Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV

25-27 Agustus 2019

UJI SITOTOKSISITAS MADU TERHADAP

HUMAN DERMAL FIBROBLAST
Oktaviani Meiliza1), Yoan Rahmah Aprilia2), Nadira3), Yola Astri Arsanti4),
Tria Miraz Chairani5), Restu Syamsul Hadi6)
1
Pendidikan Dokter, Kedokteran Umum, Universitas YARSI
2
Pendidikan Dokter, Kedokteran Umum, Universitas YARSI
3
Pendidikan Dokter, Kedokteran Umum, Universitas YARSI
4
Pendidikan Dokter, Kedokteran Umum, Universitas YARSI
5
Pendidikan Dokter, Kedokteran Umum, Universitas YARSI
6
Bagian Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas YARSI

Email : oktaviani.meiliza@gmail.com

ABSTRACT
Skin is one of the initial protections that exist within the human body. Therefore, the skin damage
causes formation of the wound. The process of wound healing is closely related to the dermis layer as a
part of the skin. Human Dermal Fibroblasts (HDF) cells are fibroblasts cells originated from dermal
which can be cultured. Honey has been frequently used as a traditional medicine in the community, one
of which is used for wound healing. This study is aimed at determining the Cytotoxicity examination of
honey against the HDF. On this experimental study, HDF was seeding at 96 well plate, then examined
citotoxicity of honey to HDF. Based on the results of the research, it can be concluded that the IC50
value of honey against HDF is 4.98% and the toxic levels of honey against the HDF cells is honey with
a dose of 5%, in which due to the dose of 5%, 50% of the cells has died. The effect of honey may
improve the viability dependent on the dose (dose dependent) with a maximum concentration of 1%
honey.

Keywords : Honey, Human Dermal Fibroblasts, Cytotoxicity test, MTT assay

PENDAHULUAN kesatuan/komponen jaringan, dimana secara

Kulit adalah merupakan bagian organ
terbesar dari manusia dan memiliki berbagai
fungsi. Kulit merupakan salah satu proteksi
awal yang ada didalam tubuh manusia. Oleh
karena itu, kerusakan kulit menyebabkan
terbentuknya luka. Luka didefinisikan
sebagai gangguan seluler, anatomi, dan
kontinuitas fungsional dari jaringan hidup.
Luka dapat disebabkan oleh trauma akibat
tekanan fisik, kimia, termal, mikroba, atau
hal lain yang merusak jaringan. Dengan kata
lain luka adalah rusaknya
spesifik terdapat substansi jaringan yang
rusak atau hilang (Shrimanker, et al. 2013).
Kulit terdiri atas epidermis, yaitu
lapisan epitel yang berasal dari ektoderm,
dan dermis, yaitu suatu lapisan jaringan ikat
yang berasal dari mesoderm (Junqueira
2012). Dermis pada kulit memiliki
subpopulasi sel punca. Fibroblas asal dermis
dapat diperoleh, diperbanyak serta dapat
disimpan dengan mudah (Hadi et al, 2014).
Di samping itu, Human Dermal Fibroblast
(HDF) adalah komponen penting dari kulit,

Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast 1

 Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV
25-27 Agustus 2019

sel ini tidak hanya memproduksi dan sebesar 50% dan menunjukkan potensi
mengatur matriks ektraseluler dari dermis ketoksikan suatu senyawa terhadap sel. Akhir
tetapi juga berkomunikasi dengan sel lainnya dari uji sitotoksisitas pada organ target
yang terutama memainkan peran penting memberikan informasi langsung tentang
dalam mengatur fisiologi kulit (Sorrell & perubahan yang terjadi pada fungsi sel secara
Caplan, 2004). spesifik (Djajanegara dan Wahyudi, 2009).
Pada saat ini sudah banyak sekali Dua metode umum yang digunakan
pengobatan herbal yang dikembangkan, salah untuk uji sitotoksik adalah metode
satunya ialah madu. Madu berpotensi sebagai perhitungan langsung (direct counting)
antioksidan, aksi stimulasi dari madu sangat dengan menggunakan biru tripan (trypan
bermanfaat dalam mempercepat proses blue) dan metode MTT assay. Uji MTT
perbaikan kerusakan jaringan. Karena efek assay merupakan salah satu metode yang
yang menguntungkan ini, dilaporkan madu digunakan dalam uji sitotoksik. Metode ini
dapat mencegah infeksi, menghilangkan bau merupakan metode kolorimetrik, dimana
tak sedap, mengurangi peradangan dan nyeri, pereaksi MTT ini merupakan garam
mengurangi edema, dan meningkatkan tetrazolium yang dapat dipecah menjadi
tingkat penyembuhan dengan stimulasi kristal formazan oleh sistem suksinat
angiogenesis, granulasi, dan epitelisasi tetrazolium reduktase yang terdapat dalam
(Anyanechi & Saheeb, 2015). Maka dari itu, jalur respirasi sel pada mitokondria yang
madu perlu dilakukan uji sitotoksisitasnya aktif pada sel yang masih hidup. Kristal
untuk mengetahui seberapa kadar toksik formazan ini memberi warna ungu yang
madu terhadap sel HDF. dapat dibaca absorbansinya dengan
Uji sitotoksik adalah uji toksisitas menggunakan ELISA reader (Junaidi, 2005).
secara in vitro menggunakan kultur sel yang
digunakan untuk mendeteksi adanya aktivitas METODE
antineoplastik dari suatu senyawa.. Sistem ini
Desain Penelitian
merupakan uji kuantitatif dengan cara
Desain penelitian ini dilakukan secara
menetapkan kematian sel (Freshney, 1987).
eksperimental secara in vitro. Penelitian ini
Parameter yang digunakan untuk uji
menggunakan 8 variasi dosis madu yaitu
sitotoksik yaitu nilai IC50.
0,5%, 1%, 2%, 4%, 5%, 10%, 15% dan 20%
Nilai IC50 menunjukkan nilai konsentrasi
yang kemudian diukur dalam 24 jam dengan
yang menghasilkan hambatan proliferasi sel
uji MTT assay.

Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast 3

 Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV
25-27 Agustus 2019

Waktu dan Tempat HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian dilakukan selama lima bulan, A. Hasil Penelitian
dimulai April 2016 hingga Agustus 2016, Pada penelitian ini, variasi dosis
mengambil tempat di laboratorium terpadu madu dengan kontrol serum menunjukan
Universitas YARSI. hasil yang cukup signifikan dibandingan
dengan kontrol non serum. Pada Gambar 1.
Subjek Penelitian terlihat bahwa persentase sel yang hidup
Human Dermal Fibroblast yang berasal dari tertinggi terlihat pada kontrol dengan serum,
biorepository Universitas Yarsi. sedangkan persentase sel yang hidup
terendah terlihat pada perlakuan madu dosis
Prosedur Kerja
20%. Dari hasil penelitian, didapatkan bahwa
Sel HDF yang sudah diberi perlakuan
dosis madu yang paling optimal untuk
diinkubasi selama 24 jam. Selanjutnya
viabilitas sel Human Dermal Fibroblast
medium dibuang dan diganti dengan reagen
(HDF) adalah 1%. Sedangkan pada
MTT masing-masing sebanyak 20µL dan
perlakuan dosis madu 2% dan 4% terjadi
diinkubasi selama 2-4 jam, dengan plate
penurunan viabilitas sel HDF. Dan pada
dibungkus dengan kertas alumunium foil
perlakuan dosis madu 5% terjadi kematian
(tanpa terpapar cahaya) dan diinkubasi pada
sel sebanyak lebih dari 50% dari total sel
suhu ruangan. Setelah itu dilihat adanya
seluruhnya. Hal ini menunjukkan bahwa
kristal formazan yang terbentuk, apabila
semakin tinggi dosis madu (di atas 5%),
sudah terlihat kristal formazan diberi stopper
maka madu menjadi toksik bahkan
berupa DMSO sebanyak 100 µL. Selanjutnya
menyebabkan kematian sel HDF. Pada
plate digoyang/diguncangkan selama 15
penelitian ini menunjukan bahwa serum dan
menit. Setelah itu dibaca menggunakan
madu dengan dosis tertentu dapat
ELISA reader.
meningkatkan viabilitas sel.

Analisis Data
Data dianalisis secara kuantitatif dengan
menghitung nilai IC50 serta dibuat grafik
menggunakan Microsoft Excel.

Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast 2

 Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV
25-27 Agustus 2019

160
140 100
90 y = -10.09x + 100.29
120
80 R² = 0.8123
100
70
80 60
60 50
40
40
30
20 20
0 10
0
0.5 1 2 4 5 10 15 20

Gambar 1. Grafik presentase sel yang hidup Gambar 2. Grafik rumus untuk
pada perlakuan kontrol non serum, kontrol penghitungan Nilai IC50.
serum, perlakuan madu dosis 0,5%, 1%, 2%,
4%, 5%, 10%, 15%, dan 20% dibandingkan
dengan kontrol serum. B. Pembahasan
Kulit terdiri dari dua lapisan:

Pada penelitian ini untuk mengetahui epidermis dan dermis. Epidermis, lapisan

nilai IC50 madu dilakukan dengan luar, terdiri dari berlapis epitel dan

penghitungan rumus Y = - 10,09 x + 100,29 keratinosit. Di bawah epidermis terletak

yang dapat dilihat pada Gambar 4.5. Jika dermis, mengandung populasi heterogen sel,

dimasukkan ke dalam rumus Y = - 10,09 x + termasuk fibroblas dan sel endotel, yang

100,29, dengan Y = 50, maka akan didalamnya terdapat matriks ekstraselular

ditemukan nilai IC50 pada penelitian ini (ECM). Tidak hanya itu saja, kulit adalah

adalah 4,98% yang berarti bahwa dosis madu pertahanan pertama apabila terjadi kerusakan

yang menyebabkan 50% kematian sel adalah jaringan. Terapi menggunakan stem cell

4,98%. Maka dari itu nilai IC50 madu merupakan teknik baru yang dapat membantu

terhadap sel HDF ialah 4,98% dan pada dan meingkatkan penyembuhan luka (Lam,

grafik dapat dijelaskan bahwa pada dosis et al. 2013). Selama tahun terakhir, terdapat

lebih dari 1% sudah dapat menurunkan laporan dari populasi sel induk dewasa yang

perkembangan dan pertumbuhan sel dengan diisolasi dari jaringan ikat pada beberapa

batas dosis maksimum ialah 4%, dan pada bagian tubuh. Salah satunya, laporan

dosis 5% sel mulai mengalami kematian pluripotensi dari dermal fibroblas di mana sel

lebih dari 50 % dari jumlah keseluruhan sel. induk populasi diisolasi dari dermis tikus dan
dibedakan menjadi neuron, glia, sel otot
polos dan adiposit. Beberapa laporan

Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast 2

 Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV
mengkonfirmasi dermal fibroblas sebagai
sumber stem cell/sel punca (Lorenz et al,
2008; Toma et al, 2001). Pada penelitian ini,
peneliti menggunakan sel Human Dermal
Fibroblast dikarenakan sel HDF cukup
mudah didapat. Pada penelitian ini sel HDF
yang didapatkan berasal dari preputium, dan
seperti yang sudah diketahui bahwa sel HDF
dapat dijadikan sumber stem cell.
Berdasarkan hasil dari penelitian ini,
menunjukan bahwa penggunaan serum dapat
meningkatkan viabilitas sel. Sesuai dengan
Gambar 1. menunjukan bahwa pada kontrol
serum memiliki presentase sel hidup yang
lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol non
serum. Hal ini sesuai dengan penelitian yang
dilakukan oleh (Chabaud et.al. 2016) bahwa
serum digunakan sebagai suplemen
pertumbuhan sel dan dapat memicu sel untuk
menghasilkan, mendeposit, dan merakit
matriks ekstraselular yang dibutuhkan dalam
pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel.
Madu sudah dikenal lama sebagai
obat herbal yang dapat dimanfaatkan oleh
masyarakat, di samping itu, para peneliti
telah mengungkapkan bahwa madu dapat
digunakan sebagai antioksidan untuk
melindungi berbagai organ termasuk otak
dan jantung dari kerusakan oksidatif tidak
hanya itu saja, madu berperan dalam
mengurangi kematian sel akibat stres
oksidatif, serta pengurangan apoptosis, selain
Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast
25-27 Agustus 2019
itu madu dapat menghambat kerusakan pada
membran sel dengan menetralisir radikal
bebas (Anarkooli, et al. 2014). Apabila
dikaitkan dengan hasil dari penelitian ini,
bahwa madu dengan dosis yang optimum
dapat meningkatkan viabilitas sel. Hal ini
sesuai dengan Gambar 1. madu dengan dosis
0,5%, 1%, 2%, 4%, 5% menunjukan hasil
presentase sel hidup yang lebih tinggi dari
kontrol non serum.
Madu merupakan produk alami yang
menunjukkan efek berpotensi menghambat
atau menekan pengembangan dan
perkembangan tumor dan kanker. Seperti
antiproliferatif, antitumor, antimetastik dan
antikanker efek yang dimediasi melalui
mekanisme yang beragam, termasuk aktivasi
jalur mitokondria, induksi Permeabilisasi
membran mitokondria, induksi apoptosis,
modulasi stres oksidatif, dan penghambatan
angiogenesis pada sel kanker. Menurut
beberapa penelitian mengatakan bahwa madu
sangat sitotoksik terhadap sel tumor kanker.
Data menunjukkan bahwa madu dapat
menghambat karsinogenesis oleh modulasi
molekul pada tahap proses inisiasi, promosi,
dan tahapan perkembangan. Dengan
demikian, madu dapat berfungsi sebagai
potensi dan agen antikanker. Sementara itu
non-sitotoksik untuk sel-sel normal (Erejuwa,
et al. 2014). Menurut hasil dari penelitian
ini, madu memiliki dosis toksik sebesar
3
 Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV
4,98% terhadap sel HDF. Hal ini sesuai
dengan Gambar 2. bahwa nilai IC50 yang
didapatkan dari rumus rumus Y = - 10,09 x +
100,29, dengan Y = 50 menunjukan bahwa
dosis madu yang menyebabkan 50%
kematian sel adalah 4,98%. Dan pada dosis
lebih dari 1% sudah dapat menurunkan
perkembangan dan pertumbuhan sel dengan
batas dosis maksimum ialah 4%, dan pada
dosis 5% sel mulai mengalami kematian
lebih dari 50 % dari jumlah keseluruhan sel.
Hasil dari nilai IC50 ini sesuai dengan
penelitian yang telah dilakukan oleh
(Portokalakis et al, 2016) bahwa nilai IC50
dari madu ialah 4%-5% pengan paparan
madu 24 jam sampai 72 jam.
Hasil dari penelitian ini menunjukan
bahwa madu dengan dosis tertentu dapat
meningkatkan viabilitas sel. Dosis optimum
yang digunakan ialah madu dengan dosis 1%.
Sedangkan untuk kadar toksis madu terhadap
sel HDF ialah madu dengan dosis 5%,
dikarenakan pada dosis 5% sudah terjadi
kematian sel sebanyak 50%.
KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang dilakukan, dapat
disimpulkan bahwa penggunaan serum dan
madu dengan dosis optimum dapat
meningkatkan viabilitas sel. Madu dengan
dosis 1% merupakan dosis yang optimum
dalam meningkatkan viabilitas sel. Nilai
Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast
25-27 Agustus 2019
IC50 sitotoksisitas madu terhadap sel Human
Dermal Fibroblast (HDF) sebesar 4,98%.
UCAPAN TERIMAKASIH
Pada kesempatan ini, penulis ingin
menyampaikan ungkapan terima kasih
kepada dr. Insan Sosiawan A. Tunru, Ph.D.
selaku Dekan Fakultas Kedokteran
Universitas YARSI, dan dr. Lilian Batubara,
M.Kes. selaku Wakil Dekan II Fakultas
Kedokteran Universitas YARSI.
REFERENSI
Anyanechi, C. & Saheeb, B., 2015. Honey
and wound dehiscence: a study of
surgical wounds in the mandibular bed,
Nigerian Journal Of Clinical Practice,
18, 2, pp. 251-255.
Burlando, B. & Cornara, L., 2013. Honey in
dermatology and skin care: a review,
Journal Of Cosmetic Dermatology, 12,
4, pp. 306-313.
Chabaud, S. et al., 2016. Origin of Serum
Affects Quality of Engineered Tissues
Produced by the Self-Assembly
Approach. , 2016.
Djajanegara, I. and Wahyudi, P., 2009.
Pemakaian Sel Hela dalam Uji
Sitotoksisitas Fraksi Ethanol Biji
Mimba (Azadirachta
indica). Biosfera, 26(2), pp.59-64.
Erejuwa, O, Sulaiman, S, & Wahab, M 2014,
'Effects of honey and its mechanisms
of action on the development and
progression of cancer', Molecules
(Basel, Switzerland), 19, 2, pp. 2497-
2522.
Freshney, R.I. ed., 1986. Animal cell culture:
a practical approach (Vol. 8). Oxford::
IRL press.
2
 Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV
Hadi, R.S., Kusuma, I. & Sandra, Y., 2014.
Allogeneic human dermal fibroblasts
are viable in peripheral blood
mononuclear co-culture. , 33(2), pp.91–
99.
Halim D. 2010 Stem Cell Dasar Teori &
Aplikasi Klinis. Penerbit Erlangga,
Jakarta.
Jafari Anarkooli, I, Barzegar Ganji, H, &
Pourheidar, M 2014, 'The protective
effects of insulin and natural honey
against hippocampal cell death in
streptozotocin-induced diabetic
rats', Journal Of Diabetes Research,
2014, p. 491571.
Junaidi, S., 2005, Isolasi dan Uji
Sitotoksisitas Senyawa Alkaloid dari
Spon Koleksi no MD-02 Cyang,
Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas
Gadjah Mada, Yogyakarta
Junqueira, Luiz C. 2012. Histologi Dasar
Teks & Atlas Ed. 12. Penerbit Buku
Kedokteran EGC, Jakarta.
Khan, S. et al., 2016. Fibroblast growth
factor and vascular endothelial growth
factor play a critical role in
endotheliogenesis from human
adipose-derived stem cells. Journal of
vascular surgery, pp.1–10.
Kim, M. et al., 2014. Comparative study of
various growth factors and cytokines
on type collagen and hyaluronan
production in human dermal
fibroblasts, pp.44–52.
Kirsner, R.S. and Eaglstein, W.H., 1993. The
wound healing process. Dermatologic
clinics, 11(4), pp.629-640.
Lam, M.T., Nauta, A., Meyer, N.P., Wu, J.C.
and Longaker, M.T., 2012. Effective
delivery of stem cells using an
extracellular matrix patch results in
increased cell survival and proliferation
and reduced scarring in skin wound
healing. Tissue Engineering Part
A, 19(5-6), pp.738-747.
Lorenz, K., Sicker, M., Schmelzer, E., Rupf,
T., Salvetter, J., Schulz-Siegmund, M.,
& Bader, A., 2008. Multilineage
Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast
25-27 Agustus 2019
differentiation potential of human
dermal skin-derived fibroblasts,
Experimental Dermatology, 17, 11, pp.
925-932.
Maxson, S., Lopez, E.A., Yoo, D.,
Danilkovitch-Miagkova, A. and
LeRoux, M.A., 2012. Concise review:
role of mesenchymal stem cells in
wound repair. Stem cells translational
medicine, 1(2), pp.142-149.
National Institutes of Health. 2007. Stem cell
Basic. Diunduh dari
http://www.stemcelle.nich.gov/info/bas
ics/PDF. Diakses pada tanggal 26
November 2016.
Palazzo, E., Marconi, A., Truzzi, F.,
Dallaglio, K., Petrachi, T., Humbert, P.,
Schnebert, S., Perrier, E., Dumas, M.,
& Pincelli, C., 2012. Role of
neurotrophins on dermal fibroblast
survival and differentiation, Journal Of
Cellular Physiology, 227, 3, pp. 1017-
1025.
Portokalakis, I., Yusof, H.M., Ghanotakis,
D.F., Nigam, P.S. and Owusu-Apenten,
R., 2016. Manuka Honey-induced
cytotoxicity against MCF7 breast
cancer cells is correlated to total phenol
content and antioxidant power. J. Adv.
Biol. Biotech, 8(2), pp.1-10.
Rembulan, V., 2015. Potency of honey in
treatment of burn wounds. , 4, pp.105–
112.
Shrimanker, M., Patel, N., Modi, H., & Dave,
R. (2013). A Review : Screening
Models for Wound Healing Activity in
Animals, 3(May).
Sorrell, J., & Caplan, A., 2004. Fibroblast
heterogeneity: more than skin deep,
Journal Of Cell Science, 117, Pt 5, pp.
667-675.
Takahashi, K. & Yamanaka, S., 2006.
Induction of pluripotent stem cells
from mouse embryonic and adult
fibroblast cultures by defined factors,
Cell, 126, 4, pp. 663-676.
Toma, J., Akhavan, M., Fernandes, K.,
Barnabé-Heider, F., Sadikot, A.,
3
 Prosiding Seminar Nasional Perhimpunan Biologi Indonesia XXV
25-27 Agustus 2019

Kaplan, D. & Miller, F., 2001. Isolation

of multipotent adult stem cells from the
dermis of mammalian skin, Nature Cell
Biology, 3, 9, pp. 778-784.

Oktaviani Meiliza - Uji Sitotoksisitas Madu Terhadap Human Dermal Fibroblast 2