CÓDIGO FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN 01 PÁGINA 1 DE 2

PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA 02/09/2016
FORMATO GUIA PARA PRACTICA DE LABORATORIO VIGENCIA:

CURSO DE BIOTECNOLOGIA
PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA Y CIENCIAS AGRICOLAS
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES

Práctica No. 5: Esterilización

Introducción.

Los procesos de búsqueda, identificación y caracterización de microorganismos son la base

científica de la biotecnología; en el proceso de exploración de nuevas alternativas para el
mejoramiento de procesos con el uso de herramientas biológicas emana la necesidad de
desarrollar o establecer procedimientos tales como los que se han construido a lo largo del
desarrollo del curso donde se inicia con la evaluación de comportamiento del crecimiento
microbiano bajo factores extrínsecos.

pasamos hacer asilamiento, identificación morfología, evaluación metabólica a través de

pruebas bioquímicas y confirmación con tinción de gram, y tinción de esporas. paso a seguir
se evalúa las opciones de conservación de microorganismo y las herramientas usadas para
los procesos de esterilización para garantizar la calidad del estudio a desarrollar. El control
de microorganismos mediante procesos de esterilización, tiene especial importancia en el
laboratorio, dado que la escogencia del método a utilizar y del material a procesar me
definen la eficacia del proceso de eliminación microbiana y por ende garantizan la no
contaminación de muestras o cultivos, hechos fundamentales en la validez de un resultado
en el laboratorio.

Marco Teórico.
Métodos físicos
Los métodos físicos son aquellos que no involucran el empleo de sustancias letales para los
microorganismos, sino procedimientos físicos como la radiación ionizante, el calor o
la filtración de soluciones con membranas que impiden el paso de microorganismos, incluyendo
virus. El método más usado en esta categoría es el calor que mata microorganismos por la
desnaturalización de las enzimas; el cambio resultante en la forma tridimensional de
las proteínas las inactiva. La resistencia al calor varía entre los diferentes microorganismos; esta
diferencia puede ser expresada como el punto térmico de muerte (PTM) el cual se define como
la temperatura más baja a la cual todos los microorganismos en una suspensión líquida serán
eliminados en 10 minutos.
Otro factor que debe ser considerado en una esterilización es el tiempo requerido. Este puede
expresarse como el tiempo de muerte térmica (TMT), el cual es el tiempo mínimo para que toda
bacteria en un cultivo líquido en particular sea exterminada a una temperatura determinada.
Ambos PTM y TMT son guías útiles que indican la severidad del tratamiento requerido para
matar a una población de bacterias dada. El tiempo de reducción decimal (TRD, o valor D) es
el tercer concepto relacionado con la resistencia bacteriana al calor. TRD es el tiempo, en
minutos, en el cual el 90 % de una población bacteriana a cierta temperatura será eliminada los
tratamientos, térmicos, en resumen, son métodos para conservar los alimentos.
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Métodos térmicos
Los métodos térmicos suelen englobar todos los procedimientos que tienen entre sus fines la
destrucción de los microorganismos por el calor. Los métodos son tanto la pasteurización como
la esterilización, cuya finalidad principal es la destrucción microbiana, como al escaldado y a la
cocción, procesos en los que también se consigue una cierta reducción de la flora microbiana,
pero que sus objetivos principales son la variación de
las propiedades físicas.
Esterilización por calor seco
Calor húmedo Temperatura (°C) Tiempo (minutos)
Las condiciones de temperatura y presión de un 121 360
proceso de esterilización por vapor de agua en
un autoclave van de 121 °C a 134 °C y 275-350 kPa. 140 180
Para el tratamiento de residuos hospitalarios se 150 150
emplean tiempos de operación entre 20 y 30 minutos.
El método de esterilización por autoclave utiliza 160 120
pruebas microbiológicas, las cuales se ingresan 170 60
dentro del ciclo de operación y posteriormente por
medio de una incubadora se busca detectar si hay 180 30
crecimiento de microorganismos. Uno de los
microorganismos utilizados en estas pruebas es el Bacillus stearothermophilus.

Calor seco
Las temperaturas de esterilización van desde 121 °C a 180 °C, teniendo en cuenta los tiempos
de esterilización para cada caso

• Radiaciones.

Las ondas electromagnéticas, acústicas o de partículas subatómicas producen daño en el

material genético de la bacteria que puede causar su muerte, este es el método de
esterilización en frío, se utiliza más frecuentemente en la industria de alimentos y en la
farmacéutica. La luz ultravioleta emplea lámparas en la que se emite a una longitud de onda
entre
30 y 40 nanómetros, estas radiaciones son absorbidas por el ácido nucleico de la bacteria
y por lo tanto tiene acción letal, el uso más amplio de este método es en salas de quirófano,
medios de cultivo y en cámaras de bioseguridad en el laboratorio.
Los rayos X son letales para las células microbianas y los seres vivos superiores, por su
alto costo y mala difusión de las radiaciones que afectan al usuario son de poco uso en el
control microbiano.
Los rayos gama tienen mucha energía y poder de penetración, son emitidos por isótopos
radioactivos como el Co60 , son letales para todas las formas de vida, se ha utilizado
alimentos empacados pero su uso en el área hospitalaria es limitado a algunos
procedimientos de diagnóstico.
Los rayos catódicos o haz de electrones son microbicidas a velocidades extremas, se usan
para esterilizar material quirúrgico, drogas o otros materiales tienen como ventaja que estos
pueden esterilizarse después de empacados a temperatura ambiente.
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Objetivos

Comprender el fundamento del método de esterilización físico: calor a vapor presión, su

importancia y utilidad dentro de procesos industriales.

• Aprender el funcionamiento básico de la autoclave.

• Comprender el fundamento y utilidad de la LUV.
• Evaluar y analizar el comportamiento del medio líquido preparado y esterilizado, así
también el medio: PCA expuesto a LUV y cámara de flujo laminar más incubación a 37° C;
y exposición a ambiente.