Bandello F, Battaglia Parodi M (eds): Anti-VEGF.

Dev Ophthalmol. Basel, Karger, 2010, vol 46, pp 4–20

Mechanisms of Ocular Angiogenesis and

Its Molecular Mediators
Martin J. Siemerinka Albert J. Augustinb Reinier O. Schlingemanna,c

aOcular Angiogenesis Group, Department of Ophthalmology, Academic Medical Center, Amsterdam, The
Netherlands; bAugenklinik, Karlsruhe, Germany, and cNetherlands Institute for Neuroscience, Royal Netherlands
Academy of Arts and Sciences, Amsterdam, The Netherlands

Abstrak

Angiogenesis didefinisikan sebagai pembentukan pembuluh darah baru dari pembuluh darah
yang ada. Ini adalah sebuah proses yang sangat terkoordinasi yang terjadi selama perkembangan
pembuluh darah retina, penyembuhan luka pada mata, dan dalam kondisi patologis. Interaksi
kompleks terlibat antara non-vaskular dan sel mikrovaskuler, seperti sel endotel dan pericytes,
melalui beberapa faktor pertumbuhan dan inhibitor angiogenik. Dari faktor-faktor pertumbuhan
ini, faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) telah muncul sebagai agen penyebab
angiogenesis paling penting dalam kesehatan dan penyakit pada mata. Selama proses angiogenik,
sel endotel bergeser dari populasi homogen menjadi populasi heterogen, masing-masing dengan
nasib seluler yang berbeda. Sejauh ini, tiga angiogenik fenotipe khusus telah diidentifikasi: (1)
'sel ujung', yang mengambil sinyal panduan dannbermigrasi melalui matriks ekstraseluler; (2) 'sel
tangkai', yang berkembang biak, membentuk persimpangan, menghasilkan matriks ekstraseluler,
dan membentuk lumen, dan (3) 'sel-sel phalanx', yang tidak berkembang biak, tetapi
menyelaraskan dan membentuk monolayer yang halus. Akhirnya, pembuluh darah baru yang
matang terbentuk dan mampu memasok darah dan oksigen ke jaringan. Angiogenesis patologis
adalah komponen kunci dari beberapa penyebab kebutaan yang tidak dapat dipulihkan. Dalam
sebagian besar kondisi ini, angiogenesis adalah bagian dari penyembuhan luka melalui sakelar
angiofibrotik, pada fibrosis dan pembentukan parut yang mengarah ke kebutaan. Saat ini,
antagonis VEGF-A adalah perawatan standar dalam pengobatan yang berkaitan dengan usia
eksudatif degenerasi makula, dan telah ditemukan sebagai strategi pengobatan tambahan yang
berharga pada beberapa penyakit retina vaskular lainnya.

Pembuluh darah membentuk jaringan rongga arteri, kapiler, dan vena untuk
pengangkutan cairan, zat terlarut, gas, makromolekul, dan sel di seluruh tubuh vertebrata.
Jaringan pembuluh darah terbentuk pada tahap awal perkembangan, dan fungsinya yang benar
dan awal yang angat penting untuk kelangsungan hidup embrio. Pembulh darah baru berasal dari
sel prekursor endotel (angioblas) melalui suatu proses disebut vasculogenesis atau dari pembuluh
darah yang sudah ada sebelumnya oleh angiogenesis. Sekali sistem vaskuler dewasa yang
fungsional telah terbentuk sepenuhnya, pembuluh darah tidak mengalami pergerakan lagi.
Namun, potensi pertumbuhan pembuluh darah yang lebih kecil tetap dipertahankan yang
digunakan saat penyembuhan luka dan regenerasi jaringan.
 Selain peran fisiologisnya, angiogenesis juga merupakan ciri dari banyak kondisi
patologis, termasuk penyakit neovaskular pada mata. Angiogenesis berlebihan terjadi ketika sel-
sel yang sakit menghasilkan sejumlah faktor angiogenik yang abnormal, yang melebihi efek
inhibitor angiogenesis alami. Seperti pembuluh yang baru terbentuk terutama berperan dalam
respon penyembuhan luka, mereka biasanya tidak mengembalikan integritas jaringan, tetapi
lebih menyebabkan gangguan penglihatan ketika mereka berada dalam kondisi normal. Strategi
untuk penghambatan angiogenesis termasuk pendekatan yang dapat memblokir kaskade
angiogenesis di beberapa langkah.

Angiogenesis: Mekanisme dan Mediator Molekuler

Diferensiasi Sel Endotel

Semua pembuluh darah dilapisi oleh sel endotel (EC), yang membentuk pembuluh
darah sehingga berfungsi di antaranya mengedarkan darah di lumen dan dinding pembuluh
darah. Dalam kondisi normal, EC adalah tipe sel yang sangat tenang, mengalami pembelahan
sekitar sekali setiap 1.000 hari, tetapi ketika diaktifkan, pembelahan sel dapat terjadi setiap 1-2
hari. Menumbuhkan angiogenesis membutuhkan pemilihan EC dari pembuluh darah yang sudah
ada dan akan diaktifkan untuk membentuk pembuluh darah baru, sementara pada saat yang
sama, EC sekitarnya tetap diam di posisi mereka saat ini. Dari penelitian terbaru, sebuah model
telah muncul di mana ECs berdiferensiasi menjadi tiga jenis sel khusus dengan fenotipe yang
berbeda selama angiogenesis. Pertama, 'sel ujung' tunggal berkembang. EC ini rusakmenyusuri
lamina basal, muncul dari pembuluh darah induknya dan menjadi sel utama dari pembuluh yang
tumbuh. Sel ujung bermigrasi ke matriks ekstraseluler dan merasakan sinyal lingkungan dan
atraktif yang menarik bagi lingkungan mikro. Kedua, mengikuti tepat di belakang sel ujung yang
bermigrasi, EC lain berdiferensiasi di bawah pengaruh sel ujung yang berdekatan menjadi 'sel
tangkai' yang berkembang biak dan menjembatani celah antara sel ujung dan pembuluh darah
induk. Sel-sel tangkai menghasilkan pembuluh darah lumen melalui pembentukan vakuola
intraseluler, suatu proses yang
disebut 'lumenogenesis'. Ketiga, EC
di belakang sel tangkai
berdiferensiasi menjadi 'sel phalanx',
dan menyelaraskan monolayer
menjadi lapisan sel paling dalam
dalam pembuluh darah baru. Sel-sel
phalanx tidak lagi berkembang biak,
mengekspresikan persimpangan
yang rapat dan melakukan kontak
dengan sel-sel mural.

Gambar 1. Model representatif dari

sprouting angiogenesis. Setidaknya
diperlukan tiga sel endotel khusus
angiogenik (putih) yang berbeda, masing-
masing dengan nasib seluler yang berbeda.
Selain itu, baru pembuluh darah menjadi
dikelilingi oleh pericytes (abu-abu gelap)
dan lamina basal baru (abu-abu terang).
Inducers dan Inhibitors Angiogenesis
Angiogenesis dikontrol secara ketat dengan berinteraksi secara erat antara angiogenik
dan angiostatik faktor, dan keseimbangan mereka akhirnya menentukan jika, di mana dan kapan
‘angiogenik sakelar 'dihidupkan dengan angiogenesis sebagai hasilnya. Selama beberapa dekade
terakhir, banyak penginduksi angiogenesis telah diidentifikasi, termasuk anggota VEGF
angiopoietins, transforming growth factors (TGF), epidermal growth factor (EGF), platelet-
derived growth factor (PDGF), tumor necrosis factor-α (TNF-α), insulin-like growth factor
(IGF), vascular endothelial-cadherin (VE-cadherin), interleukins dan fibroblast growth factor
(FGF)). Selain itu, ada sejumlah faktor pertumbuhan, hormon dan metabolit yang telah
dilaporkan secara langsung atau
tidak langsung merangsang
angiogenesis fisiologis dan
patologis (tabel 1). Tidak semua
faktor ini khusus untuk EC.
Konsisten dengan peran utama
untuk hipoksia dalam
keseluruhan proses
angiogenesis, sejumlah besar
faktor angiogenik terlibat dalam
berbagai tahap angiogenesis
responsif secara independen
terhadap hipoksia. Kelompok
protein VEGF adalah kelompok
faktor angiogenik terpenting
yang mengendalikan
pembentukan pembuluh darah.

Inhibitor angiogenesis
nogenik didefinisikan sebagai
protein atau fragmen protein
yang bisa menghambat
pembentukan pembuluh darah.
inhibitor angiogenesis dapat
dideteksi dalam sirkulasi darah,
menunjukkan bahwa mereka
berfungsi dalam sakelar
angiogenik sebagai regulator
angiostatik endogen dalam
kondisi fisiologis. Berbagai
inhibitor angiogenesis telah
ditemukan dalam tubuh,
termasuk trombospondin,
angiostatin, endostatin dan
faktor turunan epitel pigmen
(PEDF) (tabel 2).
The VEGF Family and Their Receptors

Dalam mamalia, keluarga VEGF termasuk VEGF-A (juga disebut dalam ulasan ini sebagai
VEGF), VEGF-B, faktor pertumbuhan plasenta (PlGF), VEGF-C, VEGF-D, dan virus VEGF
homolog VEGF-E. VEGF paling tidak mengikat secara selektif dengan afinitas yang berbeda
lima reseptor berbeda: VEGF receptor-1 (VEGFR-1), juga disebut Flt-1; VEGFR-2, juga disebut
Flk-1; VEGFR-3, juga disebut Flt-4; neuropilin-1 (NRP-1), dan NRP-2. VEGFR adalah anggota
superfamili reseptor tirosin-kinase. Ligan mengikat ke domain seperti imunoglobulin
ekstraseluler menginduksi dimerisasi reseptor. VEGFR-2 dianggap sebagai reseptor utama yang
bertanggung jawab untuk memediasi efek angiogenik VEGF-A. Peran VEGFR-1 dalam
angiogenesis tetap kontroversial karena aktivasi telah terbukti merangsang dan menekan
angiogenesis. Namun, VEGFR-1 (sVEGFR-1) yang larut menghambat angiogenesis retina in
vivo. VEGFR-3 sangat diekspresikan dalam kecambah angiogenik in vivo dan, seperti VEGFR-
2, itu pensinyalan memediasi angiogenesis [18]. NRP adalah reseptor VEGF-A165-, PlGF-, dan
VEGF-Bspecific, dan membentuk kompleks reseptor dengan VEGFR: NRP-1 bermitra dengan
VEGFR-2, sedangkan NRP-2 dapat membentuk kompleks dengan VEGFR-2 dan VEGFR-3.
 VEGF-A, anggota keluarga VEGF yang paling berkarakter dan paling banyak
dipelajari, awalnya digambarkan sebagai faktor permeabilitas, karena meningkatkan
permeabilitas endotelium melalui pembentukan celah dan fenestrasi antar sel. Setidaknya enam
spesies mRNA VEGF-A manusia, yang mengkode isoform VEGF-A dari 121, 145, 165, 183,
189 dan 206 asam amino, diproduksi oleh splicing alternatif dari VEGF-A mRNA. Pada tikus,
isoform VEGF-A adalah satu asam amino yang lebih pendek, yaitu VEGF-A 120, dll. Secara
luas diterima bahwa VEGF-A sangat penting untuk kedua vaskulogenesis dan angiogenesis:
hilangnya hanya satu alel pada tikus atau ikan zebra mematikan, akibatnya pada defek vaskular
berat dan kelainan kardiovaskular [19]. VEGF-A memberikan efek biologis melalui interaksi
dengan VEGFR-1 dan VEGFR-2, dan neuropilin reseptor NRP-1 dan NRP-2.
VEGF-B menghasilkan dua isoform, VEGF-B167 dan VEGF-B186 dengan
penyambungan alternatif, yang memberi sinyal melalui VEGFR-1 dan NRP-1 [16]. VEGF-B
secara luas diekspresikan dalam berbagai jaringan, termasuk retina, tetapi sangat berlimpah di
jantung, tulang dan otot. VEGF-B dapat secara langsung merangsang pertumbuhan EC dan
migrasi in vitro dan in vivo. Namun, peran pasti VEGF-B tidak diketahui, dan penelitian telah
mengungkapkan bahwa tikus yang kekurangan VEGF-B sehat dan subur, dan tidak menampilkan
cacat vaskular, yang menunjukkan bahwa VEGF-B tidak terlibat atau berlebihan angiogenesis.
PlGF sebagian besar diekspresikan dalam plasenta, jantung dan paru-paru, dan diikat
VEGFR-1 dan NRP-1 [16]. Pengikatan PlGF ke VEGFR-1 mengarah pada pembentukan
kompleks antara VEGFR-1 dan -2, yang meningkatkan pensinyalan VEGF-A dan merangsang
angiogenesis. PlGF mengatur ekspresi VEGF-A, FGF-2, PDGF-B, matrix metalloproteinases
(MMPs) dan faktor angiogenik lainnya, menunjukkan bahwa EC mampu meningkatkan daya
tanggap mereka sendiri terhadap VEGF-A dengan memproduksi PlGF. Selanjutnya, PlGF dapat
mempromosikan pematangan pembuluh darah melalui perekrutan sel mural.
VEGF-C dan VEGF-D keduanya mengikat VEGFR-2, tetapi dengan afinitas yang lebih
rendah daripada mereka ikat ke VEGFR-3. Seperti VEGF-A, baik VEGF-C dan VEGF-D
mampu merangsang migrasi dan proliferasi ECs in vitro dan in vivo [15]. Ekspresi VEGFR-3
lebih banyak pada sel-sel ujung daripada pada sel tangkai [18], sedangkan ekspresi VEGFR-3
tidak ada pada sel-sel phalanx. Disarankan bahwa VEGF-C dapat bekerja sama dengan VEGF-A
untuk mengaktifkan ECs untuk sprouting angiogenik melalui komplek reseptor VEGFR-2 /
VEGFR-3. Homolog VEGF virus VEGF-E juga merupakan faktor angiogenik yang kuat.

Degradasi Matriks
Sebelum EC dapat tumbuh dari pembuluh yang sudah ada sebelumnya, lamina basal
EC harus terdegradasi dan matriks ekstraseluler perlu direnovasi. Ini tercapai oleh interaksi yang
kompleks dari faktor pertumbuhan angiogenik, sel mural, dan ECs. Asam dan FGF dasar (aFGF
dan bFGF, masing-masing) dan VEGF merangsang produksi kolagenase dan MMP, dan
upregulasi aktivator plasminogen tipe urokinase pada Ecs. Collagenases adalah enzim yang
memutus ikatan peptida dalam kolagen; aktivator plasminogen urokinasetype mengubah
plasminogen menjadi plasmin, menyebabkan fibrinolisis; dan MMPs mampu menurunkan semua
jenis protein matriks ekstraseluler. Selanjutnya, stimulasi dosis rendah oleh TGF-β
meningkatkan regulasi protease dalam Ecs. Di saat yang sama, FGF dan VEGF menurunkan
regulasi proteolitik endogen enzim seperti inhibitor jaringan metalloproteinases (TIMPs).
Tip dan Regulasi Sel Punca

Pemilihan sel ujung endotel dari populasi EC yang tenang harus

diatur dengan ketat karena pembentukan sel tip yang berlebihan akan menghasilkan pola yang
buruk,jaringan pembuluh hyperdense yang mungkin tidak berfungsi. Jelas ujung dan tangkai sel-
sel dirangsang oleh faktor pertumbuhan yang sama, VEGF, dan keduanya merespons sinyal
VEGFR-2. Namun, perilaku mereka sangat berbeda dan pada penelitian in vivo menunjukkan
bahwa sel tip dan tangkai membawa tanda transkripsi yang berbeda. Dalam sel ujung,
pensinyalan VEGFR-2 menginduksi ekspresi ligan Notch delta-like 4 (DLL4), yang diangkut ke
membran sel dan berikatan dengan Notch reseptor pada EC berdekatan. Setelah ligan mengikat,
Notch terpotong di dalamnya sehingga menghasilkan domain intraseluler Notch yang bertindak
sebagai regulator transkripsi. Dalam sel-sel tangkai ini, aktivasi takik menurunkan regulasi
VEGFR-2, VEGFR-3 dan NRP-1, sementara menginduksi transkripsi VEGFR-1 dan varian
terlarutnya sVEGFR-1. Penghambatan experimental Dll4- Pensinyalan Notch1 meningkatkan
jumlah sel ujung selama angiogenesis postembryonic awal, yang mengarah pada peningkatan
kepadatan tunas dan perubahan pola vaskular. Overactivation of Notch signaling, di sisi lain,
mengurangi perilaku migrasi Ecs. Ligan Takik lainnya yang diekspresikan oleh sprouting vessel
adalah Jagged1 dan Dll1, dan hilangnya masing-masing ini juga menyebabkan defek vaskular.
Namun, Dll4 adalah hanya ligan yang diekspresikan dalam sel ujung, sedangkan Jagged1 dan
Dll1 hadir dalam sel tangkai. Data ini menunjukkan bahwa distribusi bergradasi VEGF bersama
dengan pensinyalan DllNotch mengatur perilaku angiogenik EC dengan membatasi jumlah sel
itu menjadi ujung sel.

Proliferasi Endhotel
Efek stimulasi VEGF pada proliferasi EC telah dilaporkan dengan baik di in vitro dan
in vivo. Menariknya, selama angiogenesis, EC yang berdekatan menunjukkan pola perilaku
seluler yang berbeda, bahkan ketika terkena tingkat VEGF-A yang sama, menunjukkan bahwa
beberapa molekul kunci lainnya terlibat dalam diferensiasi EC menjadi sel ujung, sel tangkai
atau sel phalanx. Ekspresi bersama NRP dengan VEGFR-2 adalah tipikal untuk sel ujung
endotel, di mana ia meningkatkan ikatan VEGF-A ke VEGFR-2, VEGFR-2 fosforilasi dan
pensinyalan terinduksi VEGF, yang semuanya diperlukan untuk migrasi. Dalam sel-sel tangkai,
di mana ekspresi NRP tidak ada, VEGF-A pensinyalan melalui VEGFR-2. Mempromosikan
proliferasi tetapi tidak migrasi.
Pada dosis rendah, TGF-β berkontribusi pada sakelar angiogenik dengan meningkatkan
faktor angiogenik pada EC, tetapi memiliki efek penghambatan pada konsentrasi yang lebih
tinggi. TGF-β ligan keluarga merangsang reseptor tipe II yang memfosforilasi reseptor tipe I
(sebagai activin-like kinase (ALK)) dan aktifkan Smads pensinyalan hilir. Endoglin adalah
reseptor tipe III, yang memfasilitasi pensinyalan ALK1 / TGF-β dalam ECs, dan
Pensinyalan ALK1 / Endoglin / TGF-β juga mempromosikan proliferasi dan migrasi EC.
Penambahan antibodi penawar terhadap TGF-β sangat menghambat angiogenesis di in vitro dan
in vivo. Efek angiogenik dari TNF-α mirip dengan TGF-β, karena mempromosikan proliferasi
EC dan pembentukan tabung dalam dosis yang lebih rendah, tetapi menghambat angiogenesis
dalam dosis yang lebih tinggi.
Angiopoietin-2 (Ang-2) dapat bertindak sebagai faktor angiogenik tergantung pada
keberadaannya molekul co-stimulator. Misalnya, di hadapan VEGF, Ang-2 menginduksi migrasi
dan proliferasi ECs dengan mengikat reseptor Tie2 dan dengan demikian menghalangi
pensinyalan Tie2 dari angiopoietin-1 (Ang-1). Dengan tidak adanya VEGF, bagaimanapun, Ang-
2 menyebabkan apoptosis EC dan regresi pembuluh darah. Ang-1 memiliki antagonis
berpengaruh pada Tie2 dan menghambat proliferasi EC. Ang-1 disekresikan oleh ikatan
pericytes ke Tie2 pada EC, dan penting untuk pemeliharaan integritas dan ketenangan pembuluh
darah. Beberapa molekul lain telah dilaporkan untuk merangsang proliferasi EC, termasuk FGF,
EGF, kemokin CXC dan insulin-like growth factor-1 (IGF-1).

Endothelial Cell-Cell Interaction

EC Junction terdiri dari jaringan kompleks protein adhesi yang terhubung
ke jaringan sitoskeletal intraseluler dan molekul pensinyalan. VE-cadherin secara khusus
dilokalisasi ke persimpangan antar-EC, dan diketahui diperlukan untuk mempertahankan
penghalang endotel terbatas. VE-cadherin sangat penting untuk vaskular yang tepat
pengembangan: VE-cadherin-null tikus mati pada tahap embrionik awal karena cacat pembuluh
darah. Fungsi cadherin dimodulasi oleh catenin, yang mengikat dengan ekor intraseluler
cadherin. Setelah aktivasi VEGFR-2 oleh VEGF, catenin menjadi sangat terfosforilasi,
menyebabkan hilangnya persimpangan sel-sel, memungkinkan EC untuk membedakan dan
pindah dari posisi mereka saat ini. Kemudian selama angiogenesis, fosforilasi catenin berkurang,
memungkinkan restabilisasi sel-sel EC
persimpangan dan diferensiasi menjadi sel-sel phalanx yang tenang tiak mengalami proliferasi.
Molekul adhesi EC-1 platelet (PECAM-1) diekspresikan pada ECs, dan sejenisnya VE-
cadherin, diperkaya dalam persimpangan antar sel. PECAM-1 dimediasi sel-sel persimpangan
diperlukan untuk organisasi ECs ke jaringan tubular in vitro, dan PECAM-1 telah terbukti
menstimulasi pembentukan filopodia dalam sel ujung vivo.

Blood Vessel Guidance

Sel-sel ujung endotel mengambil sinyal yang menarik atau menjijikkan dari lingkungan
jaringan dan menerjemahkannya ke dalam proses adhesi dan de-adhesi yang dinamis untuk
migrasi. Dalam proses ini sel ujung membentuk lamellipodia (proyeksi sitoskeletal pendek) dan
filopodia (ekstensi membran plasma panjang seperti jari). Amellipodia terletak di tepi seluler sel.
Mereka menempel dan menghubungkan sitoskeleton intraseluler ke matriks ekstraseluler,
memungkinkan serat stres aktin / miosin filamen untuk menarik sel ke depan. Filopodia
menonjol dari aktin lamellipodial jaringan dan berfungsi sebagai antena yang ujung selnya
mengidentifikasi lingkungan mereka. Pengatur utama pembentukan filopodia dan lamellipodia
adalah anggota Rho GTPase kecil, yang diinduksi oleh VEGF.
Gradien ekstraseluler VEGF-A tampaknya merupakan penarik kuat untuk bermigrasi
ECs melalui pengikatan dengan VEGFR-2 dan NRP, yang menonjol pada filopodia sel ujung.
Sifat biologis penting dari isoform VEGF-A yang berbeda adalah heparin mereka dan
kemampuan mengikat heparan-sulfat. Isoform VEGF-A yang lebih besar mengikat dengan
sangat erat untuk heparin dan tetap diasingkan dalam matriks ekstraseluler, sedangkan yang lebih
pendek. Isoform VEGF-A bebas difusi. Sudah mapan bahwa VEGF-A189 dan
VEGF-A 165 berfungsi sebagai sinyal kemoattractive yang mempromosikan ekstensi
terpolarisasi filopodia sel ujung, sedangkan VEGF-A121 dapat mendukung proliferasi EC tetapi
tidak pada sel tip bimbingan.
Selanjutnya, fungsi ti endotel di kerucut pertumbuhan aksonal. Pembuluh darah an ody
berdampingan satu sama lain dan sudah patterning sebagian besar dipandu oleh sim UAS. Sejauh
ini, empat keluarga utama reseptor Peristiwa nce selama morph aksonal dan vaskular eir ligan
kelas 3 semaphorins; ‘Uncoordina kanker olorektal (DCC) dengan ligannya ne gits Slits, dan Eph
dan ligand mereka ephins.
Lumen Formation

Saat bermigrasi, ujung sel terkemuka menciptakan terowongan di seluruh ruang

matriks ekstraseluler. Di belakang sel ujung, sel-sel tangkai diratakan ke dinding ruang seperti
tabung dalam matriks ekstraseluler, menghasilkan wajah apikal dan basal dari endotelium Sel-sel
tangkai membentuk vakuola intraseluler besar dengan fusi vesikel intraseluler, dimediasi oleh
integrin, yang bergabung bersama untuk membentuk lumen. Beberapa integrin serta faktor
transkripsi mengikat penambah miosit faktor 2C (MEF2C) dapat berpartisipasi dalam
pembentukan vesikel dan fusi in vitro. Interaksi EC dengan matriks ekstraseluler membentuk
kaskade pensinyalan hilir ligasi integrin yang mengarah ke aktivasi keluarga Rho dari GTPases.
Penghambatan Rho GTPases menghasilkan blokade lengkap vakuola dan lumen EC
pembentukan in vitro.

Rekrutmen dan Pematangan Sel Mural

Setelah pembentukan pembuluh awal melalui angiogenesis, penentuan arteri atau vena
diatur oleh berbagai faktor molekuler yang menentukan nasib EC. Penanda molekuler arteri dan
vena yang jelas sudah terbukti bahkan sebelum dimulainya aliran sirkulasi, menunjukkan
penentu molekul memainkan peran penting dalam diferensiasi arteri atau vena. Beberapa gen
yang relevan sekarang telah diidentifikasi dengan in vivo, termasuk keluarga Hedgehog dari
morfogen yang disekresi, pensinyalan takik, NRP,EphB4, ephrinB2, dan VEGF.
Dua kelas utama sel mural adalah sel otot polos pembuluh darah, yang lapisannya
terdiri dari pericytes dengan jumlah yang bervariasi di sekitar kapiler. Sel-sel mural sangat
diperlukan untuk memberikan kelangsungan hidup dan faktor antiproliferatif yang menstabilkan
pembuluh darah yang baru terbentuk. Namun, hipotesis itu mengatakan bahwa pericyte
menginisialisasi langkah-langkah pertama angiogenesis sedangkan perekrutan pericyte hanya
terjadi pada penyelesaian angiogenesis yang kontroversial, karena banyak pericytes ditemukan
hadir dalam endotel pada percobaan in vivo.
Pengembangan dan rekrutmen sel mural membutuhkan fungsi pensinyalan PDGF,
Ang-1 dan reseptornya Tie-2, dan interaksi Ephrin-Eph. PDGF sebagai heterodimer (PDGF-AB)
atau homodimer yang terdiri dari rantai A dan B. Sel ujung endotel dari tumbuh kecambah
vaskular menghasilkan konsentrasi PDGF-B gradien yang mempromosikan perekrutan pericytes
mengekspresikan reseptor PDGF-B. PDGF-B pada gilirannya mengaktifkan TGF-β dalam
pericytes, yang memperkenalkan produksi komponen lamina basal yang diperlukan untuk
pematangan dan stabilisasi pembuluh darah akhir.
Ang-1, diekspresikan oleh sel-sel perivaskular, mengikat dan mengaktifkan reseptor
Tie2, dengan demikian merangsang perlekatan sel mural. Dalam perjanjian, hubungan yang
buruk antara EC dan sel mural di sekitarnya terlihat pada KO-1 dan Tie2. Ang-2 terbukti
memiliki efek antagonis pada Tie2 menginduksi kehilangan pericyte dan degenerasi kapiler pada
retina. Namun, ekspresi endotel dari Tie2 telah diamati pada pembuluh darah yang baru
terbentuk dan masih belum matang.
Sirkulasi Retina

Vaskularisasi Retina
Retina memiliki suplai vaskular ganda: sepertiga terluar dari retina disuplai dari
sirkulasi koroid dan dua pertiga bagian dalam oleh arteri retina sentral. Arteri choroidal
menembus sklera di sekitar saraf optik dan menyebar membentuk choriocapillaris, yang
menyediakan nutrisi dan oksigen ke epitel pigmen retina dan fotoreseptor di bagian luar retina.
Vena yang sesuai lobulus mengalir ke venula dan vena yang berjalan anterior menuju garis
tengah bola mata untuk memasuki vortex. Vortex vena menembus sclera dan akhirnya
bergabung ke dalam vena ophthalmic. Arteri retina sentral menembus saraf optik dekat bola
mata, muncul di cakram optik, dan memiliki 4 cabang utama di atas retina, berjalan didekat
membran pembatas bagian dalam. Masing-masing dari 4 cabang arteri retina sentral memasok
satu kuadran retina dalam. Vena setara dengan arteri retina sentral adalah vena retina. Anatomi
pembuluh darah orbit mata bervariasi antar individu. Pada beberapa saluran vena retina sentral
bermuara ke dalam vena ophthalmic superior sedangkan yang lain bermuara langsung ke sinus
kavernosa.

Karakteristik yang Unik dari Sirkulasi Retina

Regulasi mikro pada retina, misalnya pergerakan cairan dan molekuler yang terkontrol
antara vaskular dan jaringan retina, sangat penting untuk fungsi penglihatan retina yang tepat.
Oleh karena itu, retina memiliki sawardarah-retina yang unik untuk memisahkan retina dari
darah yang bersirkulasi. Sawar darah dibentuk oleh persimpangan ketat kompleks EC kapiler
retina (bagian dalam sawar) dan sel epitel pigmen retina (sawar luar), sesuai dengan dua sirkulasi
utama. Kapiler koroid mengalami fenestrasi, seperti kebanyakan dari kapiler yang sangat
permeabel di seluruh tubuh manusia. EC kapiler retina mengekspresikan berbagai transporter
unik yang memainkan peran kunci dalam transportasi masuknya molekul esensial dan
transportasi eflux dari neurotransmitter metabolit, racun, dan obat-obatan. Oleh karena itu,
pemberian obat sistemik tidak cocok untuk pengobatan penyakit retina karena permeabilitas
sawar darah-retina.
Sirkulasi retina ditandai oleh aliran darah yang rendah dan tingkat ekstraksi oksigen
yang tinggi; perbedaan arteriovenous pada pO2 adalah sekitar 40%. Saraf otonom ujung meluas
ke uvea dan bagian ekstraokular pembuluh darah retina, tetapi tidak ke segmen intraokular
pembuluh darah retina. Karena itu, arteri retina sebagian besar diatur oleh faktor-faktor lokal
seperti variasi lokal dalam tekanan perfusi dan dalam pO2, pCO2 dan pH. Adanya mekanisme
autoregulasi sirkulasi mungkin mencerminkan strategi bertahan hidup yang penting untuk retina
yang belum sepenuhnya dipahami.

Perkembangan Pembuluh Darah Retina

Selama embriogenesis, jaringan pembuluh darah yang memasok retina mengalami
perubahan dramatis dan reorganisasi. Pembuluh darah koroid berkembang dalam suatu tahap
awal dan didahului oleh puncak produksi VEGF-A oleh pigmen retina epitel, menunjukkan
bahwa VEGF-A terlibat dalam pengembangan koroid pembuluh darah. Awalnya, bagian dalam
mata secara metabolik didukung oleh pembuluh darah hyaloidal, jaringan arteri di vitreous.
Darah masuk melalui arteri hyaloid sentral di saraf optik, berjalan melalui pembuluh hyaloid di
vitreous dan kemudian keluar melalui pembuluh pengumpul annular di bagian depan mata.
Sistem pembuluh hyaloid adalah sistem sirkulasi intraokular transien yang padat, tetapi
sementara itu mengalami regresi progresif dan hampir lengkap selama tahap perkembangan
okular saat lensa, vitreous dan retina matang. Karena regresi pembuluh darah hyaloidal, serta
meningkatnya tuntutan metabolisme pematangan neuron, retina menjadi hipoksia, sehingga
pembuluh darah retina diinduksi.

Angioblas Retina
Pengamatan terbaru menunjukkan bahwa pembuluh darah retina pertama kali
berdiferensiasi dengan pengorganisasian sel-sel prekursor vaskular CD39+ (penanda angioblast)
dan CD34- atau CD31– (penanda EC) pada sekitar 14 minggu kehamilan. Sel-sel ini tampaknya
muncul dari kumpulan sel prekursor CXCR4+ atau c-Kit+ (reseptor angioblast), dan ditemukan
di lapisan neuroblastik embrionik retina pada usia kehamilan 7 minggu. Sel CD39 + / CXCR4 + /
c-Kit + mulai bermigrasi kearah anterior menuju lapisan serat saraf retina di mana faktor turunan
stroma-1 (SDF-1,tingkat ligan untuk CXCR4) dan faktor sel induk (SCF, ligan untuk c-Kit) pada
tingkat paling tinggi. Dengan migrasi nyata dari prekursor vaskuler ini, ekspresi c-Kit mengalami
penurunan dan diferensiasi menjadi angioblas sehingga terjadi keselarasan dengan serabut saraf.
Gradien SDF-1 menuju ora serrata menunjukkan bahwa angioblas bermigrasi menuju
konsentrasi yang lebih tinggi. Ekspresi CXCR4 diatur oleh SCF, FGF-2 dan VEGF, dan
angioblast terus mengekspresikan CXCR4 sampai mereka menjadi Ecs CD34 + / CD31 +. Hasil
ini menunjukkan bahwa vasculogenesis mungkin berkontribusi pada pertumbuhan pembuluh
darah primordial di retina sentral. Namun demikian identifikasi angioblas dalam retina masih
kontroversial.

Angiogenesis Retina
Setelah pembentukan pembuluh darah primordial, pembuluh darah baru tumbuh ke
retina oleh cara angiogenesis, membentuk pembuluh darah retina bagian dalam. Angiogenesis
retina dimulai pada lapisan retina yang paling dangkal pada saraf optik, dan memancar keluar
dari titik pusat ini. Pleksus superfisial berkembang secara sentrifugal di permukaan dalam retina,
dengan pengecualian fovea. Angiogenesis retina diatur secara ketat oleh suplai oksigen.
Ketegangan oksigen yang tinggi menekan hipoksia produksi VEGF, dan VEGF yang lebih
sedikit menghasilkan lebih sedikit pertumbuhan pembuluh darah. Penambahan jaringan kapiler
di lapisan retina yang lebih dalam tumbuh dari permukaan arteri untuk membentuk pleksus
vaskular yang lebih dalam. Pemangkasan pembuluh darah di retina berkembang dari migrasi EC
yang menarik kembali pembuluh darah baru yang berkembang di sekitarnya. Proses
pemangkasan alami dapat dipercepat dengan paparan eksperimental terhadap hiperoksia. Proses
perkembangan pembuluh darah retina selesai segera
sebelum bayi lahir padamanusia, dan beberapa minggu setelah kelahiran pada beberapa spesies
mamalia lainnya termasuk tikus. Dengan perkembangan pleksus kapiler,peningkatan tekanan
oksigen, zona bebas kapiler berkembang di sekitar pembuluh darah utama, diikuti oleh retraksi
pembuluh di pleksus superfisial.

Pola Vaskular
Proses sprouting angiogenesis selama perkembangan pembuluh darah retina didahului
oleh invasi bermigrasi astrosit secara sentrifugal di seluruh permukaan bagian dalam retina. Sel-
sel ganglion mensekresikan PDGF-A untuk merangsang proliferasi astrosit. Pleksus vaskular
retina awalnya terbentuk dengan menumpang pada jaringan astrosit. Astrosit di ujung tombak
dan tepat di depan pleksus vaskular mengeluarkan VEGF-A tingkat tinggi dibandingkan dengan
lebih banyak astrosit yang berlokasi di tempat yang sudah memiliki kontak dengan EC. Selama
ini pada angiogenesis, semua sel ujung endotel sangat dekat dengan astrosit dan filopodia mereka
berorientasi sepanjang badan dan proses sel astrosit. Ekspresi berlebih dari PDGF-A dalam sel
ganglion mengakibatkan peningkatan dalam jumlah besar astrosit retina dan pertumbuhan
berlebih selanjutnya dari pembuluh darah retina in viv. Memblokir reseptor PDGF-A
mengurangi pembentukan jaringan astrosit tetapi hanya menunjukkan perubahan kecil dalam
pembentukan pembuluh darah.

Angiogenesis Okular Patologis

Apa yang Unik dalam Okular Angiogenesis?

Beberapa penyakit mata ditandai oleh angiogenesis, termasuk retinopati diabetik,
degenerasi makula terkait usia, dan retinopati prematuritas. Dalam semua kondisi ini,
angiogenesis mungkin dirangsang oleh hipoksia jaringan lokal yang dihasilkan dari metabolisme
neuron, dengan berbagai kontribusi dari sinyal inflamasi dan stres oksidatif. Dalam
neovaskularisasi retina, VEGF memainkan peran sentral. Setidaknya lima jenis sel retina
memiliki kapasitas untuk memproduksi dan mengeluarkan VEGF. Termasuk didalamnya epitel
berpigmen retina, astrosit, sel Muller, Ecs dan sel ganglion. Namun, mereka sangat berbeda
dalam respon terhadap hipoksia; penelitian in vitro menunjukkan bahwa sel Muller dan astrosit
umumnya menghasilkan jumlah terbesar VEGF dalam kondisi hipoksia. Dua bentuk
angiogenesis okular yang paling penting adalah angiogenesis preretinal, yang berasal dari
pembuluh darah retina,dan neovaskularisasi subretinal (atau koroid.

Angiogenesis Preretinal
Angiogenesis preretinal terjadi sebagai jalur umum akhir pada beberapa penyakit yang
berhubungan dengan non-perfusi kapiler dan iskemia retina lokal, termasuk retinopati
diabetikum. Angiogenesis diinduksi oleh daerah retina yang iskemik, dan akhirnya menghasilkan
pembentukan membran fibrovaskular kontraktil besar dalam rongga vitreous. Selaput ini dan
perdarahan yang terkait menyebabkan kebutaan karena pengaburan dari sumbu visual dan ablasi
retina. Ketika iskemia retina tersebar luas, angiogenesis dan jaringan parut juga dapat terjadi
pada iris dan menyebabkan bentuk yang tidak dapat diobati pada glaukoma. Penghancuran
daerah retina yang iskemik dengan laser bisa efektif menginduksi regresi dan fibrosis pembuluh
yang baru terbentuk.

Angiogenesis Subretinal
Neovaskularisasi subretinal, atau koroid, merupakan hasil dari serangkaian peristiwa
patologis yang mempengaruhi epitel pigmen retina, membran Bruch, dan koroid. Biasanya,
angiogenesis subretinal adalah respons penyembuhan luka yang hanya terjadi ketika sebuah
penghentian anatomi membran Bruch terjadi, dalam kombinasi dengan kekuatan pendorong
seperti peradangan, hipoksia, dan stres oksidatif. Untuk sebagian besar kondisi, tidak diketahui
sejauh mana ketiga mekanisme ini berkontribusi terhadap inisiasi angiogenesis subretinal.
Angiogenesis subretinal adalah ciri khas yang berkaitan dengan degenerasi makula terkait usia,
terjadi antara epitel pigmen retina dan membran Bruch (neovaskularisasi koroid okultisme), atau
antara epitel pigmen retina dan neuroretina (neovaskularisasi koroid klasik).
Pembuluh baru yang dibentuk oleh angiogenesis subretinal kemudian dapat mengalami
kemunduran, meninggalkan area retina atrofi, atau penyembuhan luka dapat berlanjut dengan
pembentukan bekas luka fibrotik. Dalam kedua kasus tersebut, neuroretina yang ada di atasnya
akan perlahan-lahan mengalami degenerasi, yang menyebabkan hilangnya penglihatan yang
tajam, sensitivitas kontras, dan penglihatan warna.

Angiogenesis Mata dan Respons Penyembuhan Luka

Dalam kebanyakan kasus, angiogenesis okular patologis adalah respons seperti
penyembuhan luka di mana pembentukan pembuluh darah disertai dengan masuknya
peradangan sel, diikuti oleh pembentukan myofibroblast. Oleh karena itu, selama perkembangan
penyakit, fase angiogenik dapat diikuti oleh fase fibrotik. Telah ditunjukkan itu Angiogenesis
yang digerakkan oleh VEGF meningkatkan regulasi faktor-faktor profibotik seperti TGF-β1 dan
faktor pertumbuhan jaringan ikat (CTGF). Level CTGF sangat berkorelasi dengan derajat
fibrosis dalam kondisi vitreoretinal [52]. Ketika keseimbangan antara faktor angiogenik (VEGF)
dan fibrotik (CTGF) bergeser ke rasio ambang batas tertentu yang mendukung fibrosis, 'saklar
angiofibrotik' terjadi dan fibrosis dan jaringan parut yang berkembang. Oleh karena itu,
pemberian obat anti-VEGF kepada pasien sebagai terapi untuk memulihkan neovaskularisasi
dapat menyebabkan peningkatan sementara fibrosis, sebuah fenomena yang memang diamati di
klinik.

Referensi
Patan S: Vasculogenesis and angiogenesis as mechanisms of
vascular network formation, growth and
remodeling. J Neurooncol 2000;50:1–15.
Risau W: Mechanisms of angiogenesis. Nature 1997;
386:671–674.
Gariano RF, Gardner TW: Retinal angiogenesis in
development and disease. Nature 2005;438:960–
966.
Schlingemann RO, Witmer AN: Treatment of retinal diseases with
VEGF antagonists. Prog Brain Res
2009;175:253–267.
De Smet F, Segura I, De Bock K, Hohensinner PJ,
Carmeliet P: Mechanisms of vessel branching filopodia on
endothelial tip cells lead the way. Arterioscler Thromb Vasc Biol
2009;29:639–649.
Adams RH, Alitalo K: Molecular regulation of
angiogenesis and lymphangiogenesis. Nat Rev Mol
Cell Biol 2007;8:464–478.
Le Noble F, Klein C, Tintu A, Pries A, Buschmann I:
Neural guidance molecules, tip cells, and mechanical factors in
vascular development. Cardiovasc Res
2008;78:232–241.
Otrock ZK, Mahfouz RAR, Makarm JA, Shamseddine AI:
Understanding the biology of angiogenesis:
review of the most important molecular mechanisms. Blood Cells
Mol Dis 2007;39:212–220.
Distler JHW, Hirth A, Kurowska-Stolarska M, Gay
RE, Gay S, Distler O: Angiogenic and angiostatic
factors in the molecular control of angiogenesis. Q J
Nucl Med 2003;47:149–161.
Fong GH: Regulation of angiogenesis by oxygen
sensing mechanisms. J Mol Med 2009;87:549–560.
Tabruyn SP, Griffioen AW: Molecular pathways of
angiogenesis inhibition. Biochem Biophys Res
Commun 2007;355:1–5.
Tammela T, Enholm B, Alitalo K, Paavonen K: The
biology of vascular endothelial growth factors.
Cardiovasc Res 2005;65:550–563.
Holmes DIR, Zachary I: The vascular endothelial
growth factor family: angiogenic factors in health
Witmer AN, Vrensen GFJM, van Noorden CJF, Schlingemann
RO: Vascular endothelial growth factors
and angiogenesis in eye disease. Prog Retin Eye Res
2003;22:1–29.
Andreoli CM, Miller JW: Antivascular endothelial
growth factor therapy for ocular neovascular disease. Curr Opin
Ophthalmol 2007;18:502–508.
Cines DB, Pollak ES, Buck CA, Loscalzo J, Zimmerman GA,
McEver RP, et al: Endothelial cells in
physiology and in the pathophysiology of vascular
disorders. Blood 1998;91:3527–3561.
and disease. Genome Biol 2005;6.
Aiello LP, Pierce EA, Foley ED, Takagi H, Chen H,
Riddle L, et al: Suppression of retinal neovascularization in vivo
by inhibition of vascular endothelial
growth-factor (VEGF) using soluble VEGF-receptor
chimeric proteins. Proc Natl Acad Sci USA 1995;92:
10457–10461.
Witmer AN, van Blijswijk BC, Dai J, Hofman P,
Partanen TA, Vrensen GFJM, et al: VEGFR-3 in
adult angiogenesis. J Pathol 2001;195:490–497.
Carmeliet P, Ferreira V, Breier G, Pollefeyt S,
Kieckens L, Gertsenstein M, et al: Abnormal blood
vessel development and lethality in embryos lacking
a single VEGF allele. Nature 1996;380:435–439.
Rusnati M: Fibroblast growth factor/fibroblast
growth factor receptor system in angiogenesis.
Cytokine Growth Factor Rev 2005;16:159–178.
Goumans MJ, Liu Z, ten Dijke P: TGF-β signaling in
vascular biology and dysfunction. Cell Res 2009;19:
116–127.
Gerhardt H, Golding M, Fruttiger M, Ruhrberg C,
Lundkvist A, Abramsson A, et al: VEGF guides
angiogenic sprouting utilizing endothelial tip cell
filopodia. J Cell Biol 2003;161:1163–1177.
Hellstrom M, Phng LK, Hofmann JJ, Wallgard E,
Coultas L, Lindblom P, et al: Dll4 signalling through
Notch1 regulates formation of tip cells during
angiogenesis. Nature 2007;445:776–780.
Leslie JD, Ariza-McNaughton L, Bermange AL,
McAdow R, Johnson SL, Lewis J: Endothelial signalling by the
Notch ligand delta-like 4 restricts
angiogenesis. Development 2007;134:839–844.
Harrington LS, Sainson RCA, Williams CK, Taylor
JM, Shi W, Li JL, et al: Regulation of multiple angiogenic
pathways by D114 and Notch in human
umbilical vein endothelial cells. Microvasc Res
2008;75:144–154.
Hainaud P, Contreres JO, Villemain A, Liu LX,
Plouet J, Tobelem G, et al: The role of the vascular
endothelial growth factor-delta-like 4 ligand/
Notch4-ephrin B2 cascade in tumor vessel remodeling and
endothelial cell functions. Cancer Res 2006;
66:8501–8510.
Roca C, Adams RH: Regulation of vascular morphogenesis by
Notch signaling. Genes Dev 2007;21:
2511–2524.
Mattila PK, Lappalainen P: Filopodia: molecular
architecture and cellular functions. Nat Rev Mol
Cell Biol 2008;9:446–454.
Carmeliet P: Blood vessels and nerves: common signals, pathways
and diseases. Nat Rev Genet 2003;4:
710–720.
Larrivee B, Freitas C, Suchting S, Brunet I, Eichmann
A: Guidance of vascular development lessons from
Witmer AN, van Blijswijk BC, van Noorden CJF,
Vrensen GFJM, Schlingemann RO: In vivo angiogenic phenotype
of endothelial cells and pericytes
induced by vascular endothelial growth factor-A. J
Histochem Cytochem 2004;52:39–52.
Penfold PL, Provis JM, Madigan MC, Vandriel D,
Billson FA: Angiogenesis in normal human retinal
development – the involvement of astrocytes and
macrophages. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol
1990;228:255–263.
Saint-Geniez M, D’Amore PA: Development and
pathology of the hyaloid, choroidal and retinal vasculature. Int J
Dev Biol 2004;48:1045–1058.
Provis JM: Development of the primate retinal vasculature. Prog
Retin Eye Res 2001;20:799–821.
Kaur C, Foulds WS, Ling EA: Blood-retinal barrier
in hypoxic ischaemic conditions: basic concepts,
clinical features and management. Prog Retin Eye
Res 2008;27:622–647.
Hardy P, Beauchamp M, Sennlaub F, Gobeil F,
Tremblay L, Mwaikambo B, et al: New insights into
the retinal circulation: inflammatory lipid mediators in ischemic
retinopathy. Prostaglandins Leukot
Essent Fatty Acids 2005;72:301–325.
Gogat K, Le Gat L, Van den Berghe L, Marchant D,
Kobetz A, Gadin S, et al: VEGF and KDR gene
expression during human embryonic and fetal eye
development. Invest Ophthalmol Vis Sci 2004;45:7–
14.
Hasegawa T, McLeod DS, Prow T, Merges C, Grebe
R, Lutty GA: Vascular precursors in developing
human retina. Invest Ophthalmol Vis Sci 2008;49:
2178–2192.
Hughes S, Yang HJ, Chan-Ling T: Vascularization of
the human fetal retina: roles of vasculogenesis and
angiogenesis. Invest Ophthalmol Vis Sci 2000;41:
Prof. Dr. R.O. Schlingemann
Medical Retina Unit and Ocular Angiogenesis Group, Department of Ophthalmology
Academic Medical Center, University of Amsterdam, A2-122
PO Box 22660, NL–1100 DD Amsterdam (The Netherlands)
Tel. +31 205 663 682, Fax +31 205 669 048, E-Mail r.schlingemann@amc.uva.nl
28 Sainson RCA, Johnston DA, Chu HC, Holderfield
MT, Nakatsu MN, Crampton SP, et al: TNF primes
endothelial cells for angiogenic sprouting by inducing a tip cell
phenotype. Blood 2008;111:4997–
5007.
Otrock ZK, Mahfouz RAR, Makarm JA, Shamseddine AI:
Understanding the biology of angiogenesis:
review of the most important molecular mechanisms. Blood Cells
Mol Dis 2007;39:212–220.
30 Wallez Y, Vilgrain I, Huber P: Angiogenesis: the
VE-cadherin switch. Trends Cardiovasc Med 2006;
16:55–59.
Cao GY, Fehrenbach ML, Williams JT, Finklestein
JM, Zhu JX, DeLisser HM: Angiogenesis in platelet
endothelial cell adhesion molecule-1-null mice. Am
J Pathol 2009;175:903–915.
the nervous system. Circ Res 2009;104:428–441.
Iruela-Arispe ML, Davis GE: Cellular and molecular mechanisms
of vascular lumen formation. Dev
Cell 2009;16:222–231.
Swift MR, Weinstein BM: Arterial-venous specification during
development. Circ Res 2009;104:576–
588.
1217–1228.
Gariano RF: Cellular mechanisms in retinal vascular development.
Prog Retin Eye Res 2003;22:295–
306.
Chan-Ling T, McLeod DS, Hughes S, Baxter L, Chu
Y, Hasegawa T, et al: Astrocyte-endothelial cell
relationships during human retinal vascular development. Invest
Ophthalmol Vis Sci 2004;45:2020–
2032.
Sandercoe TM, Madigan MC, Billson FA, Penfold
PL, Provis JM: Astrocyte proliferation during development of the
human retinal vasculature. Exp Eye
Res 1999;69:511–523.
Fruttiger M, Calver AR, Kruger WH, Mudhar HS,
Michalovich D, Takakura N, et al: PDGF mediates a
neuron-astrocyte interaction in the developing retina. Neuron
1996;17:1117–1131.
Campochiaro PA, Hackett SF: Ocular neovascularization: a
valuable model system. Oncogene 2003;22:
6537–6548.
Blaauwgeers HGT, Hotkamp BW, Rutten H, Witmer
AN, Koolwijk P, Partanen TA, et al: Polarized vascular endothelial
growth factor secretion by human
retinal pigment epithelium and localization of vascular endothelial
growth factor receptors on the
inner choriocapillaris – evidence for a trophic paracrine relation.
Am J Pathol 1999;155:421–428.
Kuiper EJ, Van Nieuwenhoven FA, de Smet MD, van
Meurs JC, Tanck MW, Oliver N, et al: The angiofibrotic switch of
VEGF and CTGF in proliferative
diabetic retinopathy. PLoS One 2008;3:e2675.
Kuiper EJ, Hughes JM, Van Geest RJ, Vogels IMC,
Goldschmeding R, van Noorden CJF, et al: Effect of
VEGF-A on expression of profibrotic growth factor
and extracellular matrix genes in the retina. Invest
Ophthalmol Vis Sci 2007;48:4267–4276.