Judul Jurnal: Memperkirakan Kandungan Karbohidrat dari Berbagai Bentuk Tembakau

dengan Metode Asam – Fenol Sulfat

PENDAHULUAN

India adalah konsumen tembakau terbesar kedua di dunia dan mayoritas penduduk India
mengkonsumsi tembakau dalam berbagai bentuk. Tembakau adalah yang paling mudah diakses,
zat adiktif yang tersedia secara hukum yang berkontribusi signifikan terhadap kematian dini dan
penderitaan jangka panjang, dan juga menjadi faktor risiko utama untuk penyakit kardiovaskular,
penyakit paru obstruktif kronik, kanker, hasil reproduksi, dan penyakit mulut. Di India,
tembakau dikonsumsi dalam berbagai bentuk yang meliputi merokok dan juga tembakau tanpa
asap atau disebut dengan SLT. Bidi adalah salah satu produk rokok yang paling umum
dikonsumsi di daerah pedesaan dibandingkan dengan merokok, lebih disukai digunakan di
daerah perkotaan. Hookah, chuttas, dhumti, chillum, cerutu, dan pipa adalah beberapa bentuk
tembakau merokok di berbagai bagian India. Penggunaan SLT atau tembakau tanpa asap
mempengaruhi hampir 300 juta orang di seluruh dunia dan sekitar 90% pengguna dunia berada
di Wilayah Asia Tenggara WHO. Konsumsi tembakau dengan segala jenisnya baik itu dengan
ataupun tanpa asap telah merajelela diseluruh dunia dan dalam jumlah besar, itu menjadi
perhatian utama penyakit mulut. Ada banyak literatur yang tersedia yang menggambarkan peran
karbohidrat dalam menyebabkan dan perkembangan penyakit karies gigi. Pecandu tembakau
dalam bentuk apa pun rentan terhadap proses karies gigi

Karbohidrat adalah komponen tembakau alami yang memiliki kadar hingga 20% berat
dalam produk tembakau itu sendiri dan digunakan sebagai aditif selama proses pembuatan.
Karbohidrat di dalam tembakau berfungsi sebagai zat penyedap dan humektan dalam produk-
produk tembakau. Banyak penelitian telah menilai kandungan karbohidrat dari bentuk tembakau
yang dihisap, namun, ada kelangkaan bukti yang menilai kandungan karbohidrat dari bentuk
tembakau tanpa asap. Nah, melalui metode asam fenol – sulfat akan digambarkan sebagai
representasi salah satu metode kolorimetri yang paling mudah dan dapat diandalkan, dimana
banyak digunakan dalam jenis uji kuantitatif yang tersedia untuk estimasi karbohidrat di larutan
air. Ini diikuti dengan menentukan absorbansi cahaya pada spektrofotometer ultraviolet (UV)
yang merupakan salah satu teknik analisis tertua dan merupakan dasar bagi sejumlah metode
ideal untuk penentuan mikro dan semi – mikro jumlah analit dalam sampel.

METODE
Penelitian ini adalah penelitian secara in-vitro yang dilakukan di HR Patel Institut
Pendidikan dan Penelitian Farmasi di Shirpur, Maharashtra. Izin etis untuk penelitian ini
diperoleh dari Komite Tinjauan Etika Institusional.

Beberapa alat – alat dalam praktikum ini antara lain pipet (mikropipet), spektrofotometer
UV, refluks, kondensor, tabung reaksi, penyangga, ketel, dan kuvet. Sedangkan bahan – bahan
yakni reagen dalam praktikum ini meliputi asam sulfat 96%, standar glukosa konsentrasi 2,5 N
HCl, natrium karbonat, air suling, dan larutan fenol. Penelitian ini memerlukan berbagai jenis
sampel yang pemilihannya adalah secara acak dari berbagai produk tembakau yang telah
ditetapkan sebagai sampel – sampel antara lain adalah nandi hookah tembakau, tembakau budha
punjabi, tembakau miraj, tembakau gai – chap, hanuman – chap pandharpuri tembakau, dan hathi
– chap bidi tembakau. Sampel – sampel tersebut akan melalui tahap penimbangan menurut kadar
tembakau 100 mg dan sudah tersegel dalam kantong kedap udara dengan label A, B, C, D, E, dan
F. Terakhir akan memasuki tahap pengangkutan sampel jenis – jenis tembakau dalam kondisi
higienis dan tahan lembab ke pusat penelitian. Penelitian akan berjalan selama kurang lebih 15
hari.

Prosedur dalam penelitian in – vitro ini pertama – tama mengambil 100 mg glukosa ke
dalam tabung reaksi. Kemudian akan menambahkan 5 ml 2,5 N HCl dan rebus dalam bak air
selama 3 jam untuk menghidrolisis gula. Dinginkan sampai suhu kamar. Tambahkan jumlah
natrium karbonat padat yang cukup sampai efervesensi berhenti. Ini menunjukkan netralisasi
total. Saring dan buat volume hingga 100 ml. Pipet keluar 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, dan 1 ml standar
kerja ke dalam serangkaian tabung reaksi.Yang kosong awalnya diatur dengan semua reagen
tanpa sampel. Tambahkan 1 ml larutan fenol ke setiap tabung dan kocok dengan baik.
Kemudian, tambahkan 5 ml asam sulfat 96% dan kocok lagi. Sisihkan selama 10 menit. Kocok
setiap tabung reaksi dan simpan dalam rendaman air pada suhu 25 ° C – 30 ° C selama 20 menit.
Sekarang ukur warnanya pada 490 nm. Setelah itu aktifkan spektrometer, pertama-tama
kosongkan absorbansi dan jadikan nol. Ambil OD dari semua tabung reaksi dan cuci cuvette
setiap kali setelah mengambil OD. Nilai-nilai yang diperoleh dari absorbansi sangat membantu
untuk merencanakan grafik yang sangat penting dalam memperkirakan kandungan karbohidrat.
Nilai harus positif, di atas nol untuk memplot grafik. Setelah memplot grafik, jumlah total dari
karbohidrat dalam sampel dari grafik standar glukosa dihitung. Kurva standar absorban diplot
pada 490 nm pada sumbu "Y" yang mewakili absorbansi pada 490 nm dibandingkan konsentrasi
glukosa dalam μg / ml pada sumbu X

HASIL
Penelitian ini menunjukkan bahwa tembakau jenis hathi-chhap bidi atau sampel F
memiliki daya serap maksimum (1,995) pada 10 μg / ml yang merupakan bentuk merokok
tembakau diikuti oleh sisa semua bentuk tembakau tanpa asap, yaitu sampel C (0,452), sampel B
(0,253), sampel D (0,077), sampel E (−0,018), dan sampel A (−0,127)
PEMBAHASAN

Dalam penelitian ini, penyerapan maksimum terlihat dengan bidi diikuti oleh bentuk
tembakau tanpa asap lainnya, yaitu, sampel C, B, D, E, dan A, masing-masing. Hal ini pada
gilirannya menunjukkan bahwa bentuk merokok tembakau memiliki kandungan karbohidrat
lebih banyak dibandingkan dengan bentuk tembakau tanpa asap.
Metode asam fenol-sulfat digunakan untuk menentukan konsentrasi karbohidrat karena
merupakan salah satu metode kolorimetri yang paling banyak digunakan hingga saat ini. Prinsip
dasar metode ini adalah karbohidrat, ketika didehidrasi dengan reaksi dengan asam sulfat pekat,
menghasilkan turunan furfural, menghasilkan turunan furfural. , yang selanjutnya bereaksi
dengan fenol untuk mengembangkan warna yang dapat dideteksi. Kemudian, penyerapan cahaya
pada 490 nm dicatat pada spektrofotometer.
Karbohidrat adalah senyawa polihidroksi yang terdiri dari gula aldosa atau ketosa. Oleh karena
itu, menempatkan produk tembakau untuk waktu yang lebih lama di rongga mulut meningkatkan
risiko karies gigi, yaitu gula dan kesehatan mulut saling terkait satu sama lain. Lebih jauh,
semakin seringnya konsumsi tembakau, semakin besar pula risiko gula. paparan individu itu. Ini
memberikan dorongan untuk memperkirakan karbohidrat dalam berbagai produk tembakau yang
tersedia di sekitar area studi.
Kami tidak dapat merencanakan kurva absorbansi standar pada 490 nm dari sampel yang
diuji karena beberapa nilainya negatif, sehingga hanya statistik deskriptif untuk absorban
diberikan pada konsentrasi yang berbeda. Karena kami tidak dapat memetakan grafik, persamaan
Y = mx + c tidak diperoleh, dan karenanya, pembacaan konten karbohidrat tidak diberikan oleh
spektrofotometer. Karena absorbansi berbanding lurus dengan kandungan karbohidrat, maka
diprediksi dalam penelitian ini bahwa seiring peningkatan absorbansi, kandungan karbohidrat
meningkat.Di antara sampel yang diuji, bidi yang merupakan bentuk merokok tembakau
memiliki kandungan karbohidrat lebih banyak dibandingkan dengan bentuk tembakau tanpa asap
lainnya. Hal ini didukung oleh temuan Jansen et al. dan Ramusino et al. Diantara bentuk tanpa
asap, sampel C (Miraj) memiliki karbohidrat maksimum diikuti oleh sampel B, D, E, dan A,
masing-masing. Kami tidak dapat membandingkan temuan ini dengan penelitian serupa lainnya
karena tidak ada penelitian seperti itu tersedia dalam literatur sebelumnya. Banyak penelitian
dalam literatur sebelumnya dilakukan pada bentuk merokok tembakau dan ada kekurangan
literatur tentang bentuk tembakau tanpa asap.
Literatur yang menghubungkan penggunaan SLT dengan peningkatan atau penurunan
kejadian karies gigi bahkan lebih sulit ditemukan dibandingkan dengan literatur yang
mengaitkan bentuk merokok tembakau dengan karies gigi. Teori-teori telah dipostulasikan
berdasarkan temuan klinis yang terbatas, analisis kimiawi dari kandungan berbagai produk ST,
dan in vitro efekST terhadap pertumbuhan bakteri yang terlibat dalam pengembangan karies.
Bukti yang mengaitkan penggunaan ST dengan peningkatan karies gigi. prevalensi telah
dilaporkan. Dalam sebuah laporan kasus oleh Croft, seorang pasien berusia 54 tahun
mempresentasikan "karies serviks" di area penempatan tembakau dan gingivitis serta resesi
dengan gigi yang sama. Sebaliknya, Zitterbart et al. tidak menemukan bukti karies di area
penempatan quid di pengunyah tembakau mereka yang berusia 36 tahun. Penelitian lain, yang
dilakukan di antara anak-anak Swedia tidak melaporkan prevalensi karies di antara pengguna
tembakau. Di sisi lain, prevalensi karies yang lebih tinggi diamati pada tembakau yang lebih
banyak daripada pada pengguna non-tembakau di kalangan remaja di Gothenburg.
Ada banyak literatur yang menyatakan bahwa gula bertanggung jawab untuk
menyebabkan karies gigi, tetapi dalam penelitian ini, jumlah gula yang sangat sedikit hadir
dalam produk tembakau yang mungkin secara inheren hadir atau ditambahkan di dalamnya. Ini
menunjukkan bahwa gula tidak bertanggung jawab untuk secara langsung menyebabkan karies
pada orang-orang ini. Meskipun ST tidak secara langsung menyebabkan karies gigi,
menempatkan produk tembakau untuk durasi yang lebih lama di rongga mulut dapat
menyebabkan iritasi kronis yang pada gilirannya menyebabkan resesi gingiva, denudasi
permukaan akar gigi yang dapat meningkatkan risiko terjadinya karies akar. Meskipun ada bukti
yang tidak cukup, untuk menyimpulkan bahwa SLT memiliki peran kausal langsung dalam
pembentukan atau penghambatan karies, literatur menunjukkan bahwa SLT memainkan peran
penting dalam aktivitas karies dan berbahaya terhadap kesehatan individu. .
Tinjauan studi yang dilakukan tentang konsekuensi oral penggunaan tembakau dan
kunyah di antara para pemain bisbol profesional di AS menemukan bahwa penggunaan ST
menunjukkan prevalensi karies akar secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan yang
bukan perokok. Data dari survei kesehatan multiguna yang dilakukan di AS menunjukkan bahwa
rata-rata jumlah permukaan akar yang membusuk dan terisi untuk mereka yang menggunakan
tembakau kunyah empat kali lebih tinggi daripada mereka yang tidak menggunakan tembakau.
Penting untuk dicatat bahwa permukaan yang lapuk atau terisi cenderung cocok dengan sisi
mulut tempat ST digunakan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah rata-rata permukaan
akar yang membusuk dan terisi meningkat dengan meningkatnya jumlah paket tembakau kunyah
yang digunakan per minggu dan durasi penggunaannya.
Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini menunjukkan bahwa daya serap rendah dari
semua tanpa asap bentuk tembakau dibandingkan dengan bentuk merokok tembakau yang
menunjukkan jumlah karbohidrat yang sangat rendah atau diabaikan di dalamnya relatif. Ini
menunjukkan lebih sedikit jumlah gula yang melekat serta aditif yang hadir dalam bentuk tanpa
asap dibandingkan dengan bentuk merokok tembakau. Jenis pemanis dan gula yang biasa
ditemukan di ST adalah fruktosa, glukosa, sukrosa, maltosa, dan isomaltosa. Penambahan ini
dianggap memiliki efek penetral pada rasa pahit tembakau. Variasi besar dalam gula antara
produk tembakau dapat ada dalam bentuk-ke-bentuk, merek-ke-merek, dan negara-ke-negara. Ini
mungkin menjelaskan beragam pendapat dari para praktisi dan penyelidik gigi sehubungan
dengan konsep tembakau, meningkatkan atau mengurangi kejadian karies gigi.Penelitian ini
memiliki keterbatasan sendiri seperti kandungan karbohidrat yang tepat dari sampel tidak
diperkirakan karena beberapa nilai yang diperoleh negatif karena grafik tidak dapat diplot.
Penelitian ini dilakukan dengan metode asam fenol-sulfat dengan mempertimbangkan batasan
finansial. Penelitian lebih lanjut harus dilakukan untuk menentukan kandungan karbohidrat dari
berbagai bentuk SLT dengan berbagai teknik lain seperti kromatografi, elektroforesis kapiler,
spektroskopi inframerah, deteksi hamburan cahaya, dan spektroskopi resonansi magnetik nuklir.

KESIMPULAN

Berdasarkan penelitian mengenai memperkirakan kandungan karbohidrat dari berbagai bentuk

tembakau dengan menggunakan metode asam – fenol sulfat bahwa memperoleh kesimpulan
ketika konsentrasi tembakau meningkat, absorbansi produk tembakau (sampel) meningkat yang
pada gilirannya menunjukkan peningkatan konsentrasi karbohidratnya. Diantara sampel yang
diuji, absorbansi maksimum terlihat dengan sampel F jenis bidi yang merupakan bentuk
merokok tembakau. Bidi memiliki lebih banyak absorbansi yang menunjukkan kandungan
karbohidrat lebih banyak dibandingkan dengan bentuk tembakau tanpa asap. Bentuk tembakau
tanpa asap, sampel C jenis miraj memiliki serapan maksimum yang menunjukkan kandungan
karbohidrat maksimum diikuti oleh sampel B, D, E, dan A. Karbohidrat dalam bentuk gula, baik
yang secara inheren ada atau ditambahkan di dalamnya selama pembuatan dapat berfungsi
sebagai faktor risiko yang berkontribusi terhadap insiden karies gigi yang lebih tinggi.

DAFTAR PUSTAKA
Jain, Vardharman Mulchand et al. 2017. Journal Educ Health Promot, Vol. 05, No. 90, Hal. 01 –
10. Dental College Dhule Maharashtra India.

JUDUL JURNAL II:

Kuantifikasi Kolorimetri Sukrosa dengan Adanya Polimer Termo-sensitif Hadir Dalam

Sistem Dua Fase Berair

PENDAHULUAN

Penggunaan bahan yang dapat terbiodegradasi seperti karbohidrat sederhana dan bahan
yang dapat didaur ulang seperti polimer termo-sensitif diperlukan untuk mengembangkan sistem
dua fase aqueous yang berkelanjutan (ATPS) untuk pemurnian biomolekul. Penentuan
konsentrasi sukrosa yang akurat penting dalam studi kesetaraan cair-cair (LLE) ATPS berbasis
karbohidrat. Metode asam fenol – sulfat yang mapan telah banyak digunakan dalam pengukuran
konsentrasi karbohidrat. Namun, kehadiran polimer termo-sensitif, yang memiliki suhu larutan
kritis lebih rendah (LCST) di bawah suhu kamar, dalam sampel karbohidrat dapat menghambat
ketepatan analisis spektrofotometri karena pembentukan dua fase atau kekeruhan dalam sampel.
Dengan demikian, modifikasi berikut dibuat dalam upaya untuk menghilangkan gangguan yang
terjadi selama uji asam fenol-sulfat konvensional. Pengujian modifikasi untuk kuantifikasi
sukrosa dilakukan pada suhu dingin di seluruh reaksi untuk menghindari gangguan dari polimer
termo-sensitif. Metode ini membutuhkan volume sampel 3 μL dan karenanya volume reagen lain
yang digunakan juga sangat berkurang. Absorbansi diukur pada 520 nm yang memungkinkan
rentang linearitas yang lebih panjang (0,05-7,5%, b / v).
METODE

Pelaksanaan praktikum ini di Laboratorium Biokimia, Universitas Monash Malaysia.

Praktikum ini membutuhkan bahan – bahan seperti fenol, sukrosa, asam sulfat, triton X – 100,
dan trition X – 114. Sedangkan alat – alat dalam penelitian ini antara lain microplate, penangas
es, pipet tetes

Prosedur dalam penelitian ini pertama – tama adalah air ultra-murni digunakan selama
percobaan. Standar sukrosa disiapkan dengan mencampurkan sukrosa dalam jumlah yang sama
(konsentrasi akhir 0,05-7,5%, b / v) dan air ultra-murni. Campuran ditempatkan pada suhu kamar
(28-30 ° C). Campuran sampel dibuat dengan mencampurkan jumlah yang sama dari sukrosa dan
polimer termo-sensitif dengan konsentrasi akhir berkisar dari 0,05 hingga 7,5% (b / v) dan 0,05
sampai 5% (b / v), masing-masing. Campuran kemudian ditempatkan dalam pendingin pada suhu
4 ° C selama 1 jam untuk mencegah pembentukan fase dalam larutan sampel. Untuk mempelajari
gangguan yang dikontribusikan oleh tiga zat thermo-sensitif dalam kuantifikasi sukrosa, sampel
disiapkan dengan mencampur volume sukrosa yang sama (konsentrasi akhir 0,05-7,5%, b / v)
dan 0,5% (b / v) dari masing-masing thermo-sensitif polimer. Campuran ditempatkan pada suhu
kamar selama 1 jam sebelum pengujian dilakukan. Uji asam fenol-sulfat yang dimodifikasi
dilakukan dalam sebanyak 96 microplate, dipertahankan pada suhu dingin.75 μL asam sulfat
pekat (96-98%) ditambahkan ke 3 μL campuran sampel ini diikuti oleh penambahan sebanyak 15
μl fenol 5% (b / v). Campuran dikocok selama sekitar 5 menit dan absorbansi diukur pada 520
nm menggunakan pembaca lempeng mikro. Pengujian sampel referensi dilakukan pada suhu
kamar dan bukan di penangas es dan absorbansi diukur pada 520 nm.

HASIL

Hasil menggunakan metode asam fenol – sulfat menunjukkan bahwa, dalam pengujian
ini, suhu awal sampel dalam lempeng mikro 96-sumur adalah 8 ° C yang naik menjadi 32 ° C
dengan penambahan asam sulfat dan kemudian dikurangi menjadi 23 ° C setelah kondensasi
fenol dengan turunan furfural. Dalam kisaran suhu seperti itu, campuran sampel tidak
membentuk kekeruhan atau dua fase. Kurva standar yang diperoleh dari pengujian yang
dilakukan pada suhu dingin dan suhu kamar ditunjukkan pada gambar 1 (A) dan (B), masing-
masing. Dari gambar 1 (A) dan (B), dapat dilihat bahwa pengujian dilakukan pada suhu dingin
menunjukkan kurva standar yang sangat mirip sedangkan perbedaan yang signifikan antara
lereng kurva standar diamati untuk pengujian yang dilakukan di suhu kamar. Kurva standar
larutan yang mengandung campuran sukrosa + Triton X-100 dan sukrosa + EO50PO50 pada
suhu sedingin es dilampirkan sebagai angka tambahan (gambar 2 dan 3). Nilai koefisien
determinasi (R2), kemiringan dan standar deviasi (SD) metode asam fenol-sulfat yang dilakukan
pada suhu dingin-es dan suhu kamar masing-masing ditabulasikan dalam tabel 1 (A) dan (B).
Nilai-nilai R2 mewakili pemasangan poin data terbaik dalam satu baris dan nilai-nilai R2 pada
tabel 1 (A) dan (B) lebih besar dari 0,97. SD menunjukkan ukuran penyimpangan nilai
kemiringan masing-masing sampel dari nilai rata-rata kemiringan sukrosa standar (rata-rata).
Penyimpangan nilai kemiringan pada tabel 1 (B) lebih tinggi dari pada tabel 1 (A). Oleh karena
itu, dapat disimpulkan bahwa ada gangguan yang signifikan ketika pengujian dilakukan pada
suhu kamar.

PEMBAHASAN

Polimer termo-sensitif seperti Triton X-114, Triton X-100 dan EO50PO50 [kopolimer
acak 50% etilena oksida (EO) dan 50% propilen oksida (PO)] banyak digunakan sebagai reagen
pembentuk fase dalam ATPS karena polimer terpisah menjadi dua fase ketika larutan dipanaskan
di atas suhu larutan kritis yang lebih rendah (LCST). LCST dari Triton X-114, Triton X-100 dan
EO50PO50 masing-masing adalah 28 ° C, 67 ° C dan 55 ° C. Dalam ATPS berbasis karbohidrat,
gula digunakan sebagai salah satu komponen pembentuk fase. Pengukuran konsentrasi
komponen pembentuk fase sangat penting untuk konstruksi tie-line dalam studi ATPS.
Konsentrasi gula dalam fase dapat ditentukan dengan bantuan kromatografi fisik dan
metode kolorimetri. Di antara semua metode analisis karbohidrat, metode kolorimetri memiliki
kelebihan seperti konsumsi waktu yang lebih sedikit, murah, throughput yang tinggi, dan alur
kerja yang mudah. Metode asam fenol-sulfat adalah salah satu metode kolorimetri paling cocok
ketika campuran sampel memiliki gula bersama dengan polimer, protein atau garam. Selain itu,
dalam metode asam fenol-sulfat, pembentukan warna stabil untuk periode yang lebih lama
menghasilkan akurasi yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan metode kolorimetri lainnya
Temperatur proses yang digunakan dalam semua metode asam fenol-sulfat yang ada
tidak menguntungkan untuk pengukuran konsentrasi sukrosa di hadapan polimer termo-sensitif.
Hal ini disebabkan oleh pembentukan kekeruhan dan karenanya metode ini kurang memiliki
toleransi terhadap gangguan dari bahan thermo-sensitif dalam pengukuran konsentrasi sukrosa.
Oleh karena itu dalam pekerjaan kami, suhu dipertahankan di bawah LCST dari polimer termo-
sensitif dengan melakukan pengujian dalam lempeng mikro 96-sumur yang dipertahankan pada
suhu dingin.
KESIMPULAN

Berdasarkan hasil penelitian ini maka dapat ditarik kesimpulan bahwa metode asam
fenol-sulfat suhu rendah menawarkan pengukuran akurat konsentrasi sukrosa di hadapan polimer
termo-sensitif. Selain itu, dalam pekerjaan kami semua langkah pengujian dilakukan pada suhu
dingin yang konstan dan karenanya waktu yang digunakan untuk pengujian keseluruhan lebih
sedikit jika dibandingkan dengan semua metode yang ada. Nilai-nilai SD (kurang dari 0,002) dan
R2 (0,9982) masing-masing menunjukkan akurasi dan linearitas dari metode yang direvisi. Oleh
karena itu, metode asam fenol-sulfat suhu rendah ini dapat diperluas ke pengukuran konsentrasi
jenis karbohidrat lain dalam larutan yang mengandung polimer termo-sensitif.

DAFTAR PUSTAKA
Ramalakshmi, Subbaralayu et al. 2014. Kuantifikasi Kolorimetri Sukrosa dengan Adanya
Polimer Termo-sensitif Hadir Dalam Sistem Dua Fase Berair. Journal List Method, Vol.
01, No. 01, Hal. 229 – 232. Monash University Malaysia