Efek suplementasi vitamin A pascapersalinan pada pengatur kekebalan ASI dan fungsi kekebalan bayi:

protokol studi uji coba terkontrol secara acak

Abstrak
Latar belakang: Karena dampak terbatas pada morbiditas bayi, kematian, dan status vitamin A,
pedoman baru Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) tidak merekomendasikan suplementasi vitamin A
pascapersalinan (VAS) sebagai intervensi kesehatan masyarakat di negara berkembang. Namun, ASI
mengandung banyak komponen pelindung kekebalan yang penting untuk perkembangan kekebalan
bayi, dan beberapa komponen ini diatur oleh vitamin A.

Metode / desain: Wanita postpartum didaftarkan dalam waktu 3 hari (d) persalinan di klinik bersalin
yang terletak di daerah kumuh kota Dhaka dan secara acak ke salah satu dari empat rejimen VAS
postpartum (32 / kelompok, total 128). Rejimen tersebut adalah sebagai berikut: Grup 1: 200.000 IU VAS
pada <3 hari dan plasebo pada 6 minggu postpartum; Grup 2: plasebo
pada <3 hari dan 200.000 IU VAS pada 6 minggu postpartum; Kelompok 3: 200.000 IU VAS, baik pada <3
hari dan 6 minggu pascakelahiran; Kelompok 4: plasebo, baik pada <3 hari dan 6 minggu setelah
melahirkan. Sampel ASI pada <3 d (sebelum suplementasi)
dan 4 bulan postpartum akan digunakan untuk mengukur vitamin A dan senyawa bioaktif. Sampel darah
bayi di
Usia 2 dan 4 bulan akan digunakan untuk mengukur vitamin A, serta respon imun bawaan dan vaksin.
Data diet, antropometrik, dan morbiditas juga dikumpulkan.

Diskusi: Ini adalah uji klinis acak terkontrol plasebo pertama dari suplementasi vitamin A pascanatal
untuk menyelidiki senyawa bioaktif utama dalam ASI, penting untuk kekebalan bayi, dalam kaitannya
dengan dosis dan titik waktu suplementasi pascapersalinan dan apakah suplementasi ibu seperti itu
meningkatkan kekebalan tubuh bayi status selama periode kritis awal bayi.

Latar Belakang
Kekurangan vitamin A meningkatkan risiko kematian akibat infeksi pada anak-anak dan masih
merupakan masalah kesehatan masyarakat utama di negara-negara berkembang. Saat ini, suplemen
vitamin A (VAS) direkomendasikan untuk anak-anak mulai usia 6 bulan untuk mengurangi kekurangan
vitamin A dan risiko kematian akibat infeksi. Hingga usia 6 bulan, ASI adalah satu-satunya sumber
vitamin A untuk bayi. Namun, ada banyak bukti bahwa, di elain nutrisi penting, ASI mengandung banyak
komponen pelindung kekebalan [1,2]. Analisis protein mengungkapkan 268 protein dalam ASI, 44 di
antaranya terkait dengan pertahanan inang, sebagian besar terlibat dalam sistem kekebalan [3], dan
beberapa di antaranya diatur oleh vitamin A [4-7]. Namun, studi tentang efek VAS postpartum pada
pengatur kekebalan ASI sangat terbatas. Satu studi melaporkan kadar IgA sekretori yang lebih tinggi
dalam ASI setelah VAS postpartum segera [8]. Studi lain menunjukkan tidak ada efek pada konsentrasi
susu faktor imun termasuk IgA sekretori dan IL-8 pada 3 bulan setelah VAS postpartum dalam 1-3
minggu pengiriman [9].

penelitian tidak memiliki data tindak lanjut dan data tentang regulator imun utama lainnya dalam ASI
atau efek VAS ibu terhadap perkembangan kekebalan bayi. Namun demikian, dikarakteristikkan dengan
baik bahwa komposisi imunologis ASI berubah selama periode laktasi [2,10]. Untuk meningkatkan
simpanan vitamin A ibu di negara berkembang, yang habis selama masa kehamilan dan menyusui, dan
untuk meningkatkan kandungan vitamin A dalam ASI, pada tahun 1997, Satuan Tugas WHO / UNICEF /
IVACG merekomendasikan 200.000 IU VAS wanita postpartum dalam 6 minggu setelah pengiriman [11].
Karena dampak terbatas pada status vitamin A bayi, pedoman tersebut direvisi pada tahun 2001, dan
400.000 IU VAS, dibagi menjadi dua dosis yang sama, direkomendasikan setidaknya satu hari terpisah
[12]. Tinjauan sistematis tidak menemukan dampak VAS postpartum pada morbiditas dan mortalitas ibu
dan bayi [13-15,; l dan pedoman WHO 2011 yang baru tidak merekomendasikan VAS postpartum
sebagai intervensi kesehatan masyarakat [16].
Namun, dalam beberapa penelitian ibu dilengkapi
dengan vitamin A dalam waktu 6 minggu setelah melahirkan, tanpa membuat stratifikasi titik waktu
suplementasi selama periode postpartum. Ini adalah batasan utama dalam mempelajari dampak klinis
dari suplementasi ibu, karena kolostrum (diproduksi beberapa hari pertama pascapersalinan) tiga kali
lebih kaya vitamin A dan 10 kali lebih kaya dalam beta-karoten (provitamin A) daripada susu matang
(diproduksi 2 minggu setelah pengiriman). VAS dosis tinggi gagal meningkatkan kadar vitamin A
kolostrum pada ibu dengan kadar retinol serum yang lebih rendah [17]. Dengan demikian, metabolisme
vitamin A, efek pengaturan kekebalan, dan transfer ke kelenjar susu berbeda jika suplementasi
dilakukan pada periode postpartum segera atau terlambat di daerah di mana defisiensi endemik. Tujuan
utama dari penelitian ini adalah untuk menentukan apakah VAS post-tum meningkatkan komponen
imun dalam ASI dan apakah efek ini dimodifikasi oleh rejimen dosis selama periode postpartum (segera
atau tertunda). Sekunder, tujuan eksplorasi mencakup efek VAS postpartum pada status kekebalan bayi
dengan menentukan pola mikroba yang dikenali oleh respons imun bawaan, respons sel T, dan respons
sel plasma yang mensekresi antibodi spesifik-vaksin.

Kriteria inklusi / eksklusi

Kriteria inklusi untuk wanita postpartum adalah sebagai berikut:
(1) tinggal di dekat klinik MCHTI, untuk kenyamanan kunjungan tindak lanjut; (2) ≥18 tahun; (3) bebas
dari diabetes, neoplasia, atau penyakit kronis atau infeksi serius lainnya;
(4) telah melahirkan bayi tunggal; dan (5) kesediaan untuk membuat bayi berpartisipasi dan mematuhi
protokol. Kriteria inklusi untuk bayi baru lahir adalah: (1) bebas dari penyakit bawaan atau infeksi serius
dan (2) memenuhi syarat untuk vaksinasi sesuai dengan kebijakan klinik MCHTI.

Pengacakan dan intervensi studi

Setelah mendapatkan persetujuan tertulis, wanita yang pascapersalinan yang memenuhi syarat dalam
waktu 2 hingga 3 hari setelah persalinan diacak secara acak dengan ukuran blok 4 untuk mencapai rasio
alokasi yang sama di seluruh kelompok. Urutan acak yang dihasilkan komputer dalam satu blok
digunakan untuk menempatkan wanita ke dalam empat kelompok berikut (n = 32 / kelompok, total 128)
untuk suplementasi 200.000 IU vitamin A dan / atau plasebo selama waktu segera (<3 hari, d) dan / atau
tertunda (6 minggu) periode postpartum (Gambar 1).

● Kelompok 1: 200.000 IU vitamin A pada <3 hari dan plasebo pada 6 minggu pascapersalinan;
● Kelompok 2: plasebo pada <3 hari dan 200.000 IU vitamin A pada 6 minggu pascapersalinan;
● Kelompok 3: 200.000 IU vitamin A, baik pada <3 hari dan 6 minggu pascapersalinan; dan
● Grup 4: plasebo, baik pada <3 hari dan 6 minggu setelah melahirkan.
Pertimbangan keamanan
Kami tidak mengantisipasi efek samping serius apa pun sebagai akibat dari sekali atau dua kali
melengkapi dengan 200.000 IU vitamin A pada 6 minggu terpisah di komunitas di mana prevalensi
retinol serum rendah (<1,05 μmoI / L) di antara ibu menyusui adalah> 26% dengan sekitar 10% dari
mereka diklasifikasikan sebagai kekurangan (serum retinol <0,70 μmol / L) dan sumber makanan

vitamin A juga terbatas (data tidak dipublikasikan). Sebelumnya, dosis yang serupa dari
postpartum VAS direkomendasikan oleh WHO / UNICEF / IVACG Task Force [11,12]. Vitamin
A dosis besar ditoleransi dengan baik oleh ibu yang baru melahirkan [18]. Namun, gejala khas
hypervitaminosis A akut pada orang dewasa termasuk sakit kepala (mungkin karena peningkatan
tekanan intrakranial), mual, muntah, dan kadang-kadang demam dan disorientasi visual. Gejala-
gejala ini umumnya bersifat sementara dan tidak menyebabkan efek samping permanen [19].
Juga tidak mungkin memiliki toksisitas vitamin A kronis di antara peserta penelitian (gejalanya,
misalnya, anekseksia, kulit gatal kering, osteoporosis, dan patah tulang pinggul). Kondisi ini
dapat terjadi dari asupan harian> 25.000 IU vitamin A selama> 6 tahun atau> 100.000 IU
vitamin A selama> 6 bulan [19-21]; Namun demikian, ada variabilitas antar-individu yang luas
untuk asupan terendah yang diperlukan untuk memperoleh toksisitas tersebut. Selain itu, VAS
postpartum tidak menunjukkan efek keseluruhan pada penularan penyakit, misalnya, penularan
HIV dari ibu ke anak [22].

Perhitungan ukuran sampel

Dalam penelitian ini, tujuan utama kami adalah untuk membandingkan tanggapan rata-rata
penanda kekebalan dalam ASI setelah VAS postpartum dibandingkan dengan plasebo. Ada data
terbatas yang tersedia dengan studi manusia. Jadi satu studi, melengkapi wanita postpartum
dengan dosis tunggal 200.000 IU vitamin A meningkatkan konsentrasi sekresi immuno-globulin
A (sIgA) dalam ASI sebesar 45,7% dibandingkan dengan plasebo dalam satu hari [8]. Kami
tertarik untuk menentukan apakah setidaknya 20% penanda kekebalan yang lebih tinggi
(termasuk sIgA) dalam ASI bertahan pada 4 bulan di antara wanita yang menerima dosis tunggal
200.000 IU vitamin A baik pada <3 hari (Grup 1) atau pada usia 6 tahun. minggu (Grup 2)
postpartum dibandingkan dengan plasebo (Grup 4) dan 10% tanggapan lebih tinggi di antara
wanita yang menerima dua dosis 200.000 IU vitamin A baik pada <3 hari dan 6 minggu (Grup 3)
postpartum dibandingkan dengan wanita postpartum dosis tunggal. . Dalam desain ANOVA satu
arah, ukuran sampel 29 di masing-masing empat kelompok mencapai daya 80% untuk
mendeteksi perbedaan prediksi kami menggunakan uji-F dengan tingkat signifikansi 0,05.
Ukuran variasi dalam cara diwakili oleh standar deviasi (SD) dari 39,5 mg / dL dari sIgA. SD
umum dalam kelompok diasumsikan 126 mg / dL, nilai yang dikumpulkan dari percobaan
sebelumnya [8]. Tidak ada data yang tersedia mengenai ukuran imun bayi akibat VAS ibu.
Dalam proyek ini kami menganggap bahwa respon antibodi limfosit pada bayi dari empat
kelompok ibu adalah variabel hasil utama yang mungkin terkait dengan perlindungan
Pengumpulan sampel / data
Pengumpulan sampel ASI distandarisasi untuk mengurangi bias dan potensi variabilitas diurnal.
Hindmilk dipilih untuk membuat sampel yang seragam di seluruh peserta, karena konstituen susu
berubah dari awal hingga akhir menyusui. Ibu diminta untuk memberikan 3-5 mL sampel susu
yang mengalir menjelang akhir menyusui atau sesi pemompaan payudara antara 8 dan 9 M.
Sampel susu dikumpulkan dalam tabung plastik 15-mL steril dan segera ditempatkan dalam
kotak es dan diangkut ke laboratorium icddr, dalam waktu 4 jam pengumpulan, di mana mereka
disimpan pada suhu −80 ° C dalam alikuot 500 μL sampai analisis. Sampel ASI dikumpulkan
pada <3 hari (sebelum suplementasi), 7 minggu, dan 15 minggu postpartum. Sampel darah 2-3
mL dari bayi dan ibu dikumpulkan pada 7 minggu dan 15 minggu (Gambar 1). Seorang perawat
klinik mendapatkan sampel darah dalam tabung heparinisasi.
Selama tindak lanjut, pekerja lapangan menggunakan kuesioner yang terstruktur dalam bentuk
kertas untuk mengumpulkan data tentang riwayat kehamilan, antropometri, demografi, diet,
morbiditas, dan waktu / tanggal suplementasi ibu, vaksinasi bayi, dan pengumpulan sampel
biologis (Gambar 1).

Prosedur percobaan
Sampel susu beku akan dicairkan pada suhu 37 ° C dan disentrifugasi pada 13.000 rpm selama 15 menit
pada suhu 4 ° C. Lapisan lemak atas akan dihilangkan, dan lapisan air tengah akan diekstraksi dengan
pipet untuk pengukuran sIgA, sCD14, IL-7, dan GM-CSF dengan kit enzyme-linked immunosorbent assay
(ELISA) kit [33]. Karena TGF-β terikat pada bagian lemak susu [34], sampel susu akan diasamkan dengan
penambahan 1 N HCl selama 10 menit pada suhu kamar diikuti oleh netralisasi dengan 1,2 N NaOH / 0,5
M HEPES, seperti dijelaskan sebelumnya. [33].

Penilaian fungsi kekebalan bayi

Respon imun bawaan
Sistem kekebalan bawaan memberikan garis pertahanan pertama melawan mikroba yang menyerang.
Aktivasi reseptor pengenalan pola, seperti Toll-like receptors (TLRs), dalam sel imun menyebabkan
pelepasan regulator imun yang memiliki aktivitas antimikroba langsung dan juga dapat membentuk
sistem imun adaptif. Dalam penelitian ini, kami menilai respon sitokin terhadap stimulasi TLR4 dan TLR9.
Ekspresi TLR4 pada monosit dan neutrofil mengidentifikasi LPS bakteri, komponen struktural dinding
luar utama dari bakteri Gram-negatif. Kami mengevaluasi status inflamasi dengan mengukur respons
tumor necrosis factor (TNF) -α / IL-10 terhadap stimulasi LPS. TLR9, lebih disukai diekspresikan pada sel
dendritik plasmacytoid, mengenali sekuen oligodeoksinukleotida CpG yang belum termetilasi (CpG
ODN). Kami mengukur interferon tipe 1 (IFN) -α sebagai respons terhadap stimulasi ODG CpG. IFN-α
memainkan peran kunci terhadap replikasi virus [35] dan menginduksi ekspansi sel T sitotoksik [36,37].

Prosedur percobaan
Untuk mempelajari kekebalan bawaan, 100 uL seluruh darah (1: 1 dalam 10% plasma autolog yang
mengandung RPMI-1640) dikultur selama 24 jam pada suhu 37 ° C dan 5% CO2 dengan agonis TLR4
MPLA (monophosphoryl lipid A, Invivogen) / LPS ( Sigma) pada 1,0 ug / mL dan dengan agonis TLR9
ODN-2216 (oligonukleotida CpG tipe A, Invivogen) pada 1 uM. Konsentrasi optimal agonis ini untuk
budaya telah dipilih dari percobaan kami sebelumnya dan penelitian lain [6,38,39]. Setelah inkubasi,
supernatan bebas sel dikumpulkan dan disimpan pada suhu -80 ° dengan 1% protease inhibitor untuk
analisis TNF-α dan IL-10 (kultur MPLA / LPS) dan IFN-α (kultur ODN CpG) oleh kit ELISA.

Tanggapan polarisasi sel T

Diperlukan respons imun adaptif yang sesuai untuk pemulihan dari infeksi anak yang normal. Untuk
penilaian kompetensi imun adaptif, kami akan mengukur diferensiasi sel T helper (Th) yang berbeda
menjadi empat subtipe berbeda berdasarkan ekspresi sitokin tanda tangan sebagai respons terhadap
stimulasi mitogenik. Sitokin khusus untuk Th1, Th2, Th17, dan T regulatory (Tr) -1 masing-masing adalah
IFN-γ, IL-13, IL-17, dan IL-10. Respon Th1 mempromosikan pertahanan terhadap patogen intraseluler,
sedangkan respon Th2 mempromosikan pertahanan terhadap patogen ekstraseluler dan reaksi alergi.
Sel Th17 memainkan peran penting dalam berbagai kondisi autoimun dan perkembangan tumor. Sel-sel
Tr1 adalah subset induktif dari sel T regulator yang memainkan peran penting dalam mempromosikan
dan mempertahankan toleransi [40].

Prosedur percobaan
Untuk mempelajari respon sitokin yang dimediasi-mitigasi sel T epitop independen, seluruh darah
diencerkan dengan 1 ug / mL SEB (Staphylococcal enterotoxin B, Sigma) selama 3 hari. Setelah inkubasi,
supernatan bebas sel dikumpulkan dan disimpan pada suhu -800 dengan protease inhibitor 1% untuk
analisis IFN-γ, IL-13, IL-17, dan IL-10 dengan kit ELISA.

Tanggapan vaksin
Kami menggunakan metode baru yang dimediasi sel untuk mengukur respon antibodi spesifik-vaksin
dari sel monouklear yang disebut antibodi dalam kultur supernatan limfosit (ALS) [41]. Walaupun
antibodi serum banyak digunakan untuk menilai imunitas pasca-vaksinasi, tidak mungkin membedakan
antara antibodi yang baru diproduksi dan antibodi yang sudah ada sebelumnya sebagai hasil dari
paparan antigen sebelumnya atau dari antibodi ibu yang diturunkan secara pasif. Antibodi serum
mencakup akumulasi antibodi terlarut, sedangkan uji ALS hanya mengkuantifikasi jumlah dan kekuatan
sirkulasi, sel plasma yang mensekresi antibodi dari imunisasi baru-baru ini. Untuk mendapatkan sel
plasma ini, kami mengumpulkan sampel darah bayi 1 minggu setelah vaksinasi pertama dan 1 minggu
setelah vaksinasi ketiga (Gambar 1). Setelah vaksinasi, sel yang mensekresi antibodi dalam kelenjar
getah bening yang mengering memuncak secara sementara dan kemudian menurun dalam beberapa
minggu karena seleksi untuk sel plasma afinitas yang lebih tinggi dan hilangnya apoptosis sel dengan
afinitas rendah, dan pada saat yang sama sel mulai bermigrasi dan menumpuk di kompartemen sumsum
tulang, yang tetap merupakan situs dominan produksi antibodi [42,43]. Karena kesulitan metodologis
yang terlibat dalam penyelidikan sel plasma sumsum tulang, kami menggunakan metode ALS seperti
yang dijelaskan dalam penelitian kami sebelumnya [5].

Prosedur percobaan
Untuk mempelajari sejauh mana generasi sel plasma yang mensekresi antibodi spesifik vaksin setelah
imunisasi dosis tunggal dan tiga, kami memisahkan sel mononuklear darah perifer (PBMC) menggunakan
prosedur gradien kepadatan Ficoll, dan 1 x 107 sel / mL dalam RPMI-1640 dengan 10% serum janin sapi
(FBS) dikultur tanpa stimulasi selama 3 hari pada suhu 37 ° C dan 5% CO2. Supernatan bebas sel
kemudian dipanen untuk menentukan toksin pertusis dan respons IgG spesifik antigen permukaan
hepatitis B dengan kit ELISA yang tersedia secara komersial.

Penilaian status vitamin A.

Kadar vitamin A ASI dan plasma ibu dan bayi akan diukur dengan HPLC [44]. Karena vitamin A dikaitkan
dengan lemak susu, yang bervariasi dalam episode menyusui, kandungan vitamin A ASI akan dinyatakan
sebagai konsentrasi per gram lemak susu, diukur dengan metode creamatocrit. Metode-metode ini
sekarang ada di icddr, b [45].
Variabel hasil
Variabel hasil utama adalah regulator imun ASI pada <3 hari (sebelum suplementasi), 7 minggu, dan 15
minggu pascapersalinan. Variabel-variabel ini adalah:

● sIgA, sCD14, TGF-β, IL-7, dan GM-CSF, dan

● Status vitamin A.
Variabel hasil sekunder dikaitkan dengan respons imun bayi pada usia 7 minggu dan 15 minggu akibat
VAS ibu postpartum. Variabel-variabel ini adalah:

● Reseptor pengenalan pola mikroba (Toll-like receptor, TLR) dan merangsang respons TNF-α, IL-10, dan
IFN-α,
● Mitogen-independen mitogen (PHA) merangsang polarisasi sel T: IFN-γ (Th1), IL-13 (Th2), IL-17 (Th17),
dan IL-10 (Tr1),
● Pertusis toksin dan respon sel plasma yang mensekresi antibodi IgG spesifik antigen permukaan
setelah dosis tunggal (pada 7 minggu) dan beberapa dosis
(15 minggu) vaksinasi, dan
● Vitamin plasma A.
Variabel lain termasuk vitamin A plasma ibu, jumlah darah lengkap bayi (CBC) termasuk hemoglobin dan
indeks sel darah merah lainnya, dan data antropometri dan morbiditas bayi.

Program Info 7 (dikembangkan oleh Centers for Disease Control, CDC) untuk proyek ini. 20% data
diperiksa dengan verifikasi independen. Data laboratorium yang dihasilkan dari ELISA diekspor langsung
dari instrumen ke file data yang kompatibel dengan Excel, sedangkan data laboratorium lainnya, seperti
CBC dan data retinol, dimasukkan ke dalam lembar kerja Excel. Semua data ini akan langsung diunggah
ke proyek Epi Info untuk dihubungkan dengan variabel lain dalam database. Salinan kertas dari
kuesioner lapangan dan semua hasil uji laboratorium disimpan sebagai cadangan.

Rencana analisis data

Analisis statistik akan dilakukan di SPSS 17.0 untuk Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Analisis data
akan dilakukan dengan prinsip niat untuk mengobati. Distribusi variabel penelitian akan dianalisis untuk
mengidentifikasi pencilan dan menguji asumsi normalitas dan varian yang sama. Data akan
ditransformasikan untuk membuat distribusi normal sesuai kebutuhan. Pengacakan akan diperiksa
dengan mengevaluasi jenis kelamin bayi, cara persalinan, usia kehamilan, berat lahir, usia ibu, IMT, dan
status paritas menggunakan uji-t untuk uji kontinu dan uji chi-square untuk variabel kategori. Variabel-
variabel ini akan digunakan sebagai kovariat dalam model regresi linier berganda untuk menilai efek
pengobatan pada variabel hasil berkelanjutan dari tindakan imun. Jika penyesuaian ini memiliki dampak
yang besar pada temuan, efek penyesuaian akan dilaporkan bersama dengan efek tanpa penyesuaian
untuk mengevaluasi apakah proses penyesuaian mengganggu perbandingan acak. Istilah interaksi,
misalnya, pengobatan x titik waktu suplementasi, akan digunakan dalam analisis multivariat model
campuran diikuti dengan inspeksi rasio-F univariat. Interaksi dan efek utama akan dianalisis lebih lanjut
untuk perbedaan rata-rata spesifik menggunakan analisis post hoc dengan koreksi alpha. Ukuran efek
yang terkait dengan F-statistik univariat akan dinyatakan sebagai eta-squared (η2) untuk memberikan
indikasi varians yang dijelaskan oleh efek atau interaksi utama. Ukuran efek berdasarkan perbedaan
spesifik dalam rata-rata akan dinyatakan sebagai Cohen's d untuk indikasi besarnya perbedaan. Korelasi
bivariat dalam hubungannya dengan analisis regresi berganda akan digunakan untuk mengevaluasi
hubungan antar berbagai langkah-langkah kekebalan yang terkait dengan efek VAS.

Diskusi
Selama awal kehidupan, bayi tidak mampu menghasilkan faktor-faktor pengaturan kekebalan yang
cukup untuk pertahanan pejamu yang memadai. Senyawa bioaktif ASI dapat mengkompensasi
keterlambatan perkembangan sistem kekebalan penerima dengan memberikan dukungan yang
diperlukan di situs mukosa atau sistemik. Kami berhipotesis bahwa VAS dosis tinggi selama periode
postpartum akan membaik

faktor-faktor pengaturan kekebalan ASI dan akibatnya meningkatkan status kekebalan bayi dalam
keadaan geografis di mana prevalensi defisiensi vitamin A sangat tinggi. Namun, konsentrasi vitamin A
dalam ASI paling tinggi dalam 3 minggu pertama postpartum, yaitu di kolostrum pada minggu pertama
dan dalam susu transisi dalam 2 hingga 3 minggu berikutnya [46]. Setelah periode ini, ibu yang bergizi
baik biasanya memiliki konsentrasi vitamin A yang stabil selama menyusui [47], sementara ibu yang
kekurangan nutrisi mungkin memiliki ASI dengan konsentrasi yang lebih rendah [46]. Namun, jika ibu
tidak dapat memenuhi peningkatan kebutuhan vitamin A selama menyusui melalui diet, tubuhnya
berusaha untuk mengimbanginya dengan menarik cadangan vitamin A di hati [48]. Dengan demikian,
asupan makanan ibu merupakan penentu penting konsentrasi vitamin A ASI dan status vitamin A bayi
[46,49]. Mempertimbangkan hal ini, kami mengantisipasi bahwa data dari ibu-ibu Kelompok 2 dalam
penelitian kami, yang menerima 200.000 IU suplemen vitamin A tunggal pada 6 minggu postpartum,
dapat menunjukkan komponen kekebalan ASI yang lebih tinggi daripada data untuk ibu-ibu Kelompok 1,
yang menerima suplemen dosis yang sama di <3 hari postpartum. Prediksi ini didukung oleh
pengamatan bahwa suplementasi ibu dengan 400.000 IU dalam 24 jam postpartum tidak meningkatkan
status ASI pada 3 atau 6 bulan [50]. Namun, sebuah penelitian yang menggunakan dosis 300.000 IU
pada 1 hingga 3 minggu postpartum melaporkan peningkatan konsentrasi retinol ASI pada 6 hingga 9
bulan postpartum [51], menunjukkan bahwa periode suplementasi postpartum penting untuk status
retinol ASI. Namun, VAS dosis tinggi menghasilkan peningkatan segera dalam konsentrasi retinol yang
bersirkulasi dalam plasma dan ASI yang membutuhkan 3 hingga 4 minggu untuk diseimbangkan dengan
penyimpanan hati. Mempertimbangkan fenomena biologis ini, kami memperkirakan bahwa wanita
dalam Kelompok 3, yang menerima dosis kedua vitamin A 6 minggu setelah dosis pertama (total: 2 x
200.000 IU), akan lebih banyak menyimpan vitamin A yang berkelanjutan dan dengan demikian lebih
banyak ASI komponen kekebalan tubuh.
Sepengetahuan kami, ini adalah yang pertama yang dikendalikan plasebo
uji klinis acak dari VAS pascanatal untuk menyelidiki senyawa bioaktif utama dalam ASI, penting untuk
kekebalan bayi, dalam kaitannya dengan dosis dan titik waktu suplementasi pascapersalinan dan apakah
suplementasi ibu seperti itu meningkatkan status kekebalan bayi selama periode kritis awal bayi ketika
bayi mengalami adaptasi terhadap organisme non-patogen dan patogen. Secara khusus, karakterisasi
respon imun adaptif pada bayi mengikuti jadwal vaksinasi, kami akan dapat mengevaluasi durasi dan
sifat kompetensi imun terhadap infeksi secara umum. Poin waktu untuk suplementasi ibu dipilih
berdasarkan pertemuan. Ibu yang mengunjungi fasilitas kesehatan atau rumah sakit untuk melahirkan
biasanya tinggal 3 sampai 4 hari setelah melahirkan normal dengan masa tinggal yang lebih lama untuk
melahirkan sesar. Peluang lain untuk
para ibu yang mengunjungi klinik adalah 6 minggu pascapersalinan untuk memulai imunisasi untuk bayi
mereka di bawah program imunisasi bayi nasional. Hasil studi kami akan membantu pembuat kebijakan
untuk mempertimbangkan program VAS postpartum tanpa memperkenalkan kunjungan tambahan oleh
para ibu.
Penelitian kami tidak bertujuan untuk menentukan dampak VAS postpartum pada morbiditas atau
mortalitas, yang akan membutuhkan ukuran sampel yang lebih besar dan sampel yang mewakili
populasi. Tujuan utama kami adalah untuk melakukan analisis inklusif dari parameter imun dalam ASI
dan sampel darah bayi, dan untuk alasan pragmatis, kami membatasi daerah tangkapan kami ke satu
klinik bersalin perkotaan, dari mana sampel darah dapat mencapai icddr, b laboratorium dalam waktu 3
hingga 4 jam pengumpulan. Prevalensi defisiensi vitamin A di antara wanita hamil di daerah itu diketahui
tinggi dan mirip dengan di daerah pedesaan di Bangladesh [52,53], tetapi mempertimbangkan beban
penyakit dan faktor lingkungan, pengaturan kota dan pedesaan mungkin berbeda. Pendaftaran di klinik
bersalin daripada di masyarakat tidak condong subjek studi kami menuju status sosial ekonomi yang
lebih tinggi, karena klinik bersalin publik ini menyediakan perawatan ibu dan anak dengan tingkat
subtilisasi tinggi atau tanpa biaya.
Singkatnya, penelitian yang sedang berlangsung adalah upaya untuk memahami alasan biologis untuk
efek potensial dari suplementasi vitamin A pascapersalinan dengan dosis yang tepat dan titik waktu
pascapersalinan untuk memastikan kecukupan vitamin A dan pasokan senyawa bioaktif dalam ASI untuk
memenuhi kekebalan optimal bayi. pengembangan serta kebutuhan vitamin A harian.

Status percobaan
Penelitian ini telah berada dalam fase rekrutmen aktif sejak April 2014. Antropometri dan analisis
sampel darah segar bayi termasuk CBC, kultur sel mononuklear, dan kultur darah lengkap dengan agonis
TLR dan dengan PHA mitogen sedang dilakukan. Setelah akhir tindak lanjut, analisis laboratorium
terhadap sto