Mikrobiota komensal mempengaruhi hasil stroke iskemik dengan mengatur sel T

γδ usus

Abstrak

Bakteri komensal berdampak pada sistem kekebalan inang dan dapat mempengaruhi proses penyakit di
beberapa organ, termasuk otak. Namun, masih belum jelas apakah mikrobiota berdampak pada hasil
cedera otak akut. Di sini kami menunjukkan bahwa perubahan yang disebabkan oleh antibiotik pada flora
usus mengurangi cedera otak iskemik pada tikus, efek yang ditularkan oleh transplantasi tinja. Disbiosis
usus mengubah homeostasis imun di usus kecil yang mengarah ke peningkatan sel T regulatori dan
pengurangan sel T IL-17 +, melalui aktivitas sel dendritik yang berubah. Disbiosis menekan perdagangan
sel T efektor dari usus ke leptomeninges setelah stroke. Interleukin-10 (IL-10) dan IL-17 diperlukan untuk
perlindungan saraf yang diberikan oleh dysbiosis usus. Temuan ini mengungkap poros usus otak yang
sebelumnya tidak dikenal dan dampak flora usus serta sel T-17 + γδ T meningeal pada cedera iskemik.

Pendahuluan terhadap degenerasi neurologis sekunder

dengan melepaskan faktor neurotoksik
Stroke iskemik adalah penyakit yang sangat
termasuk oksigen reaktif dan spesies nitrogen
lazim dengan pilihan terapi terbatas1.
serta exopeptidases2.
Peradangan adalah komponen kunci dalam
patofisiologi iskemia otak2, dan banyak Interaksi terus menerus antara sistem kekebalan
pendekatan eksperimental telah mengeksplorasi tubuh dan mikroba komensal yang mengisi
potensi terapi imunomodulasi3. Namun, permukaan epitel sangat penting untuk
pemahaman kita tentang interaksi antara sel-sel pengembangan, pemeliharaan, dan fungsi sel
otak residen dan sel-sel imun perifer yang imun4. Mikroba komensal usus, kompartemen
menyusup ke otak pasca-iskemik, dan peran simbiotik yang paling melimpah di dalam tubuh,
mereka dalam kerusakan dan perbaikan telah muncul sebagai pengatur potensial
jaringan, masih belum lengkap3. Sistem populasi limfosit, termasuk T regulator (Treg)
kekebalan perifer, yang melibatkan sel imun dan sel T, yang keduanya terlibat dalam cedera
bawaan dan adaptif, memainkan peran penting iskemik serebral2. cells Sel T, populasi limfosit
dalam patofisiologi stroke dan berkontribusi utama dengan fitur imun bawaan, terletak di
permukaan epitel termasuk usus. Mereka dapat Cidera otak iskemik berkurang pada tikus
memperburuk cedera otak iskemik dengan dengan flora usus yang berubah
mengeluarkan IL-17 dan menghasilkan sinyal
Untuk memodifikasi komposisi mikrobiota usus,
kemotaksis untuk sel-sel myeloid perifer seperti
kami merawat tikus jantan C57BL / 6 selama 2
neutrofil dan monosit. Meskipun penelitian ini
minggu dengan amoksisilin (antibiotik β-laktam)
menunjukkan keterlibatan kausal dari sel T IL-17
dan asam klavulanat (β-laktamase inhibitor)
+ in dalam cedera otak iskemik, asal dan situs
(amoksisilin / klavulanat [AC] flora sensitif atau
aksi mereka belum dijelaskan dengan jelas.
AC Sens; Gambar; 1a dan Gambar Tambahan 1a).
Sementara sel T efektor dapat berkontribusi
Untuk mengendalikan efek antibiotik yang tidak
pada cedera iskemik fokal, sel Treg dapat
tepat sasaran, kami membuat model tikus yang
berkontribusi untuk perlindungan saraf dengan
dapat disimpan di bawah perawatan antibiotik
menurunkan regulasi peradangan post-
tanpa mengubah flora usus. Hal ini dicapai oleh
iskemik8. Treg muncul di jaringan iskemik
tikus percobaan co-housing di bawah perlakuan
setelah fase akut dan memberikan perlindungan
AC dengan tikus seeder, yang membawa
saraf dengan mengeluarkan sitokin anti-
mikroflora usus tahan AC yang secara kualitatif
inflamasi IL-10, sebuah efek yang dianggap
mirip dengan yang ditemukan pada hewan naif
antigen independen9,10. Meskipun memberikan
(Gambar Tambahan 1b). Karena perilaku
efek perlindungan, Treg yang ditransfer secara
coprophagic tikus, flora resisten berhasil
adopsi tidak memasuki parenkim otak pada fase
ditransmisikan ke tikus naif. Dengan demikian,
akut stroke11, menunjukkan bahwa Treg
tikus yang diobati dengan AC bersama dengan
menggunakan efek menguntungkan mereka
hewan pembibit ini memperoleh mikrobiota
dengan memodulasi sistem kekebalan perifer
yang tahan AC (Gambar 1a dan Gambar
daripada bertindak pada jaringan otak secara
Tambahan 1). Pengobatan AC mengurangi
langsung11. Intestinal Treg sangat diperlukan
salinan bakteri tinja selama 3 hari pertama
untuk menjaga lingkungan anti-inflamasi di usus
pengobatan pada tikus AC Sens, tetapi jumlah
dengan menekan diferensiasi sel TH17, dan
bakteri pulih setelahnya mencerminkan
proliferasi sel T. Dalam penelitian ini kami
kolonisasi dengan spesies bakteri yang tidak
meneliti efek dari perubahan flora usus pada
sensitif terhadap AC (Gbr. 1b). Tidak ada
sistem kekebalan tubuh dan hasil setelah
perubahan besar dalam biomassa yang diamati
iskemia serebral.
pada tikus AC Res, menunjukkan transisi mulus
Hasil dari AC sensitif ke flora tahan AC. Analisis
filogenetik 2 minggu setelah dimulainya
pengobatan AC mengungkapkan perubahan ukuran infark (Tabel 1 dan Gambar Tambahan 3).
dalam komposisi mikrobiota usus pada tikus AC Untuk menilai apakah efek perlindungan
Sens dengan pengurangan keseluruhan dalam dysbiosis usus disebabkan oleh perubahan sawar
keragaman alfa bakteri dan perluasan darah-otak (BBB), yang diubah pada tikus bebas
Proteobacteria dan kontraksi Firmicutes dan kuman17, kami menyelidiki permeabilitas BBB.
Bacteroidetes (Gbr. 1c). Tidak ada perbedaan permeabilitas BBB yang
terdeteksi antara AC Res dan AC Sens tikus baik
Volume infark berkurang sebesar 60 ± 6% pada
pada awal atau 6 jam setelah stroke,
tikus yang diobati dengan AC dengan flora
menunjukkan bahwa perubahan dalam
sensitif antibiotik setelah oklusi arteri serebral
integritas BBB tidak memperhitungkan
menengah (MCAO) sementara dibandingkan
perlindungan yang diamati pada tikus AC Sens
dengan tikus yang diobati dengan antibiotik yang
(Tambahan Gambar. 4).
membawa flora resisten (Gambar 1d). Fungsi
sensorimotor lebih baik dipertahankan di AC Untuk menilai apakah efek neuroprotektif ini
Sens daripada di AC Res tikus 3 dan 7 hari pasca- secara langsung dimediasi oleh flora usus,
iskemia (Gambar 1e). Efek perlindungan ini tidak transplantasi tinja tunggal dilakukan,
terbatas pada model khusus dysbiosis ini. mentransfer flora dari tikus AC Res atau AC Sens
Perlindungan juga diamati pada tikus yang ke tikus yang diberi pulsa dengan AC selama 3
diobati dengan vankomisin, antibiotik yang hari (Gbr. 1f). Tikus menjalani MCAO 14 hari
kurang diserap oleh saluran pencernaan, bahkan setelah transplantasi. Volume infark (72 jam
ketika pengobatan dihentikan 3 hari sebelum pasca MCAO) berkurang sebesar 54 ± 8% pada
MCAO untuk menghilangkan kemungkinan efek tikus yang menerima transplantasi tinja dari
sistemik dari pengobatan antibiotik (Tambahan tikus AC Sens dibandingkan dengan tikus dengan
Gambar 2a, b). Perubahan yang diinduksi transplantasi AC Res. Kami mengamati beberapa
vankomisin dalam komposisi flora usus mirip kesamaan dalam komunitas mikroba pada tikus
dengan hewan AC Sens (Tambahan Gambar. 2c), yang diobati dengan antibiotik dan pada tikus
mendukung hipotesis bahwa perubahan flora yang menerima transplantasi tinja. Keragaman
usus menghasilkan neuroproteksi. Berat badan, mikroba berkurang pada tikus yang menerima
suhu rektal, dan aliran darah otak (CBF) intra- transplantasi dari donor AC Sens (Gambar
oklusi tidak berbeda di antara kelompok. Tambahan 5a). Seperti pada tikus yang diobati
Reperfusi CBF sangat bervariasi antar kelompok, dengan antibiotik, Clostridiales dan
tetapi, seperti yang dilaporkan dalam model Bacteroidetes S24-7, kelas bakteri yang dominan
lain15,16, tidak memiliki hubungan dengan pada tikus yang ditransplantasi AC Res, dikurangi
pada tikus yang menerima transplantasi feses AC memproduksi IL-17 di usus, darah, dan organ
Sens (Tambahan Gambar. 5a). Di tempat limfoid sekunder. Analisis aliran cytometric sel-
Proteobacteria, kami mengamati ekspansi sel imun usus mengungkapkan peningkatan CD4
Lachnospiraceae, Verrucomicrobiaceae dan + FoxP3 + Treg dan pengurangan IL-17 + in T
Anaeroplasmataceae. Meskipun terdapat dalam LP usus kecil tikus AC Sens 2 minggu
perbedaan antara tikus yang diobati dengan setelah perawatan dimulai, sementara T-helper
antibiotik dan yang ditransplantasikan, frekuensi memproduksi IL-17 sel (TH17) tidak terpengaruh
relatif dari beberapa keluarga bakteri, termasuk (Gbr. 2a, b). Perubahan serupa diamati pada sel
Verrucomicrobiaceae, Prevotellaceae dan Treg intraepitel tetapi tidak pada sel T-IL-17 +.
Clostridiaceae, diidentifikasi sebagai prediktor Secara independen dari kelompok perlakuan,
volume infark yang baik dalam kedua paradigma frekuensi sel T IL-17 + was lebih rendah di
pengobatan dengan klasifikasi hutan acak limfosit intraepitel (IEL) daripada di LP (Gambar
(Tambahan Gambar hutan 5b). Tambahan 6a, b). Konsisten dengan efek
regional selektif dari mikrobiota yang berubah
Disbiosis mempengaruhi sel Treg dan IL-17 +
pada komposisi sel imun di usus kecil, frekuensi
γδT usus
sel Treg dan IL-17 + γδ T dalam LP usus besar
Selanjutnya, kami berusaha menjelaskan (Gbr. 2b), darah tepi, kelenjar getah bening dan
mekanisme perlindungan yang diberikan oleh limpa tidak berbeda antara kelompok
flora usus yang berubah 2 minggu setelah (Tambahan Gambar. 7). Seperti pada tikus AC
pengobatan AC. Stroke iskemik memiliki Sens, sel-sel T LP IL-17 + γδ usus halus juga
komponen inflamasi yang melibatkan sel-sel berkurang pada tikus yang diobati dengan
imun perifer termasuk limfosit2. Di antaranya, vankomisin (Gambar Tambahan 6c). Untuk
Treg dan IL-17 yang memproduksi γδ T cell (IL-17 menilai saling ketergantungan antara flora usus,
+ γδ T) telah terlibat dalam mekanisme cedera sel-sel kekebalan usus dan volume infark, kami
iskemik6,7,9,18. Lamina propria (LP) intestinal menentukan parameter ini dalam AC Res dan AC
dan epitel mengandung populasi sel T terbesar Sens tikus 1 minggu setelah dimulainya
dalam tubuh, cells sel T khususnya, dan pengobatan antibiotik. Sedangkan komposisi
mikrobiota usus memberikan sinyal yang mikroba berbeda pada 3 hari setelah
beragam untuk menyetel sistem kekebalan pengobatan AC (Gambar Tambahan 8a),
tubuh inang ke fenotipe regulator atau komposisi mikroba usus pada AC Res dan tikus
regulator19,20. Akibatnya, kami meneliti efek AC Sens pada 1 minggu sama dengan yang
dysbiosis usus pada Treg dan sel T yang diamati setelah 2 minggu (Gambar Tambahan
8b), menunjukkan bahwa komunitas mikroba
stabil setelah 1 minggu, meskipun jumlah bakteri
masih bertambah pada tikus AC Sens selama
minggu kedua (Gbr. 1b). Volume infark, LP Treg
dan LP IL-17 + cells sel T tidak terpengaruh pada
1 minggu (Gambar Tambahan 8c, d). Perubahan
sel Treg dan IL-17 + γδ T usus hanya terlihat pada
dua minggu ketika pelindung saraf juga diamati.
IL-17 + γδ Sel T menumpuk di meninges setelah
stroke
Selanjutnya, kami membahas apakah respon
imun setelah stroke diubah pada tikus dengan
dysbiosis usus. Analisis aliran cytometric sel-sel
imun otak mengungkapkan pengurangan
infiltrasi sel-sel yang ditularkan darah (CD45high)
pada 2 dan 3 hari setelah reperfusi pada AC Sens
dibandingkan dengan tikus AC Res (Gambar 3a).
Sementara semua jenis leukosit berkurang,
neutrofil lebih jelas berkurang pada hari ke 2
(Gambar 3a). Karena infiltrasi neutrofil post-
iskemik berkontribusi terhadap cedera otak,
kami berusaha untuk menentukan ekspresi
kemokin yang terlibat dalam perekrutan otak
neutrofil. Kami menemukan bahwa ekspresi
mRNA Cxcl1 dan Cxcl2 berkurang pada otak tikus
AC Sens dibandingkan dengan tikus AC Res 24
jam setelah stroke (Gambar 3b). Sejalan dengan
berkurangnya infiltrasi neutrofil otak, kami
mengamati tren peningkatan jumlah neutrofil
pada meninge mencit AC Sens 48 jam setelah
stroke (Gbr. 3c).
Karena IL-17 adalah penginduksi utama kemokin
Cxcl1 dan Cxcl2, kami memeriksa frekuensi sel-
sel yang memproduksi IL-17 di otak setelah
iskemia. Tikus yang membawa GFP di lokus IL-
17A endogen (IL-17-GFP) dirawat sesuai dengan
AC Res atau protokol AC Sens dan menjalani
operasi palsu atau MCAO. Enam belas jam
kemudian, sebelum infark iskemik sepenuhnya
ditegakkan, otak dan meningus diproses untuk
analisis aliran sitometrik. Hanya beberapa sel T
yang terdeteksi di otak iskemik (data tidak
ditunjukkan) sementara sebagian besar sel T
ditemukan di meninges. Frekuensi meningeal
cells sel T meningkat setelah stroke
dibandingkan dengan tikus sham (Gambar 3d)
dan ekspresi protein IL-17 lebih tinggi pada γδ sel
T tikus AC Res setelah stroke dibandingkan
dengan tikus AC Sens yang tidak berbeda dengan
sham yang dioperasikan. hewan (Gbr. 3d). Kami
juga mengamati Treg di meninges, tetapi jumlah
sel tidak berbeda antara AC Res dan AC Sens
tikus (Tambahan Gambar. 9). Untuk menentukan
lokasi yang tepat dari sel-sel dalam lapisan
meningeal, termasuk dura mater, arachnoid dan
pia mater, kami memeriksa pewarnaan
imunofluoresen pada bagian tengkorak utuh
tikus yang mengekspresikan GFP di bawah
kendali lokus TCRδ endogen. cells Sel T
dilokalisasi ke leptomeninges 16 jam setelah
MCAO (Gambar 3e). Beberapa sel T GFP + were
juga diamati pada pleksus koroid, sebuah titik
masuknya CNS untuk sel T23, sementara
parenkim otak tidak memiliki sel γδ T (data tidak
ditunjukkan).
Sel T usus traffic ke meninges setelah stroke
Selanjutnya kami menilai apakah sel T yang telah
memperoleh fenotip regulator atau efektor
dalam usus dapat berpindah ke kelenjar getah
bening leher rahim (cLN) dan meninges. Studi
terbaru menunjukkan perdagangan dua arah
leukosit antara usus dan organ limfoid
sekunder24. Untuk tujuan ini kami
menggunakan tikus (KikGR33) yang
mengekspresikan protein KikGR yang secara
stabil memfotokopi dari hijau (G) menjadi merah
(R) saat penerangan dengan violet light25. Kami
mengekspos usus kecil distal ke cahaya ungu
melalui laparotomi, yang menghasilkan konversi
KikG menjadi KikR yang efisien pada residen usus
tetapi tidak pada sel imun yang bersirkulasi
(Gambar Tambahan 10). Satu minggu setelah
fotokonversi tikus menjalani MCAO. CLN usus,
dangkal dan dalam, dan sel imun meningeal
dianalisis dengan flow cytometry 16 jam setelah
stroke (Gbr. 4a, b), titik waktu sebelum infiltrasi
leukosit ke otak (Gbr. 3a). Frekuensi sel KikR + T
lebih tinggi pada meninges dibandingkan pada
cLN superfisial dan dalam, menunjukkan sel T
yang diturunkan usus lebih disukai bagi
meninges setelah stroke (Gbr. 4c). Frekuensi sel
KikR + B tidak berbeda di antara jaringan. Seperti
yang diharapkan, frekuensi sel KikR + T tertinggi
di usus (Gambar 4d). Persentase sel KikR + T usus
lebih rendah dari sel KikR + B, menunjukkan
bahwa sel T dapat keluar dari LP usus halus pada
tingkat yang lebih tinggi daripada sel B seperti
yang dilaporkan sebelumnya untuk usus
besar24. Hampir tidak ada perdagangan sel KikR
+ yang diamati pada tikus yang menjalani
laparotomi tanpa paparan sumber cahaya (Gbr.
4e).
Perlindungan saraf setelah dysbiosis
tergantung pada IL-17 dan IL-10
Selanjutnya, kami menguji apakah penekanan
sel-sel kekebalan penghasil IL-17 pada tikus AC
Sens dengan flora usus yang diubah cukup untuk
memberikan perlindungan saraf. IL-17 - / - tikus
menjalani AC Res atau protokol perawatan AC
Sens dan dikenai MCAO 2 minggu kemudian.
Volume infark serupa antara tikus AC Res IL-17 -
/ - dan AC Sens IL-17 - / - yang mendukung peran
penting untuk IL-17 dalam model ini (Gbr. 5a).
Karena data kami menunjukkan bahwa sel Treg
usus kecil meningkat pada tikus AC Sens (Gbr.
2a), kami memeriksa apakah sel Treg terlibat
dalam penekanan sel IL-17 + γδ T dalam model
kami. Karena IL-10 terlibat dalam penghambatan
sel efektor medi T yang dimediasi sel Treg, kami
menggunakan tikus yang kekurangan IL-10.
Perlindungan saraf setelah stroke tidak diamati
pada tikus IL-10 - / - yang dirawat dengan AC
(Gambar 5b) dan frekuensi IL-17 + γδ T dalam LP
usus halus tidak berbeda antar kelompok
(Gambar 5c). Temuan ini mengungkapkan
hubungan antara ekspansi Treg usus dan IL-10
dan pengurangan IL-17 + γδ sel T yang diamati
pada tikus AC Sens.
Pemrograman ulang sel dendritik
mempengaruhi diferensiasi sel T
Untuk mengatasi apakah interaksi sel imun lokal
dimodifikasi oleh dysbiosis usus, kami
memeriksa dampak flora usus pada kapasitas sel
penyaji antigen usus untuk mempromosikan sel
Treg dan IL-17 + differenti diferensiasi sel T in
vitro. Sel dendritik (DC) mempertahankan
homeostasis imun di usus dengan menginduksi
Treg26. Kami menyelidiki apakah mengubah
mikroflora usus berdampak diferensiasi sel T
dengan memodulasi aktivitas DC usus. CD103 +
DC berasal dari lamina propria usus dan
bermigrasi ke LN mesenterika (mLN) di mana
mereka mendorong diferensiasi homing usus
Treg26-28. Konsisten dengan fenotip
tolerogenik, kami menemukan bahwa
persentase CD11c + CD11b + CD103 + DC lebih
tinggi dalam mLN yang diisolasi dari AC Sens
dibandingkan dengan tikus AC Res (Gambar 6a).
Kemudian, kami mengisolasi DC dari mLN pada
AC Res dan AC Sens dan menguji kemampuan
masing-masing untuk menginduksi diferensiasi
sel Treg dan IL-17 + γδ. Dalam kultur bersama
dengan sel T CD4 +, DC dari tikus AC Sens lebih
efisien daripada DC dari tikus AC Res dalam
menginduksi diferensiasi sel Treg (Gambar 6b).
Pada kultur bersama dengan γδ sel T, DC dari
tikus AC Res lebih efektif dalam menginduksi IL-
17 + γδ sel T daripada DC dari tikus AC Sens
(Gambar 6c), menyarankan bakteri komensal
mengubah DC.
IL-10 diperlukan untuk supresi Treg yang
dimediasi IL-17 + γδ T
Selanjutnya kami menguji apakah sel Treg dapat
menekan IL-17 + γδ T diferensiasi in vitro.
Peningkatan jumlah sel Treg, dihasilkan oleh
kultur sel T CD4 + dengan DC yang diisolasi dari
mLN AC Sens atau AC Res mice, dikultur bersama
dengan sel T na naif. Sel Treg dosis-dependen
tertekan IL-17 + differenti T diferensiasi dan sel
Treg dari kultur dengan AC Sens DC lebih efisien
daripada sel Treg yang diperoleh dari kultur
dengan AC Res DCs (Gbr. 6d). Untuk menguji
apakah penindasan dimediasi oleh IL-10, kami
membandingkan sel Treg yang dihasilkan oleh
DC AC Sens co-kultur dengan sel T CD4 + yang
diisolasi dari wild-type (WT) atau tikus IL-10 - / -.
Kekurangan IL-10 mengurangi kapasitas sel Treg
untuk menekan diferensiasi IL-17 + γδ T (Gambar
6d) meskipun jumlah Treg sebanding dengan sel
WT (Gambar 6e).
Pembahasan
Studi kami menggambarkan sumbu mikrobiota-
usus-otak novel yang didasarkan pada priming
bakteri DC usus yang mengarah ke ekspansi Treg
lokal di usus kecil dan penekan sel T efektor IL-
17 +.. Data menunjukkan bahwa sel T efektor lalu
lintas dari usus ke otak, di mana mereka
melokalisasi di leptomeninges dan
meningkatkan peradangan saraf iskemik dengan
mengeluarkan IL-17 yang menghasilkan
peningkatan produksi kemokin di parenkim otak
dan infiltrasi sel imun sitotoksik selanjutnya
termasuk neutrofil (Gambar 5). 6f).
Mengusulkan pencetakan yang tergantung pada
antigen, kami menemukan bahwa DC yang
diisolasi dari mLN tikus AC Sens lebih efisien
dalam menginduksi Treg daripada DC yang
diisolasi dari mLN tikus AC Res. DC dapat
langsung mencicipi konten usus29,30 dan
bermigrasi ke mLN di mana mereka menyajikan
antigen untuk menginduksi polarisasi Treg26.
Konsisten dengan pentingnya mekanisme ini,
kami menemukan bahwa DC dalam mLN dari
tikus AC Sens menunjukkan tingkat CD103 yang
lebih tinggi, sebuah penanda DC26–28 usus
tolerogenik. Dibandingkan dengan induksi Treg,
kemampuan DC dari tikus AC Sens untuk
menekan IL-17 + generation generasi sel T
kurang mengejutkan, menunjukkan bahwa
induksi Treg bisa menjadi mekanisme utama
dimana DC menekan sel IL-17 + γδ T. Dengan
demikian, kami menemukan bahwa Treg yang
dihasilkan dalam kultur bersama dengan AC Sens
DC menghambat diferensiasi IL-17 + γδ T lebih
efisien daripada Treg yang dihasilkan oleh AC Res
DC. Sejalan dengan temuan sebelumnya yang
mengidentifikasi IL-10 sebagai faktor penting
untuk Treg-mediated dari cell penindasan sel T,
kami menemukan bahwa IL-10 - / - Treg yang
dihasilkan oleh kultur bersama dengan AC Sens
DC kurang efisien dalam menekan IL-10. 17+ γδ
T diferensiasi daripada WT Treg. Aktivitas
penekanan Treg tidak sepenuhnya dihapuskan,
menunjukkan bahwa mekanisme lain yang tidak
terpengaruh oleh dysbiosis usus juga berperan.
Ini diharapkan, karena IL-10 hanya salah satu
mekanisme yang memungkinkan Treg menekan
proliferasi sel T31. Menariknya, penurunan
aktivitas supresi pada IL-10 - / - Treg mirip
dengan WT Treg yang berasal dari kultur dengan
AC Res DC, menunjukkan bahwa sebagian besar
efek yang diinduksi oleh dysbiosis pada IL-17 + γδ
T adalah IL-10 tergantung. Dengan demikian,
dysbiosis tidak dapat memberikan perlindungan
saraf pada tikus IL-10 - / -.
Temuan baru dan tak terduga dari penelitian
kami adalah perdagangan sel T usus ke
meninges. Sel T diketahui melakukan patroli
tubuh termasuk otak di mana mereka masuk
melalui pleksus koroid ke dalam cairan
serebrospinal23 dan mungkin mengalir melalui
sistem limfatik meningeal yang baru-baru ini
dijelaskan ke kelenjar getah bening serviks yang
dalam32. Sel-sel T usus telah ditemukan lalu
lintas ke LN ekstra-usus dan limpa24. Namun,
data kami menunjukkan bahwa sel-sel T usus
secara istimewa menumpuk di meninge sebagai
lawan dari LN serviks setelah stroke, mungkin
menunjuk pada perdagangan usus-otak yang
diarahkan. Sedangkan Treg meningkat di usus
kecil tikus dengan dysbiosis, Treg di meninges
tidak meningkat. Sementara bukti untuk efek
perlindungan langsung dari Treg yang terkait
dengan otak tetap kontroversial8, 18,35,36, data
kami menunjukkan bahwa Treg dapat
mempengaruhi hasil stroke secara independen
dari kehadiran mereka di otak, dan melalui
mekanisme usus yang melibatkan IL-17 + γδ
Penindasan sel T. Studi kami juga menunjukkan
bahwa fungsi meninges sebagai penjaga gerbang
dalam peradangan pasca-iskemik. Ini dibuktikan
oleh fakta bahwa γδ sel T tidak masuk ke otak
setelah stroke, tetapi tetap terbatas pada
leptomeninges di mana jumlah mereka
meningkat setelah stroke. Karena sel-sel
inflamasi mungkin memasuki otak yang terluka
melalui ekstravasasi dari pembuluh meningeal
yang dikompromikan37,38, sel-sel T meningeal
IL-17 + γδ akan berada di lokasi yang strategis
untuk mengontrol perdagangan ke parenkim
otak monosit dan neutrofil - populasi leukosit
utama yang ditemukan di otak iskemik. Untuk
mendukung interpretasi ini, kami menemukan
lebih sedikit IL-17 + γδ sel T di meninges setelah
stroke pada tikus dengan dysbiosis usus, yang
dikaitkan dengan berkurangnya ekspresi
chemokine responsif IL-17 di parenkim otak.
Meskipun peran γδ sel T sebagai faktor
penyebab cedera otak iskemik tidak didukung
dalam semua model39, penelitian kami
mengidentifikasi IL-17 + γδ sel T sebagai
kemungkinan sel T efektor yang diatur oleh
dysbiosis usus. Karena kami menemukan
perubahan frekuensi sel Treg dan IL-17 + γδ T di
usus kecil tetapi tidak di usus besar, darah tepi,
limpa dan LN tikus yang diobati AC, perubahan
bakteri yang berada di usus kecil dapat
menjelaskan efek ini. Spesies bakteri yang
bertanggung jawab untuk perubahan kekebalan
usus yang mendasari efek protektif dari dysbiosis
tetap harus diidentifikasi. Pengobatan AC
menghasilkan perubahan besar pada mikrobiota
usus yang ditandai dengan pencabutan
Clostridiaceae dan S24-7 spp., Keluarga besar
Bacteroidetes, dengan ekspansi bersamaan
Proteobacteria. Clostridiaceae dan S24-7
Bacteroidetes juga berkurang pada tikus yang
menerima transplantasi tinja dari donor AC Sens,
meningkatkan kemungkinan bahwa
pengurangan dalam keluarga bakteri ini dapat
terlibat dalam perlindungan saraf. Studi untuk
mengidentifikasi spesies bakteri yang relevan
sedang dilakukan.
Sel IL-17 dan γδ T juga terlibat dalam stroke
manusia. Infiltrasi sel T and dan sekresi IL-17
telah didokumentasikan dalam jaringan otak
manusia iskemik 7,40. IL-17 yang bersirkulasi
meningkat pada pasien stroke41 dan ekspresi IL-
17 pada lesi aterosklerotik dikaitkan dengan
peningkatan kerentanan plak, faktor risiko yang
diketahui untuk stroke emboli42. Mengingat
bahwa beberapa obat anti-IL-17 dalam uji klinis
untuk berbagai gangguan inflamasi
(clinicaltrials.gov), penggunaan obat tersebut
dalam jahitan stroke klinis layak setelah data
farmakokinetik dan keamanan tersedia.
Meskipun belum ada data epidemiologis yang
menghubungkan mikrobiota usus dengan risiko
stroke atau hasil stroke, penyakit radang usus
dan penyakit Crohn, yang telah dikaitkan dengan
flora usus yang berubah dan peningkatan
produksi IL-17 usus19, 43, telah diidentifikasi
sebagai faktor risiko untuk stroke44 , 45,
menunjukkan bahwa mikrobiota-IL-17 + axis
sumbu T-otak yang diidentifikasi dalam
penelitian ini mungkin juga ada pada manusia.

Sebagai kesimpulan, temuan kami memberi

penerangan baru pada mekanisme kekebalan
yang kurang dipahami yang memiliki dampak
luar biasa pada cedera otak, dan memiliki
implikasi yang jauh dan relevan secara translasi
untuk menilai risiko serebrovaskular dan
memprediksi keparahan stroke.