Anda di halaman 1dari 8

BioTrends Vol.8 No.

2 Tahun 2017

PENINGKATAN PERFORMA PERTUMBUHAN KULTUR SEL


FIBROBLAS DAN APLIKASINYA UNTUK PERBAIKAN
JARINGAN YANG RUSAK
FEMIN DAMAYANTI, SYUBBANUL WATHON
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Jember
Jl. Kalimantan No. 37, Kampus Tegal Boto, Jember, 68121
Corresponding author : syubbanulwathon@unej.ac.id

J aringan ikat adalah salah


satu dari empat macam
jaringan yang ada dalam
tubuh manusia. Jaringan
berbentuk memanjang dan
memiliki retikulum
endoplasma kasar yang
jumlahnya banyak. Fibroblas
1. Teknik Pembuatan Kultur
Sel Fibroblas

1.1. kultur Fibroblas


tersebut adalah jaringan ikat, membuat serat-serat kolagen, Menggunakan Culture
otot, saraf dan epitel. Jaringan retikulin, elastin, Dish
ikat merupakan jaringan- glikosaminoglikan dan
jaringan fibrosa yang terdiri glikoprotein dari substansi Sampel kulit dicuci dengan 50
atas kolagen. Kolagen intercellular amorf. (Mescher, ml polipropilena dalam PBS.
merupakan protein yang paling 2010). Fibroblas Sampel kulit yang ukurannya
banyak terdapat di dalam mensekresikan molekul pro- relatif besar, maka jaringan
tubuh mamalia yang kolagen dalam matriks intersel. subkutan dan epidermisnya
diproduksi oleh fibroblas. Polimerisasi dari prokolagen dipisahkan dengan cara
Fibroblas tersebar diantara menjadi mikrofibril terjadi dihilangkan menggunakan
kolagen. Selain itu, fibroblas diluar sitoplasma tersebut. pisau bedah kemudian sampel
juga mensekresi glikoprotein, Pada orang dewasa, fibroblas kulit diinkubasi selama 45
glikosaminoglikan, serta dalam jaringan ikat jarang menit hingga 4 jam dengan
proteoglikan yaitu polisakarida mengalami pembelahan. 0,5% PBS dalam suhu 37 °C.
yang berbentuk gel seperti Mitosis hanya tampak bila Potongan kulit yang telah
pelumas untuk menjaga organisme memerlukan diinkubasi diletakkan di tengah
ligamentum dan tulang rawan tambahan fibroblas. Hal ini culture disk dan ditutup
tetap berfungsi dengan baik. terjadi apabila jaringan ikat dengan kaca penutup. Media
Selain itu, fibroblas juga mengalami kerusakan (Spector pertumbuhan DMEM (
mempunyai kemampuan untuk dan Spector, 2002). Sel Dulbecco Modified Eagle
memperbaiki jaringan yang fibroblas banyak dikulturkan Medium) diteteskan sebanyak
rusak dan jumlahnya akan untuk keperluan cangkok kulit 1 sampai 2 ml ke dalam culture
bertambah apabila terjadi berkaitan dengan fungsinya dish. Desain kultur fibroblas
pelukaan (Mescher, 2010). menghasilkan serat kolagen dalam culture dish dapat
Fibroblas adalah sel yang dan memperbaiki jaringan dilihat pada gambar dibawah
paling banyak terdapat dalam epidermis yang rusak. ini :
jaringan ikat, sel nya

32
BioTrends Vol.8 No.2 Tahun 2017

Gambar 1. Kultur eksplan kulit, (A) tampak atas; (B) tampak samping ( Sumber :
Takashima,2001).

Kultur biasanya diinkubasi ditambah dengan 2% FBS , growht factor (Furukawa et


pada medium DMEM dexamitasobe dan fibroblas al., 2001.).

1.1 Kultur Fibroblas fibroblas menggunakan flasks seperti gambar dibawah ini :
menggunakan flasks

Sel fibroblas yang berhasil


diisolasi kemudian
dimasukkan dalam flasks (
tabung gelas) yang
didalamnya mengandung
media DMEM dan suplemen
lain menggunakan pipet
pasteur, kemudian dilakukan
subkultur beberapa kali
dengan membuang media
DMEM lama dan mengganti
dengan media DMEM yang
baru menggunakan teknik
pipetting hingga diperoleh
single coloni. ( Friedeinstein et
al., 1987 ). Mekanisme kultur

1.2 Kultur Fibroblas


menggunakan
bioreaktor Gambar 2. Koloni sel dimasukkan dalam flask dengan metode
pipetting dan disubkultur berkali kali dengan metode
Penggunaan bioreaktor pipetting. ( Sumber: Friedeinstein et al., 1987 .
memiliki beberapa kelebihan

33
BioTrends Vol.8 No.2 Tahun 2017

dibandingkan dengan cultur akan dialirkan secara antibiotik gentamisin


dish atau flask karena mampu otomatis. Terdapat serat poly- (Tharakan & Chau, 1985).
mengatur komponen abiotik d-lisin yang memfasilitasi
seperti saturasi CO2, pH, suhu, perlekatan sel. Media Konsep metode kultur
kelembaban dan lainnya, pertumbuhan berupa media fibroblas menggunakan
memudahkan dalam DMEM, Fetal Calf Serum, anti bioreaktor seperti gambar
subkultur media karena media jamur fungizone dan dibawah ini :

B
A

Gambar 3. Gambar (A) Konsep bioreaktor tanda panah menunjukkan aliran media dan udara,
(B) sel fibroblas akan tumbuh menempel pada serat lisin ( sumber : Tharakan &
Chau, 1985)

Gambar 4. Kultur sel fibroblas setelah 12 jam (A), 24 jam (B) dan 36 jam (C). (Sumber :
Furukawa et al., 2001).
34
BioTrends Vol.8 No.2 Tahun 2017

1. 2. Peningkatan dan elemen jejak 1.4. Pro dan kontra tentang


Pertumbuhan Kultur Sel (misalnya transferrin) FBS
Fibroblas secara Biologis dan lipid (misalnya
lipoprotein) Penggunaan FBS mulai
Proliferasi sel fibroblas dapat dibatasi karena beberapa isu,
ditingkatkan secara biologis (iv) Faktor keterikatan antara lain :
dengan mengganti serum dan penyebaran, 1. Proses pembuatan FBS
pertumbuhan yang biasa bertindak sebagai dianggap menyiksa janin
digunakan yaitu FBS ( Fetal penginisiasi sapi karena ada
Bovine Serum ) menggunakan perkembangan. kemungkinan janin sapi
serum yang diisolasi dari (v) masih hidup sebelum
darah manusia, sehingga lebih (vi) Faktor stabilisator dan jantungnya ditusuk untuk
efektif. Selain serum, juga detoksifikasi untuk diambil darahnya. Selain
perlu ditambahkan faktor menghambat enzim protease itu, janin yang dipisah dari
faktor tumbuh yang seperti α antitrypsin atau α2 tubuh induknya akan
meningkatkan proliferasi sel macroglobulin, atau secara mengalami kekurangan
sel, serta ditambahkan pula tidak langsung dengan oksigen yang
ekstrak tanaman yang telah bertindak sebagai subtratyang menyebabkan kerusakan
terbukti mampu tidak spesifik untuk protease orak dan jaringan tubuh.
meningkatkan proliferasi sel. dan molekul (racun) lainnya. Tindakan ini dianggap
menyiksa hewan. Sekitar 2
1.3. FBS ( Fetal Bovine FBS dipanen melalui juta janin yang harus
Serum ) pemotongan induk sapi yang dibunuh pertahun untuk
hamil dan dilakukan memenuhi kebutuhan FBS
Berdasarkan metode-metode pengangkatan organ dalam (Valk et al., 2002 ).
kultur sel, FBS sering termasuk saluran
digunakan sebagai suplemen reproduksinya. Janin diambil 2. Pertumbuhan seluler dan
tambahan dalam kultur dan dibersihkan dari air respon fisiologis yang tidak
karena FBS merupakan ketuban dan didesinfeksi. tepat, dalam beberapa
suplemen esensial yang Janin sapi yang berumur kasus efek negatif dari FBS
digunakan dalam media kultur minimal 3 bulan ditusuk dilaporkan dapat
sel. FBS diekstraksi dari serum jantungnya untuk mengurangi menghalangi pematangan
janin sapi sehingga FBS kontaminasi. Darah yang sel atau menyebabkan
merupakan campuran keluar kemudian ditampung diferensiasi sel tertunda (
protein, vitamin, karbohidrat, dan disentrifugasi Valk et al, 2015).
lipid, hormon, faktor berpendingin untuk
pertumbuhan, mineral yang memisahkan serum dari sel 3. Keraguan mengenai
berperan penting dalam darah. Janin berumur 3 bulan keamanan FBS karena
pertumbuhan sel. Fungsi menghasilkan sekitar 150 ml kemungkinan adanya
utama serum dalam media FBS mentah, pada 6 bulan kontaminasi dari virus,
kultur adalah untuk sekitar 350 ml dan pada 9 prion, endotoksin atau
memberikan: bulan sekitar 550 ml (Valk et mikoplasma yang masih
(i) Faktor hormonal al., 2002). FBS dibuat tinggi meskipun telah
untuk merangsang menggunakan serum janin dilakukan sterilisasi
sapi yang disterilkan(salah dengan radiasi gamma.
(ii) Pertumbuhan, satunya dengan radiasi Protein prion, endotoksin,
proliferasi dan gamma, biasanya cobalt-60) mikoplasma pada
diferensiasi sel. untuk membunuh virus dan beberapa kasus dilaporkan
mycoplasma ( Fadhani, 2005). dapat menyebabkan reaksi
(iii) Protein transportasi alergi (Valk et al, 2015).
yang membawa
hormon (misalnya 4. FBS memiliki variabilitas
transkortin),mineral besar dan banyaknya

35
BioTrends Vol.8 No.2 Tahun 2017

variasi eksperimental akan bermain peran regulasi dalam suplemen, yang menyediakan
membatasi reproduktifitas proliferasi sel (Scher et al., faktor pertumbuhan penting,
antar laboratorium (Valk et 1979 ). protein, hormon dan enzim (
al, 2015). Sovkova et al., 2017).
Beberapa dekade terakhir,
5. Kemurnian FBS diragukan banyak usaha telah dilakukan 1.2.1 PRP ( Platelet Rich
setelah adanya kasus untuk menggantikan FBS, Plasma ) dan PL (
pencampuran FBS dengan diantaranya adalah PRP Platelet Lysat)
komponen lain. Hal ini (Platelet Rich Plasma), PL
menyebabkan (Platelet Lysat), PPPS Platelet Rich Plasma (PRP)
kekhawatiran FBS yang (Platelet-Poor Plasma Serum), merupakan trombosit
dikomersialkan tidak murni WBS (Whole Blood Serum). konsentrasi tinggi dicampur
sehingga keamanannya Semua suplemen tersebut dengan sedikit plasma setelah
tidak terjamin ( Valk et al, sentrifugasi. Kekurangan PRP
2015). diekstraksi dari platelet atau adalah masa simpan yang
serum. relatif pendek. Berbeda
6. Adanya permasalahan dengan PRP,Platelet lysate
penggunaan FBS untuk 1.3.1. Trombosit ( Platelet) (PL) merupakan cairan kaya
kultur sel yaitu variabilitas faktor pertumbuhan dari
dan kualitatif FBS karena Trombosit (platelet) telah trombosit yang lisis dan
FBS diperoleh musiman dipelajari secara intensif dan dikumpulkan dari beberapa
serta dipengaruhi faktor digunakan di berbagai bidang donor untuk meminimalkan
lain seperti jenis sapi, medis, seperti ortopedi, variabilitas antar individu. Hal
pakan sapi dan faktor operasi plastik, kedokteran ini dapat diperoleh dengan
geografis sehingga gigi dan dermatologi,. Hal ini berbagai metode termasuk
kandungan FBS satu karena trombosit berperan sonikasi dan metode freeze-
dengan yang lain mungkin penting dalam penutupan dan thawing. Keunggulan
berbeda ( Sovkova et al., penyembuhan luka. Platelet utamanya adalah harga yang
2017). melepaskan banyak molekul relatif murah dan dapat
bioaktif antara lain faktor disimpan dalam jangka waktu
1.3. FBS dan Alternatif pertumbuhan, seperti panjang. Dalam penelitian ini
Penggantinya Platelet-Derived Growth platelet lisat dikumpulkan dari
Factor (PDGF), faktor 16 donor dan dapat bertahan
Sel fibroblast membutuhkan pertumbuhan β1 (TGF-β1), selama 5 bulan pada suhu -20
medium kultur yang ditambah faktor pertumbuhan hepatosit °C. PL dalam penggunaannya
dengan serum untuk (HGF) memainkan peran bersama dengan serat
pertumbuhan in vitro. Serum penting dalam komunikasi sel nanofiber scaffold karena
mengandung banyak dan mempengaruhi dikenal tidak beracun,
komponen yang berfungsi kelangsungan hidup sel. Selain kompatibel untuk mendukung
dalam berbagai cara untuk itu, trombosit mengandung pertumbuhan, proliferasi dan
mendukung pertumbuhan sel sitokin interleukin (ILs), yang diferensiasi berbagai jenis sel
antara lain asam amino, lipid mampu merangsang seperti fibroblas. Serat ini
dan logam. Transportasi pematangan sel dan memiliki porositas yang tinggi
transmembran dengan nutrisi chemotaxis. Chemokines sehingga lebih memfasilitasi
difasilitasi oleh protein adalah protein kecil yang pertukaran gas dan nutrisi
pembawa seperti transferrin menarik sel dan memainkan antara eksplan dan media,
(yang membawa zat besi) atau peran kompleks dalam permukaan spesifik yang
hormon seperti insulin yang koordinasi respon imun. membantu adesi sel sehingga
mengatur transportasi Metode kultur sel klasik media yang diperkaya PL dan
glukosa dan asam amino. didasarkan pada nanofiber scaffold ini mampu
Artinya, serum tidak hanya pemeliharaan sel dengan meningkatkan proliferasi sel
mengandung nutrisi untuk campuran medium, hingga 7 % ( Sovkova et al.,
pertumbuhan sel, melainkan mengandung garam, ion dan 2017).

36
BioTrends Vol.8 No.2 Tahun 2017

2.3.2. PPPS (Platelet-Poor 2.4.1 PDGF (Platelet-Derived polipeptida lainnya, PDGF


Plasma Serum) dan Growth Factor ) tidak ditemukan dalam
WBS (Whole Blood plasma, namun ditemukan
Serum ) PDGF (Platelet Derived dalam trombosit. PDGF
Growth Factor) merangsang berfungsi dengan
Serum PPPS (Platelet-Poor pertumbuhan jaringan ikat sel mengendalikan kejadian awal
Plasma Serum) merupakan secara in vitro. Trombosit di tahapan G0 atau tahapan
serum darah hewan yang mengandung sejumlah G1 dari siklus sel fibroblas
mengandung sedikit platelet organel yang menyimpan sedangkan kontrol sel
dan WBS (Whole Blood polipeptida dan molekul memasuki fase S dipengaruhi
Serum) merupakan serum rendah, ada empat protein oleh hormon somatodemin
darah yang kaya platelet. yang dikenal yaitu PDGF, yang terkandung dalam
Berdasarkan penelitian, faktor platelet 4, fl- plasma sehingga PDGF dan
platelet mengeluarkan tromboglobulin, dan plasma diperlukan untuk
material yang membantu fibrinogen platelet. PDGF stimulasi sintesis DNA yang
proliferasi sel fibroblast mampu merangsang replikasi optimal. PDGF dan plasma
sehingga sel fibroblas tumbuh sel jaringan ikat. Fibrinogen dicampur dalam PPP ( Platelet
lebih cepat mengalami platelet diubah menjadi fibrin Poor Plasma ) sebagai faktor
proliferasi dengan selama pembekuan, faktor pertumbuhan untuk kultur
menggunakan WBS dan PPPS. platelet 4 menetralkan fibroblas ( Scher et al., 1979 )
Platelet akan mengeluarkan heparin (faktor anti
growth factor, menarik dan pembekuan). PDGF adalah 2.4.2 EGF (Epidermal Growth
memberi sinyal kepada stem polipeptida rantai tunggal Factor ), FGF (Fibroblas
cell untuk memperbaiki sel dengan berat molekul 13.000 Growth Factor) dan TGF
yang rusak atau mati. Growth dan nampaknya mengandung (Transforming Growth
factor adalah substansi yang ikatan disulfida. PDGF Factor)
secara alamiah ada di dalam terbungkus granula padat
tubuh kita, dan berguna untuk bersama dengan serotonin, TGF-a, merangsang proliferasi
pertumbuhan sel baik ATP, ADP, dan (Scher et sel melalui pengikatan ke
proliferasi maupun al., 1979 ). reseptor EGF seperti protein
diferensiasi. Biasanya growth tirosin kinase. FGF
factor adalah protein atau Hasil penelitian ini telah menstimulasi pertumbuhan
hormon steroid. Growth menunjukkan bahwa PDGF fibroblas, dan EGF bekerja
factor sangat penting dalam adalah kationik (isoelektrik pada sel endotel dan
regulasi proses seluler. titik 9.8-10.0) PDGF diperoleh merangsang angiogenesis
Growth factor berperan dengan mensenfrifugasi secara in vivo. TGF
sebagai sinyal antar sel ( trombosit dengan kecepatan merangsang atau
Rutherford & Rose, 1976). rendah, dilisiskan oleh menghambat proliferasi sel
pembekuan dan pencairan. tergantung pada jenis sel dan
2.4 .Growth Factor yang Karena PDGF stabil pada suhu kondisi kultur, pada firoblas
menunjang kultur sel 100 °C platelet yg lisis manusia TGF menghambat
fibroblas dipanaskan 100 °C selama 10 proliferasi sel yang
menit. kemudian di disebabkan oleh PDGF atau
PDGF (Platelet-Derived sentrifugasi berkecepatan EGF, dengan cara tergantung
Growth Factor ), EGF rendah, PDGF diambil dari kepadatan sel. Penghambatan
(Epidermal Growth Factor), endapan dengan cara mencuci TGF lebih besar di kultur
FGF (Fibroblas Growth dengan l M NaC1 ( Scher et padat daripada kultur cair.
Factor), TGF (Transforming al., 1979 ). TGF berperan dalam sintesis
Growth Factor) merupakan matriks protein seperti
growth factor ang diisolasi Sekitar 40% aktivitas fibronektin dan kolagen. TGF
dari platelet. merangsang pertumbuhan menstimulasi sintesis
pulih setelah pemanasan. hyaluronan dalam kondisi
Tidak seperti hormon dimana ia menghambat

37
BioTrends Vol.8 No.2 Tahun 2017

proliferasi fibroblas. memblokir inisiasi dari prooxidative (


Hyaluronan adalah susunan radikal bebas Wardianingsih et al., 2015).
polisakarida linier yang sehingga growth factor
tersusun oleh 1000 asam dapat memicu proliferasi 3. Penggunaan Laser untuk
glukuronat dan N- Meningkatkan Proliferasi
sel fibroblas. Hal ini dapat
acetylglucosamine yang Sel Fibroblas
meningkatkan persentase
mampu memberikan stabilitas
dan elastisitas pada matriks kehidupan sel. Senyawa
Laser diciptakan pada
ekstraselular (Heldin et al., tanin juga mampu
tahun 1960 dan segera
1989 ). menetralisir enzim yang
setelah itu diperkenalkan
menghentikan degradrasi
ke bidang medis. Dua jenis
2.5. Tanin dari Ekstrak Kulit matriks ekstraseluler
Manggis laser dengan energi rendah,
dengan mengurangi
yaitu laser He-Ne dan Ga-As
kelebihan MMPs. Hal ini
Berdasarkan beberapa hasil mampu meningkatkan
diperlukan untuk
uji fitokimia kulit buah proliferasi sel fibroblas.
membantu menciptakan
manggis menunjukkan Laser Ga-As adalah laser
lingkungan yang
bahwa kulit buah manggis pulse dengan panjang
menguntungkan bagi
gelombang 904 nm. Laser
He-Ne adalah laser
gelombang kontinyu
dengan panjang gelombang
632,8 nm. Dilaporkan
bahwa laser Ga-As,
memiliki efek langsung
pada DNA atau struktur
kromatin yang terkait, yang
mengakibatkan hilangnya
kapasitas replikasi sel
selama ekspresi gen
kolagen sedangkan laser
He-Ne dapat meningkatkan
produksi kolagen kultur
Gambar 5. He-Ne laser mempercepat sintesis mRNA fibroblas karena energi
prokolagen komponen dari sel fibroblas laser merubah struktur
(Sumber :Arbergel et al., 1997) kromatin sehingga
mengandung alkaloid, pertumbuhan sel fibroblas, menyebabkan elevasi
saponin, triterpenoid, sehingga terjadi supresi tingkat steady-state
tanin, fenolik, flavonoid, sekresi MMP-2 dan MMP-9 procollagen mRNA melalui
glikosida dan steroid. yang akan menyebabkan aktivasi ekspresi gen yang
Senyawa tanin diketahui produksi MMP dan aktivitas sesuai. Hal ini
memiliki beberapa aktivitas katalisis terhambat. Selain menyebabkan ekspresi gen
kimia antara lain itu, tanin juga berperan prokolagen meningkat (
antibakteri, antioksidan, sebagai chelator transisi ion Abergel et al., 1987).
antikanker dan logam untuk mencegah
antiinflamasi. Tanin ekstrak terjadinya oksidatif DNA Kesimpulan
kulit manggis memiliki daya dengan cara menetralkan
Sel fibroblas merupakan sel
anti antioksidan yang kelebihan ion logam, penyusun jaringan ikat. Sel
mampu menghambat lipid menekan radikal hidroksil fibroblas banyak dikulturkan
peroxidation dan dan menstabilkan aktivitas untuk keperluan cangkok kulit
38
BioTrends Vol.8 No.2 Tahun 2017

yang berkaitan dengan efektif dari FBS seperti PRP (Fibroblas Growth Factor) dan
fungsinya untuk menghasilkan (Platelet Rich Plasma), PL TGF (Transforming Growth
serat kolagen serta (Platelet Lysat), PPPS Factor). Penambahan ekstrak
memperbaiki kerusakan (Platelet-Poor Plasma Serum) tanaman seperti ekstrak
jaringan epidermis. atau WBS (Whole Blood tannin dari buah manggis juga
Peningkatan performa Serum). Penambahan faktor perlakuan khusus seperti
pertumbuhan sel fibroblas tumbuh yang membantu pemaparan kultur sel
dapat dilakukan dengan meningkatkan proliferasi sel fibroblas dengan laser ber
berbagai hal seperti: fibroblas seperti PDGF energi rendah seperti laser
mengganti serum yang (Platelet-Derived Growth He-Ne dan Ga-As dapat
digunakan dalam media Factor ), EGF (Epidermal meningkatkan performa
menjadi serum yang lebih Growth Factor), FGF pertumbuhan sel fibroblas.

Daftar Pustaka

Abergel,R.P., Richard, F., LyonS, Rutherford, R.B., & Ross, R. 1976. University of Texas
Castel, J,C., Dwyer, R.M., & Platelet Factors Stimulate Southwest
Uito, J. 1987. Biostimulation Fibroblasts and Smooth
of Wound Healing by Lasers. Muscle Cells Quiescent in Tharakan & Chau. 1985. A radial
J. Dermatologi. Vol 1(2): 54- Plasma Serum to Proliferate. flow hollow fiber bioreactor
67. The Journal of Cell Biology. for the large scale culture of
Vol 69: 196-203 mammalian cells. Journal of
Friedenstein,A.J., Chailakhyan, biotechnology and
R.K., & Gerasimov, U.V., Scher,C.D., Shepard, R.C., bioenginering. Vol 13: 329-
1987. Bobe marrow Antoniades, H.N & Stiles,C.D. 342
osteogenic stem cells : In 1979. Platelet Derived
vitro cultivation and Growth Factor and the Vadhani, via. 2005. Fetal bovine
transplantation in diffusion Regulation of the serum Himedia product
chambers. Cell tissue kinet. Mammalian Fibroblast Cell information . India: Hi media
Vol 20: 263-272 Cycle. Biochimica et laboratories.
Biophysica Acta. VOL 560:
Fukurawa,F., Ushida, T., Sakai, Y., 217-241. Valk, J. B. F. V., Stafleu, F., &
Suzuki, M., Tanaka,J, & Baumans,V., 2002. The use
Tateishi, T. 2001. Formation Sovkova, V., Vocetkova, K., of fetal bovine serum: Ethical
of Human Fibroblast Rampichova, M., Mickova, or scientific problem.
Agregrat by Rotation Culture. A., Buzgo,M., Lukasova, V., Alternative to laboratory
Cell Transformation. Vol 10 Dankova, E., Filova, E., animals. Vol 22 290- 312.
(2): 441- 445. Necas, A., & Amler, E., 2017.
Platelet lysate as a serum Valk, J. V. D., Kolar, R., &
Heldin,P., Laurent,T.C., & Heldin, replacement for skin cell Gstraunthaler, G. 2015. Fetal
C.H., 1989. Effect og Growth culture on biomimetic PCL Bovine Serum-free Media
Factors on Hyaluronan nanofibers.Journals Platelets. and Alternatives. Faculty of
Syntesis in Cultured Human Vol 3(7) : 89- 95. veteriner medicine.
Fibroblasts. Biochemst. Vol Universiteit utrecht.
258: 919-922 Spector, W.G., Spector, T.D. 2002.
Pengantar Patologi Umum, Widjaja, T. 2011. Plasma kaya
Mescher, A. 2010, Junqueira's edisi ketiga, trombosit tidak menurunkan
Basic Histology, Twelfth Gadjah Mada University apoptosis fibroblas tikus
Edition, The McGrawHill Press; 136-140,230-233. yang terpajan sinar UV. Tesis.
Companies, Inc. Universitas Udayana.
Takashima, A. 2001. Preparation
and Isolation of Cells. Dallas :

39