Jurnal Kultur Jaringan

Nama Anggota Kelompok :

1. Alfijanti Sjahrina Qadr (1601125034)

2. Aprilia Dwi Ambarwati (1601125025)
3. Cut (15
4. Rafika Noor (15

Kelas : 7 A / Pendidikan Biologi

Jurnal 1

 Judul : “Glutathione (GSH) induces embryogenic response in in vitro

cultured explants of Arabidopsis thaliana via auxin- related mechanism”
( Glutathione (GSH) menginduksi respons embriogenik dalam kultur in vitro
eksplan Arabidopsis thaliana melalui mekanisme terkait auksin )

 Abstrak
Untuk mendapatkan wawasan tentang hubungan antara stres oksidatif dan
induksi somatik embriogenesis (SE), kami menganalisis efek penurunan
glutathione (GSH) dari aktivitas antioksidan pada potensi embriogenik dari
eksplan yang dikultur in vitro dari model tanaman Arabidopsis. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa pengobatan GSH menghasilkan induksi SE pada eksplan
yang telah dikultur pada medium auksin-habis.
SE yang diinduksi GSH terbukti berhubungan dengan biosintesis auksin dan
akumulasi dari kedua transkrip YUCCA (YUC10 / 11) dan senyawa indolik yang
merupakan indikasi untuk IAA. Sebaliknya, 2,4-D pengobatan ditemukan untuk
meningkatkan tingkat GSH pada eksplan yang dikultur dan dengan demikian,
interaksi yang kompleks antara auksin dan stres oksidatif diasumsikan
mengendalikan induksi SE.
Regulator genetik SE yang diinduksi auksin, LEC1dan gen LEC2, juga diatur
naik dalam SE yang dipicu GSH. Sebaliknya, ekspresi ini menghasilkan BBM dan
MYB118 secara jelas berbeda di GSH- daripada di 2,4-D yang diinduksi SE, yang
menunjukkan perbedaan dalam regulasi genetik ini. jalur embriogenik alternatif.
Secara kolektif, penelitian ini memberikan bukti bahwa GSH menerapkan
perubahan oksidatif tingkat stres mempengaruhi produksi auksin, yang memicu
perkembangan embriogenik pada eksplan yang dikultur.

 Pendahuluan
Embriogenesis somatik (SE) adalah spesifik tanaman yang unik proses
perkembangan di mana somatik dibedakan sel-sel tanaman menghasilkan embrio
somatik. SE banyak digunakan dalam bioteknologi hijau untuk regenerasi
tanaman dari jaringan biakan in vitro untuk transformasi genetik, tanaman
1
 produksi mikro dan benih artifisial. Selain nilai praktisnya, SE menyediakan
sistem eksperimental di studi tentang penentu genetik dan fisiologis plastisitas
perkembangan sel somatik tanaman. Khususnya, investigasi induksi SE di
Arabidopsis, model di genomik tanaman, telah banyak berkontribusi pada
identifikasi gen yang mengontrol transisi embriogenik secara somatik sel tanaman.
Untuk menginduksi SE, eksplan biasanya dirawat dengan auksin dan 2,4-D,
herbisida auksinat yang banyak digunakan digunakan untuk menginduksi SE
secara efisien pada tanaman yang berbeda termasuk Arabidopsis. Selain
aktivitasnya yang seperti auksin, 2,4-D juga telah dipostulatkan untuk memicu SE
melalui stres mekanisme terkait respons. Sejalan dengan ini asumsi, ekspresi yang
berbeda dari stres yang terkait gen dalam 2,4-D-induced kultur embriogenik
Arabidopsis dan tanaman lainnya dilaporkan. Meskipun banyak penelitian telah
menunjukkan peran respons stres dalam transisi embriogenik sel tanaman somatik,
hubungan antara stres dan mekanisme induksi SE masih belum jelas.
Stres oksidatif yang dihasilkan dari ketidakseimbangan antara produksi spesies
oksigen reaktif (ROS) dan pertahanan antioksidan tampaknya tidak terpisahkan
dengan menanam kultur in vitro. Peran utama dalam pertahanan intraseluler
terhadap stres oksidatif dikaitkan dengan glutathione (GSH), tripeptide non-enzim
di mana-mana aktivitas antioksidan. GSH mengurangi tingkat stres dengan
memadamkan ROS dalam jalur askorbat-glutathione dan rasio dari tereduksi
(GSH) menjadi glutathione teroksidasi (GSSG) menunjukkan status redoks
seluler. GSH bertindak sebagai molekul pensinyalan multifungsi di berbagai
proses tanaman termasuk detoksifikasi logam berat, modulasi dari siklus sel dan
perbedaan sel, the regulasi apoptosis sel, perkembangan embrio dan pematangan
benih. Kontrol GSH aktivitas protein spesifik ROS termasuk yang yang sangat
penting untuk transkripsi gen, dan yang relevan, GSH telah diindikasikan untuk
mengatur ekspresi gen secara berbeda organisme termasuk Arabidopsis.
Dalam Arabidopsis, studi tentang peran status redoks dalam respon
embriogenik eksplan yang dikultur terbatas dan termasuk manipulasi genetik asam
askorbat (AA) di tingkat seluler untuk meningkatkan jumlah dan kualitas embrio
somatik. Jadi, untuk belajar lebih banyak tentang dampak stres oksidatif pada
embriogenik pemrograman ulang sel somatik dan, khususnya, untuk
mengidentifikasi komponen genetik yang merespons status redoks budaya, kami
menganalisis respon morfogenik in vitro eksplan Arabidopsis yang diobati dengan
GSH, yang merupakan model di genomik tanaman.

 Metode penelitian
Eksplan dan media budaya

Embrio zygotik yang belum matang (IZEs) pada akhir kotiledon tahap
pengembangan digunakan untuk membangun kultur in vitro mengikuti
protokol standar untuk isolasi eksplan dan sterilisasi (Gaj 2001). Semua
media yang digunakan untuk kultur eksplan didasarkan pada media E0 itu
terdiri dari unsur mikro dan makro B5, 20 g / L sukrosa dan 8 g / L agar.

2
 Modifikasi berbeda dari media E0 diterapkan termasuk suplementasi E0
dengan (i) 0,1, 0,5 dan 0,75 mM GSH (Glutathione L -uced, Sigma-
Aldrich) (E0G); (ii) 5 μM dari 2,4-D (asam 2,4-diklorofenoksiasetat;
Sigma-Aldrich) (E5); (iii) 5 μM 2,4-D dan GSH pada konsentrasi 0,1 dan
0,5 mM (E5G). GSH dilarutkan dalam H2O, flter disterilkan dan
ditambahkan ke E0 yang diautoklaf dan didinginkan dan media E5 untuk
menghasilkan media E0G dan E5G. Media GSH yang baru disiapkan
digunakan untuk budaya eksplan pada hari yang sama.

 Diskusi & Kesimpulan

Diskusi
GSH kuat dalam menginduksi SE Pada Arabidopsis, induksi SE yang
efisien membutuhkan perawataneksplan IZE dengan auksin, lebih disukai
dengan 2,4-D (Gaj 2004). Di sini, kami mengindikasikan bahwa GSH
cukup untuk diinduksi SE dalam eksplan yang telah dikultur pada bebas
auksin medium. Meskipun efek menguntungkan GSH pada somatik
produksi embrio pada tumbuhan runjung ditunjukkan (Belmonte dan
Yeung 2004), aksi SE-mempromosikan GSH pada auksin-habis media
belum dibuktikan. Meskipun mirip dengan 2,4-D, GSH mempromosikan
induksi SE, proses embriogenik yang dipicu oleh senyawa-senyawa ini
tampaknya berbeda dalam hal jenis SE yang terlibat jaringan dan efisiensi
eksplan yang merespons.
Dalam eksplan IZE yang diterapi 2,4 D, perkembangan pembibitan
terhambat dan SE secara efisien diinduksi oleh 80-90% dari eksplan dan
dengan demikian sistem ini banyak digunakan dalam studi tentang SE
(Pillon et al. 1996; Gaj 2001; IkedaIwai et al. 2002; Su et al. 2009;
ditinjau dalam Wójcikowska dan Gaj 2016). Embrio somatik yang
diinduksi 2,4-D adalah diinduksi pada jaringan embrio IZE termasuk sisi
adaxial kotiledon dan kedekatan SAM (Kurczyńska et al. 2007). Berbeda
dengan 2,4-D, GSH tampaknya kuat dalam mempromosikan embriogenik
respon dalam jaringan pasca-embrionik yang diturunkan dari IZE dan
bibit cacat secara morfologis yang telah berkembang dari eksplan yang
diperlakukan GSH.
Regulator genetik dari SE yang diinduksi GSH
Untuk mendapatkan wawasan tentang jalur regulasi respon
embriogenik yang dipicu GSH, ekspresi gen pengkodean TF yang
memiliki fungsi yang terdokumentasi di SE induksi, termasuk LEC1,
LEC2, BBM dan telah dibuat. Hasilnya menunjukkan bahwa GSH secara
substansial mengatur tiga yang dianalisis TF, termasuk LEC1, LEC2 dan
MYB118. LEC1 dan LEC2, yang merupakan anggota kelompok LEAF
COTYLEDON dari gen yang menyandikan regulator utama dari jalur
hormonerelated selama perkembangan embrio zygotic. Sebuah ekspresi
ektopik LEC1 dan LEC2 memicu induksi SE pada bibit tanpa perlakuan
auksin dan peran penting dari gen ini dalam auksin yang diinduksi SE

3
ditunjukkan. Itu analisis saat ini menunjukkan bahwa LEC1 dan LEC2
juga berkontribusi untuk SE yang diinduksi GSH mungkin melalui
aktivasi dari jalur biosintesis auksin tergantung YUC. Untuk mendukung
asumsi ini, YUC10 dengan Ekspresi yang diinduksi GSH (penelitian ini)
dipostulatkan menjadi menjadi di antara target LEC1 dan LEC2.
Secara kolektif, pembuatan ekspresi gen menyiratkan hal itu jalur
embriogenik yang diinduksi GSH berbagi beberapa kesamaan dengan
yang diinduksi oleh 2,4-D dalam hal stimulasi dari gen YUC auksin-
biosintesis dan peningkatan ekspresi regulator TF SE, LEC1 dan LEC2.
Namun, Ungkapan yang berlawanan menyatakan BBM dan MYB118 itu
ditemukan dalam SE yang diinduksi GSH-versus 2,4-D menyiratkan
perbedaan antara jalur genetik yang dipicu sebagai respons terhadap stres
oksidatif dan auksin. Wawasan ke dalam hubungan antara ekspresi gen
TF dan keseimbangan redoks akan sangat membantu dalam
mempertahankan specifc komponen jalur SE yang dipicu GSH.

Kesimpulan
Interaksi yang kompleks dan saling menguntungkan antara status
redoks dan proses genetik / epigenetik tampaknya mengendalikan
pemrograman ulang embriogenik somatik sel tanaman dan studi ekstensif
diperlukan untuk mengungkap peran serbaguna ROS dan antioksidan
dalam molekul mekanisme induksi SE