
3.2.2 Inventarisasi Parasit

Parasit adalah organisme yang hidupnya dapat menyesuaikan diri dengan
inangnya, sangat tergantung pada inangnya dan merugikan inang. Parasit mempunyai
spesifitas terhadap mikro habitat (organ inang) sehingga pemeriksaan diarahkan pada
organ internal (endoparasit) dan eksternal (ektoparasit) (Hudaidah, 2006). Munculnya
penyakit parasiter merupakan hasil interaksi antara kondisi lingkungan budidaya yang
tidak mendukung kehidupan di dalamnya (jelek), ikan (inang) yang rentan dan
adanya parasit (patogen). Pada kondisi lingkungan yang jelek ikan menjadi stress
sehingga daya tahan tubuhnya lemah, dan memudahkan patogen menyerang inang
(Yuasa 2003).
Berdasarkan hasil pengamatan pada praktikum menunjukkan bahwa parasit
yang ditemukan berasal dari jenis Trichodina sp. yang terdapat di lender dan insang
ikan lele. Kemudian Dactylogyrus sp. yang ditemukan pada bagian insang ikan lele
dan mas dan Argulus sp. pada lendir ikan mas. Jika ditinjau, parasit yang ditemukan
merupakan parasit yang menyerang organ luar ikan atau disebut juga ektoparasit.
Ektoparasit adalah parasit yang melekat pada bagian permukaan tubuh, sedangkan
endoparasit adalah parasit yang hidup di dalam tubuh inang. Parasit mempunyai
habitat yang berbeda pada organ inang sebagai tempat hidupnya, parasit yang
menginfeksi pada bagian luar tubuh adalah protozoa, monogenea, copepod.
Sedangkan parasit yang menyerang bagian dalam tubuh ikan adalah protozoa,
digenea, acanthocephala, nematode dan crustacean. Akibat dari infeksi parasit ini
akan memberikan perubahan-perubahan baik pada jaringan organ tubuh maupun
perubahan sifat-sifat inang secara umum Nourina dan Martiadi (2002) menyebutkan
bahwa parasit dapat merugikan inangnya dengan banyak cara, yaitu dengan
menimbulkan luka-luka, dengan memakan dan menyerap jaringan tubuh inang.
Berdasarkan prevalensi yang diperoleh adalah 100%, dimana kedua sampel
ikan terdapat parasit, sedangkan intensitasnya adalah Tricodina 3 ind/ekor,
Dactylogyrus terdapat 2 indekor dan Argulus 1 ind/ekor. Perbedaan intensitas
tersebut menunjukkan perbedaan parasit menyerang ikan/inang yang ada di
lingkungan. Hal ini sesuai dengan pernyataan Sinderman (1990) dalam Astuti (2012)
bahwa tingkat serangan penyakit tergantung pada jenis dan jumlah mikroorganisme
yang menyerang ikan, kondisi lingkungan dan daya tahan tubuh ikan juga turut
memicu cepat tidaknya penyakit itu menyerang ikan parasit dapat menyerang ikan
baik secara langsung maupun secara tidak langsung. Secara langsung dapat terjadi
dengan adanya kontak langsung antara ikan yang sehat dengan ikan yang terinfeksi,
sedangkan secara tidak langsung dapat terjadi apabila kekebalan tubuh ikan mulai
menurun akibat stres sehingga parasit dengan mudah dapat menyerang ikan
prevalensi dan intensitas tiap jenis parasit tidak selalu sama karena banyaknya faktor
yang berpengaruh, salah satu faktor yang berpengaruh adalah ukuran inang
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa parasit Tricodina sp. ditemukan pada
organ insang dan lender ikan. Hal ini dikarenakan Tricodina sp. merupakan parasit
yang biasanya menyebabkan borok dan hyperplasia pada sisik dan kerusakan insang.
Menurut Dana dkk. (2002) bahwa Trichodina adalah ektoparasit patogen dari
golongan ciliata yang biasa menyerang ikan air tawar dan laut. Parasit ini
menginfeksi berbagai jenis ikan inang dan distribusinya cukup luas secara geografis.
Pada ikan-ikan air tawar, parasit ini umumnya ditemukan di kulit, sedangkan pada
ikan-ikan air laut di insang. Serangan dengan intensitas yang tinggi dapat
menyebabkan hiperplasia pada sisik dan kerusakan struktur insang (McArdle 1984),
yang pada akhirnya akan menyebabkan ikan mati.
Hasil pengamatan pada ikan selanjutnya ditemukan parasit Dactylogyrus sp.,
merupakan parasit yang menyerang insang. Menurut Kordi (2004) bahwa
Dctylogyrus sp merupakan parasit yang lebih suka menyerang insang baik ikan air
tawar, payau dan laut. Pada bagian tubuhnya terdapat posterior Haptor. Haptornya ini
tidak memiliki struktur cuticular dan memiliki satu pasang kait dengan satu baris
kutikular, memiliki 16 kait utama, satu pasang kait yang sangat kecil. Dactylogyrus
spp mempunyai ophistapor (posterior suvker) dengan 1 – 2 pasang kait besar dan 14
kait marginal yang terdapat pada bagian posterior. Kepala memiliki 4 lobe dengan
dua pasang mata yang terletak di daerah pharynx. Gejala infeksi pada ikan antara lain
pernafasan ikan meningkat, produksi lendir berlebih. Sebagian besar parasit
monogenea seperti Dactylogyrus spp bersifat ovivarus (bertelur) dimana telur yang
menetas menjadi larfa yang berenang bebas yang dinamakan oncomiracidium. Insang
yang terserang berubah warnanya menjadi pucat dan keputih-putihan. Penyerangan
dimulai dengan cacing dewasa menempel pada insang atau bagian tubuh lainnya.
Parasit Dactylogyrus spp mempunyai siklus hidup langsung yang melibatkan satu
inang. Parasit ini merupakan ektoparasit pada insang ikan. Telur-telur yang
dilepaskan akan menjadi larva cilia yang yang dinamakan penetasan oncomiracidium.
Oncomiracidium mempunyai haptor dan dapat menyerang sampai menyentuh inang.
Parasit yang ditemukan selanjutnya pada lender ikan mas adalah Argulus sp.
Argulus sp. merupakan parasit yang memiliki sucker besar pada bagian ventral
sucker merupakan modifikasi maxillae pertama dan berfungsi sebagai organ
penempel utama pada Argulus sp. dewasa. Selain itu terdapat preoral dan proboscis
untuk melukai dan menghisap sari makanan dari inang (Walker 2005 dalam Astuti
2012). Berdasarkan hasil pengamatan baik ektoparasit maupun endoparasit Argulus
sp. merupakan parasit yang lebih dominan menginfeksi ikan kerapu sunu baik insang
maupun usus. Hal tersebut diduga karena Argulus sp. memiliki sifat parasitik yaitu
Argulus sp. akan cenderung temporer atau dapat berpindah pada tubuh ikan lain. Hal
ini dapat dilakukan karena Argulus sp. mampu bertahan hidup selama beberapa hari
di luar tubuh ikan. Efek Argulus sp. terhadap inang tergantung pada derajat infeksi
dan ukuran inang Derajat infeksi 1–3 Argulus sp. pada ikan termasuk dalam kategori
berat walaupun jumlah parasit tersebut sedikit, serangan parasit ini lebih sering
mematikan pada ikan-ikan muda yang biasanya berukuran kecil karena belum
berkembangnya sistem pertahanan tubuh. Selain menginfeksi ikan, Argulus sp. juga
dapat berperan sebagai vektor bagi virus atau bakteri yang sering menyebabkan
penyakit pada ikan. Bakteri, virus dan organisme penyakit lainnya dapat masuk ke
dalam tubuh ikan karena integumen sebagai pertahanan pertama ikan telah dirusak
oleh Argulus sp. (Yizild dan Kumantas 2002 dalam Astuti 2012).
3.2.3 Pengujian Bakteri A. hydrophila menggunakan KIT API 20 E
Isolasi dan identifikasi bakteri pada saat ini tidak hanya dilakukan dengan cara
konvensional, tetapi telah digunakan metode yang lebih modern yaitu dengan KIT.
Kit yang digunakan dalam praktikum kali ini adalah KIT API 20E. Kit API 20 E
adalah kit komersial yang biasa digunakan untuk mengidentifikasi bakteri
Enterobacteriaceae dan beberapa spesies bakteri gram negatif lainnya. Penggunaan
KIT dalam karakterisasi bakteri dinilai lebih cepat dibanding metode konvensional
karena dalam KIT telah tersedia reagen-reagen yang dapat digunakan langsung dalam
karakterisasi, sementara hal itu tidak didapat pada metode konvensional. Hasil yang
didapat pun relatif lebih akurat daripada metode konvensional. Namun, karena
kelengkapannyalah harga KIT di pasaran masih relatif mahal disbanding metode
konvensional (Astuti 2009). Adapun hasil yang diperoleh berdasarkan tabel di atas
dapat diketahui bahwa taraf kepercayaan 89,8% merupakan bakteri A. hydrophila.
3.2.4 Distribusi bakteri A. hydrophila pada Organ Ginjal Ikan Lele
Hasil pengamatan distribusi bakteri A. hydrophila pada organ ginjal ikan lele
pasca injeksi menunjukkan bahwa distribusi bakteri tertinggi terdapat pada
pengamatan hari ke-3 pasca injeksi dengan jumlah koloni bakteri A. hydrophila tidak
bisa untuk dihitung, lalu kemudian menurun pada hari ke-10 sebanyak 35 koloni
bakteri
Berdasarkan hasil pengamatan, total koloni bakteri yang diperoleh pada hari
ke-3 paska injeksi menunjukkan keseluruhan koloni pada media baik pada
pengenceran 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 tidak bisa untuk dihitung (TBUD), baik pada kontrol
maupun pada injeksi (perlakuan). Hal ini menunjukkan bahwa populasi bakteri yang
menginfeksi ikan uji dapat dikatakan masih tinggi. Menurut Wulandari dkk. (2014)
bahwa semakin tinggi konsentrasi bakteri yang digunakan maka semakin cepat pula
gejala klinis yang ditimbulkan. Tingginya kepadatan populasi bakteri pada kontrol
diduga karena kontaminasi air yang diguakan mengandung bakteri A. hydrophilla,
sehingga menyebabkan kematian 2 ikan pada hari ke-4 (SR=80%). Serangan bakteri
pada ikan kontrol ini diduga karena pada saat persiapan dan pemindahan ikan, ikan
mengalami stress yang menyebabkan menurunnya sistem imun. Namun pada hari
berikutnya ikan kembali normal, sehingga ikan yang berhasil hidup adalah ikan yang
memiliki sistem imun tinggi untuk melawan tingkat serangan bakteri.
Pada perlakuan injeksi populasi bakteri menurun, diikuti dengan terjadinya
kematian ikan (SR=60%). Pada hari ke-10 populasi bakteri menurun. Hal ini dapat
dilihat pada hasil pengamatan di media tumbuh yang menunjukkan koloni bakteri
pada kontrol adalah 6,2 x 103 cfu/ml dan pada injeksi 7,0 x 106 cfu/ml. Kepadata
populasi bakteri pada kontrol lebih rendah dibandingkan injeksi karena terlihat dari
pengamatan patogenitas, dimana ikan kontrol masih tampak sehat dan sebaliknya
ikan injeksi tampak sakit. Kondisi demikian terjadi karena ikan-ikan pada kontrol
hanya dipengaruhi oleh bakteri pathogen dari lingkungan sehingga meskipun terdapat
ikan yang mati karena tidak mampu melawan serangan pathogen, namun ikan-ikan
lain mampu bertahan hidup dengan kondisi sehat. Sedangkan pada perlakuan injeksi,
bakteri yang menyerang adalah bakteri yang diinjeksi masuk ke dalam tubuh,
sehingga tingkat patogentiasnya semaki tinggi diikuti dengan peningkatan populasi
bakteri hingga hari ke-10. Berdasarkan uraian data tersebut, populasi bakteri pada
ikan injeksi menyebabkan persentase kematian hingga 40%, hal ini didukung oleh
hasil penelitian Mangunwardoyo dkk. (2010) bahwa kepadatan populasi bakteri pada
106 akan menyebabkan kematian hingga 45,83%, sedangkan pada kepadatan bakteri
A. hydrophilla 103 dapat menyebabkan kematian hingga 16,67%.
3.2.5 Kondisi Ikan Pasca Injeksi
Berdasarkan pengamatan mengenai gejala klinis ikan lele dumbo yang

diinfeksi Isolat bakteri A. hydrophilla menunjukkan bahwa gejala klinis pasca injeksi.
Pada semua ikan kontrol tampak ikan berenang aktif dan nafsu makan normal, gejala
klinis terjadi pada injeksi dimana mulai terlihat pada semua ikan setelah 24 jam pasca
infeksi. Gejala klinis yang timbul ditandai dengan luka memar bekas suntikan dan
geripis pada sirip mulai terlihat pada jam ke-48 sampai jam ke-96 pasca infeksi,
kemudian gejala klinis yang muncul selanjutnya adalah nafsu makan berkurang,
berenang tidak normal (lemah didasar dan vertikal) gripis pada sirip, sungut lepas,
kulit mengelupas, dan pada hari ke-7 disusul dengan munculnya ulcer (luka terbuka
pada bekas suntikan) dan haemoragi (pecahnya pembuluh darah).
Berdasarkan hasil gejala klinis yang diperoleh menunjukan bahwa
berdasarkan gejala klinis mencirikan infeksi bakteri A. hydrophilla. Hal ini sesuai
dengan pernyataan Sugianti (2005), yang menjelaskan gejala klinis yang timbul
akibat infeksi bakteri A. hydrophilla ini antara lain ulser yang berbentuk bulat/tidak
teratur dan berwarna merah keabu-abuan. Nitimulyo et al., (1993) menambahkan pula
bahwa gejala klinis yang timbul akibat bakteri A. hydrophilla adalah haemorhagi
pada sirip dan eksopthalmia yaitu mata membengkak dan menonjol. Selain itu ciri-
ciri lainnya adalah pendarahan pada tubuh, sisik terkuak, borok, nekrosis, busung,
dan juga ikan lemas sering di permukaan atau dasar kolam. Perubahan morfologi
tubuh ikan lele dumbo yaitu kulit mengelupas, terdapatnya haemorragic di bagian
tubuh, geripis pada sirip, kemudian disusul timbulnya luka yang dicirikan dengan
munculnya radang dan berlanjut menjadi luka yang terbuka (ulcer). Infeksi A.
hydrophilla menyebabkan proses pembengkakan dan haemorragic di antara jaringan
epidermis dan dermis. Zona pembengkakan berwarna merah yang secara bertahap
dapat meluas. Kerusakan jaringan terjadi dengan adanya pembentukan pusat ulcer
pada permukaan tubuh, lebih sering menyerang pada sisi lambung (Austin dan
Austin, 2007).
Data yang diperoleh juga menunjukkan pola kematian pada ikan yakni pada
kontrol terjadi kematian setelah 4 hari paska injeksi sebanyak 2 ekor ikan, sedangkan
pada perlakuan kematian terjadi setelah 24 jam paska injeksi sebanyak 2 ekor
(SR:80%), kemudian pada hari ke-2 kematian ikan ekor dan (SR:70%) dan setelah
hari ke-3 kematian ikan 1 ekor (SR:60%). Menurut Rey et al., (2009) dalam
Wulandari dkk. (2014) bahwa infeksi A.hydrophilla menimbulkan gejala klinis
setelah beberapa jam setelah infeksi dan mulai muncul kematian setelah 7 jam pasca
infeksi, selanjutnya akan menyebabkan kematian lebih banyak setelah 12-24 jam
pasca infeksi. Menurut Sarjito et al., (2007), tingkat patogenesitas bakteri yang tinggi
dapat menimbulkan kematian mencapai 100%. Hal ini dapat disimpulkan bahwa ikan
lele dumbo yg diinfeksi dengan konsentrasi bakteri yang berbeda mengalami tingkat
kematian yang sejalan dengan meningkatnya kepadatan bakteri, semakin tinggi
konsentrasi bakteri yang diinfeksi semakin tinggi pula tingkat kematian pada lele
dumbo.

Pengamatan darah pada ikan dilakukan sebelum dan setelah injeksi. Hal ini
dilakukan untuk mengamati respon imun tubuh ikan terhadap tingkat petogenitas
ikan. Diketahui bersama bahwa darah ikan tersusun dari sel-sel yang tersuspensi
dalam plasma dan diedarkan ke seluruh jaringan tubuh melalui sistem sirkulasi
tertutup. Menurut Takashima dan Hibiya (1995), darah tersusun atas cairan darah
(plasma darah) dan elemen-elemen seluler ( sel-sel darah). Plasma darah terdiri dari
air, protein (yakni albumin, globulin dan faktor-faktor koagualasi), lipid dan ion,
adapun sel darah terdiri dari sel darah merah (eritrosit) dan sel darah putih (leukosit).
Sel darah putih (leukosit) ikan merupakan bagian dari sistem pertahanan tubuh yang
bersifat non-spesifik. Leukosit ikan terdiri dari granulosit dan agranulosit.
Agranulosit terdiri dari limfosit, monosit dan trombosit, sedangkan granulosit terdiri
dari basofil, netrofil dan eosinofil. Moyle dan Cech (1988) menjelaskan bahwa
jumlah sel darah putih lebih rendah dibandingkan dengan sel darah merah yaitu
berkisar 20.000 sel/mm3 – 150.000 sel/mm3. Perubahan nilai leukosit total dan
persentase jenis leukosit sering dijadikan petunjuk keadaan fisiologi ikan atau
indikator keberadaan penyakit pada tubuh ikan. Suatu pemeriksaan darah sangatlah
perlu pada keadaan patologis dan kita bisa mendapatkan pelengkap diagnosa.
Susunan darah ikan merupakan faktor diagnostik panting, sehingga perubahan
gambaran darah banyak digunakan untuk menilai status kesehatan ikan (Amrullah
2004).
a. Hemaglobin (Hb)
Berdasarkan hasil pengamatan menunjukkan terjadi penurunan jumlah Hb
pada ikan kontrol dari hari pertama 9 g/% menjadi 6 g/% pada hari ke-12. Hal ini
mengindikasikan bahwa jumlah eritrosit mengalami penurunan yang disebabkan oleh
peningkatan jumlah leukosit. Kadar Hb dalam darah berbanding lurus dengan jumlah
eritrosit, semakin tinggi eritsosit maka semakin tinggi pula kadar Hb dan begitupula
sebaliknya. Sedangkan pada ikan injeksi kadar Hb menurun dari hari pertama 16 g/%
menjadi 4 g/% pada hari ke-9 dan meningkat menjadi 11 g/% pada hari ke-12. Jumlah
Hb yang menurun hingga 4 g/% menunjukkan kadar eritrosit yang sangat rendah dan
leukosit yang sangat tinggi. Hal ini diduga karena pada injeksi, leukosit meningkat
tinggi sebagai respon terhadap tingginya serangan pathogen. Menurut Lagler et al.
(1977) mengatakan, bahwa kadar Hemoglobin (Hb) dalam darah ikan berkaitan
dengan jumlah eritrosit. Hemoglobin mengangkut oksigen dalam ikatan dengan Fe
(besi) dari darah.
60
50
Jumlah Hb (g/%)
40
30
kontrol
20 injeksi
10
0
H0 H3 H6 H9 H12
Waktu Pemeliharaan (H: Hari ke-)
Gambar 7 Grafik Hemoglobin (Hb)
Penurunan kadar Hb juga diduga karena adanya eksotoksin yang dihasilkan

bakteri. Eksotoksin maupun endotoksin menyebabkan penurunan Hb. Menurut Hardi
dkk. (2014) bahwa Penurunan Hb dalam darah disebabkan oleh eksotoksin dan
endotoksin yang dihasilkan oleh sel bakteri yang mengakibatkan berkurangya
pengikatan oksigen dalam darah. Sedangkan menurut Nuryati dkk. (2006) bahwa
Hemoglobin merupakan protein yang mengandung besi (Fe) dan globin yang terdapat
dalam eritrosit dan berperan dalam transport oksigen sehingga keberadaanya juga
dipengaruhi oleh senyawa-senyawa yang diangkut/diikat oleh darah. Kadar
hemoglobin menunjukkan nilai tinggi pada kondisi ikan normal dan akan menurun
pada kondisi ikan yang sakit.
b. Hematokrit (Ht)
Kadar hematokrit adalah persentase volume sel darah merah dalam darah
yang diperoleh dari sampel darah total yang ada di tabung kapiler. Seiring
meningkatnya jumlah eritrosit maka nilai hematokrit ikut meningkat pula.
Pengukuran hematokrit ini dimaksudkan untuk mengetahui tingkat kesehatan ikan,
hal ini karena kadar hematokrit dan hemoglobin dalam cairan darah berhubungan
juga dengan hormone ikan. Berdasarkan data hasil pengamatan, kadar hematokrit
(Ht) juga mengalami penurunan pada ikan kontrol yakni dari 30,30% pada hari
pertama menjadi 17,39% pada hari ke-12, sedangkan pada ikan injeksi kadar Ht juga
mengalami penurunan dari 38,46% pada hari pertama menjadi 37,50% pada hari ke-
12.
60
50
Presentasi (%)
40
30
kontrol
20 injeksi
10
0
H0 H3 H6 H9 H12
Gambar 8 Grafik Hematokrit (Ht)

Berdasarkan data tersebut, maka dapat diketahui bahwa ikan kontrol masih
terkategori sehat sedangkan ikan injeksi terkategori sakit/terserang ulcer. Nilai
hematokrit ikan lele (Clarias batrachus) normal adalah 30.8 - 45,5% sedangkan ikan
lele yang terserang ulcer mempunyai kadar hematokrit sebesar 34.4 - 48,2%
(Chinabut et al., 1991). Anderson and Sewicki (1993) menyatakan kandungan
hematokrit menunjukkan kondisi kesehatan ikan, apabila kandungan hematokrit
rendah menunjukkan kondisi ikan anemia. Adapun menurut Svobodova and
Vyukusova (1991) bahwa kadar hematokrit yaitu persentase volume sel darah merah
pada ikan berkisar antara 28 – 40 %, jika lebih rendah maka ikan dalam kondisi tidak
normal sakit.
c. Sel Darah Merah (SDM)
Sel darah merah (eritrosit) ikan mempunyai inti, umumnya berbentuk bulat
dan oval tergantung pada jenis ikannya. Inti sel eritrosit terletak sentral dengan
sitoplasma terlihat jernih kebiruan dengan pewarnaan giemsa (Chinabut et al. 1991).
Jumlah eritrosit berbeda-beda pada berbagai spesies dan juga sangat dipengaruhi oleh
suhu, namun umumnya berkisar antara 1 - 3 juta sel/mm3. Sel darah merah yang
matang sangat mudah dikenali disebabkan oleh morfologinya yang unik. Pada
keadaan normal, bentuk sel darah merah adalah dwicekung dengan diameter purata
8µm, ketebalan 2µm dan volumenya sekitar 90fL. Ia tidak mempunyai nukleus atau
mitokondria, dan 33% daripada kandungannya terdiri daripada protein tunggal yaitu
hemoglobin. Tanpa nukleus dan jalur metabolik protein, sel ini mempunyai masa
hidup yang singkat yaitu selama 100-120 hari. Tetapi, struktur sel darah merah
matang yang unik ini memberikan daya lenturan yang maksimal saat sel ini melewati
pembuluh darah yang sempit.
Gambar 9 Sel Darah Merah
Eritrosit berperan dalam pengikatan oksigen yang dibutuhkan oleh tubuh. Hal
ini sesuai dengan pernyataan Swenson (1984) bahwa Eritrosit mengandung
hemaglobin dan berfungsi sebagai transpor oksigen. Eritrosit berbentuk bikonkaf
dengan lingkaran tepi tipis dan tebal ditengah, eritrosit kehilangan intinya sebelum
masuk sirkulasi. Pembentukan sel darah merah (”erithropoiesis”) terjadi di sum-sum
tulang. Pada fetus eritrosit dibentuk juga di dalam hati dan limpa. Eritrhopoiesis
merupakan suatu proses yang kontinu dan sebanding dengan tingkat pengrusakan sel
darah merah. Erithtopoiesis diatur oleh mekanisme umpan balik dimana prosesnya
dihambat oleh peningkatan level sel darah merah yang bersirkulasi dan dirangsang
oleh anemia.
60
Presentasi (x105 sel/mm3)
50
40
30
kontrol
20 injeksi
10
0
H0 H3 H6 H9 H12
Gambar 10 Jumlah Sel Darah Merah

Berdasarkan hasil pengamatan sel darah merah, diperoleh bahwa pada ikan
kontrol sel darah merah mengalami fluktuasi jumlah yang berbeda. Pada kontrol,
SDM mengalami penurunan dari 38,7x105 sel/mm3 menjadi 8,95 x105 sel/mm3 pada
hari ke-9 dan meningkat kembali pada hari ke-12 menjadi 39,9 x105 sel/mm3.
sedangkan pada ikan injeksi, sel darah merah mengalami penurunan dari 29,4 x105
sel/mm3 menjadi 8,80 x105 sel/mm3 pada hasi ke-9, kemudian meningkat lagi
menjadi 16 x105 sel/mm3 pada hari ke-12. Terjadinya penurunan ini dikarenakan
peningkatan jumlah sel darah putih akibat respon terhadap serangan inang. Jumlah sel
darah merah berbanding terbalik dengan sel darah putih, semakin tinggi sel darah
putih maka sel darah merah akan semakin rendah. Hal ini sesuai dengan pernyataan
Amlacher (1970) bahwa selain pengaruh oksigen, terjadinya penuruan eritrosit
disebabkan oleh peningkatan produksi sel darah putih yang juga mengakibatkan
penurunan nilai hematokrit dan hemoglobin.
d. Sel Darah Putih (SDP)
Moyle dan Cech (1988) menjelaskan bahwa jumlah sel darah putih lebih
rendah dibandingkan dengan sel darah merah yaitu berkisar 20.000 sel/mm3– 150.000
sel/mm3. Perubahan nilai leukosit total dan persentase jenis leukosit sering dijadikan
petunjuk keadaan fisiologi ikan atau indikator keberadaan penyakit pada tubuh ikan.
Perbedaan sel darah putih dengan eritrosit adalah leukosit selalu mempunyai inti sel
dan sitoplasma serta mampu bergerak bebas. Jumlah leukosit lebih sedikit dari
eritrosit. Leukosit diklasifikasikan berdasarkan ada tidaknya granula di dalam
sitoplasma dibagi menjadi granulosit dan agranulosit. Granulosit terdiri dari netrofil,
basofil dan eosinofil, sedangkan agranulosit atas limposit dan monosit (Swenson,
1984).
Gambar 11 Sel Darah Putih
Berdasarkan hasil pengamatan diketahui bahwa persentase sel darah putih

(SDP) mengalami fluktuasi baik pada ikan kontrol maupun injeksi. Pada kontrol H0
1,78x105sel/mm3 dan selanjutnya meningkat hingga hari ke-6 menjadi 6,26
x105sel/mm3 dan menurun pada hari ke-9 menjadi 3,55 x105sel/mm3 kemudian
meningkat pada hari ke-12 menjadi 5,80 x105sel/mm3. Adapun pada ikan injeksi
persentase sel darah merah meningkat pada hari ke-6 yakni 9,37 x105sel/mm3 dan
selanjutnya meningkat lagi, namun pada hari ke-12 kembali meningkat menjadi 11,7
x105sel/mm3.
60
50
Presentasi (%)
40
30
kontrol
20 injeksi
10
0
H0 H3 H6 H9 H12
Gambar 12 Pengamatan Sel Darah Putih

Berdasarkan data tersebut, maka ikan injeksi dan kontrol memiliki kadar
leukosit diatas normal atau kadar leukosit ikan normal. Hal ini sesuai dengan
pernyataan Moyle and Cech (1988) bahwa leukosit memiliki jumlah yang lebih
sedikit dibandingkan dengan sel darah merah, yaitu berkisar antara 20.000/mm3
hingga 150.000/mm3.
Jika ditinjau secara kuantitatif, ikan injeksi memiliki kadar leukosit yang lebih
tinggi dibandingkan ikan kontrol, hal ini menunjukkan bahwa ikan injeksi lebih
banyak memproduksi leukosit sebagai upaya untuk melawan populasi pathogen yang
tinggi. Karena pada dasarnya kadar sel darah putih akan meningkat dengan tingginya
tingkat patogenitas, hal ini ditegaskan oleh Guyton and Hall (1997) bahwa sel darah
putih merupakan sel imun yang akan merespon kehadiran pathogen atau benda asing
yang masuk ke dalam tubuh, semakin tinggi patogenitas, maka tubuh akan semakin
banyak memproduksi sel darah putih. Selain itu menurut Muiswinkel and Vervoorn
(2006) bahwa leukosit memiliki bermacam-macam fungsi, erat kaitannya untuk
menghilangkan benda asing (termasuk mikroorganisme patogen). Faktor-faktor yang
mempengaruhi jumlah leukosit adalah kondisi dan kesehatan tubuh ikan. Infiltrasi
granulosit muncul 12-24 jam setelah diinjeksi oleh bakteri pada ikan. Setelah itu
persentase granulosit dan makrofag akan meningkat hingga 2-4 hari. Berdasarkan
hasil pengamatan juga menunjukkan bahwa bentuk sel darah putih adalah lonjong
hingga bulat. Leukosit terdiri dari agranulosit (monosit dan limfosit) dan granulosit
(heterofil, eosinofi dan basofil).
e. Aktifitas Fagositik (AF)
Diketahui bersama bahwa sistem imun non spesifik didukung oleh dua
komponen utama yaitu respon selular dan respon humoral (Irianto 2005). Respon
selular imun non spesifik meliputi beberapa tipe mekanisme: inflamasi, fagositosis,
fagositosis sebagai penyaji antigen (antigen presenting cells) dan non spesific
citotoxic cells. Inflamasi merupakan upaya proteksi reaksi restoratif dari tubuh sejak
ikan berusaha menjaga kondisi kestabilan sistem dari pengaruh lingkungan yang
kurang baik. Inflamasi ditandai dengan rasa sakit, pembengkakan, kulit memerah atau
peradangan, suhu tubuh naik atau kehilangan fungsi-fungsi fisiologis. Hal tersebut
merupakan respon protektif awal tubuh dalam upaya menghalangi patogen dan
menghancurkannya. Oleh sebab itu, pengukuran indeks fagositik penting untuk
meninjau seberapa jauh aktifitas fagositik dalam menghadapi pathogen.
60
50
Presentasi (%)
40
30
kontrol
20 injeksi
10
0
H0 H3 H6 H9 H12
Gambar 13 Aktifitas Fagositik
Berdasarkan hasil pengamatan, indeks fagositik tertinggi pada ikan injeksi

yakni 51%. Indeks fagositik pada ikan kontrol mengalami fluktuasi yakni dari 34%
pada hari pertama, kemudian menurun menjadi 36% pada hari ke-6 hingga 34% pada
hari ke-12. Sedangkan pada ikan injeksi, indeks fagositik terus mengalami
peningkatan menjadi 51% pada hari ke-6, dan kemudian menurun dihari ke-12
menjadi 45%. Tingginya aktifitas fagositik pada ikan injeksi menunjukkan bahwa
terdapat populasi pathogen yang tinggi dalam tubuh ikan, sehingga untuk
mengantisipasi hal tersebut, tubuh ikan memproduksi sel fagositik.
Fagositosis merupakan pertahanan pertama dari respon selular yang dilakukan
oleh monosit (makrofag) dan granulosit (netrofil). Proses fagositosis meliputi tahap
kemotaksis, tahap pelekatan, tahap penelanan dan tahap pencernaan. Tahap
kemotaksis yaitu pergerakan sel fagosit yang terarah dibawah pengaruh rangsangan
kimiawi eksternal (pelbagai produk patogen yang menginfeksi ataupun sel yang rusak
akibat infeksi patogen) (Tizard 1988). Setelah sel fagosit bertemu dengan suatu
partikel yang akan ditelannya, partikel tersebut diikat kuat-kuat, proses ini disebut
perlekatan. Sekali terpasang kuat pada membrane sel fagosit, partikel yang melekat
tampak merangsang membran sel lokal dan aktivitas mikrotubul, yang sebaliknya
menyebabkan sitoplasma mengalir diatas dan sekitar partikel dan menelannya, proses
ini disebut penelanan.
Sebuah partikel yang terkurung dalam sitoplasma sel fagosit menempatkan
dirinya dalam ruang yang disebut fagosom. Penghancuran partikel terjadi bila enzim
hidrolitik yang biasanya tersimpan di dalam lisosom, dikosongkan ke dalam fagosom.
Hal ini terjadi sebagai akibat granula bermigrasi melalui sitoplasma dan bersatu
dengan fagosom membentuk fagolisosom. Enzim lisosom dapat mencernakan
beberapa dinding sel bakteri, sedangkan enzim proteolotik, mieloperoksidase,
ribonuklease dan fosfolipase bersifat letal bagi sebagian mikroorganisme (Tizard
1988). Proses fagositosis oleh sel-sel fagosit (makrofag) berperan pula dalam
mekanisme penyajian antigen (antigen presenting cells) untuk menstimulasi respon
sel limfosit. Partikel yang difagosit diproses dan dipresentasikan sebagai peptide
antigen yang berasosiasi dengan molekul MHC kelas II pada permukaan sel fagosit
(Gillund et al. 2008). T cell receptor ( TCR) mampu mengenali peptide antigen yang
dipresentesikan oleh MHC kelas I dan MHC kelas II, yang masing-masing
merangsang CD 8+T sel (cytotoxic T sel, CTL) dan CD4+T sel (helper-T sel)
(Gillund et al. 2008).
f. Diferensiasi Leukosit
Berdasarkan hasil pengamatan diketahui bahwa diferensiasi leukosit tertinggi

pada limfosit, kemudian neutrofil dan monosit. Pada sel limfosit ikan kontrol,
persentasenya mengalami penurunan dari hari peratama sebesar 61% menjadi 58%
pada hari ke-9 dan menjadi 62% pada hari ke-12. begitupula pada ikan injeksi,
pengamatan awal menunjukkan persentase linfosit 73% kemudian pada hari ke-12
menjadi 50%. Limfosit adalah berupa sel darah kecil dengan nukleus yang besar
(menempati bagian terbesar dari sel) tidak bergranula dan dikelilingi sejumlah kecil
sitoplasma (Chinabut et al. 1991). Limfosit biasanya merupakan proporsi sel darah putih
terbanyak. Jumlah limfosit pada ikan lebih besar dari pada mamalia dengan kepadatan
48.000 sel/mm3 (Nabib dan Pasaribu 1989). Menurut Svobodova dan Vyukusova (1991)
kisaran limfosit adalah 76 – 97,5 % dari total leukosit. Limfosit merupakan sel-sel respon
pertahanan tubuh terpenting, dan diklasifikasikan ke dalam 2 sub-kelas : sel B dan sel T.
Sel B mempunyai kemampuan untuk bertransformasi menjadi sel plasma yaitu sel yang
memproduksi antibodi. Sedangkan sel T sangat berperan dalam mengontrol respon imun.
Gambar 14 Sel darah ikan mas strain Sinyonya: 7a. Limfosit (L), 7b. Eritrosit (Er),
7c. Heterofil (H), 7d. Monosit (M), 7e. Eosinofil (Eo) (Ornella 2008).
Persentase sel neutrofil mengalami peningkatan yakni dari 21% pada hari
pertama menjadi 25% pada hari ke-12, sedangkan pada ikan injeksi dari 14% menjadi
29 pada hari ke-12. Netrofil ikan berbentuk bulat dengan inti dapat memenuhi
sebagian ruang sitoplasma (diamaeter 9-13 μm) dan terdapat granula dalam
sitoplasmanya (Chinabut et al. 1991). Seperti halnya monosit, sel netrofil berperan
pula dalam respon nonspesifik dengan melakukan fagositosis untuk menyingkirkan
mikroorganisme penyerang (Kresno 2001). Jumlah netrofil berkisar antara 2 – 10 %
dari total leukosit (Svobodova dan Vyukusova 1991).
Persentase Monosit pada ikan kontrol mengalami fluktuasi, yakni dari 18%
pada hari pertama, menurun menjadi 8% pada hari ke-3, kemudian menjadi 13% pada
hari ke-12. Sedangkan pada ikan injeksi, mengalami peningkatan, dari 13% pada hari
pertama menjadi 21% pada hari ke-12. Monosit ikan berbentuk bulat oval, intinya
terletak ditengah sel dengan sitoplasmanya tidak bergranula (Takashima dan Hibiya
1995). Monosit dihasilkan dari jaringan haemapoietik dalam ginjal yang siap untuk
melakukan fungsinya dalam jaringan, kisaran jumlah monosit sebesar 3 - 5 % dari
jumlah leukosit (Svobodova & Vyukusova 1991). Monosit berkemampuan masuk ke
jaringan dan berdiferensiasi menjadi sel makrofag. Peran monosit sangat penting,
sebagai sel fagosit utama untuk menghancurkan berbagai patogen penyerang dan
berperan pula sebagai antigen presenting cells (APC) yang fungsinya untuk
menyajikan antigen kepada sel limfosit (Kresno 2001).
3.2.7 Pengamatan Histotologi
Jaringan merupakan sekumpulan sel yang tersimpan dalam suatu kerangka

struktur atau matriks yang mempunyai suatu kesatuan organisasi yang mampu
mempertahankan keutuhan dan penyesuaian terhadap lingkungan diluar batas dirinya
(Bavelander, 1998). Histologi merupakan ilmu yang yang menguraikan struktur dari
hewan secara terperinci dan hubungan antara struktur pengorganisasian sel dan
jaringan serta fungsi-fungsi yang mereka lakukan. Pentingnya pemeriksaan jaringan
pada ikan yang diindikasikan sakit akan menunjukkan secara deskriptif gambaran
patologis jaringan yang rusak. Karena pada dasarnya, kerusakan jaringan diakibatkan
oleh rusaknya sel-sel yang diinfeksi oleh pathogen baik itu secara fagositik maupun
pemecahan sel akibat endotoksik dan eksotoksik yang dihasilkan oleh pathogen.
Histopatologi sangat penting dalam kaitan dengan diagnosis penyakit karena salah
satu pertimbangan dalam penegakan diagnosis adalah melalui hasil pengamatan
terhadap jaringan yang diduga terganggu.
Hasil pengamatan histologi pada organ otot, hati, ginjal dan insang ikan lele
(Clarias sp.) menunjukkan adanya perubahan patologis. Perubahan patologis diduga
karena adanya infeksi bakteri A. hydrophila yang menyebabkan kerusakan sel-sel
pada organ target. Adapun perubahan patologis tersebut adalah sebagai berikut:
a. Pengamatan pada Jaringan Otot
Pengamatan pada jaringan otot dengan perbesaran masing-masing 10x

menunjukkan jaringan mengalami perubahan patologis yakni (V) Vakuolisasi.
Vakuolisasi adalah perubahan volume hepatosit yang membesar dan nukleus rata-rata
hanya satu terletak di tengah sel. Menurut Sari dkk. (2014) bahwa vakuolisasi pada
jaringan organ terbentuk karena terjadinya degenerasi sel. Degenerasi merupakan
perubahan jaringan menjadi bentuk yang kurang aktif.
b. Pengamatan pada Jaringan Ginjal
Pada pengamatan jaringan organ ginjal, Nampak bahwa jaringan ginjal (A)
kontrol normal dan jaringan (B) pasca injeksi dengan perbesaran 10x bagian Tubulus
distal (T) dan jaringan hematopoetik (JH), terjadi perubahan patologi berupa artropi
(A), yaitu ketidaknormalan jumlah dan volume sel atau penyusutan sel, tubulus distal
mengalami kerusakan degenerasi hialin Menurut Takashima dan Hibaya (1995)
dalam Asniatih dkk. (2013) mengemukakan bahwa degenerasi hialin terjadi pada
jaringan konektif, dan serat halus akan berangsur-angsur menebal, sehingga akhirnya
menjadi substansi esinopilik homogen. Fibriosit biasanya menghilang dan sel-sel
parenkim mengalami artropi ketika jaringan konektif terdegradasi. Menurut Plumb
(1994) bahwa artropi yang terjadi pada ginjal pasca infeksi A. hydrophila yaitu
penyusutan sel-sel hematopoetik. Atropi merupakan berukurangnya jumlah sel pada
jaringan atau kitidaknormalan jumlah sel yang biasa juga disebut penyusutan sel.
Ginjal terdiri dari sel-sel yang banyak dengan glomeruli yang berkembang dengan
baik dan sistem tubulus. Segmen proksimal ditutupi oleh sel epitel kolumnar dengan
inti basal dan terletak di sepanjang apices sel. Segmen distal dipenuhi dengan
kolumnar sel epitel. Diameter glomerulus lebih besar di bandingkan dengan dari
segmen distal, yang mengandung sel-sel epitel kolumnar dengan inti basal (Peebua et
al., 2006).
3. Pengamatan pada Jaringan Insang
Pada pengamatan jaringan insang pada menunjukkan arcus insang dalam

kondisi normal sedangkan pada ikan injeksi menunjukkan kondisi arcus insang pasca
infeksi yang menunjukkan terjadinya hemoragi (pendarahan dari dinding vaskula)
terjadi pada jaringan konektif dan jaringan otot pada arcus insang. Insang merupakan
alat respirasi pada ikan yang berhubungan langsung dengan lingkungan luar sehingga
berpeluang besar terinfeksi penyakit.
4. Pengamatan pada Jaringan Hati
Hati merupakan organ yang memiliki banyak fungsi diantaranya adalah

pembentukan dan sekresi empedu, metabolisme zat-zat penting bagi tubuh,
pertahanan tubuh, serta fungsi vaskuler. Berdasarkan banyaknya fungsi hati maka
dengan adanya kerusakan atau kelainan pada hati akan mempengaruhi fungsi jaringan
tubuh lainnya, oleh karena itu organ hati juga diamati.
Pada pengamatan jaringan hati menunjukkan hati pada ikan kontrol terlihat
normal, sedangkan pada jaringan mengalami perubahan patologis yakni (N) Nekrosis
yakni kematian sel dan (H) Hemoragi atau keluarnya darah dari kardio vaskuler.
Nekrosis adalah kematian dini sel dan jaringan hidup.Nekrosis ini disebabkan oleh
faktor eksternal, seperti infeksi, racun atau trauma.Hal ini berbeda dengan apoptosis,
yang merupakan penyebab alami selular kematian.Walaupun apoptosis sering
memberikan efek yang menguntungkan bagi organisme, nekrosis hampir selalu
merugikan, dan dapat berakibat fatal. Sel-sel yang mati karena nekrosis biasanya
tidak mengirimkan sinyal kimia yang sama untuk sistem kekebalan sel-sel yang
mengalami apoptosis. Hal ini untuk mencegah phagocytes terdekat dari lokasi dan
menyelimuti sel-sel mati, yang mengarah ke terbentuknya sel jaringan yang mati dan
puing-puing pada atau di dekat lokasi kematian sel.
Menurut Mcmillan (2007) bahwa nekrosis sel dapat didorong oleh sejumlah
sumber-sumber eksternal, termasuk cedera, infeksi, kanker, infark, racun, dan
peradangan. Sebagai contoh, suatu infark (penyumbatan aliran darah ke jaringan otot)
menyebabkan nekrosis dari jaringan otot karena kekurangan oksigen ke sel yang
terkena dampak, seperti terjadi pada infark miokard - serangan jantung.Laba-laba
tertentu (coklat pertapa) dan ular (ular, Bothrops) venoms dapat menyebabkan
nekrosis dari jaringan di dekat luka gigitan. Secara khusus, mengandung sel-sel kecil
yang disebut organel lisosom, yang mampu mencerna bahan selular. Kerusakan pada
membran lisosom dapat memicu pelepasan enzim, menghancurkan bagian-bagian lain
dari sel. Lebih buruk lagi, ketika enzim ini dilepaskan dari non-sel mati, mereka dapat
memicu reaksi berantai lebih lanjut kematian sel. Jika jumlah yang cukup susunan
jaringan necrosis itu disebut gangren. Perawatan yang tepat dan perawatan luka atau
gigitan binatang memainkan peran kunci dalam mencegah jenis ini nekrosis
meluas.Selama biopsi bedah, nekrosis ini reaksi berantai dihentikan oleh fiksasi atau
beku. Nekrosis biasanya dimulai dengan pembengkakan sel, kromatin pencernaan,
gangguan membran plasma dan membran organel. Nekrosis dicirikan oleh DNA luas
hidrolisis, vacuolation dari retikulum endoplasma, organel mental, dan lisis sel.
Pelepasan konten intraselular setelah pecah membran plasma adalah penyebab
peradangan pada nekrosis.
3.2.8 Pengujian Potensi Dengan Metode Cracking, PCR, Elektroforesis
Koi herpes virus (KHV) merupakan virus yang memiliki kapsid berbentuk
simetri icosahedral dengan diameter 100-110 nm, sementara virion matangnya
memiliki amplop yang longgar sehingga ukuran diameternya menjadi 170-230 nm.
Selain itu juga terdapat benang-benang penyangga seperti struktur tegument pada
permukaan inti yang mirip dengan kelompok herpesvirus. Patogenisitas KHV sangat
tinggi dan penyebarannya sangat cepat, sehingga dianggap sebagai salah satu
penyakit yang paling serius dalam budidaya ikan air tawar (Nuryati dkk. 2007).
Beberapa komponen yang penting yang dibutuhkan dalam reaksi PCR adalah DNA
target, primer, enzim Taq DNA polymerase, deoksinukleoside triphosphat dan larutan
penyangga (buffer). Molekul DNA yang targetnya akan dilipat gandakan jumlahnya
dapat berupa untai tunggal atau untai ganda. Dalam menentukan jumlah ini, dapat
pula dilakukan uji coba dengan berbagai ukuran, misalnya 10, 100, atau 1000
pikogram sehingga diperoleh kualitas PCR yang paling baik. Apabila target yang
digunakan berupa total DNA genom, sebaiknya DNA tersebut dipotong terlebih
dahulu dengan enzim tertentu sehingga potongan DNA yang dihasilkan masih
berukuran cukup besar, misalnya enzim Sal I atau Not I yang mempunyai sedikit situs
pemotongan di dalam total DNA genom. Primer atau oligonukleotida sebaiknya
berukuran paling pendek 16 basa dan biasanya berkisar antara 18-24 basa (Muladno
2002).
Hasil praktikum menunjukkan bahwa pada uji interaksi vaksin DNA anti-
KHV dengan A. hydrophilla tidak ditemukan adanya pita plasmid vaksin GP-25 pada
sampel 5 dan 5’ (ginjal) yang menandakan bahwa tidak ada interaksi perpindahan
plasmid pada bakteri. Sedangkan pada sampel 6 dan 6’ (darah) tampak adanya pita
DNA plasmid anti vaksin anti-KHV pada panjang 300 bp. Pita DNA pada sampel
darah I dan darah II sejajar dengan pita DNA pada kontrol positif. Gen penyandi
KHV berukuran 300 bp, sementara pada pita DNA sampel ginjal sejajar dengan
kontrol negatif. Hal ini sesuai dengan pernyataan Irianto (2006) bahwa sampel
dikatakan terinfeksi positif ringan KHV tatkala pada sampel tersebut menunjukkan
pita 290 pada foto hasil PCR. Hal ini berarti bahwa pada ikan tersebut terdapat virion
didalam organ yang terinfeksi, namun dalam jumlah yang sedikit, para peneliti sering
menggolongkan ikan tersebut sebagai carrier.
Ikan yang bersifat karier biasanya tidak menunjukkan gejala klinis, namun telah
membawa bahan genetic dari virus sehingga sewaktu-waktu bisa aktif dan menyerang
ikan tersebut. Menurut Masri (2013) bahwa Ikan yang tidak menunjukkan gejala
klinis adanya serangan KHV merupakan ikan yang terinfeksi ringan. Ikan yang tidak
memperlihatkan ciri yang jelas terinfeksi KHV namun dari hasil PCR terbentuk pada
band 290 bp maka dapat diindikasikan ikan tersebut adalah positif carrier (pembawa
yang dapat menulari). Terbentuknya pita pada posisi 300 bp mengindikasikan bahwa
adanya virion yang terdapat di sampel dan adanya kesesuaian basa oligonukleotida
yang dihasilkan berdasarkan primer yang digunakan dan sequencing DNA virus yang
terdapat pada ikan yang terinfeksi, hanya saja virion tersebut dalam jumlah yang
sedikit sehingga tidak terlalu memperlihatkan ciri infeksi.
IV. KESIMPULAN DAN SARAN
4.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan, maka dapat disimpulkan beberapa hal

sebagai berikut:
a. Hasil uji refleks dan pengamatan paska injeksi menunjukkan ikan sehat memiliki
refleks lari yang cepat, berusaha melepaskan diri saat dipegang, bergerak aktif,
normal dan tidak ada perubahan morfologi, sedangkan ikan yang sakit tampak
tampak lemas, pergerakan tidak normal, nafsu makan menurun dan terjadi
perubahan morfologi berupa borok pada kulit ikan.
b. Hasil inventarisasi parasit diperoleh jenis ektoparasit dari jenis Trichodina sp.
yang terdapat di lendir dan insang dengan intensitas 3 ind./ekor, jenis
Dactylogyrus sp. yang ditemukan pada bagian insang ikan lele dan mas dengan
intensitas 2 ind./ekor dan Argulus sp. pada lendir ikan mas dengan intensitas 1
ind./ekor serta prevalensi diperoleh 100%.
c. Hasil pengujian KIT API 20E diketahui bahwa taraf kepercayaan 89,8%
merupakan bakteri A. hydrophila. Sedangkan distribusi bakteri pada ginjal ikan
lele injeksi (7,0 x 106 cfu/ml) lebih tinggi dibandingkan dengan ikan kontrol (6,2
x 103 cfu/ml), dengan SR pada ikan kontrol 80% dan ikan injeksi 60%.
d. Hasil pengamatan darah menunjukkan pola penurunan jumlah sel darah merah
pada ikan injeksi lebih tinggi dibandingkan ikan kontrol, penurunan sel darah
merah berbanding lurus dengan Hb dan Ht. sedangkan sel darah putih
menunjukkan pola kenaikan lebih tinggi pada ikan injeksi dibandingkan dengan
ikan kontrol dan kadar limfosit, monosit, neutrofil serta aktifitas fagositik
berbanding lurus dengan jumlah sel darah putih.
e. Hasil pengamatan histologi pada otot menunjukkan perubahan patologis yakni
(V) Vakuolisasi. Pada ginjal terjadi perubahan patologi berupa artropi, pada
insang menunjukkan kondisi arcus insang pasca infeksi yang menunjukkan
terjadinya hemoragi (pendarahan dari dinding vaskula), dan pada hati
menunjukkan gejala nekrosis.
f. Hasil pengujian potensi dengan cracking menunjukkan sampel ginjal keduanya
negatif dengan tidak terbentuknya pita DNA pada berat molekul 300 bp
sedangkan pada sampel darah menunjukkan hasil positif ditandai denga
terbentuknya pita DNA pada berat molekul 300 bp. Sehingga pemberian vaksin
DNA memiliki potensi untuk cracking DNA bakteri yang akan menimbulkan
resistemsi.
4.2 Saran
Pada praktikum ini dapat disarankan agar supaya praktikum selanjutnya

dilakukan pengujian yang lebih beragam seperti pengujian deteksi penyakit ikan
secara immunodiagnosis dan dilakukan pula pengujian lebih lanjut dengan
menggunakan virus. Selain itu perlu adanya pembacaan hasil pengamatan histologi
bersama dosen dan mahasisawa untuk memudahkan mahasiswa dalam memahami
perubahan patologis pada jaringan ikan.
DAFTAR PUSTAKA
Agustina, Saptiani, G., Rabiyanti dan Nohon, R. 2013. Suplementasi vitamin c dalam
pakan sebagai upaya peningkatan kesehatan ikan mas (cyprinus carpio
l.) Dalam menghadapi infeksi bakteri aeromonas hydrophila. Jurnal
Ilmu Perikanan Tropis, 19 (1); 45-53
Amlacher, E. 1970. Textbook of Fish Disease. Conroy D.A., R.L. Herman (eds) TFH
Publ. Neptune. New York. 302p.
Anderson, D.P. 1974. Fish Immunology. TFH Publication Ltd Hongkong. 239 p.
Asniatih, Idris M., Sabilu, K. 2013. Studi Histopatologi pada Ikan Lele Dumbo
(Clarias gariepinus) yang Terinfeksi Bakteri Aeromonas hydrophila
Pathological Change of African Catfish (Clarias gariepinus) Infected by
Aeromonas Hydrophila. Jurnal Mina Laut Indonesia. 03 (12); 13 – 21.
Astuti DD. 2009. Karakterisasi Fisiologi dan Identifikasi Molekuler Isolat-Isolat
Bakteri Metanotrof Asal Sawah Wilayah Bogor dan
Sukabumi.Skripsi.Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Pertanian Bogor.
Astuti, N. F. 2012 Identifikasi Parasit Ikan Kerapu Sunu (Plectropomus Leopardus)
Pada Karamba Jaring Apung Di Pesisir Mata Kecamatan Kendari Kota
Kendari. Skripsi. FPIK Universitas Haluoleo. Kendari. 63 hal.
Austin B. dan D.A. Austin. 2007. Bacterial Fish Pathogens. Disease in Farmed and
Wild Fish. Fourth edition. Ellis Horword limited. Chichester: England.
235-300pp.
Chinabut, S, Limsuwan C, Kitsawat P. 1991. Histology of The Walking Catfish
Clarias batrachus. Departement of Fisheries Thailand. Thailand. 96p
Dana, D., Effendi, K. Sumawidjaja dan Hadiroseyani, Y. 2002. Parasit Trichodina
Pada Benih Ikan Betutu (Oxyeleotris Marmorata) Trichodinid
(Ciliophora: Peritrichida) Ectoparasites Of Sand Goby (Oxyeleotris
Marmorata) Fry. Jurnal Akuakultur Indonesia, 1 (1); 5-8.
Gillund F, Dalmo R, Tonheim TC, Seternes T and Mhyr AI. 2008. DNA vaccination
in aquaculture, Expert judgments of impacts on environment and fish
health. . Elsevier. Journal of Aquaculture 284 : 25-34.
Guyton AC, Hall JE, 1997, “Buku Ajar Fisiologi Kedokteran”. Setiawan I, Tengadi
KA, Santoso A, penerjamah; Setiawan I, editor. Jakarta: EGC.
Terjemahan dari: Textbook of Medical Physiology.
Hardi, E. H., Pebrianto, C. A., Hidayanti, T. dan Handayani, R. T. Infeksi
Aeromonas Hydrophila Melalui Jalur Yang Berbeda Pada Ikan Nila
(Oreochromis Niloticus) Di Loa Kulu Kutai Kartanegara Kalimantan
Timur. Jurnal Kedokteran Hewan. 8 (2) 130.
Hartadi, D., Sumardi, Isnanto, R. R. 2004. Simulasi Penghitungan Jumlah Sel Darah
Merah. Jurnal Transmisi. 8 (2): 1 – 6.
Hibiya T and Takashima F. 1995. An Atlas of Fish Histology Normal and
Pathological Feature. Second Edition. Takashima F. Kodansha Ltd
Tokyo. 195 hlm.
Hudaida, S. 2006. Inventarisasi Penyakit pada Budidaya Ikan Kerapu Lumpur
(Epinephelus tauvina). Prosiding Seminar Hasil-hasil Penelitian dan
Pengabdian Masyarakat, Bandar Lampung, November 2006. 8 Hal
Irianto A. 2005. Patologi Ikan Teleostei. Gajah Mada Universitas Press, Yogyakarta.
256 hlm.
Irianto, A. 2005. Patologi Ikan Teleostei. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta
Kordi, K. M. G. H. 2004. Penanggulangan Hama dan Penyakit Ikan. Penerbit Rineka
Cipta. Jakarta. 190 hal.
Kresno SB. 2001. Imunologi Diagnosis dan Prosedur Laboratorium. Edisi ketiga.
Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta.
Lagler KF, Bardach JE, Miller RR and Paxino DRM. 1963. Ichtyology. Jhon Willey
and Sons inc. New York. 295 ps.
Mahyudin. 2007. Panduan Lengkap Agrobisnis Lele. Penebar Swadaya. Jakarta.
McArdle, J. F. 1984. Trichodina as a cause of mortalities in cange reared rainbow
trout (Salmo gairdneri) and salmon (Salmo salar). Bull. Eur. Ass. Fish.
Pathol.,4(l): 3-6.
Mcmillan, B. D. 2007. Fish Histology. Springer. London.603 p.
Moyle PB and Chech JJ. 1988. Fishes: An Introduction to Ichtyology. Prentice- Hall
Inc. A Division of Salmon and Schuster Englewood Cliffs, New Jersey.
597 ps.
Muladno. 2002. Seputar Teknologi Rekayasa Genetika. Pustaka Wirausaha Muda dan
USESE Foundation, Bogor. 123 halaman
Nitimulyo, H, Triyanto, S. dan Kamiso, H.N. 1993. Vaksinasi Lele Dumbo (Clarias
gariepinus). Fakultas Pertanian. Universitas Gajah Mada. 72hlm.
Nourina dan Martiadi. 2002. Inventarisasi Parasit Pada Tubuh Ikan. PT. Rineka
Cipta. Jakarta. 130 hal.
Nuryati, S., Kuswardani dan Hadiroseyani, Y. 2006. Pengaruh Pemberian Resin
Lebah Terhadap Gambaran Darah Ikan Koki Carassius Auratus Yang
Terinfeksi Bakteri Aeromonas hydrophila. Jurnal Akuakultur Indonesia,
5(2): 191-199.
Nuryati, S., Puspitaningtyas, D. dan Wahjuningrum, D. 2007. Potensi Ekstrak
Bawang Putih Allium Sativum Untuk Menginaktifasi Koi Herpesvirus
(Khv) Pada Ikan Mas (Cyprinus Carpio) Potency Of Garlic Extract
Against Koi Herpesvirus (Khv) In Common Carp. Departemen
Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut
Pertanian Bogor. Jurnal Akuakultur Indonesia, 6(2): 147–154.
Ornella, V. 2008. Gambaran Darah Ikan Mas (Cyprinus carpio linn) Strain Sinyonya
yang Berasal Dari Daerah Ciampea-Bogor. Skripsi. Fakultas Kedokteran
Hewan Institut Pertanian Bogor.
Peebuaa P.; Kruatrachuea M.; Pokethitiyooka P. & Kosiyachindaa P. (2006).
Histological Effects of Contaminated Sediments in Mae Klong River
Tributaries, Thailand, on Nile tilapia, Oreochromis niloticus. Science
Asia,32, 143-150.
Plumb., J.A. 1994. Health Maintenance of Cultured Fishes, Principal Microbial
Diseases. CRC press. Amerika. 239 p.
Sari, S. D., Wardiyanto, Setyawan, A. 2014. Profil Histopatologi Kerapu Tikus
(Cromileptes Altivelis) Yang Distimulasi Jintan Hitam (Nigella Sativa)
Dan Diinfeksi Viral Nervous Necrosis (VNN). Jurnal Aquasains.
Sarjito. O.K. Radjasa, S. Hutabarat, dan S.B. Prayitno, 2007. Casuative Agent
Vibriosis pada Kerapu Bebek (Cromileptes Altivelis) dari Karimunjawa
I. Patogenesitas pada Ikan Kerapu Macan (Epinephelus fuscoguttatus).
Ilmu Kelautan, 12(3): 173-180.
Sugianti, B. 2005. Pemanfaatan Tumbuhan Obat Tradisional dalam Pengendalian
Penyakit. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Svobodova Z, Vyukusova B. 1991. Diagnostik, Prevention and Therapy of Fish
Disease and Intoxication. Research Institute of fish Culture and
Hydrobiology Vodnany Czechoslovakia.
Swenson, M.J.1984. Dukes Physiologi of Domestic Animals, 10th ed. Ithaca. Cornel
University Press.
Tizard I. 1988. Pengantar Imunologi Veteriner. Ed ke-2. Partodirejo M, Hardjosworo
S, penerjemah; Surabaya: Airlangga University Press. Terjemahan dari:
An Introduction to Veterinary Immunology.
Van Muiswinkel WB, Vervoorn VDWB. 2006. The Immune System of Fish. Di
dalam: Woo PTK, Bruno DW, editor. Fish Disease and Disorders. Vol
3. Ed ke-2. UK: CABI Publishing. hlm 678-695.
Wahjuningrum, D., Astrini, R., Setiawati, M. 2013. Pencegahan Infeksi Aeromonas
hdrophilla pada Benih Ikan Lele Clarias sp. yang Berumur 11 hari
Menggunakan Bawang Putih Allium sativum dan meniran Phyllanthus
niruri. Jurnal Akuakultur Indonesia, 12 (1); 94-104.
Wulandari, D. A., Prayitno, S. B. dan Sarjito. 2014. Patogenisitas Isolat K14 Yang
Diisolasi Dari Lele Dumbo (Clarias Gariepinus)tang Berasal Dari
Demak. Journal of Aquaculture Management and Technology, 3 (2);
143-149.
Yuasa, K. 2003. Panduan Diagnosa Penyakit Ikan. Tehnik Diagnosa Penyakit Ikan
Budidaya Air Tawar. Balai Budidaya Air Tawar Jambi dan Japan
International Cooperation Agency. 54 hal.
LAMPIRAN
1. Tahapan Pelaksanaan Praktikum
H 6-H30:
Pembuat
an dan
H0: pengama
H-14: Injeks H6: H10 tan
Adapt i Gamba : preparat
asi bakte ran TPC histopat
Ikan ri Darah 2 ologi
H-3: H3: H9: H12:

Pemeriksaan TPC 1 Gamb Gambar
parasit , dan aran an
validasi gamba Darah Darah
bakteri, dan ran
gambaran darah
darah awal
2. Dokumentasi Praktikum
a. Persiapan Wadah
b. Pemeriksaan Parasit
c. Pemeriksaan Darah
d. Pembuatan Preparat Histologi

Laporan Patologi Ikan PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Patologi Ikan PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Praktikum Hari/Tanggal: Rabu/31 Desember 2014

M.K Patologi Ikan Dosen: Dr. Sri Nuryati, S.Pi., M.Si

Bogor, Desember 2014

Penulis bernama lengkap Ardana Kurniaji, dilahirkan pada

II. METODE PRAKTIKUM

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

IV. SIMPULAN DAN SARAN

2 Hasil Histologi Otot ................................................................................... 23

3 Hasil Histologi Ginjal. ............................................................................... 24

4 Hasil Histologi Insang.............................................................................. 24

5 Hasil Histologi Hati ................................................................................... 25

6 Hasil Elektroforesis dari Pengujian Potensi dengan metode Cracking ..... 25

7 Grafik Hemoglobin (Hb) ........................................................................... 35

8 Gambar 8 Grafik Hematokrit (Ht) ............................................................. 36

9 Sel Darah Merah ........................................................................................ 38

10 Jumlah Sel Darah Merah ........................................................................... 38

11 Sel Darah Putih .......................................................................................... 40

12 Pengamatan Sel Darah Putih ..................................................................... 40

13 Aktifitas Fagositik ..................................................................................... 42

14 Sel darah ikan mas strain ........................................................................... 44

1 Hasil Uji Refleks Ikan Lele ..................................................................... 19

2 Hasil pengamatan pada pemeriksaan parasit ............................................. 20

3 Hasil pengamatan pada pengujian bakteri ................................................. 21

4 Hasil Perhitungan Koloni Bakteri .............................................................. 21

5 Hasil Pengamatan Ikan Paska Injeksi ........................................................ 22

6 Hasil pengamatan darah ikan lele kontrol ................................................. 23

7 Hasil pengamatan darah ikan lele injeksi .................................................. 23

1.1 Latar Belakang

2.1 Waktu dan Tempat

Praktikum patologi ikan dilaksanakan dalam dua tahapan, tahapan pertama

2.2 Alat dan Bahan

2.2.1 Pemeliharaan Ikan

Pemeliharaan ikan dilakukan di laboratorium lingkungan dengan

2.2.2 Pemeriksaan Parasit

2.2.3 Penginjeksian dan Pengujian Bakteri

Untuk selanjutnya dilakukan penginjeksian bakteri A. hydrophilla dengan

2.2.4 Perhitungan Bakteri pada Organ

2.2.5 Pengamatan Darah

2.2.6 Pengamatan Histologi

Kegiatan praktikum patologi ikan mencakup persiapan wadah dan media,

1. Persiapan wadah dan media

2.3.1 Persiapan Wadah dan Media

Persiapan wadah diawali dengan persiapan wadah dan media. Persiapan

2.3.3 Pemeriksaan Status Kesehatan Ikan: Uji Reflex

2.3.4 Pemeriksaan Parasit

Pemeriksaan terhdap parasit meliputi pemeriksaan ektoparasit dan

1. Lakukan pemeriksaan ikan untuk mengetahui abnormalitas morfologi ikan akibat

𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑖𝑘𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑡𝑒𝑟𝑖𝑛𝑓𝑒𝑘𝑠𝑖 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡

𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑝𝑒𝑟𝑜𝑙𝑒ℎ

2.3.5 Penginjeksian Aeromonas hydrophyla

Bakteri A. hydrophyla yang diinjeksi ke ikan harus divalidasi terlebih dahulu

2.3.7 Penghitungan bakteri pada organ ikan

2.3.8 Pembuatan dan Pengamatan Preparat Histologi

2.3.9 Pengamatan Darah

Prosedur yang dilakukan dalam pengambilan darah adalah sebagai berikut:

I. Cara Pengambilan Darah

1. Letakkan ikan dengan kepala menghadap ke sebelah kiri

- Pembuatan Preparat Ulas

- Pembuatan Darah dengan Giemsa

Pengukuran kadar hemoglobin (Hb) dapat dilakukan dengan metode Sahli

IV. Perhitungan Kadar Hematokrit

Prosedur penghitungan kadar hematokrit:

V. Perhitungan Sel Darah Merah (Eritrosit Total)