ZAT PAHIT DALAM ALMOND

Pendahuluan

Deteksi HCN yang pertama diketahui berasal dari jaringan tanaman yang rusak pada tahun 1802
oleh apoteker Bohm di Berlin setelah mendestilasi almond pahit. Senyawa tersebut diisolasi dari
Prunus amygdalus (sinonim Prunus dulcis), namanya diberi amygdalin. Amigdalin diglucoside adalah
glukosida sianogenik. Setelah terganggunya jaringan tanaman yang mengandung glukosida sianogenik,
ini dihidrolisis oleh β- glukosida dengan pelepasan Glc, aldehid atau keton, dan HCN.

Studi sebelumnya pada almond telah menunjukkan bahwa prunasin diubah menjadi amigdalin
selama pematangan buah . Prunasin ada di akar, daun, dan biji varietas manis, sedikit pahit dan pahit.
Prunasin diubah menjadi amigdalin diglucosida dengan menggunakan UDPG-glucosyltransferase
tambahan. Hasilnya menunjukkan adanya perbedaan aktivitas β- glukosidase di epidermis bagian
dalam tegument sebagai penentu plum apakah varietas itu manis atau pahit.

Hasil

a. Pengembangan buah dan pemasakan

Sintesis, akumulasi dan degradasi cyanogenic glukosida prunasin dan amygdalin dipelajari selama
musim pertumbuhan keseluruhan dari pembungaan pohon hingga pemasakan kernel secara penuh
menggunakan empat genotipe 'Ramillete' (SkSk, sweet), 'Marcona' (Sksk, sweet ), 'Garrigues' (Sksk,
sedikit pahit), dan 'S3067' (sksk, pahit). Pengembangan buah ditandai dengan peningkatan ukuran
kotiledon dengan dihilangkan nucleus dan endosperm yang berkurang. Oleh karena itu, pengembangan
dan pematangan jaringan buah yang berbeda berlanjut dengan cara yang sedikit bergeser dari satu
genotipe ke genotipe yang lain. Endocarp berwarna hijau dan cukup lembut membuat buah mudah
dibuka. Endokarp telah menjadi sulit untuk dibuka dan berubah menjadi coklat dengan tampilan kayu.
Akhirnya, pada akhir musim pematangan, kotiledon menempati seluruh ruang di dalam tegument.
Endokarp itun keras dan mesocarp bersama dengan exocarp mulai mengering akhirnya mengekspos
endocarp.

b. Tingkat Glukosa Cyanogenic dari

pembungaan sampai pematangan buah

Tingkat prunasin dan amigdalin

selama musim pertumbuhan dari pohon
berbunga sampai pematangan buah
dipantau dengan analisis kromatografi cair
- spektrometri massa (LC-MS) dalam
empat genotype.

Pada genotipe pahit, prunasin terdeteksi pada

daun lamina, petioles, tegument buah, dan
nucellus plus endosperm.
 Kandungan prunasin di
tegument dari genotipe pahit
adalah yang tertinggi
ditemukan pada jaringan
buah. Dalam tiga genotipe
lainnya, prunasin hadir dalam
jumlah yang jauh lebih
rendah di daun lamina dan
batang dan tidak terdeteksi
pada jaringan buah yang
dianalisis. Tidak ada
prunasin yang terdeteksi pada eksokarp buah, mesocarp, dan endocarp dari empat genotipe (data
tidak ditunjukkan).

Semua analisis tegument dari keempat genotipe menunjukkan tidak adanya amigdalin pada
jaringan buah ini. Amygdalin terdeteksi di nukleus dan endosperma dari genotipe pahit. Seiring dengan
penurunan kandungan prunasin di nukleus dan endosperm dari genotipe pahit, kandungan amigdalin
dalam kotiledon mulai meningkat untuk mencapai konsentrasi akhir. Dalam genotipe 'Garrigues' yang
sedikit pahit dan genotipe heterozigot manis 'Marcona', amygdalin dapat dideteksi, genotipe homozigot
manis 'Ramillete' tidak ada amigdalin yang terdeteksi.

c. Lokalisasi dari b-Glucosidases di Tegument

Aktivitas b-glukosidase dinilai pada bagian melintang tegument terletak berdekatan ke kotiledon
yang sedang berkembang dengan pewarnaan dengan Fast Blue BB garam dengan adanya substrat b-
glukosidase 6-bromo-2-napthyl-b-D-glukopiranosida. Atas Pewarnaan 1 menit dari bagian 'Ramillete'
(SkSk, manis), aktivitas b-glukosidase kuat diamati pada epidermis dalam yang tegak menghadap
nukleus. Pembesaran sel epidermis dalam yang lebih tinggi menunjukkan bahwa pewarnaan b-
glukosidase dibatasi ke sitosol dan vakuola utama yang ada dalam ini sel.

d. Pengukuran Aktivitas Biosintetik dalam mengembangkan Buah Almond

1. Percobaan makan dengan L- [14C] Phe

Jaringan tunggal buah almond yang menunjukkan kemampuan untuk mengubah Phe menjadi
prunasin adalah tegument (jaringan induk). Tidak ada formasi amigdalin di glucosida sianogenik yang
diamati. Percobaan ini dilakukan keluar dengan menggunakan lapisan tegensi yang baru saja dibedah
Sel yang saat kontak dengan udara cepat berkembang warna kecoklatan Dengan demikian, tidak
mungkin untuk secara akurat mengkuantifikasi kapasitas biosintesis yang berbeda genotipe, namun
beberapa percobaan terpisah menunjukkan bahwa kapasitas biosintesis prunasin mungkin sedikit lebih
tinggi dalam varietas pahit dibandingkan varietas manis. Namun, perbedaannya tidak terlalu jauh.

2. Uji Microsome dengan L- [14C] Phe atau L- [U-14C] Tyr

 Pada jenis tanaman sianogenik lainnya, konversi asam amino induk ke sianogenik glukosida
adalah diketahui dikatalisis oleh dua Cyt P450s bertempat di sistem membran retikulum endoplasmatik
dan oleh glukosiltransferase UDPG terlarut. Demikian persiapan mikrosomal menyimpan dua Cyt
P450s ditunjukkan untuk mengkatalisis konversi dari asam amino induk ke dalam sianohidrin yang
sesuai. Intermediet yang diharapkan dan produk akhir adalah phenylacetaldoxime, fenilacetonitril, dan
mandelonitril. Mandelonitril labil dan akan terdeteksi sebagai disosiasi produk benzaldehid pada TLC.

Bahan tanaman

Almond ( Prunus dulcis ) cabang dari empat genotipe berikut 'Ramillete' (SkSk, sweet),
'Marcona' (Sksk, sweet), 'Garrigues' (Sksk, sedikit pahit), dan 'S3067' (sksk, pahit). Diambil setiap
minggu kedua selama musim pertumbuhan dari berbunga pohon sampai kematangan kernel/ biji (Maret
sampai Agustus).

Metode

1. Analisis LC-MS Kandungan Glukosa Cyanogenik

 Bahan tanaman yang digunakan : lamina daun, tangkai daun, batang, tegument, nucellus
plus endosperm, dan kotiledon; tiga spesimen sampel masing-masing.
2. Percobaan Girdling
 Pengangkutan floemida sianogenik pada tumbuh kembang buah dan batang di bawah
tunas tahun pertama dipantau dalam eksperimen girdling.
 Bahan tanaman : menggunakan pohon almond dari genotipe 'Ramillete' (SkSk, sweet)
dan 'S3067' (sksk, pahit) kemudian lapisan sel epidermis dan kambium termasuk floem
dilepas dengan sayatan pisau bedah (selebar 2 mm).
3. Aktivitas Biosintetik Jaringan
 Bahan tanaman : daun lamina, tangkai daun, batang, tegument, nucellus plus endosperm,
dan kotiledon dari genotipe almond 'Ramillete' (SkSk, sweet) dan 'S3067' (sksk, pahit)
 Hasil : Glukosida sianogenik radiolabel yang terbentuk dipisahkan oleh pengembangan
di EtOAc / HOAc / MeOH / H 2 O (8: 2.5: 2.5: 1, v / v) dan dipantau menggunakan
Storm 860 PhosphorImager (Dinamika Molekuler). 
4. Persiapan Mikrosomal
 Bahan tanaman : 3-100 g berat segar daun lamina, akar, dan eksokarp buah, endocarp,
dan mesocarp, tegument, nucellus plus endosperm, dan kotiledon dari genotipe
'Ramillete' (SkSk, sweet) dan 'S3067' (sksk , pahit)
 Hasil : Phenylacetaldoxime, phenylacetonitrile, dan benzaldehyde diaplikasikan pada
TLC sebagai senyawa referensi dan posisi mereka yang berada pada absorbansi UV.
5. Uji Glucosyltransferase
 Bahan tanaman : Ekstrak enzim dari daun lamina, petioles, peduncles, nucellus plus
endosperm, dan kotiledon (100 sampai 500 mg jaringan) dari empat genotype.
 Hasil : Posisi prunasin dan amigdalin pada TLC didefinisikan dengan penerapan standar
otentik yang tidak diberi label.
6. Bagian Jaringan dan Pewarnaan β -Glucosidase Menggunakan Garam BB Blue Cepat
 Bahan tanaman : sampel buah (tegument, nucellus, dan kotiledon) dari genotipe
'Ramillete' dan 'S3067'