PANDUAN LABORATORIUM

BLOK 2

ILMU BIOMEDIS I

Fakultas Kedokteran

Universitas Gadjah Mada

Yogyakarta

2011

Blok 2: Ilmu Biomedis I

Laboratorium Pengguna
Edisi Ketiga

Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada, 2011

Dicetak Di Jogyakarta
Pertama Dicetak: Januari 2011
Diterbitkan Oleh Fakultas Kedokteran, Universitas Gadja Mada
Semua Hak Cipta

Publikasi Ini Dilindungi Oleh Hukum Hak Cipta Dan Izin Harus Diperoleh Dari Penerbit Sebelum Setiap Reproduksi Dilaran
g, Penyimpanan Dalam Sistem Pengambilan, Atau Transmisi Dalam Dari Dengan Cara Apapun, Elektronik, Mekanik, Foto
kopi, Atau Juga di Rekaman.
 KATA PENGANTAR

Ilmu biomedis blok II memberikan siswa dengan pengetahuan dasar dan keterampilan untuk memahami struktur norma
l, organisasi, topografi dan mekanisme tubuh manusia, sistem molekul, sel, jaringan dan organ, dan manusia sebagai indi
vidu. dengan pengetahuan dan keterampilan, siswa diharapkan untuk memahami dasar biologis masalah klinis dan peng
obatan yang akan dibahas dalam tahun kemudian

selama blok, siswa harus berpartisipasi dalam sesi praktis antara lain anatomi, histologi, biokimia dan fisiologi latihan unt
uk meningkatkan pemahaman mereka tentang konsep-konsep yang dibahas

sebagai aturan umum sesi praktis, siswa harus mengenakan pakaian yang tepat dan sepatu (siswa tidak diperbolehkan u
ntuk memakai sandal). selama pekerjaan laboratorium, siswa tidak diperbolehkan untuk meninggalkan laboratorium tan
pa izin dari instruktur. siswa harus mematuhi semua aturan selama sesi laboratorium, pelanggaran akan dihukum.

koordinator
 PERATURAN UMUM

DALAM KELAS LABORATORIUM

kehadiran

1. Mahasiswa wajib hadir tepat waktu dan mengikuti semua kegiatan praktikum yang di jadwalkan
oleh blok;
2. Mahasiswa yang terlambat lebih dari 15 menit, tidak di perbolehkan mengikuti praktikum pada
sesi tersebut. Untuk mengikuti topik praktikum yang sama di kelompok lain, mahasiswa harus
mendapatkan ijin dari penanggung jawab praktikum yang bersangkutan;
3. Mahasiswa yang tidak hadir pada sesi praktikum yang di jadwalkan harus meminta ijin
sebelumnya atau 48 jam setelahnya. Tanpa ada permintaan ijin maka ijin ketidakhadirannya tidak akan
dipertimbangkan. Keterlambatan permintaan ijin tidak akan diproses.
4. Mahasiswa yang ijin wajib meminta praktikum pengganti kepada penanggungjawab praktikum
di bagian yang bersangkutan;
5. Selama praktikum mahasiswa tidak diperbolehkan meninggalkan ruang praktikum tanpa seijin
instruktur.

Selama mengikuti kegiatan praktikum mahasiswa diwajibkan mengikuti hal – hal sebagai berikut :

1. Berpakaian rapi, bersih dan sopan, memakai jas praktikum, dan bersepatu;
2. Tidak diperbolehkan makan, minum maupun merokok didalam ruang praktikum;
3. Mematikan ponsel selama kegiatan praktikum berlangsung;
4. Bersedia menjadi probandus yang diperlukan. Apabila dalam satu kelompok tidak ada yang
bersedia, maka kelompok yang bersangkutan tidak boleh mengikuti praktikum;
5. Tidak boleh melakukan aktivitas yang menggangu jalannya praktikum.

Penilaian

1. Nilai praktikum terdiri atas semua komponen praktikum dari masing – masing bagian.
2. Nilai praktikum hanya akan diperoleh apabila mahasiswa telah memenuhi beberap ketentuan
berikut:
a. Mengikuti semua topik praktikum dengan lengkap
b. Mengumpulkan semua laporan/tugas prkatikum sesuai jadwal yang telah ditentukan
c. Menyelesaikan persyaratan administrasi bagian.
3. Nilai akhir blokhanya akan diumumkan bagi mahasiswa yang telah melengkapi seluruh kegiatan
belajar-mengajar termaksud praktikum
4. Mahasiswa yang terlambat mengikuti pre-tes akan mendapatkan nilai 0 untuk pre-ters pada
topik praktikum tersebut.

DAFTAR ISI
Kata pengantar..................................................................................................................................... 3
Umum Laboratorium Kelas Aturan...................................................................................................... 4

Biokimia
1. Protein............................................................................................................................................. 7
a. Reaksi Warna Protein...................................................................................................................... 7
b. curah hujan reaksi dan koagulasi protein....................................................................................... 9
2. Lemak.............................................................................................................................................. 11
Eksperimen Lipid................................................................................................................................. 15
3. Eksperimen Dengan Karbohidrat I.................................................................................................. 22
4. Eksperimen Dengan Karbohidrat II................................................................................................. 24
5. Penentuan Besi Serum.................................................................................................................... 26
6. Isolasi DNA (Deoxyribo Nucleic Acid).............................................................................................. 28

Histologi
1. Organel........................................................................................................................................... 34
2. Inclusiones..................................................................................................................................... 35
3. Fagosit Dan Metchromation.......................................................................................................... 36
4. Mytosis Dan Kromosom................................................................................................................ 37
5. Dokumentasi Sesi Kelas Laboratorium.......................................................................................... 38

Mikrobiologi
Mikroskopis Pemeriksaan Bakteri Gram Berwarna........................................................................... 46

BLOK 2

BIOKIMIA
PROTEIN
 Protein merupakan polimer dari acindes amino, menggabungkan satu sama lain dengan pertalian peptida. Asam
amino adalah blok bangunan protein. hanya ada dua puluh macam asam amino: glisin, alanin, valin, leusin, isole
usin, serin, treonin, tirosin, fenilalanin, triptofan, penerimaan, aspartat, asam glutamat, lisin, arginin, histidin, sis
tein, metionin, asparagines, prolin, dan hydroxyproline.

WARNA UNTUK REAKSI PROTEIN

1. Uji biuret
Untuk 3 ml larutan protein dalam tabung reaksi tambahkan 1 ml dari 40 persen natrium hidroksida solitiun, aduk
, dan menambahkan 0,5 persen larutan tembaga sulfat dengan mampir tetes beween pencampuran. Aduk samp
ai menghasilkan warna keunguan - ungu [jika sulfat tembaga terlalu banyak ditambahkan warna violet mungkin
tidak jelas oleh precipipate biru hidroksida tembaga terbentuk]. Warna tergantung pada sifat protein, proteose
dan peptones memberikan merah muda, sedangkan gelatin memberikan warna biru

Tes biuret positif untuk peptida terkait. tes biuret positif untuk zat berisi dua carbamyl (-CONH2) kelompok berg
abung bersama-sama baik secara langsung atau meskipun atom tunggal nitrogen atau karbon. Zat serupa yang b
erisi, di tempat CONH2-kelompok,-CSNH2,-C (NH) NH2, Atau CH2NH2, juga respon terhadap tes. Setiap zat yang
nonprotein dalam ciri tetapi berisi kelompok yang diperlukan akan menanggapi uji biuret. Contoh zat tersebut

2. Millon-Nesse reaksi
Tambahkan 2 ml larutan encer protein dalam tabung reaksi, kemudian tambahkan 1 ml reagen sulfat merkuri (1% dari H
gSO4 Dalam asam sulfat). Panaskan tabung sampai kehendak endapan kuning terjadi, dingin isi dengan air keran selama
5 sampai 10 menit. Tambahkan 1 ml NaNO2 1%. Panas lagi: munculnya warna merah tua menunjukkan tirosin atau lain 3
,5-tersubstitusi fenol.

3. Hopkins-cole reaksi
Tambahkan 1ml larutan protein encer dan 1 tetes larutan formaldehida encer dalam tabung reaksi dan aduk rata. Tamba
hkan 1 tetes reagen sulfat dan merkuri aduk rata. miringkan tabung dan masukkan 1 ml asam sulfat pekat murni mengal
ir perlahan meskipun dinding tabung, sehingga membentuk lapisan tertentu asam bawah campuran protein. Ketika steat
ified saya dengan cara ini kemerahan-ungu bentuk warna pada zona kontak dari dua cairan. Jika dua warna tidak muncu
l setelah berdiri selama beberapa menit, tabung dapat bergoyang perlahan menyebabkan pencampuran sedikit engkau l
arut dan menyebar warna violet Sabbatarian larutan. Warnanya karena adanya kelompok triptofan. Gelatin tidak respon
terhadap tes ini. Nitrat (NaNO3 dan KNO3), Klorat, nitrit, atau kelebihan choloride mencegah reaksi, namun jejak temba
ga sulfat, akan meningkatkan sensitivitas.

4. reaksi Xanthoprotein
Tambahkan 3 ml larutan protein encer dalam tabung reaksi, kemudian tambahkan 1 ml asam nitrat pekat. Menetaskan t
abung dalam bak air mendidih. Sebuah bentuk endapan sementara, yang setelah tabung di bawah air keran. Bagilah isin
ya ke tabung 2. Untuk tabung saya menambahkan amonium hidroksida atau natrium hidroksida berlebihan. Perhatikan
bahwa memperdalam warna kuning menjadi oranye. jangan menambahkan amonium hidroksida ke tabung 2. Apa yang
 terjadi dalam dua tabung?
Reaksi ini disebabkan oleh kehadiran kelompok-fenil C2H5in dalam molekul protein, dengan mana asam nitrat membent
uk modifikasi tertentu nitro. Kompleks tertentu dari protein yang penting khusus dalam hubungan ini adalah mereka dar
i thyrosine dan trytophane. Phenilalanin tidak merespon tes ini. Tes ini tidak cocok untuk digunakan dalam pemeriksaan
urin karena warna dari reaksi akhir.

5. uji Sulphur
Untuk 1 ml larutan protein encer (serum darah) dalam tabung tes tambahkan 1 ml dari 40 persen natrium hidroksida. Pa
naskan selama 1 menit untuk mengubah organik-anorganik sulfur belerang ke (natrium sulfida). Tambahkan satu tetes ti
mbal asetat sampai timbal-sulfat diproduksi dalam coklat sampai hitam. Reaksi ini positif untuk keberadaan sulfur dalam
asam amino dalam molekul protein.

6. reaksi Ninhidrin (reaksi hidrat triketohydrindene)

Untuk 5 ml larutan protein encer, yang harus sekitar netral dalam reaksi, tambahkan 0,5 ml dari 0,1 persen solusi hidrat
triketohydrindene. Panas sampai mendidih selama satu sampai dua menit, dan biarkan dingin. Sebuah warna biru berke
mbang jika tes positif.
Tes ini memberikan hasil positif dengan protein, peptones, peptida, dan asam amino, yang memiliki sebuah gugus karbo
ksil dan alfa-amino bebas. Dalam konsentrasi 1 persen garam amonium dari asam lemah bereaksi positif, seperti halnya
garam amonium dari asam kuat dalam konsentrasi yang sangat tinggi. Amina tertentu juga memberi reaksi ini.

REAKSI PENGENDAPAN DAN KOAGULASI PROTEIN.

Protein yang diendapkan dari larutan oleh garam dari logam berat (e.g.HgCL2,AgNO3,CUSO4,Pb(C3H3O2)O2.dl
l),oleh beberapa asam tertentu yang disebut ”reagen alkalid”
(asam picric,asam phosphotungstic,asam tannic,asam metaphosphoric,dll)oleh larutan terkonsentrasi garam s
eperti ammonium sulfat,natrium sulfat,dan natrium klorida,etil dan metal alcohol.
1. pengendapan dengan garam metalik
Siapkan enam tabung,masing-masing berisi 2 ml dari larutan protein.untuk tabung satu,tambahkan sat
u tetes seng sulfat encer,untuk tabung dua tambahkan satu tetes dari garam besi,untuk tabung tiga tambahka
n satu tetes garam tembaga encer,untuk tabung empat tambahkan satu tetes larutan garam merkuri,untuk ta
bung lima tambahkan satu tetes garam timbal encer,dan untuk tabung enam tambahkan satu tetes garam per
ak.terjadinya pengendapan.kemudian tabung dibagi masing-masing menjadi dua tabung.kesalah satu tabung,t
ambahkan larutan garam encer yang berlebih.
Catat dan gambarkan ap yang terjadi.
Catatan:
- mengapa albumin telur digunakan sebagai penangkal untuk timbale atau mrkuri poisoning?
- merupakan suatu penawar sama baik untuk garam logam lainnya di uji?

2. pengendapan dengan reagen alkaloid

Mempersiapkan masing-masing berisi 3 tabung larutan protein encer
a. tempatkan 2 ml larutan protein encer ke dalam tabung 1,tambahkan 1-2 tetes larutan asam 20% sulfos
alisilic.catat apa yang terjadi
b. tempatkan 1 ml larutan protein encer ke dalam tabung 2.tambahkan 2 ml reagen esbach(asam+picric a
 sam sulfat)catat apa yang terjadi
c. tempatka 10 tetes sebesar 5% dari kalium ferrocyanide dan 5 tetes asan asetat glacial ke dalam tabung
3 dan campur secara menyeluruh tambahkan 1 tetes larutan ini menjadi 2 ml larutan protein catat seti
ap perubahan mungkin terjadi kemudian panaskan.catat apa yang terjadi.
Catatan:
Tes biasanya digunakan untuk mengindikasi adanya albumin dalam urin
3. pengendapan dengan garam dan konsentrasi alcohol
a. masukkan 5 ml larutan protein encer dalam tabung ,tambahkan kelebihan padat ammonium sulfat dan
aduk sampai larutan jenuh dengan garam.pengendapan akan terjadi.larutkan dengan aquades .catat y
ang terjadi.
b. tempatkan 2 ml alcohol terkonsentrasi ditabung dan tambahkan 1-2 tetes larutan konsentrasi protein (
serum darah).pengendapan putih tebal akan terjadi,larutkan dengan aquades,apa yang terjadi?semua
protein kecuali pepton yang dipicu oleh larutan jenuh dengan ammonium sulfat,globulin sebagian besa
r dipicu oleh setengah jenuh dengan sulfat ammonium atau jenuh dengan natrium klorida.jika larutan
natrium klorida jenuh kemudian diasamkan,semua protein kecuali pepton adalah mengendap mungkin
sabun asin-dalam cara yang sama.
4. pengendapan albumin dan globulin
a. tambahkan 2 ml serum darah encer dan 1 tetes asam sulfosalycilic dalam tabung tes.pengendapan war
na putih akan terjadi(albumin dan globulin)
b. koagulasi protein
tambahkan 2 ml serum darah encer dalm tabung reaksi,kemudian tambahkan 1 tetes indicator merah f
enol-klor,larutan akan menjadi merah muda,tambahkan20% asam asetat dengan hati-hati kedalam lar
utan ini sampai warna merah muda menghilang,saat ini tidak akan terjadi turbidnes.pemanasan akan
menyebabkan koagulasi .dinginkan dan tambahkan larutan asam encer,catat apa yang terjadi.
5. pengaruh asam asetat
a. tambahkan 3 ml asam nitrat pekat kedalam tabung reaksi,dan tambahkan larutan protein perlahan den
gan pipet,cairan yang memungkinkan untuk mengalir turunmelalui dinding tabung dan membentuk sua
tu lapisan atas asam nitrat.catat tampilan protein presipitat pada zona kontak antara dua cairan.sekara
ng campuran isi tabung secara menyeluruh dgn sangat hati-hati protein diendapkan oleh asam nitrat p
ekat adalah? Ulangi percobaan di atas menggunakan asam sulfat pekat,asam klorida pekat,asam asetat
,dan natrium hidroksida pekat.
Bagaimana berbagai reagen ini berbeda dengan tindakan mereka pada protein?memungkinkan tabung
untuk berdiri semalam atau lebih catat perubahan selanjutnya.
Pembentukan endapan protein oleh larutan lapisan atas asam nitrat seperti di jelaskan diatas sering dig
unakan sebagai tes untuk protein dalam urin dan cairan lainnya(uji heller)
b. tambahkan 5 ml larutan protein 2 tetes dari 1N asam asetat memanaskan tabung dalam air mendidih s
elama 5 menit.menyelesaikan presipitat dalam air adalah? Tes ini pengendapan dengan reagen milon-n
asse tampilan pada endapan tampilan merah atau larutan kemerahan menunjukkan terjadinya kelomp
ok hidroksi-fenil(firosin)dalam protein.
6. pengaruh formal dehida menjadi asam amino
Siapkan 2 tabung.untuk tabung II tempat 1ml larutan asam amino.untuk masing-masing tabung tamba
hkan 1 tetes larutan indikator phthalein fenol(PP) lalu masing-masing tabung yang dinetralkan dengan
 10% natrium hidroksida sampai larutan berubah warna merah muda tepat kemudian 2 larutan di camp
ur.catat apa yang akan terjadi dan bagaimana?
7. munculnya gas nitrogen
Tambahkan 1 ml larutan asam amino dan tambahkan beberapa tetes larutan natrium hypobromine seg
ar dalam tabung dan gas campuran thoroughly larutan akan meninggalkan nitrogen,mengapa?
Catatan :
Reaksi ini juga positif untuk ureum dan garam amonium

LIPIDS

Lipid diet konstituen penting tidak hanya karena nilai energi tinggi, tetapi juga karena vitamin yang laru
t dalam lemak dan asam lemak esensial yang terkandung dalam lemak dari makanan alami.
Istilah lipid diterapkan ke kelompok zat alami ditandai dengan tidak dapat terpecah di dalam air dan d
aya larut dalam lemak seperti pelarut sebagai eter, kloroform, alkohol mendidih, dan benzena. Lipid terbatas p
ada zat yang dapat dipakai oleh organisme hewan. Setiap anggota kelompok ini menunjukkan setiap variasi ya
ng besar dalam kelarutan, tetapi sebagai kelas lipid dapat segera dibedakan dari karbohidrat dan protein, dua l
ainnya kelompok senyawa yang terjadi secara alami.
Kimia, lipid dapat berupa ester asam lemak atau zat yang mampu membentuk ester tersebut. Lipid san
gat luas di alam, yang dapat ditemukan di semua sayuran dan hewan. Beberapa anggota kelompok ini, seperti
phosphatides dan sterol, ditemukan di semua sel hidup di mana, dengan protein dan karbohidrat, lipid merupa
kan bagian penting dari kompleks koloid protoplasma. Lipid kompleks juga ditemukan dalam jumlah besar di o
tak dan jaringan saraf otak, mengindikasikan peran penting zat ini dalam organisme hidup. Mereka timbul dari
lipid yang tertelan dan dari metabolisme karbohidrat dan protein, dan disimpan dalam penyimpanan lemak, se
perti di jaringan ikat bawah kulit, jaringan ikat intermuskularis, omentum, depot lemak perirenal, dan lemak ke
lamin.
Kombinasi lemak dan protein (lipoprotein) yang penting konstituen seluler, terjadi baik di dalam selapu
t sel dan mitichondria di dalam sitoplasma, serta sebagai sarana transportasi lipid di dalam darah. Pengetahua
n tentang biokimia lipid adalah penting dalam pemahaman dibanyak bidang biomedis saat bunga, misalnya, ke
gemukan, aterosklerosis, dan berperan pada berbagai asam lemak tak jenuh ganda dalam gizi dan kesehatan.

KLASIFIKASI
Lipid Sederhana
Lipid sederhana adalah ester asam lemak dengan alkohol tertentu. Lipid sederhana biasanya lebih diklasifikasa
ikan menurut sifat alkohol, sebagai berikut:
1. Lemak dan minyak. Ester dari asam lemak dan gliserol. Minyak adalah lemak cair pada suhu
kamar.
2. Ester asam lemak dengan alkohol rantai panjang alifatik atau siklik. Ini dapat di bagi menjadi:
(1)Waxes murni. (2) Ester kolesterol. (3) Vitamin A dan Karotenol esternya. (4) Vitamin D ester.

Lipid Turunan
Lipid turunan adalah zat yang terbentuk pada hidrolisis lipid sederhana atau senyawa yang masih mempertaha
nkan kandungan lipidnya. Berikut zat-zat yang termasuk:
1. Asam lemak. Asam jenuh dan asam tak jenuh.
2. Alkohol. Senyawa berat dari molekul tinggi tapi bukan gliserol. Dapat diklasifikasikan menjadi:
a. alkohol alifatik seperti setil, starly, dan myricyl.
b. sterol yang berisi inti fenantren (kolesterol, ergosterol, sitosterol, stigmasterol).
c. alkohol mengandung cincin β-lonone.
3. Hidrokarbon. Senyawa tidak memiliki karboksil atau kelompok alkohol, dan yang tidak dapat
saponified.
d. hidrokarbon alifatik.
e. karotenoid.
f. squalene.
4. Vitamin D
5. Vitamin E
6. Vitamin K
ASAM LEMAK JENUH (CnH2nO2 or CnH2n+1COOH)
Sifat fisik asam lemak jenuh bergantung pada berat molekul mereka. Asam lemak yang mengandung atom kar
bon sepuluh atau kurang dalam molekul asam lemaknya berbentuk cairan pada suhu kamar, sisanya titik leleh
padatan meningkat dengan meningkatnya berat molekul. Asam cair juga dikenal sebagai asam lemak volatil, k
arena mungkin disuling dengan uap, sedangkan, asam-asam nonvolatil, yang dibawa oleh destilasi uap hanya d
alam bekas atau tidak ada sama sekali. Asam lemak dengan empat atom karbon atau lebih sedikit miscible den
gan air di semua proporsi. Sebagai panjang rantai karbon meningkat di luar ini, tetapi, kelarutan berkurang de
ngan cepat ke nol. Rantai lurus biasa asam lemak jenuh ditemukan di alam sebagai konstituen molekul lipid ter
cantum dalam tabel berikut.

ASAM LEMAK TAK JENUH

Asam lemak tak jenuh yang ditandai oleh adanya satu atau lebih ikatan ganda dalam molekul. Karena a
danya ikatan rangkap asam lemak tak jenuh jauh lebih reaktif daripada asam lemak jenuh, reaktivitas peningka
tan dengan meningkatnya jumlah ikatan rangkap. Asam lemak tak jenuh mampu mengambil satu molekul air,
oksigen, hidrogen, bromin, atau iodine pada setiap ikatan rangkap, dan jumlahnya, zat tersebut (misalnya, yod
ium) diserap oleh berat tertentu asam di digunakan untuk menentukan yang tingkat jenuh. Sudah jelas bahwa
berbagai Isomerisme mungkin antara asam lemak tak jenuh, tidak tergantung hanya pada posisi ikatan ganda
dalam rantai, tetapi juga pada Isomerisme cis-trans di ikatan ganda. Relatif sedikit dari jumlah besar kemungki
nan isomer asam lemak tak jenuh yang ditemukan di alam.

Tabel asam lemak jenuh

Nama kimia nama umum Struktur terjadinya

Butirat Butanoat CH3(CH2)2COOH lemak Butter
Kaprat Hexanoic CH3(CH2)4COOH Butter lemak, minyak k
elapa
 capdecarylic Oktanoat CH3(CH2)6COOH Butter lemak, minyak k
elapa
Kaprat Dekanoat CH3(CH2)8COOH Butter lemak, minyak k
elapa
Lauric Dodecanoic CH3(CH2)10COOH Laurel karnel oil, minya
k mentega, minyak kel
apa
miristat Tetradecanoic CH3(CH2)12COOH Pala lemak, minyak me
ntega, lemak nabati
Palmitat heksadekanoat CH3(CH2)14COOH Sebagian besar sayura
n dan lemak hewani
strearic Octadecanoic CH3(CH2)16COOH Sebagian besar sayura
n dan lemak hewani

Arachidic Eicosanoic CH3(CH2)18COOH minyak kacang

behenic Docosanioc CH3(CH2)20COOH minyak rapeseed, kaca
ng
lignoceric Tetracosanoicid CH3(CH2)22COOH Cerebrosides, sphingo
myelin, minyak kacang

Karakteristik kimia lemak theres perwakilan rantai lurus jenuh

Nama umum Rumus empiris Nama dari ikatan gand Nama kimia
a
Asam oleat C18H34O2 1 9-Octadecenoic
Linoleic acid C18H32O2 2 9,12-octadecenoic
Linolenat C18H30O2 3 9,12,15-octadecenoic
Asam arakidonat C20H32O2 4 5,8,11,14-eicosatetrae
noic

CABANG-RANTAI DAN ASAM SIKLIK

Dalam penjumlahan untuk rantai lurus-asam lemak sejauh dijelaskan, sejumlah asam lemak rantai bercabang da
n siklik, baik jenuh dan tidak jenuh, telah diisolasi dari sumber alami. Tuberculostearic acid (10-methylstearic aci
d), yang bercabang alkohol rantai C26 asam yang mungkin 3, 13, 19 asam-trimethyltricosanoic, meskipun strukt
ur ini telah diperdebatkan. Yang terakhir ini tampaknya terkait dengan beberapa ia manifersations klinis tuberku
losis. Sangat menarik untuk dicatat bahwa ini dan asam lemak lainnya yang ditemukan dalam lilin tuberkulum se
bagai ester dari trehalosa disakarida. Dalam minyak choulmoogra asam asam lemak tak jenuh dan asam siklik ah
oulmoogric hydnocarpic ditemukan asam atau turunannya telah digunakan dalam pengobatan kusta.
rantai Branc dan asam lemak siklik.
Lemak. Lemak adalah ester asam lemak netral glycerolnd. Contohnya adalah tristearin, disintesis dalam jaringan
hidup dari satu molekul gliserol dan tiga molekul asam stearic:

titik leleh
Tristearin, misalnya, mencair mengandung asam lemak jenuh, kenaikan berat molekul dari hasil komponen asam
Alkohol + asam lemak → lemak
lemak dalam titik melthing tinggi, perubahan dari jenuh ke asam lemak tak jenuh biasanya menurunkan titik me
lthing.
Tengik
Ketika lemak diperbolehkan untuk berdiri untuk jangka waktu yang cukup adalah kontak dengan udara dan kele
mbaban, khususnya dalam keadaan terang dan panas, perubahan tertentu terjadi dan menjadi tengik. Tiga jenis
tengik telah dijelaskan yaitu, oxidatve, ketonic, dan hidrolisis. Yang pertama adalah yang paling penting dalam p
embusukan lemak. Lemak tengik yang enak dan tampaknya sedikit beracun untuk beberapa individu dan merusa
k faktor-faktor lain dalam makanan seperti karoten dan vitamin A-8 dan E9 vitamin.
Emulsi
Ketika minyak atau lemak cair terguncang dengan air, menjadi halus devided dan didispersikan dalam air untuk
membentuk apa yang dikenal sebagai emulsi. Emulsifikasi dengan air saja tentu tidak efisien dan transsitory. De
ngan adanya bahan pengemulsi dispersi gelembung-gelembung lemak yang lebih lengkap dan karenanya lebih p
ermanen. Di antara bahan pengemulsi penting adalah sabun, protein, garam empedu.
Penyabunan
C3H5(OOCC5H13) + 3NaOH →C3H5(OH)3 + 3C15H31COONa
Tripalmitin glycerol sodium palmitate
Pembentukan akrolein.
gliserol lemak mengalami dehidrasi dan aldehida akrilik atau akrolein diproduksi. Ini reaksi yang berlangsung:

CH2OH C HO

CHOH→ CH + 2H2O

CH2OH CH2
Glycerol acroline

PENELITIAN TENTANG LIPID

 Penelitian 1 (Larutan Lemak dan Emulsi)

Menambahkan 2 ml dari khloroform (obat bius), eter, air 1%, kelarutan minyak kelapa atau mencairkan
larutan empedu ke dalam 5 pipa yang berbeda. Menambahkan tetesan air dari minyak buah kelapa ke
dalam setiap pipa-pipa itu. Tutup pipa-pipa itu dengan ibu jarimu, kemudian menggelengkannya secara
keras dan melipat apa yang akan terjadi setelah 5 menit.

 Penelitian 2 Perubahan asam yang berlemak (Percobaan Absorpsi Yodium)

Menambahkan 10 ml dari khloroform dalam sebuah percobaan pipa, kemudian menambahkan 10 tete
san air dari larutan asam amino yodium. Warnanya berubah dari campuran itu menjadi warna merah m
uda karena bebas dari yodium. Dibagi larutan-larutan itu kedalam 4 percobaan pipa. Ditambahkan min
 yak buah kelapa, minyak kacang tanah, minyak bijan dan hewan yang berlemak untuk setiap pipa tetes
an air dari butiran air lainnya dan menggelengkan pipa-pipa tersebut. Apa yang diakibatkan? Perbandin
gan derajat terlihat dari suhu yang terjadi antara minyak-minyak itu dan lemak.

 Penelitian 3 Bentuk Acroline

Menambahkan 3 tetes air dari gliserol kedalam pipa I, menambahkan 3 tetes air dari minyak kedalam p
ipa II. Menambahkan secara kira-kira 1 cm kaca Kristal dari KHSO4 kedalam setiap pipa-pipa itu, dan suh
unya panas, dilakukan secara berhati-hati. Prosesnya itu, baunya mengganggu dari acroline yang berea
ksi, perbandingan baunya berasal dari pipa yang pertama dan yang kedua apakah resep dari acroline it
u, dan apakah kegunaan dari KHSO4?

 Penelitian 4 : Percobaan Zat Lemak (Tempat dari Penelitian Tidak Disekitar Api)
Menambahkan sejumlah kecil dari bahan zat cair atau zat padat dalam sebuah percobaan pipa. Menam
bahkan 4 ml dari eter dan menggelengkannya secara kuat. Selanjutnya lapisan eter itu berpisah dari ba
hannya. Lapisan eter itu mengalir ke dalam sebuah mangkuk Porselin dan selanjutnya eter itu menguap
. Senyawa tersebut lepas dari mangkuk porselin dengan berbentuk kepingan dan digunakan dalam hasil
laporan. Catatan dari pertunjukkan itu menjelaskan nilai yang berhubungan dengan lemak.

 Penelitian 5 : (Kristal Kolestrol)

Menegaskan sedikit kecil bahwa kolestrol dalam 2 ml berasal dari alkohol panas. Selanjutnya dinginnya
diturunkan untuk menguj dan menarik Kristal-kristal itu dibawah sebuah mikroskop. Apa itu steroid? D
an apa itu sterol?

 Penelitian 6 : Percobaan H2SO4 (Asam Salkowski)

Melarutkan sedikit Kristal-kristal kolestrol dalam 2 ml khloroform dan menambahkan dengan volume y
ang sama dari asam sulfur. Perubahan warna bergerak cepat dari kebiru-biruan-merah ke cherry-mera
h dan warna ungu adalah zat dalam khloroform itu saat asam tersebut reaktif berarti hijau.

KARBOHIDRAT

Karbohidrat merupakan penjelasan dari polihidroksi aldehid atau keton atau zat hasil persenyawaan dalam hid
rolisis. Senyawa-senyawa tersebut secara garis besar disalurkan kedalam tumbuh-tumbuhan dan hewan-hewa
n. Dalam tumbuhan, glukosa merupakan buatan dari karbondioksida (Co 2) dan air dari Fotosintesis dan maltos
a sebagai zat tepung atau zat yang mengubah ke selulosa dari tumbuhan yan sistematis. Dalam hewan, karboh
idat pada saat ini sebagai glukosa dan glikogen yang mana merupakan sumber utama dari energi. Karbohidrat-
karbohidrat tersebut memainkan peranan khusus sesuai bidangnya masing-masing, seperti memasukkan ribos
a dalam nukleotida, galaktosa dalam lipid-lipid tertentu dan laktosa sebagai komponen utama dari susu. Karbo
hidrat menurut jenisnya, dibagi sebagai berikut :

1) Monosakarida merupakan karbohidrat yang tidak dapat dihidrolisis ke dalam bentuk

karbohidrat tenpa melepaskan gula yang berlebihan.
2) Disakarida menghasilkan dua molekul dari monosakarida ketika dihidrolisis
3) Oligosakarida menghasilkan tiga untuk sepuluh molekul dari monosakarida ketika hidrolisis
 4) Polisakarida menghasilkan lebih dari sepuluh molekul dari monosakarida ketika hidrolisis

MONOSAKARIDA

Triosa (3 karbon atom) : triosa merupakan bentuk selama metabolisme yang rusak dari heksosa (6 karbon ato
m) dalam kegiatan metabolisme tubuh. Sebagai contoh triosa (gliseraldehida, dan gliserosa) dan ketriosa (dihi
droksi aseton). senyawa ini menghubungkan dengan golongan OH dari karbon khiral L dibagian samping kiri (L
evo, samping kiri) dan satunya dari karbon khiral D di bagian samping kanan (detroxyt, samping kanan)

C H

HO C H

CH2OH
O O

C H
D-Gliseraldehida L-Gliseraldehida
H C OH

CH2OH

Tetrosa (4 karbon atom) : satu dari tetrosa, eritrosa, merupakan lanjutan dalam heksosa (6 karbon atom) mon
ofosfat sebagai hasil untuk oksidasi dari glukosa.
Pentosa (5 karbon atom) : banyak unsur-unsur penting dari pentosa yaitu D-Ribosa dan D-deoksiribosa yang m
ana terdapat dalam RNA dan DNA secara masing-masing. Ribosa juga merupakan bentuk-bentuk dari ATP, co-
enzim NAD dan NADP. Aldopentosa lainnya yaitu D-arabinosa dan D-Xilosa.
Heksosa (6 karbon atom) : heksosa merupakan unsur paling reaktif dari semua karbohidrat yang terdapat dari
beberapa heksosa. Yang paling utama adalah glukosa, galaktosa, mannose (aldoheksosa), dan fruktosa (ketoh
eksosa)
Glukosa umum dikenal sebagai dekstrosa atau gula anggur. Itu dapat dibuat dengan hidrolisis amilum, sukros
a, maltose dan laktosa. Secara medis, ketika masa glukosa digunakan , D-isomer berarti bahwa isomer aktif s
ecara biologis. Glukosa mengandung empat pusat kiral (nomor 2,3,4,5) dan juga memiliki 24 atau 16 isomer o
ptical. Glukosa adalah monosakarida paling umum, ditemukan dalam cairan darah dan jaringan. Itu tidak me
mbutuhkan pencernaan dan dapat diberikan melalui urat pembuluh darah. Adanya glukosa dalam urin disebu
t glikosuria menunjukkan bahwa pasien mungkin menderita diabetes mellitus.
Fruktosa, ketoheksosa, sering disebut levulosa atau gula buah. Dapat dibuat dengan hidrolisis sukrosa (disaka
rida) dan inulin (polisakarida). Struktur kimia dari fruktosa mirip dengan glukosa, karbon atom nomor 3 samp
ai 6 adalah persamaannya. Oleh karena itu, osazones yg dihasilkan dari glukosa dan fruktosa adalah identik. F
ruktosemia merupakan penyakit bawaan akibat kekurangan kekurangan enzim fruktosa 1-fosfat aldolase. Se
orang bayi yang menderita penyakit ini mengalami hioglikemia, muntah dan gizi buruk.

Galaktosa berbeda dari glukosa hanya dalam konfigurasi H dan OH tentang atom karbon tunggal. Dua atom
yang berbeda hanya dalam konfigurasi tentang atom karbon tunggal disebut epimer. D-galaktosa dapat diko
nversi ke D-glukosa di dalam hati oleh enzim spesifik disebut epimerase. Galaktosa dapat dibuat dengan hidr
olisis laktosa dan raffinosa. Galaktosemia hasil dari ketidakmampuan bayi untuk memetaboisme karena keku
rangan baik itu enzim galaktosa 1-fosfat uridyl trasferase ataupun enzim galaktokinase. Peningkatan konsent
rasi galaktosa dalam darah dan adanya dalam urin (galaktosuria).

Glikosid adalah senyawa pembentuk kondensasi antara monosakarida dan gugus hidroksil dari monosakarida
lainnya (gula atau bukan gula). Senyawa kedua disebut aglikon jika gulanya glukosa, senyawa yang dihasilka
n adalah glikosida, jika galaktosa senyawa yang dihasilkan adalah galaktosida. Glikosid ditemukan dalam ban
yak obat, termasuk turunan dari digitalis dan strophantus seperti ouabain, sebuah inhibitor dari Na+-K+ ATP d
ari membran sel.

Gula deoksi adalah dimana gugus hidroksi yang terikat pada struktur cincin telah digantikan oleh atom hidrog
en.

Gula amino adalah yang mengandung gugus amino termasuk D-glukosamin, D-galaktosamin dan beberapa a
ntibiotic (e.g. eritromisin)

Heptosa (7 karbon atom) : termasuk sedoheptulosa yang merupakan senyawa lanjutan dari metabolism karb
ohidrat.

KIMIA DARI MONOSAKARIDA

Sifat mereduksi. Karbohidrat yang memiliki aldehid bebas atau berpotensi bebas atau gugus keton yang memil
iki sifat mudah mereduksi ion logam tertentu seperti Cu, Bi, Fe, Hg, dll. Gugus karbonil bebas dari aldehid dan
keton dalam larutan alkalin diubah menjadi enol reakif dan dapat dengan mudah teroksidasi ( = mereduksi sen
yawa lainnya). Reagen yang sering digunakan adalah Benedict (mengandung CuSO4, Na-sitrat, dan Na2CO3) da
n Fehling (mengandung CuSO4, K-Na-tartrat, dan KOH). Na-sitrat dan K-Na-tartrat digunakan untuk mencegah
pengendapan Cu(OH)2 atau CuCO3. Alkali digunakan untuk mengubah gula menjadi enol, dan mereduksi Cu ++ d
ari sitrat atau tartrat-senyawa kompleks menjadi Cu+. Ion Cu+ dan OH- membentuk warna kuning CuOH diubah
menjadi endapan warna merah Cu2O pada pemanasan.

Reduksi. Gugus karbonil dari karbohidrat dapat direduksi dengan berbagai reagen seperti Na-amalgam, H2 dan
Pt menjadi gugus alkohol. Glukosa direduksi menjadi sorbitol, mannose menjadi mannitol, galaktosa menjadi
dulsitol dan fruktosa menjadi sebuah campuran dari sorbitol dan mannitol.
Pengaruh asam. Jika heksosa dicampur dengan asam kuat dipanaskan, sebuah fulfural metil hidroksi akan dipr
oduksi. Jika pentosa dicampur dengan asam kuat dan dipanaskan, fulfural yang akan diproduksi. Kehadiran fulf
ural adalah konsep dasar dari beberapa percobaan seperti Molisch dan reaksi selliwanoff. Warna ungu muncul
dalam reaksi Molisch yang dihasilkan dari kondensasi 4 - hydroxymethylfulfural dan alpha-naftol. Reaksi selliw
anoff spesifik untuk levulosa seperti fruktosa serta ketoses lain seperti ketotrioses dan ketopentoses. Reaksi in
i juga positif untuk sukrosa karena sukrosa dihidrolisis menjadi fruktosa dan glukosa oleh kehadiran HCL dalam
reagen selliwanoff itu.

Pengaruh alkali. Dalam larutan alkali, aldosa dan ketose akan dikonversi menjadi enol reaktif. enol bentuk gluk
osa dan fruktosa mannose mirip.

pembentukan Osazones. ketika larutan gula dipanaskan untuk mengurangi phenylhydrazine, senyawa kristalin
kuning disebut osazones terbentuk. Setiap individu gula akan menghasilkan osazones yang khas untuk gula. Gl
ukosa dan fruktosa menghasilkan osazones yang sama karena kemiripan struktur molekul. maltosa dan laktosa
jugamenghasilkan maltosazone lactosazone.

Aldosa + phenylhydrazine phenylhydrazine + H 2O

Phenylhydrazone + 2 phenylhydrazine Osazone + aniline + NH 3 + H2O

Disakarida
Maltose mengandung 2 molekul glukosa dengan C1-4 obligasi. Hal ini dapat dibuat dengan hidrolisis amilum m
enggunakan enzim aylase / ptyaline atau diastase. Hidrolisis maltase dengan asam maltosa atau menghasilkan
dua molekul glukosa yang dapat mengurangi masalah Benediktus karena adanya gugus karbonil bebas pada at
om C1. maltosa dapat membentuk osazones dan dapat difermentasi.
Sukrosa juga dikenal sebagai gula tebu. diproduksi secara komersial dari tebu dan bit gula. Ketika sukrosa dihi
drolisis dengan asam atau enzim Sucrase (invertase), akan membentuk campuran glukosa dan fruktosa. Ini 50:
50 campuran glukosa dan sukrosa, gula yang disebut invert untuk membalikkan rotasi cahaya terpolarisasi. suk
rosa tidak memiliki gugus karbonil bebas (tidak mengurangi gula). Pengikatan sukrosa adalah asosiasi 1,2-gliko
sidik karena terjadi antara C-1 molekul glukosa dan fruktosa C-2. Sukrosa menghasilkan osazones tetapi tidak d
apat difermentasi.
Laktosa dikenal secara umum sebagai gula susu yang terkandung dalam susu. hidrolisis laktosa dengan asam a
tau enzim laktase menghasilkan glukosa dan galaktosa. Ikatan di laktosa adalah 1,4 ikatan glikosidanya antara
C-1 glukosa dan C-4 dari molekul galaktosa. Laktosa adalah gula pereduksi. Berbentuk osazone dan dapat difer
mentasi.
Trehalose menghasilkan 2 molekul glukosa bila dihidrolisis. keterkaitan trehalose adalah 1,1 ikatan glikosidany
a antara C1 dari dua molekul glukosa. trehalose ini tidak mengurangi gula, berarti tidak dapat terbentuk osazo
nes.

OLIGOSAKARIDA
Raffinose adalah Triholoside karena terdiri dari tiga molekul monosakarida. raffinose hidrolisis menghasilkan g
lukosa dan fruktosa galaktosa.

POLISAKARIDA
Polisakarida merupakan polimer dari monosakarida. berat molekul polisakarida tinggi umumnya tidak larut da
lam air dan hambar. Ketika pati ditambahkan ke dalam air mendidih, membentuk dispersi koloid. Polisakarida
yang terbentuk dari pentosa disebut pentosans, yang terbentuk dari heksosa disebut hexosans.
Amilum (pati) adalah suatu karbohidrat. adalah sumber karbohidrat yang paling penting dan ditemukan dalam
sereal, kentang, kacang dan sayuran lainnya. 2 Komponen utama adalah amilosa (15-20%), yang memiliki stru
ktur heliks tanpa cabang dan amilopektin (80-85%) yang terdiri dari cabang-rantai yang terdiri dari residu gluk
osa 24-30 oleh ikatan 1,4-AS di rantai dan link ke poin 1,6-cabang. pati menghasilkan glukosa hanya pada hidro
lisis oleh asam tetapi hasil hidrolisis oleh amilase maltosa. Pati memberikan karakteristik biru dengan iodin. a
milosa memberi warna biru dengan yodium, sedangkan amilopektin memberikan ungu. warna ini akan hilang
dalam panas, tetapi muncul lagi pada pendinginan. Jika alkali yang ditambahkan, warna tersebut akan hilang k
arena yodium basa mengikat. Amilum tidak mengurangi gula, tidak dapat terbentuk osazones. Ketika amilum d
ihidrolisis, membentuk dekstrin (amylodextrin, erythrodextrin, achroodextrin), maltosa dan glukosa terjadi sec
ara berurutan. erythrodextrin berubah merah di hadapan yodium, tapi maltosa dan glukosa tidak menghasilka
n warna. Oleh karena itu, itu memungkinkan untuk mengikuti hidrolisis pati dengan mengamati perubahan wa
rna ketika ditambahkan yodium.
Dextram diproduksi oleh bakteri tertentu ketika mereka tumbuh di sukrosa. Medis, dekstran digunakan sebag
ai perluasan dari darah untuk mempertahankan air dalam aliran darah dan membantu mencegah jatuh dalam
volume darah dan tekanan darah.
DEKSTRIN dihasilkan selama hidrolisis pati. amylodekstrim, erythrodekstrin achroodekstrin dan memberikan w
arna biru, merah dan warnanya, masing-masing.
Dekstrin dihasilkan selama hidrolisis pati. Amylodextrin, erythrodextrin dan achroodextrin memberikan warna
biru, merah, dan tidak berwarna, masing-masing.

Glikogen adalah penyimpanan polisakarida didalam tubuh hewan. Struktur yang lebih bercabang daripada am
ylopectin. Glikogen adalah glukosan dimana rantai 10-18 residu glukosa dalam 1,4-glycosidic linkage dengan p
ercabangan dengan cara 1,6 - glikosidik linkage. hidrolisis glikogen dengan asam menghasilkan glukosa, hidroli
sis dengan amylase menghasilakn maltose. Glikogen tidak mengurangi gula, member warna merah dengan iod
ine, tidak dapat membentuk osazones dan dapat diendapkan dengan penambahan ammonium sulfat jenuh.

Selulosa terdiri dari sejumlah besar bilangan-glukosa unit digabung bersama dalam rantai dengan 1,4-glikosidi
k linkages. Itu adalah kostituen utama dalam kerangka tanaman. Selulosa tidak dapat dicerna oleh mamalia ter
masuk manusia, karena tidak adanya hidolase yang menyerang hubungan. Dalam usus ruminansia dan herbivo
re lainnya, terdapat mikroorganisme yang menghasilkan enzim dengan kemampuan untuk menyeran hubunga
n, membuat selulosa tersedia sebagai sumber kalori utama untuk hewan.
Inulin adalah fruktosan yang ditemukan dalam umbi akar dahlia. Dalam bidang medis, telah digunakan untuk
menentukan laju filtrasi glomelurus.

Pentosan merupakan polimer dari pentosa. Getah arab, pentosan umum, mungkin dihidrolisis dengan direbus
dengan asam klorida kuat menghasilkan arabinoses.

Kitin adalah structural umum polisakarida suatu invertebrate. Secara structural, terdiri dari N-asetil-D-glukosa
min.

Glikoprotein dan mukoprotein terjadi dilapisan mukosa, sebagai fraksi globulin plasma, dalam hormone 9gon
adotropin dan tirotropin), dan isoaglutinin dalam eritrosit.

Galaktan. Salah satu galaktan paling umum adalah agar-agar, sebuah produk yang dibuat dari beberapa jenis r
umput laut. Produk hidrolisis dari agar-agar adalah D-galaktosa, L-galaktosa dan asam sulfat.

PERCOBAAN KARBOHIDRAT 1

 Percobaan 1 (uji Molisch)

Dalam tes ini alpha naftol digunakan. Naftol mengalami reaksi fenol biasa dalam kondisi asam. Monosa
karida dalam larutan asam akan berubah menjadi bentuk fulfural. Fulfural dan fenol dikondensasikan s
atu sama lain untuk membentuk suatu zat dengan warna spesifik.

Prosedur

Tambahkan ke dalam tabung reaksi

* 2 ml larutan glukosa

* 0,2 ml atau 2 tetes alpha naftol 10%

Tambahkan 2 ml H2SO4 melalui dinding tabung perlahan-lahan, sehingga ada lapisan dibawah
larutan.

Sebuah cincin warna ungu terbentuk antar dua larutan menunjukkan monosakarida. Silahkan
ulang lagi dengan fruktosa dan pentose

 Percobaan 2 (uji benedict)

Monosakarida dapat teroksidasi oleh efek alkali dalam larutan fehling atau larutan benedict. Monosaka
rida juga mereduksi larutan benedict, memberikan warna deep-biru dan endapan merah-oksida.

Prosedur

Tambahkan ke dalam tabung reaksi :

* 5 ml reagen Benedict

* 0.5 ml atau 8 tetes larutan glukosa

Mengerami tabung dalam bak air pada 37C selama 5 menit, atau membakar langsung selama 1
menit.

Apa bukti uji positif?

Silahkan coba lagi dengan fruktosa dan pentose

 Percobaan 3 ( uji Selliwanof)

Monosakarida (fruktosa) dapat tereduksi dengan efek asam dan resorsinol-HCL memberikan warna me
rah-cherry pada larutan.

Prosedur

Tambahkan ke dalam tabung reaksi :

* 5 ml reagen Selliwanof (0.5% resorsinol encer dalam 5 n HCl)

* 1 ml larutan fruktosa

Mengerami tabung dalam bak air 100C atau dalam air mendidih atau membakar langsung
selama 3 menit

Apa bukti uji positif?

Silahkan coba lagi dengan glukosa dan pentose

 Percobaan 4 (uji Tauber)

Aromatic amines (benzidines) sangat mudah teroksidasi dalam kondisi asam. Dengan menambahkan m
onosakarida, mereka akan tereduksi memberikan warna-merah produk oksidasi.

Prosedur
 Tambahkan ke dalam tabung reaksi :

* 0.5 ml reagen Taube (Benidine 4% dalam larutan asetat glacial)

* 1 tetes larutan pentose

Rebus langsung larutan selama beberapa menit dan mendinginkannya dengan air keran

Apa bukti uji positif?

silahkan coba lagi dengan glukosa dan pentose

Percobaan karbohidrat II
  Percobaan 1 (benedict test)
dalam tes ini, gunakan uji benedict untuk maltosa, laktosa, dan sukrosa. Yang dari mereka memiliki reacrions
positif atau negatif. Berikan sebuah explainnation.

 Percobaan 2 (selliwanof test)

Dalam tes ini Anda mencoba tes selliwanof untuk sukrosa dan maltosa. Yang dari mereka memiliki reaksi positivi
atau negatif? Berikan penjelasan. Bagaimana Anda bisa membedakan antara sukrosa dan maltosa?

 Percobaan 3 (hidrolisis sukrosa)

Sukrosa akan hydrolysized oleh asam untuk menghasilkan glukosa dan fruktosa. Sukrosa adalah gula non-
pereduksi. Ini memiliki reaksi negatif dengan uji benedict, tetapi glukosa dan frutose adalah mengurangi gula
mereka memiliki raection positivi dengan uji benedict
prosedur
- Tambahkan tymol drop biru sebagai indikator ke dalam tabung yang berisi 5 ml sukrosa
- Tambahkan 5 tetes HCL untuk memberikan warna pink untuk solusi
- Bagilah larutan menjadi dua (2) tabung
- Tabung I direbus selama 3 menit dan kemudian didinginkan dengan air keran
- Tambahkan natrium karbonat-2% untuk memberi warna biru ke tabung kedua
- Melaksanakan uji benedict untuk kedua tabung
- Apa hasil dari sukrosa. Yang tabung mengalami hidrolisis atau tes benedict positif itu?
- Lakukan prosedur yang sama dengan maltosa Dan laktosa. Mana yang memiliki reaksi yang kuat dengan uji ben
edict setelah hidrolisa dibandingkan dengan sebelum hidrolisis. Berikan penjelasan

 Percobaan 4 (hidrolisis pati)

Pati akan hidrolisis dengan asam untuk menghasilkan glukosa, ia memiliki reaksi positif dengan uji
benedict itu.
prosedur
- Tambahkan 3 ml 3 N HCL ke tabung berisi 10 ml larutan pati
- Inkubasi tabung dalam bak air pada 100 ◦ C atau dalam air mendidih
- Setiap tiga (3) menit mengambil satu (1) drop dan tempat di glas, dan menambahkan satu (1) tetes
0,01 N yodium solusi sampai warna larutan menghilang
- Untuk bagian dari solusi dihidrolisis menambahkan natrium karbonat 2% untuk memberikan warna
biru
- Melaksanakan uji benedict untuk dua (2) tabung pasangan.
- Apa hasil dari hidrolisis pati oleh asam atau oleh amilase?
- Apa warna larutan setelah penambahan yodium?

 Percobaan 5 (hidrolisis Getah Arab)

Getah Arab akan dihidrolisis oleh asam untuk menghasilkan pentosa. Ini memiliki reaksi positif dengan k
edua Tauber dengan uji benedict.

Langkah kerja

 Tambahkan 1 ml HCl pekat ke tabung berisi 4 ml larutan getah Arab.

 keluarkan tabung dalam pemanas air pada suhu 100 celcius atau dalam air mendidih selama dua menit
 Dinginkan dengan keran air
 Tambahkan sodium hidroksida untuk membuat alkali (gunakan indikator)
 Melaksanakan Tauber kita uji dan kita uji benedict untuk dua pasang tabung
 Apa hasil dari hidrolisis getah arab?

SIFAT-SIFAT SERUM BESI

 BESI

Peranan besi dalam tubuh hampir secara eksklusif convined dalam respirasi selular.Besi adalah komponen dari
hemoglobin, mioglobin, dan sitokrom, serta enzim katalase dan peroksidase. Dalam semua senyawa besi adal
ah suatu komponen porfirin. Sisa dari besi dalam tubuh hampir seluruhnya terikat protein. bentuk-bentuknya t
ermasuk bentuk penyimpanan dan transportasi dari besi. nilai normal adalah 65 -175 Besi mg/100 ml dari seru
m.

PRINSIP

Besi akan dilepaskan dari globulin jika besi-glubulin yang kompleks adalah besi-glubulin yang telah diinkubasi d
alam lingkungan asam minggu. Kebebasan besi akan berkurang oleh redaktor, misalnya hydroquinone. Reaksi
besi akan berkurang dengan orthophenantroline membentuk rangkaian dengan warna merah. pembacaan int
ensitas warna merah tersebut menggunakan spektrofotometri dg panjang gelombang 500nm.

Zat zat yang digunakan

1. HCL, 0,35 N

Tiga puluh (30) ml HCL pekat diencerkan dengan air suling untuk menghasilkan volume 1 liter.

2. Trikloroasetat asam, 20%

Dua puluh (20) g asam trechloroacetic dilarutkan dalam air suling untuk mengahsilkan volume 100 ml.

3. Kalium-asetat, 50%

Lima puluh (50) g kalium asetat dilarutkan dalam air suling untuk menghasilkan volume 5 ml

4. Hydroquinone, 1%

Lima puluh (50) mg hydroquinone dilarutkan dalam air suling untuk menghasilkan volume 5 ml. ini dila
kukan agar selalu segar sebelum digunakan.

5. Orthophenantroline, 0,1%

Seratus (100) mg orthophenantroline-HCL dilarutkan dalam air suling untuk menghasilkan volume 100
ml.

6. kandungan Fe dalam keadaan standar

Tujuh puluh koma dua (70,2) mg amonium-ferrous sulpate dilarutkan dalam air suling yang berisi 0,2 m
l 2NH2SO4 untuk menghasilkan volume 1 liter

7. Fe yang bekerja dalam keadaan standar.

Empat puluh (40) ml larutan standar untuk cadangan dilarutkan dalam air suling untuk menghasilkan v
olume 100 ml (400ug/100ml).

PROSEDUR
1. Tambahkan 1,0 ml air suling dan 1,0 ml 0,35 N HCL ke dalam tabung reaksi berisi 1,0 ml serum, campurkan dan
kemudian diamkan pada suhu kamar selama 1 jam.
2. Tambahkan 1,0 ml asam trichloracetic 20% untuk solusi (1), campurkan dan kemudian diamkan pada suhu
kamar selama 15 menit, dan kemudian sentrifus pada 2000 rpm selama 15 menit.
3. Tambahkan:
- 3 ml air suling
- 0,25 ml 50% potasium asetat
- 0,15 ml 1% hydroquinone
- 0,5 ml 1% dari orthophenantroline untuk supernatan 2,0 ml, campurkan dan kemudian diamkan pada suhu
kamar sampai warna larutan stabil.
4. Baca intensitas warna merah dengan menggunakan spektrofotometer, dengan panjang gelombang at500 nm.
5. Grafik Standar
Nol koma nol (0,0) ml, 0,5 ml, 10 ml, 1,5 ml, dan 2,0 ml standar kerja dilakukan dengan cara yang sama sebagai
sampel (serum). Buatlah volume semua solusi 2 ml, menggunakan air suling untuk 2,0 ml. Menggambar grafik
dengan menggunakan semua bacaan/hasil dari konsentrasi larutan standar untuk Fe. Grafik digunakan untuk
mencari konsentrasi Fe dalam sampel serum.

Catatan
Dalam hal ini semua reagen, air suling dan instrumen yang digunakan harus bersih dan tidak boleh ada
hemolisis dalam sampel serum yang akan diuji.

Pertanyaan
1. Apa itu transferin?
2. Apa feritin?
3. Apa hemosiderin?
4. Apa hemosiderosis?
5. Bagaimana Anda menggunakan tes laboratorium untuk menilai pasien dengan gangguan metabolisme besi?

ISOLASI DARI DNA DARI COWSPLEEN

 DNA. deoxyribonucleic acid (DNA) terdiri dari dua rantai polynucleotides terjalin dalam bentuk struktur
spiral yang distabilkan oleh ikatan hidrogen antara pasangan basa tertentu. Stereokimia dari basis adalah pasa
ngan adenin dengan timin dan suchthat guanin dengan sitosin sehingga rasio A / T dan G / C adalah satu. Aspe
k struktur DNA pertama kali diusulkan oleh Watson dan Crick pada tahun 1953 berdasarkan data X-Ray of wilki
ns danssss dikenal sebagai hipotesis Watson-Crick. Ide ini telah dilakukan sejak dikonfirmasi dan menyediakan
dasar untuk menjelaskan beberapa sifat biologi DNA.

pasangan dari basa dengan ikatan hidrogen (----------) seperti dalam DNA

molekul DNA Kebanyakan dari jenis heliks ganda, meskipun beberapa virus hanya mengandung DNA be
runtai tunggal dan DNA dalam bakteriofag x 174 bahkan lebih tidak biasa seperti lingkar an.
hal ini sulit untuk memperoleh secara akurat berat molekul DNA karena metode yang digunakan untuk i
solasi dapat mengakibatkan istirahat dalam molekul, tetapi nilai-nilai beberapa juta telah diperoleh.

RNA. Hubungan sederhana A / U = G / C tidak berlaku untuk hampir semua bentuk asam ribonukleat (R
NA), karena molekul RNA terdiri dari untai tunggal asam nukleat dalam bentuk koil acak dengan hanya daerah
terbatas basis pasangan . Berat molekul RNA transfer sekitar 25000, tapi bentuk lain dari RNA memiliki berat
molekul tinggi satu juta atau lebih

DNA terkait dengan bahan genetik sel. Dalam beberapa mikro-organisme, satu untai DNA tampaknya u
ntuk informasi genetik tetapi, pada organisme yang lebih tinggi, DNA hadir sebagai nukleoprotein dalam krom
osom. Jumlah DNA dalam sel dari spescies tertentu adalah konstan, sedangkan sel-sel germinal dengan seteng
ah jumlah kromosom mengandung setengah.

DNA hadir dalam sel lainnya. DNA terjadi hampir secara eksklusif dalam inti dengan jumlah jejak dala
m mitokondria. fungsi DNA adalah untuk bertindak sebagai penyimpan informasi genetik (cetak biru) dan untu
k mengontrol sintesis protein dalam sel.
Replikasi sel. karakteristik keturunan yang diwariskan kepada sel anak melalui replikasi DNA. Selama pembelah
an sel, kedua untai DNA yang terpisah dan bebas nukleotida untai melekat pada masing-masing menurut atura
n di pangkalan pasangan. Nukleotida yang kemudian "zip" bersama-sama dengan aksi DNA polimerase untuk
memberikan dua molekul identik DNA asli.
Sintesis protein. Urutan basa dalam DNA nuklir menentukan protein disintesis dalam sitoplasma sel. Kode gen
etik adalah sedemikian rupa sehingga tidak tumpang tindih 3 basis tahu sebagai kodon, kode untuk setiap asa
m amino. cide ini merosot di lebih dari satu kodon mungkin kode untuk asam amino tertentu. DNA Karena itu
bertindak sebagai suatu template yang messenger RNA (mRNA) disintesis. MRNA membawa pesan genetik dar
i nukleus ke sistem sintesis protein pada ribosom.

PRINSIP

Walaupun hampir semua sel mengandung DNA, jumlah hadir di beberapa jaringan cukup kecil sehing
ga mereka tidak nyaman terutama sumber. Selain itu, beberapa jaringan mengandung tinggi deoxyribonucleas
e (DNAase) kegiatan sehingga DNA dipecah menjadi fragmen yang lebih kecil. Sebuah sumber yang mudah dig
unakan untuk isolasi DNA adalah harus mengandung bahan kuantitas tinggi dan memiliki aktivitas rendah DNA
ase. jaringan limfoid adalah sumber yang sangat baik dalam menghormati dan timus yang mungkin merupakan
sumber terbaik dengan limpa sebagai alternatif yang baik.

Jaringan yang homogen di salin isotome natrium sitrat buffer dengan pH 7,4. Pada kekuatan ion, deo
xyribonucleoprotein yang tidak larut dan terpisah baik dari orang lain protein. Natrium sitrat menghambat akti
vitas DNAase oleh mengikat Ca dan Mg yang kofaktor untuk enzim. Prosedur Ekstraksi dilakukan pada suhu re
ndah sehingga kegiatan DNAase sisa minimal. Gelas atau kapal plastik digunakan di seluruh untuk menghindari
degradasi fisik DNA.

DNA akhirnya diendapkan sebagai massa putih berserat dengan penambahan etanol. Setelah cuci de
ngan etanol, DNA dilarutkan dalam buffer salin dengan natrium sitrat pH 7,4. DNA adalah yang terbaik disimpa
n beku dan tidak mengalami perubahan yang nyata selama beberapa bulan, namun pengeringan DNA cenderu
ng menyebabkan denaturasi.

BAHAN
1.Cow limpa
2. Natrium klorida (0,14 M buffer dengan 0,02 M natrium sitrat pH 7,4)
3. Natrium klorida (2M)
4. Etanol 75%
5. Etanol 100%
6. Homogen
7. Didinginkan centrifuge

METODE
Tambahkan 50 g limpa sampai 200 ml dan menghomogenkan buffered saline. Centrifuge suspensi di 5000 g sel
ama 15 menit dan menghomogenkan lagi presipitat dalam 200 ml garam buffer. Buang suspensi dalam lemari
es semalam dan centrifuge itu pada 20.000 g selama 15 menit. Simpan supernatan dan menambahkan supern
atan perlahan-lahan, sambil diaduk, ke volume 2 dari etanol 100%. Massa putih berserat harus dibentuk pada
batang kaca-aduk. Hati-hati menyimpan DNA berserat, cuci dengan etanol 75% dan larut dalam garam buffer.
Toko beku sampai diperlukan.

Blok 2
 Histologi dan sel biologi

Peraturan Kelas Laboratorium

Selama bekerja di laboratorium siswa harus:

 1. Berpakaian rapi, pakaian bersih dan sopan
2. Mempersiapkan kajian teoritis dari topik yang akan dibahas
3. Menyiapkan bahan yang diperlukan, terutama menulis peralat
4. Datang ke kelas laboratorium lima menit lebih awal dan duduk di kursi ditugaskan sebagai
dirancang. mengubah kursi tanpa izin dari instruksi yang tidak diperkenankan
5. Tepat waktu. akan pretest tidak diberikan untuk keterlambatan
6. Menunggu instruktur sebelum mulai bekerja apapun
7. Bergabung semua latihan dan aktivitas yang terkait dengan pelajaran hari itu
8. Diamati semua peraturan dan instruksi di kelas
9. Menyiapkan semua bahan dan kelas mikroskop beforethe mulai
10. Kembali slide untuk bahan laboran dan lainnya ke tempat yang tepat sebelum meninggalkan
kelas
11. Tidak bertanggung jawab atas kerugian atau kerusakan pada peralatan laboratorium di kelas

Selain peraturan dan informasi

Mahasiswa yang kehilangan satu atau lebih kelas selama blok harus menyelesaikan sesi praktis sebelum dan bl
ok dan akan ada biaya itu.

Masalah yang tidak disebutkan akan diselesaikan pada saat terjasi

HISTOLOGY

1. Topik:
I. organel
II. Inklusi
III. Fagosit & metachromation
IV. mitosis & kromosom
untuk informasi detail lebih lanjut, silakan lihat daftar spesimen histologis yang digunakan untuk sesi
kelas laboratorium biologi sel
2. Tujuan:
a. memperkuat teori
b. memberikan pengalaman belajar
c. merangsang siswa untuk menjadi kreatif dalam memecahkan masalah
d. memotivasi siswa untuk belajar
3. prasyarat:
a. mempelajari teori dari buku teks histologi
 b. mempelajari atlas histologi manusia
c. mengintegrasikan aspek anatomi, fisiologi dan biokimia
4. facilities:
a. kaca slide histologis
b. Mikroskop cahaya
c. atlas
5. procedure:
a. proyeksi slide histologis dan penjelasan singkat tentang hal tersebut oleh instruktur
b. pengamatan kaca slide histologis di bawah mikroskop cahaya
c. dokumentasi gambar kaca slide histologis dalam buku gambar
6. report:
a. menggambar gambar kaca slide histologis yang diamati di bawah mikroskop cahaya dalam me
nggambar menggunakan pensil warna
b. Memberikan nama pada setiap bagian dari gambar
7. referensi:
a. De Robertis EDP dan De Robertis EMF.Cell & Biologi molekular 8 ed. Lea & Febiger, Philadelphi
a, 1987.
b.Color Atlas Histologi dasar, kedua ed. Aku Berman Appleton & Lange. A Simon & Schuster Comp
any, USA. 1998.
8. Evaluasi:
a. Pra Uji
b. Dokumentasi
c. Pemeriksaan praktis

Sesi I: ORGANEL

1. Zat Chromatophil (tubuh Nissl's)

Slide kode : Cy-2

Spesimen yang digunakan : pusat saraf tulang belakang
Zat warna : Toluidine biru
Pembesaran rendah : kelompok padat sel kecil dan besar
Pembesaran tinggi : Kelompok sel yang lebih besar (neuron atau sel saraf) memiliki
potongan kecil berwarna biru yang disebut zat chromatophil

2. Mitokondria
Slide kode : Cy-3
Spesimen yang digunakan : ginjal (ren)
Zat warna : asam fuchsin (metzner)
Pembesaran rendah : dalam korteks ginjal, temukan tubulus proksimal rumit. Tubulus
yang berwarna merah terang
Pembesaran Tinggi : tubulus proksimal rumit dibatasi oleh satu lapisan sel cuboidal ti
 nggi dengan inti bulat. Di bagian basal sel (infranuclear), terlihat mitokondria merah terang sebagai der
etan tongkat kecil paralel yang tangensial terhadap membran basal sel

3. Drumstick
Slide kode : Cy-11
Spesimen yang digunakan : hapusan darah tepi
Zat warna : Giemsa
Pembesaran rendah : leukosit Neutrofil sekitar 12μm di diameter, bentuk bulat dengan
inti yang terdiri 2-5 sosis - lobus berbentuk terhubung satu sama lain dengan benang kromatin halus.
Pembesaran tinggi : Cari leukosit neutrofil yang memiliki inti dengan proyeksi halus di
sebut drumstick.

Sesi II: INKLUSI

4. Glycogen granul
Slide kode : cy-4
Spesimen yang digunakan : hati
Zat warna : PAS (reaksi asam Schiff berkala)
Pembesaran rendah : mencari hepatosit, berbentuk poligonal dengan inti bulat. Sel ini
disusun sebagai chord radial dengan vena sentral di bagian tengahnya.
Pembesaran tinggi : dalam sitoplasma dari hepatosit terlihat magenta granule disebut
butiran granula glikogen (seperti yang PAS reaksi positif)
5. Zymogen granul
Slide kode : cy-5
Spesimen yang digunakan : pancreas
Zat warna : trichrome (Mallory)
Pembesaran rendah : menemukan acinus bagian eksokrin (Pars pankreas eksokrin).
pankreas terdiri dari kelenjar endokrin dan kelenjar eksokrin. Kelenjar endoktrin tampak seperti pedala
 man besar di 'laut' dari kelenjar eksokrin.
Pembesaran tinggi: acinus terdiri dari sel-sel piramidal, memiliki lumen kecil. Pada puncak apex setiap s
el terlihat granul halus merah disebut zymogen granula.

6. Titik mucinogen

Slide kode : cy-6

Spesimen yang digunakan : intestinum tenue
stanning : PAS
Pembesaran rendah : mencari vili usus (vili intestinalis) dicakup oleh satu lapisan sel tin
ggi. Modifikasi sel tinggi diisi penuh dengan tetesan mucinogen yang tampak seperti piala (gelas anggur
), sehingga sel ini disebut sel goblet. gelembung gelembung mucingen berwarna magenta (violet redish
)

7. gelembung-gelembung lipid
slide kode: cy-7
spesimen yang digunakan: kulit
stanning: osmium-tetroxide (Flemming)-eosin
pembesaran rendah dan pembesaran tinggi: mencari lapisan subkutis dari gelembung-gelembung lipid
kulit.gelembung-gelembung lipid terlihat seperti gelembung-gelembung hitam dengan berbagai ukuran
.terkadang setiap gelembung lipid hamper terisi seluruh sitoplasma

Sesi III : phagocytus & metachromation

8.phagocytus
slide kode: cy-8
spesimen yang digunakan: hati
menodai: safranin-o, sebagai kontra-noda seekor tikus albino disuntikkan dengan 1 cc dari 1 tripan% lar
utan biru, intraperitoneal
perbesaran rendah: pertama menemukan sebuah epatis lobulus terdiri dari hepatocyteschord diatur ra
dialy dengan bagian tengah lobulus.then menemukan sinusoida antara hepatosit.
magnifiation tinggi: sinusoida adalah jenis kapiler darah yang bentuknya tidak beraturan.

9.metachromation
slide kode: cy-12
spesimen yang digunakan: trakea
stanning: toluidin biru
perbesaran rendah: mengamati magenta (ungu redish) jaringan tulang rawan trakea. struktur lainnya b
ernoda biru
 pembesaran tinggi:sel tulang rawan dapat amati sebagai sel jelas
kelompok sel tulang rawan dikelilingi oleh magenta fenomena matrix.fenomene ini(komponen tertentu
dari struktur menunjukkan warna yang berbeda dengan warna pewarna pewarnaan) disebut metechro
mation

Sesi IV : Mitosis dan Cromosom

10. Mitosis

Slide code : cy-9

Spesimen yang digunakan : Ovarium monyet

Pewarnaan : Hematoxylin-eosin

Low magnitication : Menemukan bentuk bulat sampai oval dari folikel ovarium matang(folikel graat
ian) 200-400m, yg terdiri dari oosit besar(50m), dikelilingi oleh granular folikel g
raatian juga berisi ruang yang disebut antrum folliculli yg diisi oleh cairan follicul
li.

High magnification : Cari dengan hati hati diantara sel sel granular, beberapa sel menunjukan berba
gai tahap pembelahan mitosis seperti intervase,prophase,metaphase,anatase, d
an telotase.

11.Kromosom
Slide code : cy-10

Spesimen yg digunakan : Culture of lymphocytus(budaya limposit)

Pewarnaan : Biru Tu

Low magnificaton : Sel besar dengan inti bulat ungu disebut lymphoblast. disekitar lymphoblast terdap
at kromosom yang tersesat diarea terlarang.

High magnification :

Mengenal tipe kromosom tergantung pada posisi/dari tempat sentromernya

Kromosome submetrasentrilx mempunyai bentuk X yang terdiri dari 2 kromatid dengan
sentromer pusat.
Kromosom submetrasentrik dengan sekeliling sentromernya(sekitar 2-3 bagian kromatid)
kromosom.
Kromosom gerocentric dengan sentromer di bagian terakhir dari kromatid.

Dokumentasi dari sesi kelas laboratorium

Sesi I : Organel

1. Nama spesimen : Subtansi kromatophil(badan nissl)

Kode spesimen : cy-2
Spesimen yang digunakan : spinal ganglion
Metode pewarnaan : Biru Toloidine
Low magnification High magnification

2. Nama spesimen : Mitokondria

Kode spesimen : cy-3
 Spesimen yang digunakan : kindes(ren)
Metode pewarnaan : Asam Tuchise(met
Low magnification High magnification

3. Nama Spesimen : tongkat pemukul gendering

Kode Spesimen : Cy-11
Spesimen yang digunakan : Perifer Preparat
: Giemsa
Pembesaran Rendah : Pembesaran Tinggi :

Pembahasan II : INCLUSSIONES
4. Nama Spesimen : Granula Glikogen
Kode Spesimen : Cy-4
Spesimen yang digunakan ; Hati
warna zat : Reaksi Asam Schiff Berkala
 Pembesaran Rendah : Pembesaran Tinggi :

5. Nama Spesimen : Granul Zymogen

Kode Spesimen : Cy-5
Spesimen yang digunakan : Pankreas (kelenjar ludah perut)
Metode zat warna : Trikrom (mallori)
Pembesaran Rendah : Pembesaran Tinggi :

6. Pembahasan II : INCLUSSIONES
Nama Spesimen : gelembung-gelembung lipid
 Kode Spesimen : Cy-7
Spesimen yang digunakan ; kulit
Metode zat warna : osmium-tetroxide-eosin

Pembesaran Rendah : Pembesaran Tinggi :

7. Nama sampel : Tetesan mucinogen

Kode sampel : Cy-6
Sampel yang digunakan : Intestinum tenue
Pewarnaan : PAS

Rendah pembesaran : pembesaran Tinggi :

Sesi III: Fagositosis & Metachromation

8. Nama sampel : Fagosit
Kode sampel : Cy-8
Sampel yang digunakan : Hati
Pewarnaan : safranin-O, sebagai kontra-noda
Rendah pembesaran : pembesaran Tinggi :

9. Nama samel : Metachromation

kode sampel : Cy-12
Sampel yang digunakan : Trakea
Pewarnaan : Toluidine biru
Rendah pembesaran : pembesaran Tinggi:

Sesi IV : mitosis & kromosom

10. Nama sampel : Mitosis

kode sampel : Cy-9
Sampel yang digunakan : Ovarium monyet
 Pewarnaan : HE
Rendah pembesaran : pembesaran Tinggi:

11. Nama sampel : kromosom

Kode sampel : cy- 10
Sampel yang digunakan : kultur lymphocytus
Pewarna : giemsa
 Blok 2

Mikrobiologi
 Mikroskopis pemeriksaan bakteri gram bernoda
Tujuan:
Untuk memvisualisasikan dan membedakan berbagai bakteri di bawah mikroskop

Latar belakang
Pemeriksaan Microscopi memperbesar objek gambar og untuk dilihat. Secara historis, munculnya mikroskop tel
ah menyebabkan perkembangan ilmu kedokteran, khususnya di bidang mikrobiologi.
Ada 5 jenis mikroskop dengan tujuan yang berbeda penggunaan; mikroskop cahaya, gelap-lapangan mikroskop,
mikroskop fluoresensi, mikroskop fase, dan mikroskop elektron. Kemampuan pembesaran dan resolusi adalah fa
ktor penting yang menentukan kualitas mikroskop. Resolusi adalah kemampuan untuk membedakan detail dari
obyek.
Dalam mikroskop ligth, sekitar lapangan spesimen terlihat cahaya sementara spesimen relatif gelap karena caha
ya dari sumber melewati sistem lensa tanpa perubahan apapun. Exaplanations lebih lanjut tentang mikroskop da
pat ditemukan di tempat lain.
Pemeriksaan mikroskopis adalah prosedur yang sangat penting dalam diagnostik mikrobiologi, melainkan memb
eri informasi awal tentang mikroorganisme yang diperiksa. Dalam keadaan tertentu diagnosis penyebab penyaki
t infeksi dapat dibentuk hanya dengan pemeriksaan mikroskopis.
Mikroskop pemeriksaan langsung dari spesimen tak bercacat biasanya memberikan hasil yang buruk karena kura
ngnya kontras antara sel bakteri dan latar belakang. Pewarnaan smear akan menunjukkan penampilan yang lebi
h baik di bawah mikroskop.
Ada 3 teknik pewarnaan yang berbeda: pewarnaan sederhana menggunakan hanya 1cstain, diferensial / senyaw
 a pewarnaan menggunakan 2 atau lebih jenis noda, dan pewarnaan khusus untuk memeriksa pelengkap bakteri.
Pewarnaan Gram adalah salah satu teknik pewarnaan diferensial. Berdasarkan hasil pewarnaan ini, bakteri dapa
t dikelompokkan menjadi bakteri gram positif (tahan terhadap alkohol) dan gram negatif (tidak tahan terhadap a
lkohol). Perbedaan bakteri berdasarkan pewarnaan gram ini sangat penting karena ini kelompok 2 bakteri menu
njukkan karakteristik yang berbeda.

PERALATAN DAN BAHAN

Cahaya mikroskop
Kaca slide
Bunsen burner
Putaran
Spesimen (sputum, pus, urin, usap hidung atau faring) atau bakteri dari media kultur
- 1% formalin
- Minyak imersi
- Gram stain terdiri
gram A : kristal violet..................................................1 gram
(violet) alkohol 95%...................................................20 ml
amonium oksalat 1%.....................................0,8 gram
akuades..........................................................80 ml

gram B : lodium..............................................................1 gram

(coklat) kalium iodida....................................................2 gram
aquqdest..........................................................300ml

gram C : aseton.................................................................50ml
alkohol................................................................50ml

gram D : safranin................................................................0,25 gr
(red) alkohol 95%..........................................................10 ml
akuades................................................................90ml

prosedur
1. Pap prepration spesimen
-panas slide kaca dibersihkan dan sterilizen atas burner untuk membebaskan slide dari lipid, biarkan dingin
-mengambil spesimen dengan loop steril atau cotton bud dan smear pada slide setipis mungkin
- Memanaskan geser sampai smear adalah kering (sekitar 20 cm dari kompor.)
- Tambahkan satu tetes 1% formalin pada smear dan biarkan mengering pada suhu kamar.
2. pewarnaan Gram
- Membanjiri smear dengan gram A noda untuk 1-3 menit
- Pada langkah ini semua bakteri akan berwarna violet
- Membuang noda tanpa mencuci slide
- Tambahkan gram B noda, memungkinkan untuk berdiri selama 1 menit
- Membuang noda, cuci slide dengan air keran
- Tambahkan gram C noda sebelumnya dihitamkan
@ Setelah penambahan gram C noda ada 2 kemungkinan efek bakteri tetap berwarna violet karena tidak b
erubah warna dengan penambahan alkohol atau bakteri menjadi tidak berwarna karena sebelumnya noda (gr
am A) berubah warna
@ Yang pertama dikatakan gram positif sedangkan yang kedua dikatakan bakteri gram negatif

- Tambahkan gram D noda, memungkinkan untuk berdiri selama 1-2 menit, dan cuci dengan keran Wate, kerin
g pada suhu kamar. Bakteri gram negatif akan ternoda, sedangkan bakteri gram positif tidak akan
- Periksa smear di bawah mikroskop cahaya dengan 100x magnificatio
- Catatan characteristich dari bakteri: bentuk, gram positivi (violet) atau gram negatif (merah) dan pengaturan.
Contoh bakteri gram positif:
- Streptococcus sp
- Stephylococcus sp
- Pneumococcus
- Peptococcus Bacilus sp
Clastridia
Corynebacterium diphteriae
Peptostreptococcus
Contoh bakteri gram negatif
- Neisseria sp
- Vellonella sp
- Salmonella sp Klebsiella
Shigella sp
Hemophillus sp
Assesment
Mahasiswa akan dievaluasi untuk / nya skor akhir nya. Poin untuk evaluasi harus mencakup.
1. Pre test (akan diadakan sebelum kelas dimulai praktis
2. Kinerja dan kegiatan selama kerja laboratorium
3. Skor laporan pekerjaan laboratorium
4. Post test (akan diselenggarakan pada dan atau setelah kelas praktis)

Referensi
Jawetz, Melnick JL, Adelberg EA. Ulasan of Medical Microbiology, ed 21th. Los Attos: Lange Medis Publikasi, 20
01
Lennettele EH, Ballows A, Hausller wj, shadomy hj. Manual Mikrobiologi Klinik 4th ed. Washingthon masyaraka
t Amerika untuk mikrobiologi, 1995