RIVIEW JURNAL

Judul : Penentuan tropane alkaloid atropin dan skopolamin dengan

kromatografi-massa cair spektrometri di organ tanaman jenis Datura
Metode : Kromatografi-massa cair kinerja tinggi dan Spektrofotometri
Metode Identifikasi : 1. HPLC
2. LC-MS
Metode : Dari larutan stok metanol atropin dan skopolamin (masing-masing
10 mg mL - 1), solusi standar disiapkan untuk kalibrasi di rentang konsentrasi dari 10 rentang
konsentrasi dari 10 - 6 10 - 3 mg mL - 1 oleh pengenceran persediaan dengan campuran pelarut
(1% (v / v) asam format di metanol: air = 7:93). Standar disimpan pada 4 ◦ C dan digunakan
untuk minggu.
Bagian tanaman sampel (batang, daun, bunga-bunga, buah dan biji) dari empat Datura taksa
pada suhu kamar (udara kering) dan disimpan dalam kantong kertas sampai analisis
laboratorium. bahan tanaman itu ditumbuk, dan 100 mg bubuk herbal ditimbang untuk fl
volumetrik. Ekstraksi terjamin dengan 30 menit. ultrasonication setelah penambahan 10 mL
campuran pelarut (CH 3 OH: H 2 O = 3: 2 (v / v)) untuk setiap sampel. Pemurnian ekstrak
dilakukan dengan sentrifugasi (15 menit pada 10.000 min - 1) dan filtrasi melalui 0,45 m ukuran
pori Syringeless fi lter (Mini-Uniprep, Whatman). Sampel disimpan dalam gelap pada 4 ◦ C
sampai analisis LC-MS dilakukan. pengenceran sesuai sampel dilakukan sesuai dengan
kebutuhan sebelum injeksi ke sistem LC-MS.

Hasil Pengamatan :
-Validasi metode cepat
Verifikasi keandalan metode yang dikembangkan dilakukan dengan validasi cepat. Beberapa
parameter validasi adalah dievaluasi untuk menegaskan bahwa metode LC-MS memiliki kinerja
yang kompatibel dengan yang diperlukan untuk analisis rutin alkaloid tropane dalam sampel
Datura.

-Selektivitas
Resolusi, diamati antara puncak skopolamin dan atropin lebih tinggi dari 1,5, yang dapat
diterima bahkan ketika menerapkan deteksi UV. Namun demikian, di bidang alkaloid tropana
analisis, deteksi MS umumnya lebih disukai karena selektivitas tinggi yang melekat, terutama
dalam mode pemantauan ion tunggal (SIM). Gambar. 1 menunjukkan kromatogram MS-SIM
khas alkaloid dominan dalam ekstrak spesies yang diperiksa. Kromatogram sesuai dengan ion
pseudo molekul [M + H] +, di mana m / z 304 menyajikan skopolamin dan m / z 290 atropin.
-Pengulangan dan presisi menengah
Kolom fase terbalik berkecepatan tinggi - Ascentis Express C18, dikemas dengan partikel core-
shell, digunakan untuk pemisahan. Itu partikel pengepakan mengandung inti silika padat
(diameter 1,7 m) yang dilapisi dengan cangkang berpori tipis (0,5 m) dengan kemurnian tinggi
yang dimodifikasi secara kimia silika. Struktur ini memungkinkan pengurangan waktu retensi,
menghasilkan pemisahan dalam 4,5 menit. Dibandingkan dengan penelitian sebelumnya,
penurunan waktu retensi lebih dari 1 menit tercapai untuk kedua senyawa tersebut. Total waktu
setiap kali berlari, termasuk mencuci dan keseimbangan kolom, kurang dari 23 menit.
Pengulangan (dievaluasi sebagai presisi intra dan interday) dari. Metode diuji dengan enam
suntikan ulangan dari kedua standar larutan (50 ng mL − 1), dan ekstrak sampel D. metel (bunga
+ buah). Respons yang diukur pada setiap kromatogram adalah retensi waktu puncak atropin dan
skopolamin dan yang sesuai area puncak ion [M − H] +. Variasi dalam dan antar hari waktu dan
konsentrasi retensi, dinyatakan dalam RSD%, terdaftar pada Tabel 2 dan 3. Variasi yang sangat
rendah diamati dalam retensi kali, dengan nilai RSD tidak melebihi 0,9%. Nilai RSD untuk
konsentrasi alkaloid berkisar antara 0,03 hingga 3,53. Nilai rendah dari standar deviasi
menunjukkan presisi dan pengulangan waktu retensi menjadi sangat baik.

-Penentuan LOD, LOQ, dan rentang kalibrasi

Batas deteksi (LOD) ditentukan secara eksperimental, dan diambil sebagai konsentrasi, yang
menghasilkan detektorsinyal jelas dapat dibedakan dari kebisingan awal (3 kali kebisingan
dasar). Batas kuantitasi (LOQ) diambil sebagai konsentrasi, yang menghasilkan sinyal detektor
10 kali lebih tinggi dari kebisingan dasar.
-Metode penambahan pada sampel ekstrak Datura yang dipilih (Datura metel L., daun kecil,
musim panas 2009). Dalam sampel berduri (n = 3) konsentrasi alkaloid tropana meningkat
sebesar 50%, 100%, dan 150%. Sampel ekstrak Datura berduri ini dianalisis (n = 3) dan jumlah
analit yang pulih dihitung. Itu pemulihan untuk alkaloid tropana adalah antara 94,8% dan
100,6% (terutama antara 96% dan 98%).

Kesimpulan :
Metode kromatografi cair kinerja tinggi digabungkan dengan deteksi spektrometri massa
electrospray telah dikembangkan untuk penentuan alkaloid dan skopolamin di Datura ekstrak
tumbuhan. Karakteristik validasi yang diuji menunjukkan rendah batas kuantisasi,
memungkinkan penentuan alkaloid dalam solusi dan dalam ekstrak pada tingkat konsentrasi sub-
ng mL − 1. Batas deteksi untuk kedua alkaloid agak baik: 100 pg mL – 1 untuk skopolamin dan
50 pg mL − 1 untuk atropin. Metode ini membutuhkan persiapan sampel yang agak sederhana,
dan bisa juga diterapkan analisis hampir semua jenis bahan tanaman yang mengandung atropin
dan alkaloid skopolamin. Hasil penelitian menunjukkan bahwa teknik berulang dan akurat, batas
deteksi agak rendah. Itu pemisahan dilakukan pada kolom RP core-shell dan penggunaan
instrumentasi UFLC ditambah dengan spektrometer massa menghasilkan analisis yang cepat.
Analisis kami mengkonfirmasi bahwa tingkat alkaloid spesies Datura bervariasi tergantung pada
takson, bagian tanaman yang diselidiki dan tahap ontogenetik. D. innoxia, ditandai dengan
sangat tinggi rasio skopolamin terhadap atropin dapat dengan mudah dibedakan dari spesies
Datura lain yang memiliki rasio terbalik dari dua induk alkaloid. Bahkan varietas dari spesies
yang sama dapat memiliki perbedaan karakteristik dalam kandungan alkaloidnya, seperti yang
diilustrasikan oleh contoh D. stramonium. Saat membandingkan musim panas dan musim gugur
sampel, tren penurunan yang kuat ditemukan dalam konsentrasi alkaloid dominan di organ
vegetatif. Variabilitas kadar alkaloid Datura harus diperhitungkan dalam beberapa
bidang-bidang seperti kemotaksonomi, fitomedis dan toksikologi.