STUDI PENGARUH DIABETES BEBAS DAN KONJUGAT BISPENOL.

KONSENTRASI DALAM URIN: PENGEMBANGAN PROSEDUR MIKROEKSTRASI

SEDERHANA MENGGUNAKAN GAS KROMATOGRAFI-SPEKTROFOTOMETRI
MASSA
Dosen : Anggi Restyana, S. Farm, M. Farm, Apt

Oleh :
Yuliana daima ( 17650095 )
Ayutya Helgayanti ( 17650110)
Nina nur jannah ( 19650332 )

Program Studi S-1 Farmasi

Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Kadiri
Kediri
2020
 Kata Pengantar

Puji  dan  syukur  kita panjatkan  kepada  Tuhan  Yang  Maha  Esa, karena  atas

keberkahanNya, lah  akhirnya  kita  mampu  menyelesaikan   tugas  makalah  ini  sesuai  dengan 

waktu  yang  telah  ditentukan. Puji syukur juga kami panjatkan karena sesuai dengan jadwal

kami dapat menyelesaikan tugas tentang ” STUDI PENGARUH DIABETES BEBAS DAN

KONJUGAT BISPENOL. KONSENTRASI DALAM URIN: PENGEMBANGAN PROSEDUR

MIKROEKSTRASI SEDERHANA MENGGUNAKAN GAS KROMATOGRAFI-

SPEKTROFOTOMETRI MASSA”.

Saya telah berusaha maksimal sesuai dengan kemampuan saya untuk menyusun makalah

ini sehingga dapat terselesaikan dengan baik. Sumber dari makalah ini adalah literatur-literatur

dari berbagai sumber berasal dari internet dan jurnal.

Kami menyadari sepenuhnya bahwa masih banyak kekurangan baik dari segi isi maupun tata-

cara kami menyampaikanya. Oleh karena itu dengan tangan terbuka kami menerima segala saran

dan kritik dari pembaca agar kami dapat memperbaiki tugas macam – macam alat kesehatan dan

penggolongannya ini.

Kediri, 24 Maret 2020

Penyusun
DAFTAR ISI
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Bisphenol (BPs) memiliki aktivitas estrogenik dan telah dikaitkan untuk obesitas,

penyakit kardiovaskular dan diabetes mellitus. Bisphenol A (BPA) adalah bahan kimia industri

di mana-mana ditemukan dalam varietas wadah plastik untuk penyimpanan makanan dan di

lapisan resin epoksi kaleng makanan dan minuman dari logam. Beberapa penelitian telah

dilakukan yang juga digunakan dalam pembuatan resin epoksi , bisphenol Z (BPZ), digunakan

dalam menyembuhkan bahan plastik yang sangat tahan panas atau untuk isolasi listrik, dan 2,2

-biphenol (BP), yang mengurangi keberadaan karet dan terjadinya oksidasi plastic.

Selain itu, asosiasi antara konsentrasi BPA urin dan status kesehatan orang dewasa telah

diselidiki, sebagian besar penelitian menunjukkan bahwa paparan BPA yang lebih tinggi,

sebagaimana tercermin dalam kemih yang lebih tinggi konsentrasi, dapat dikaitkan dengan

morbiditas yang dapat dihindari di populasi dewasa yang tinggal di komunitas . Kebijakan saat

ini dan pandangan badan pengatur nasional dan internasional mengenai keamanan BPA

diringkas . Lingkungan Amerika Badan Perlindungan menetapkan bahwa BPA muncul dalam

darah dan urin dari 95% orang yang diuji. Baru-baru ini, para peneliti telah menemukan

kemungkinan hubungan antara BPA dan resistensi insulin . Meskipun BPA sering diukur dalam

sampel urin dari populasi umum, data terbatas pada bentuk bebas (bioaktif) dari fenol ini. Pada

manusia, konjugasi molekul BPA dengan glukuronida atau sulfat dianggap sebagai mekanisme

detoksifikasi karena metabolit ini lebih larut dalam air, dan sedang diekskresikan dalam urin.

Bentuk glucuronide dari BPA umumnya ditemukan sebagai bentuk yang dominan, sedangkan

bentuk bebasnya adalah terdeteksi ke tingkat yang lebih rendah.

 Metode analitik baru yang efisien dan sensitif berdasarkan gas kromatografi (GC) dan

kromatografi cair (LC), ditambah dengan spektrometri massa (MS), telah diusulkan untuk

analisis jejak BPA dalam matriks yang berbeda, seperti sampel urin . Rendah batas deteksi dan

resolusi tinggi dapat dicapai dengan GC-MS, meskipun langkah derivatisasi didasarkan pada

sililasi atau asetilasi umumnya direkomendasikan untuk meningkatkan volatilitas senyawa dan

sensitivitas metode. Prosedur normal untuk menentukan kadar BPA urin membosankan sebagai

sampel diserahkan ke beberapa langkah ekstraksi cair-cair (LLE) dengan pelarut organik,

penguapan pelarut, dan kemudian fase padat ekstraksi (SPE). Prosedur ini memakan waktu,

memerlukan sejumlah besar reagen dan menghasilkan banyak residu. Sebagai alternatif, metode

persiapan sampel miniatur menawarkan prosedur analitik yang ramah lingkungan dengan

peningkatan analisis mempercepat dan menurunkan jumlah pelarut organik. Mikro ekstraksi cair

cair cair (DLLME) dispersi melibatkan komponen terner sistem pelarut yang dibentuk oleh

larutan berair yang mengandung analit, pelarut ekstraksi yang tidak dapat larut dalam air dan

larut dalam air pelarut disperser. Injeksi cepat campuran pelarut organik ke dalam air

menyebabkan pelarut yang tidak larut dalam air terdispersi dalam massa air sebagai tetes mikro

kecil, dari mana target analit dapat diekstraksi dengan cepat.

Jumlah referensi yang terkait dengan teknik miniatur diterapkan untuk penentuan BPs

rendah, meskipun fase padat microextraction (SPME) telah digunakan untuk analisis dari

simulan makanan dan plastik, emulsifikasi mikroekstraksi berbantuan ultrasonik (USAEME)

untuk analisis minuman, kertas printer termal, mainan dan peralatan bayi, satu-drop

microextraction (SDME) untuk sampel air sungai, berbasis cairan ionik teknik dalam sampel air

dan ekstraksi batang pengaduk aduk (SBSE) untuk penentuan BPs di perairan tanah, bodyfluids ,
migrasi dari botol bayi, minuman kaleng dan produk perawatan pribadi DLLME telah diterapkan

untuk analisis air, urin, minuman dan bayi formula dan studi migrasi.

Dalam penelitian ini, data konsentrasi BPA bebas dan terkonjugasi dari urin ditentukan

untuk yang pertama. waktu dalam kontrol dan manusia diabetes menggunakan DLLME sebagai

teknik persiapan sampel hijau dan GC-MS. BPF dan BP juga bisa ditentukan, berdasarkan pada

hubungan kimianya dengan BPA dan kemungkinan mereka muncul dalam sampel urin. BPZ

digunakan sebagai pengganti standar setelah mengkonfirmasikan bahwa sampel urin bebas dari

senyawa ini. Hasilnya divalidasi oleh pemulihan mempelajari dan menggunakan bahan referensi

bersertifikat manusia yang merokok,air seni.

1.2 Rumusan Masalah

Bagaimana pengaruh diabetes bebas dan konjugat bispenol.

konsentrasi dalam urin dengan menggunakan metode kromatografi gas spektrometri massa ?

1.3 Tujuan

Dapat mengetahui pengaruh diabetes bebas dan konjugat bispenol.

konsentrasi dalam urin dengan menggunakan metode kromatografi gas spektrometri massa.
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Kromatografi Gas-Spektrometri Massa

GCMS merupakan metode pemisahan senyawa organik yang menggunakan

duametode analisis senyawa yaitu kromatografi gas (GC) untuk menganalisis jumlahsenyawa

secara kuantitatif dan spektrometri massa (MS) untuk menganalisis struktur molekul senyawa

analit.

Kromatogtafi gas-spektrometer masa (GC-MS) adalah metode yang mengkombinasikan

kromatografi gas dan spectrometer massa untu mengidentifikasi senyawa yang berada dalam

analisis sampel. Kromatografi gas dan spektrpmeter massa memiliki keunikan masing-masing,

dimana keduanya memiliki kelebihan dan kekurangan. Dengan menggabungkan kedua teknik

tersebut diharapkan mampu meningkatkan kemampuan dalam menganalilis sampel dengan

menggunakan kelebihan masing-masing dan meminimalisir kekurangannya.

Kromatografi gas dan spketometer masa dalam  memiliki banyak kesamaan dalam

tekniknya. Untuk kedua teknik tersebut sampel yang dibutuhkan dalam benuk fase uap, dan

keduany juga sama-sama membutuhkan jumlah sampel yang sedikit (umumnya kurang dari

1mg). Disisi lain, kedua teknik tersebut memiliki perbedaan yang cukup besar yaitu pada kondisi

operasinya. . Senyawa yang terdapat pada kromatografi gas adalah senyawa yang digunakan

sebagai gas pembawa dalam alat GS dengan tekanan kurang lebih 760 torr, sedangkan

spketometer massa beroperasi pada kondisi vakum dengan kondisi tekanan 10-6 – 10-5 torr.

Gas kromatografi merupakan salah satu teknik spektroskopi yang menggunakan prinsip

pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan migrasi komponen-komponen

penyusunnya. Gas kromatofragi biasanya digunakan untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang

terdapat pada campuran gas da juga menentukan konsentrasi suatu senyawa dalam fase gas.

Spektroskopi massa adalah suatu metode untuk mendapatkan berat molekul dengan cara

mencari perbandingan massa terhadap muatan dari ion yang muatannya diketahui dengan

mengukur jari-jari orbital yang melingkarnya dalam medan magnetic yang seragam.

Penggunaan kromatografi gas dapat dipadukan dengan spekroskopi massa. Paduan

keduanya dapat menghasilakn data yang lebih akurat dalam pengidentifikasiansenyawa yang

dilengakapi dengan struktur molekulnya.

Kromatografi gas ini juga mirip dengan distilasi fraksional, karena kedua proses

memisahkan komponen dari campuran terutama berdasarkan pada perbedaan titik didih (atau

tekanan uap). Namun distilasi fraksional biasanya digunakan untuk memisahkan komponen-

komponen dari campuran pada skala besar sedangkan GC dapat digunakan pada skala lebih kecil

yaitu mikro (Pavia 2006).

2.2 Bagian-Bagian Kromatografi Gas

1. Gas Pembawa (Carrier Gas)

Kromatografi Gas Gas pembawa (carrier gas) berfungsi sebagai fase gerak. Gas pembawa

adalah gas inert yang memiliki kemurnian tinggi (direkomendasikan grade Ultra High

Purity atau UHP). Gas pembawa ini yang akan membawa uap sampel masuk ke dalam

kolom untuk dipisahkan komponen-komponen dalam campurannya dan selanjutnya akan

masuk ke detektor untuk dideteksi secara individual. Gas pembawa yang biasa digunakan

adalah Helium, Nitrogen atau Hidrogen (silakan mengacu ke kurva Van Deemter). Untuk

analisis sampel gas, maka gas pembawa yang digunakan harus berbeda dengan gas target
 analisis. Gas pembawa biasanya disimpan dalam tabung gas bertekanan tinggi atau dari

gas generator.

2. Injeksi sampel

Injektor memiliki fungsi untuk memasukkan sampel, menguapkan sampel, dan

mencampur uap sampel dengan gas pembawa. Dalam kromatografi gas, semua sampel

dari fase asal harus diubah menjadi fase gas/uap. Misalnya sampel padatan dapat

dilarutkan terlebih dahulu, baru larutannya diinjeksikan ke sistem kromatografi gas.

Untuk sampel larutan bisa langsung diinjeksikan menggunakan micro syringe biasa,

sementara untuk sampel gas bisa menggunakan jarum suntik gas. Untuk otomatisasi, bisa

juga menggunakan auto injector/auto sampler. Injektor dilengkapi dengan blok pemanas

(heater block) yang memungkinkan pengaturan suhu injektor untuk menguapkan sampel.

Biasanya yang menjadi patokan awal adalah kira-kira 50°C di atas titik didih tertinggi

dalam campuran, dengan asumsi semua zat target akan menguap tapi tidak sampai

merusak Kromatografi Gas komponen itu sendiri. Untuk sampel-sampel yang

memerlukan perlakuan khusus bisa menggunakan opsi tambahan, misalnya Pyrolizer

(untuk sampel seperti ban, kayu, dll), Headspace (untuk sampel film atau kemasan

plastik, cat, dll) atau Programmable Temperature Vaporizer / penguap suhu yang dapat

diprogram (untuk sampel biodiesel yang memiliki range titik didih lebar).

3. Kolom

Kolom berfungsi sebagai fase diam dan merupakan jantung dari kromatografi. Dalam

kolomlah terjadi proses pemisahan komponen-komponen dalam campuran berdasarkan

perbedaan afinitas masing-masing komponen terhadap fase diam dan fase gerak. Masing-

masing komponen akan mengalami 3 kondisi yaitu: ikut dengan gas pembawa,
 terdistribusi secara dinamis di antara gas pembawa dan kolom, serta tertahan/larut dalam

kolom. Mekanisme ini terjadi berulang-ulang mulai dari sampel masuk ke dalam kolom

hingga masuk ke detektor secara individual. Proses pemisahan dalam kolom dipengaruhi

oleh banyak faktor seperti sifat kimia-fisika dari sampel maupun material kolom,dimensi

kolom (panjang,diameter dan tebal lapisan kolom, kapiler/kemas), laju alir gas pembawa,

suhu oven kolom, dll. Secara umum, semakin mirip polaritas komponen sampel dengan

fase diam,maka semakin kuat interaksi antara keduanya sehingga komponen akan

tertahan lebih lama dalam kolom (waktu retensi makin lama). Semakin panjang kolom,

semakin panjang jarak lintasan yang harus dilalui oleh komponen sampel sehingga waktu

retensi makin lama. Laju aliran gas pembawa mempengaruhi kecepatan migrasi

komponen sampel dalam kolom (semakin cepat laju alir akan mengakibatkan waktu

retensi makin cepat pula). Begitu pula dengan variabel suhu oven kolom,makin tinggi

suhu oven kolom,makin lemah interaksi antara komponen sampel dengan fase

diam,sehingga makin cepat waktu retensi. Semua variabel tersebut dikombinasikan

sedemikian rupa sehingga didapatkan kondisi analisis yang menghasilkan pemisahan

yang baik namun waktu analisis juga seefektif mungkin.

2.3 Bagian-Bagian Spectrometer Massa

a. Sumber Ion

Setelah melewati rangkaian gas kromatografi, sampel gas yang akan diuji dilanjutkan

melalui rangkaian spekstroskopi massa. Molekul-molekul yang melewati sumber ion ini

diserang oleh elektron, dan dipecah menjadi ionion positifnya. Tahap ini sangatlah

penting karena untuk melewati filter, partikel-partikel sampel haruslah bermuatan.

b. Filter

Selama ion melui rangkaian spekstroskopi massa, ion-ion ini melalui rangkaian

elektromagnetik yang menyaring ion berdasarkan perbedaan masa. Para ilmuwan

memisahkan komponen-komponen massa untuk kemudian dipilih yang mana yang boleh

melanjutkan yang mana yang tidak (prinsip penyaringan). Filter ini terus menyaring ion-

ion yang berasal dari sumber ion untuk kemudian diteruskan ke detektor.

c.     Detektor
Kromatografi Gas Detektor pada kromatografi gas berfungsi untuk memberikan respon

linear atas komponen-komponen sampel yang sudah dipisahkan dalam kolom.

Komponen-komponen dalam sampel akan masuk secara individual ke dalam sistem

detektor dan akan dideteksi responnya sesuai prinsip masing-masing detektor, arusnya

diperkuat, kemudian dikonversi menjadi satuan tegangan listrik (uV atau mV). Masuknya

komponen-komponen sampel kedetektor terjadi secara parsial (tidak sekaligus) dan

plotingnya akan membentuk kurva distribusi Gauss seperti yang bisa kita lihat sebagai

“kromatogram”. Untuk detektor MS (Mass Spectrometer), mekanismenya agak berbeda

dengan mekanisme detektor lain. Ada beberapa jenis detektor dalam khromatografi gas,

berikut adalah jenis detektor yang dikenal :

a. Flame Ionization Detector (FID), adalah detektor general untuk mengukur komponen-

komponen sampel yang memiliki gugus alkil (C-H).Komponen sampel masuk ke

FID, kemudian akan dibakar dalam nyala (campuran gas H2 dan udara), komponen

akan terionisasi, ion-ion yang dihasilkan akan dikumpulkan oleh ion collector, arus

yang dihasilkan akan diperkuat, kemudian akan dikonversi menjadi satuan tegangan.
 Semakin tinggi konsentrasi komponen, makin banyak pula ion yang dihasilkan

sehingga responnya juga makin besar.

b. Thermal Conductivity Detector (TCD) adalah detektor paling general sebab hampir

semua komponen memiliki daya hantar panas. TCD bekerja dengan prinsip mengukur

daya hantar panas dari masing-masing komponen. Mekanismenya berdasarkan teori

“Jembatan Wheatstone” di mana ada dua sel yaitu sel referensi dan sel sampel. Sel

referensi hanya dilalui oleh gas pembawa, sementara sel sampel dilalui oleh gas

pembawa dan komponen sampel. Perbedaan suhu kedua sel akan mengakibatkan

perbedaan respon listrik antara keduanya dan ini akan dihitung sebagai respon

komponen sampel. Detektor TCD banyak digunakan untuk analisis gas.

c. Electron Capture Detector (ECD) adalah detektor khusus untuk mendeteksi

senyawaan halogen organik. Banyak diaplikasikan untuk analisis senyawaan

pestisida. Secara prinsip,komponen sampel akan ditembak dengan sumber radioaktif

Nikel, dan jumlah elektron yang hilang dari proses itu dianggap linear dengan

konsentrasi senyawaan tersebut.

d. Flame Photometric Detector (FPD) adalah detektor khusus untuk mendeteksi

senyawaan sulfur, posfor dan atau timah organik. Prinsipnya adalah pembakaran

senyawaan komponen sehingga mengemisikan energi tertentu yang akan dilewatkan

filter tertentu (filter S, P atau Sn) kemudian akan dideteksi oleh Photomultiflier.

Banyak digunakan untuk analisis senyawaan pestisida.

e. Flame Thermionic Detector (FTD) adalah detektor khusus untuk mendeteksi

senyawaan nitrogen dan atau posfor organik. Prinsipnya adalah pembakaran

senyawaan komponen kemudian direaksikan dengan garam Rubidium dan respon

 listrik yang dihasilkan akan diperkuat dan dikonversi menjadi satuan

tegangan.Banyak digunakan untuk analisis senyawaan pestisida.

f. Mass Spectrometer (MS) adalah detektor khusus yang dapat digunakan baik untuk

analisis kualitatif maupun kuantitatif. Prinsip pengukurannya adalah komponen

sampel dipecah menjadi bentuk ion fragmennya (baik secara elektronik maupun

kimiawi) lalu ion fragmen tersebut dilewatkan ke Mass Analyzer untuk memisahkan

ion berdasarkan perbedaan massa/muatan dan selanjutnya diteruskan ke ion detector

untuk mendeteksi jumlah ion yang dihasilkan.Spektrum fragmen yang dihasilkan oleh

masing-masing komponen akan menunjukkan karakteristik yang khas, dan ini

digunakan untuk tujuan identifikasi kualitatif dengan membandingkan dengan

database atau library spektrum yang telah ada.

2.4 Prinsip Kerja Kromatografi Gas-Spektrometri Massa

1.  Kromatografi Gas (Gas Chromatography)

Kromatografi gas (GC) merupakan jenis kromatografi yang digunakan dalam kimia

organik untuk pemisahan dan analisis. GC dapat digunakan untuk menguji kemurnian

dari bahan tertentu, atau memisahkan berbagai komponen dari campuran. Dalam

beberapa situasi, GC dapat membantu dalam mengidentifikasi sebuah senyawa kompleks.

Dalam kromatografi gas, fase yang bergerak (atau "mobile phase") adalah sebuah

operator gas, yang biasanya gas murni seperti helium atau yang tidak reactive seperti gas

nitrogen. Stationary atau fasa diam merupakan tahap mikroskopis lapisan cair atau

polimer yang mendukung gas murni, di dalam bagian dari sistem pipa-pipa kaca atau
 logam yang disebut kolom. Instrumen yang digunakan untuk melakukan kromatografi

gas disebut gas chromatograph (atau "aerograph", "gas pemisah").

2. Spektroskopi Massa (Mass Spectrometry)

Umumnya spektrum massa diperoleh dengan mengubah senyawa suatu sample menjadi

ion-ion yang bergerak cepat yang dipisahkan berdasarkan perbandingan massa terhadap

muatan.

Spektroskopi massa mampu menghasilkan berkas ion dari suatu zat uji, memilah ion

tersebut menjadi spektum yang sesuai dengan perbandingan massa terhadap muatan dan

merekam kelimpahan relatif tiap jenis ion yang ada. Umumnya hanya ion positif yang

dipelajari karena ion negative yang dihasilkan dari sumber tumbukan umumnya sedikit.

3. Kombinasi GCMS

Saat GC dikombinasikan dengan MS, akan didapatkan sebuah metode analisis yang

sangat bagus. Peneliti dapat menganalisis larutan organik, memasukkannya ke dalam

instrumen, memisahkannya menjadi komponen tinggal dan langsung mengidentifikasi

larutan tersebut. Selanjutnya, peneliti dapat menghitung analisa kuantitatif dari masing-

masing komponen. Pada Gambar 4, sumbu z menyatakan kelimpahan senyawa, sumbu x

menyatakan spektrum kromatografi, dan sumbu y menyatakan spektrum spektroskopi

massa. Untuk menghitung masing-masing metode dapat divisualisasikan ke dalam grafik

dua dimensi.

4.  Metode Analisis Cromatografy Mass Spectrometry (GCMS)

Pada metode analisis GCMS (Gas Cromatografy Mass Spektroscopy) adalah dengan

membaca spektra yang terdapat pada kedua metode yang digabung tersebut.

Pada  spektra GC jika terdapat bahwa dari sampel mengandung banyak senyawa,

 yaitu terlihat dari banyaknya puncak (peak) dalam spektra GC tersebut. Berdasarkan data

waktu retensi yang sudah diketahui dari literatur, bisa diketahui senyawa apa saja yang

ada dalam sampel.

   Selanjutnya adalah dengan memasukkan senyawa yang diduga tersebut ke dalam

instrumen spektroskopi massa. Hal ini dapat dilakukan karena salah satu kegunaan dari

kromatografi gas adalah untuk memisahkan senyawa-senyawa dari suatu sampel. Setelah

itu, didapat hasil dari spektra spektroskopi massa pada grafik yang berbeda.

2.5 Aplikasi kromatografi gas

GC tampil menonjol dalam pekerjaan laboratorium pada topik-topik yang sedang banyak

diamati. Analisanya, Badan Perlindungan Lingkungan (EPA) melakukan suatu program

pemantauan kadar pestisida dan tanah, air tanah dan sampel-sampel semacamnya.

Pendekatan umumnya melibatkan pengekstrasian sampel untuk mengkonsentrasikan

analit dalam suatu pelarut organik yang sesuai dengan pengkromatografian ekstrak

tersebut.

 Sisa-sisa hormon yang digunakan untuk mendorong pertumbuhan binatang diukur

dalam sampel daging dengan cara yang sama, dan ekstrak spesimen urin juga sama

diuji dengan GLC dalam program penyaringan obat-obatan.

 Aluminium besi dan tembaga dalam aliase telah ditetapkan dengan melarutkan

sampel diikuti dengan ekstraksi logam-logam itu ke dalam larutan trifluoroaseton

dalam kloroform yang kemudian dikromatografi.

 GLC sangat berperan penting dalam upaya memonitor dan mengendalikan distribusi

pencemaran dalam lingkungan, misalnya Badan Perlindungan Lingkungan (EPA) AS

menjalankan suatu program yang ekstensif untuk memonitor kadar pestisida dalam
 tanah di berbagai tempat di negeri itu, tujuannya ialah menegakkan suatu garis

pijakan yang menunjukkan dengan eksak situasi pada masa kini sehingga

kecenderungan dalam masa depan dapat ditafsirkan dengan bermakna program yang

serupa sedang dilakukan untuk hasil bumi, air, ikan, kehidupan bebas.

 GLC dapat juga digunakan untuk identifikasi dan pengelompokan pemonitoran gas-

gas pernapasan selama anestesia, penelusuran senyawa organik dan organisme hidup

pada planet lain. Dan masih banyak lagi aplikasi dari GLC yang tidak dapat kami

sebutkan satu persatu dalam kehidupan makhluk hidup di bumi.

2.5 kelebihan Kromatografi Gas-Spektrometri Massa

1.   Efisien, resolusi tinggi sehingga dapat digunakan untuk menganalisa partikel berukuran

sangat kecil seperti polutan dalam udara

2.      Aliran fasa bergerak (gas) sangat terkontrol dan kecepatannya tetap.

3.      Pemisahan fisik terjadi didalam kolom yang jenisnya banyak sekali, panjang dan

temperaturnya dapat diatur.

4.      Banyak sekali macam detektor yang dapat dipakai pada kromatografi gas (saat ini

dikenal 13 macam detektor) dan respons detektor adalah proporsional dengan jumlah tiap

komponen yang keluar dari kolom.

5.      Sangat mudah terjadi pencampuran uap sampel kedalam fasa bergerak.

6.      Kromatograf sangat mudah digabung dengan instrumen fisika-kimia yang lainnya,

contohnya GC/FT-IR/MS.

7.      Analisis cepat, biasanya hanya dalam hitungan menit.

8.      Tidak merusak sampel.

 9.      Sensitivitas tinggi sehingga dapat memisahkan berbagai senyawa yang saling bercampur

dan mampu menganalisa berbagai senyawa meskipun dalam kadar/konsentrasi rendah.

Seperti dalam udara, terdapat berbagai macam senyawa yang saling bercampur dan

dengan ukuran partikel/molekul yang sangat kecil.

2.6. kekurangan Kromatografi Gas-Spektrometri Massa

1.      Teknik Kromatografi gas terbatas untuk zat yang mudah menguap

2.      Kromatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran dalam jumlah besar.

Pemisahan pada tingkat mg mudah dilakukan, pemisahan pada tingkat gram mungkin

dilakukan, tetapi pemisahan dalam tingkat pon atau ton sukar dilakukan kecuali jika ada

metode lain.

3.      Fase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif terhadap fase diam

dan zat terlarut

 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Bahan

Asetonitril kualitas kromatografi, metanol dan kloroform diperoleh dari Sigma (St. Louis,

MO, USA). Itu air yang digunakan sebelumnya dimurnikan dalam sistem Milli-Q (Millipore,

Bedford, MA, USA). Sodium karbonat, natrium klorida, hidrogen kalium fosfat dan amonium

asetat adalah dibeli dari Panreac (Barcelona, Spanyol). Derivatisasi pereaksi adalah asetat

anhidrida (AA, Fluka, Buchs, Swiss,> 99% kemurnian). Bisphenol A (BPA, 2,2- (4,4-) yang

tersedia secara komersial dihidroxydiphenyl) propana, kemurnian 99%), bisphenol F (BPF, 2,2-

(4,4-dihidroxydiphenyl) metana, kemurnian 98%), bisphenol Z (BPZ, 1,1-bis (4-hydroxyphenyl)

cyclohexane, kemurnian 99%) dan biphenol (BP, 2,2-biphenol, kemurnian 98%) disediakan oleh

Sigma. Persediaan larutan 1000 mg L-1 disiapkan dalam metanol dan disimpan dalam kegelapan

di −10 ◦C. Solusi campuran standar yang bekerja disiapkan setiap hari dengan mengencerkan

dengan air. Untuk hidrolisis enzimatik, enzim -glucuronidase dari Helix pomatia-Type H-1

(Sigma,> 300000 U g activity 1 aktivitas glukuronidase dan> 10000 U g – 1 aktivitas sulfatase)

digunakan. Enzim dilarutkan menggunakan amonium asetat buffer (pH 5). Sampel urin sintetis

adalah disiapkan seperti yang dilaporkan sebelumnya [38]. Level kreatinin, indikatif

pengenceran urin, dihitung menggunakan uji komersial sesuai Metode Jaffe oleh Roche / /

Hitachi Cobas c701 modul analisa klinis (Roche Diagnostics).

Bahan referensi bersertifikat yang terdiri dari "Kontaminan organik dalam perokok (beku)"

(Bahan referensi standar, SRM 3672) dipasok oleh National Institute of Standards dan Teknologi

(NIST, Gaithersburg, USA) memiliki total BPA bersertifikat isi 3,05 ± 0,16 g kg − 1.
3.2 Alat

Analisis GC dilakukan pada Agilent 6890N (Agilent, Waldbronn, Germany)

kromatografi gas digabungkan ke Agilent 5973 quadrupole spektrometer selektif massa

dilengkapi dengan sumber ion inert. Gas pembawa helium dalam kolom dipertahankan pada

aliran konstan 1 mL min-1. Injeksi (2 L) dilakukan menggunakan pulsed splitless dengan nilai

tekanan 15,5 psi diterapkan selama 0,2 mnt. Kolom kapiler HP-5MS (5% difenil – 95%

dimethylpolysiloxane, Agilent) (30 mx 0,25 mm I.D., film 0,25 m ketebalan) digunakan.

Program suhu GC adalah: mulai suhu 90 ◦C selama 0,5 menit, naik menjadi 255 ◦C pada 30 ◦C

min – 1 dan tahan selama 3,5 menit, naik menjadi 290 ◦C pada 35 ◦C min − 1 dan tahan selama 3

menit, mengelusi analit dengan waktu retensi di antaranya 6.1 dan 12.8 mnt, masing-masing

untuk BP dan BPZ. Total waktu menjalankan adalah 13 mnt. Suhu sumber ion, garis transfer dan

quadrupole masing-masing adalah 230, 300 dan 150 ◦C. Spektrometer massa dioperasikan

menggunakan mode electron impact (EI) (70 eV). Tabel 1 merangkum kondisi eksperimental

GC-MS. Senyawa dikuantifikasi dalam mode pemantauan ion yang dipilih (SIM) untuk

meningkatkan batas deteksi menggunakan satu target dan dua ion kualifikasi. Tabel 2

menunjukkan waktu retensi dan ion dipilih untuk semua senyawa. Identifikasi dikonfirmasi oleh

waktu retensi target dan rasio kualifikasi terhadap target untuk setiap senyawa. Aplikasi Analisis

Data MSD Chemstation, Versi G1701EA, revisi E.02.02.SP2 digunakan.

Untuk menyaring sampel, filter PVDF (0,45 m) (Teknokroma, Barcelona, Spanyol)

digunakan. EBA 20 (Hettich, Tuttlingen, Jerman) centrifuge digunakan pada kecepatan

mendekati maksimum.
3.3 sampel urine

Sampel urin dari pasien diabetes non-diabetes dan tipe-2 digunakan untuk penelitian ini.

Sebanyak 40 sampel urin manusia yang dikumpulkan dalam kekosongan pagi pertama diperoleh

dari sukarelawan: 20 pasien non-diabetes (berusia 30-89 tahun, 10 wanita dan 10 pria) dan 20

pasien diabetes (usia 30-91 tahun, 10 wanita dan 10 pria). Sampel urin dikumpulkan dalam

tabung polypropylene 10 mL (BD Tabung Plastik Vacutainer, Becton, Dickinson and Company,

Franklin Lakes, NJ) dan kemudian disimpan di −20 ◦C sampai analisis. Semua sukarelawan

menandatangani dan memberi persetujuan untuk berpartisipasi dalam penelitian ini. Kreatinin

ditentukan dengan menggunakan uji komersial sesuai Metode Jaffe oleh Roche / Hitachi Cobas

c701 module analyzer klinis (Roche Diagnostics).

3.4 Prosedur analitik

Volume 2 mL urin diencerkan hingga 10 mL dengan air mengandung BPZ (digunakan

sebagai standar pengganti) (50 ng mL − 1), 0,73 g hidrogen dipotassium fosfat dan 220 L asetat

anhidrida (AA) untuk derivatisasi in-situ, dan ditempatkan dalam gelas 15 mL botol kecil. Solusi

sampel diguncang keras selama beberapa detik. Setelah derivatisasi, DLLME dilakukan dengan

menyuntikkan a campuran yang mengandung 1 mL aseton sebagai pelarut pendispersi dan 100 L

kloroform sebagai pelarut ekstraktan, ke dalam sampel urin berair diajukan ke derivatisasi.

Campuran itu dikocok perlahan secara manual selama beberapa detik. Setelah sentrifugasi pada

600g selama 5 menit, pelarut ekstraksi diendapkan di bagian bawah tabung kerucut (volume

pulih 50 ± 10 L). Fase sedimen adalah dikumpulkan dan 2 L disuntikkan ke GC-MS

menggunakan kosong liner dengan 4 mm I.D. Fraksi ini mengandung BPA yang tersedia secara

bebas. Untuk menentukan BPA total, bebas dan terkonjugasi, langkah hidrolisis enzimatik

dilakukan. Dalam hal ini, volume 2 mL urin dicampur dengan 1 mL 1500 U mL − 1 –

glucuronidase larutan enzim dilarutkan dalam buffer amonium asetat (pH 5).

Setelah diinkubasi pada suhu 37 ◦C semalam, larutan ini terdilusi menjadi 10 mL air yang

mengandung BPZ (50 ng mL − 1), 0,73 g hidrogen dipotassium fosfat dan 220 L AA. Akhirnya,

prosedur DLLME adalah dilakukan seperti yang dijelaskan di atas. Untuk studi pemulihan,

sampel diperkaya dengan menambahkan berbeda volume larutan standar yang mengandung

analit hingga 2 mL sampel, mengarah ke tingkat fortifikasi 5 dan 20 ng mL − 1. Sampel yang

diperkaya dihomogenisasi selama 5 menit dan dibiarkan selama 1 jam pada suhu kamar, sebelum

melakukan analisis yang dijelaskan atas. Prosedur fortifikasi diterapkan pada tiga sampel urin

pasien diabetes dan non-diabetes. Tiga alikuot dari setiap sampel pada setiap tingkat konsentrasi

dianalisis secara terpisah.

 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Optimalisasi kondisi GC-MS

Kondisi pemisahan dioptimalkan menggunakan campuran standar bisphenol berair.

Pemisahan terbaik di waktu terendah dicapai dengan menggunakan HP-5MS (5% difenil – 95%

kolom kapiler dimethylpolysiloxane), dengan program suhu yang diringkas dalam Tabel 1, yang

memberikan pemisahan yang baik dalam 13,5 menit total waktu berjalan. Suhu tinggi di port

injeksi GC memastikan penguapan analit lengkap di inlet, menghindari retensi pada dinding liner

kaca, tetapi dapat menyebabkan degradasi termal dari beberapa senyawa. Ketika variabel ini

diuji pada 280, 300 dan 320 ◦C, sensitivitas maksimum dicapai untuk semua analit pada 320 ◦C,

yang dipilih .

Untuk meningkatkan efisiensi transfer sampel, pulsed splitless injeksi diuji. Dalam mode

injeksi ini, saluran masuk gas pembawa Tekanan meningkat tepat sebelum awal setiap lari, oleh

meningkatkan aliran gas ke dalam kolom, dan kembali ke nilai normal setelah waktu yang

ditentukan. Nilai tekanan 9,9, 12,7, 15,5, 17,8 dan 20,1 psi, diterapkan selama 0,5 menit, diuji.

Sensitivitas maksimum untuk sebagian besar BP diperoleh pada 15,5 psi). Kemudian, durasi

denyut nadi bervariasi pada 0,1, 0,2, 0,35 dan 0,5 menit, sinyal maksimum diperoleh selama 0,2

menit, yang dipilih.

4.2 Optimalisasi parameter derivatisasi

Asetilasi kelompok hidroksil BP mengurangi polaritasnya, yang meningkatkan respons

kromatografi dan meningkatkan responsnya afinitas untuk pelarut ekstraksi DLLME,

memungkinkan faktor pengayaan yang lebih tinggi. Reaksi asetilasi dilakukan dengan
menggunakan AA pada media dasar. Sampel pH dapat dimodifikasi dengan penambahan larutan

buffer atau dengan menambahkan garam penetral, yang bereaksi dengan asam asetat yang

dihasilkan. Penggunaan garam netralisasi menunjukkan hasil terbaik, dan garam fosfat dibasic

dan tribasic diuji untuk tujuan ini. Dibasic phosphate memberikan respons yang lebih tinggi

untuk kebanyakan BP. Volume pereaksi derivatisasi dan jumlah Garam penetral yang

ditambahkan ke sampel dioptimalkan menggunakan prosedur multivariat, desain komposit pusat

(CCD), dikembangkan di kisaran 50-350 L AA dan 0,3-0,9 g K2HPO4 (yang sesuai dengan 0,75

dan 2,25 setara dengan basis). Tanggapan yang didapat (Gbr. 1) menunjukkan bahwa nilai

optimal untuk senyawa adalah 220 L AA dan 0,73 gK2HPO4 (1,9 setara dengan basis.

Gambar.1Respons yang diperoleh untuk analit asetat menggunakan volume AA yang

berbeda dan ekuivalen stoikiometrik K2HPO4 terkait dengan AA

 Gambar.2 Pengaruh pelarut ekstraktan pada efisiensi ekstraksi BPs.

4.3 Optimalisasi prosedur ekstraksi mikro: perbandingan DLLME dan USAEME

Pelarut ekstraktan yang optimal dipilih menggunakan yang diperkaya sampel urin sintetis (20 ng

mL − 1 BPs). Pelarut yang berbeda lebih padat dari air - karbon tetraklorida, kloroform, 1,2-

dikloroetana, 1,1,2,2-tetrachloroethane dan diklorometana (volume 100 L) - Diuji, menggunakan

ultrasonik untuk USAEME atau 1 mL aseton sebagai pelarut disperser untuk teknik DLLME.

Ketika 1,2- dikloroetana dan diklorometana digunakan, tidak ada sedimen drop muncul.

Perbandingan sisa pelarut menggunakan. Teknik USAEME menunjukkan bahwa efisiensi

ekstraksi untukkebanyakan BPs tertinggi menggunakan kloroform, seperti yang ditunjukkan

pada Gambar. 2.
 Gambar.3 Variabel yang dipilih untuk desain Taguchi

Volume ekstraktan, volume fase berair dan rasio urin / air adalah tiga variabel

eksperimental terkait erat yang mempengaruhi efisiensi ekstraksi mikro. Nilai optimalnya

dipelajari menggunakan metode Taguchi, menerapkan orthogonal desain array (OAD) untuk tiga

faktor (masing-masing faktor pada tiga tingkat), seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3. Suhu,

waktu ekstraksi dan pengadukan tidak dianggap sebagai variabel karena keseimbangannya cepat

tercapai. Kecepatan sentrifugasi ditetapkan pada 600g selama 5 menit. Itu tiga variabel yang

dipilih memiliki efek signifikan pada ekstraksi efisiensi, seperti yang ditunjukkan oleh analisis

statistik varians (ANOVA). Efisiensi ekstraksi maksimal untuk 100 L kloroform, tetapi menurun

untuk volume yang lebih tinggi karena efek pengenceran; oleh karena itu, volume 100 L dipilih.

Meningkatkan fase berair volume hingga 10 mL menyebabkan peningkatan area puncak, dan

volume ini Oleh karena itu dipilih. Sinyal maksimum diperoleh dengan menggunakan 1/1 rasio

urin / air.

Desain Taguchi serupa lainnya dilakukan untuk mengoptimalkan jumlah siklus, waktu

siklus dan amplitudo (tiga faktor, tiga tingkat), seperti juga ditunjukkan pada Tabel 3. Kecepatan

sentrifugasi diperbaiki pada 600g selama 5 menit. Tiga variabel yang dipilih memiliki efek
signifikan pada efisiensi ekstraksi, seperti yang ditunjukkan oleh ANOVA. Sensitivitas

maksimum diperoleh saat menerapkan siklus selama 20 detik, setiap siklus 0,8 detik, dan

amplitudo 70 m untuk probe.

Untuk DLLME, pelarut disperser harus dapat bercampur dengan keduanya ekstraktan dan

fase urin berair. Pelarut optimal adalah dipilih dengan menyuntikkan 1 mL masing-masing

secara cepat (metanol, aseton dan asetonitril) mengandung 100 L CHCl3 ke dalam 10 mL yang

diperkaya sampel urin sintetis (20 ng mL − 1 BPs). Efisiensi ekstraksi paling tinggi

menggunakan aseton, yang dipilih. Volume optimal pelarut disperser adalah 1 mL, karena tidak

ada tetes yang muncul untuk volume yang lebih tinggi.

Eksperimen ini kemudian dilakukan dengan menggunakan sampel urin nyata. Dalam hal

ini, hasil terbaik diperoleh saat menggunakan DLLME daripada USAEME, teknik yang

menyebabkan penampilan sebuah endapan ketika sampel urin diserahkan ke pemeriksaan

ultrasonografi. Akibatnya, DLLME terpilih sebagai yang optimal teknik ekstraksi mikro.

4.5 kinerja metode

Metode ini divalidasi untuk batas linearitas, deteksi dan kuantifikasi, selektivitas,

pemulihan, akurasi dan ketahanan, sesuai dengan pedoman internasional . Grafik kalibrasi adalah

diperoleh menggunakan standar pengganti dan DLLME dikombinasikan dengan GC-MS, dengan

analisis regresi linear kuadrat-terkecil, menggunakan enam level dalam percobaan rangkap.

Ketika BPA-d16 diuji sebagai pengganti standar, itu terbukti sangat tidak stabil ketika

menggunakan pelarut yang diperlukan untuk DLLME, terurai menjadi BPA. BPZ juga diuji

memeriksa apakah semua sampel bebas dari senyawa ini. Muncul menjadi yang paling cocok
untuk tujuan ini karena itu menunjukkan lar kromatografi dan perilaku ekstraksi DLLME ke

seluruh BP yang diteliti. Sampel urin diencerkan 5 kali lipat efek matriks. Ketika BPZ, sebagai

pengganti standar, ditambahkan di 50 ng mL − 1, kemiringan grafik kalibrasi standar berair dan

yang diperoleh dengan penambahan standar pada urin sampel tidak menunjukkan perbedaan

yang signifikan pada tingkat kepercayaan 95%, seperti yang dikonfirmasi oleh tes ANOVA,

karena nilai "P" diperoleh lebih tinggi dari 0,05 untuk semua senyawa. Akibatnya,

penggunaannya. BPZ sebagai standar pengganti mengkompensasi efek matriks, menghilangkan

kebutuhan untuk menggunakan metode penambahan standar yang membosankan untuk tujuan

kuantifikasi, sehingga metode kalibrasi yang paling sederhana dengan standar air berlaku. Selain

itu, penggunaan pengganti membatasi segala ketidakpastian terkait dengan ekstraksi DLLME

langkah dan pengukuran GC-MS,

Ketika linieritas metode dinilai dalam Kisaran 0,5-40 ng mL − 1, nilai koefisien regresi

lebih tinggi dari 0,99 menunjukkan linearitas yang baik untuk rentang yang dipelajari. Itu batas

deteksi (LOD, untuk rasio signal-to-noise 3) dirangkum dalam Tabel 4 untuk matriks urin.

Pengulangan antar hari dan antar hari dan reproduktifitas, masing-masing, dari metode dihitung

dengan menggunakan standar deviasi relatif (RSD) dari serangkaian sepuluh analisis berturut-

turut dari sampel yang dibubuhi dengan semua senyawa di level 20 ng mL − 1. Faktor pengayaan

(EF) dihitung sebagai rasio antara konsentrasi analit dalam organik menetap fase setelah

ekstraksi dan konsentrasi awal dalam air larutan. Nilai EF juga termasuk dalam Tabel 4. Tabel 5

menunjukkan keunggulan utama dari metode yang diusulkan dibandingkan dengan yang lain

metode yang dilaporkan sebelumnya untuk analisis urin.

Sebuah kromatogram yang diperoleh DLLME dan GC-MS di bawah SIM mode untuk

sampel urin berduri pada level 10 ng mL − Kromatogram yang diperoleh untuk sampel yang
tidak terkontaminasi menunjukkan tidak adanya puncak yang mengganggu pada retensi. waktu

senyawa. BP diidentifikasi dengan membandingkan waktu retensi, mengidentifikasi target (T)

dan ion kualifikasi dan rasio kualifikasi terhadap target dari puncak dalam sampel, solusi standar

dan sampel yang diperkaya. Gambar. 3 juga menunjukkan spektrum massa, yang

mengkonfirmasi identitas.

4.6 Optimalisasi langkah hidrolisis enzimatik

Urin adalah sampel biologis yang cocok untuk campuran biomonitoring BPs. Seperti

ditunjukkan sebelumnya, konjugasi molekul BPA dengan glukuronida atau sulfat dianggap

sebagai mekanisme untuk detoksifikasi . Bentuk konjugasi BPA diperkirakan oleh perbedaan

antara konsentrasi BPA gratis (dianalisis tanpa dekonjugasi enzimatik urin) dan BPA total

(dianalisis setelah hidrolisis enzimatik). Untuk mengoptimalkan langkah ini, enzim -

glukuronidase dari Helix pomatia-Type H-1 dipilih karena itu memiliki aktivitas -glucuronidase

dan sulfatase. Itu dilarutkan menggunakan buffer amonium asetat (pH 5). Enzim berbeda

konsentrasi diuji dengan menambahkan volume dalam 0,5-2 mL kisaran 1500 U mL − 1 larutan

untuk 2 mL sampel urin. Karena sinyal tetap konstan di seluruh rentang yang dipelajari, 500 U

mL – 1 konsentrasi enzim dipilih. Suhu hidrolisis diperbaiki pada 37 ◦C seperti yang

direkomendasikan sebelumnya. Berbeda Waktu hidrolisis juga diuji antara 1 dan 12 jam, dan

sensitivitas lebih tinggi ketika sampel dirawat semalam.

Sebuah studi efek matriks baru dilakukan termasuk langkah hidrolisis enzimatik, di

hadapan BPZ sebagai standar pengganti pada 50 ng mL − 1 level. Nilai kemiringan dari

penambahan standar ke sampel urin terhidrolisis adalah 0,144 ± 0,009 mL ng-1,

mengkonfirmasikan bahwa tidak ada perbedaan signifikan pada kepercayaan 95% tingkat antara
kemiringan grafik kalibrasi standar berair dan yang diperoleh dengan penambahan standar pada

urin sampel dan sampel urin terhidrolisis. Oleh karena itu kalibrasi dengan standar berair

dianggap sesuai.

Persentase pemulihan BPs dari sampel urin.

Profil elusi dan spektrum massa yang diperoleh untuk sampel urin yang diperkaya
pada 10 g L-1 bisphenol, menggunakan prosedur DLLME dan GC-MS dalam
mode SIM.
4.7 Analilis Sampel Urin

Untuk memeriksa akurasi, tes pemulihan dilakukan dengan memperkuat tiga sampel urin

pada dua level konsentrasi 5 dan 20 ng mL − 1, yang berhubungan dengan konsentrasi rendah

dan nilai menengah rentang linearitas. Pemulihan bervariasi dari 96 hingga 109% (n = 27) di

level terendah dan dari 92 hingga 117% (n = 27) untuk level tertinggi (Tabel 6). Nilai RSD untuk

sampel ini lebih rendah dari 10%.

Metode yang diusulkan diterapkan untuk penentuan PT kandungan BPs dari beberapa

sampel urin dari diabetes (D) dan pasien non-diabetes (NoD). Sampel diprioritaskan oleh

DLLME dan diserahkan untuk dianalisis. Profil elusi diperoleh menunjukkan tidak adanya

senyawa yang mengganggu eluting di waktu retensi BP yang berbeda. Perbandingan retensi kali

untuk senyawa dalam campuran standar dan yang diperkaya sampel dan, khususnya, spektrum

MS, memungkinkan identifikasi BP. Tabel 7 menunjukkan hasil yang diperoleh. Seperti yang

bisa dilihat, BPA adalah satu-satunya senyawa yang terdeteksi dalam sampel urin yang dianalisis

dan ada perbedaan substansial antara konten BPAdari sampel yang berbeda. Bisphenol lainnya,

seperti BPF, BPZ dan BP, tidak terdeteksi dalam sampel urin dalam bentuk bebas atau

terkonjugasi. Total konten BPA diukur dengan melakukan hidrolisis enzimatik sampel urin

menggunakan campuran enzim.. Seperti dapat dilihat, glukuronida BPA sering terjadi bentuk

dominan bahan kimia ini diukur, sedangkan yang bebas formulir terdeteksi ke tingkat yang lebih

rendah.

Nilai yang terkait dengan BPA gratis, BPA terkonjugasi, dan total BPA disesuaikan

dengan total konten kreatinin dalam urin. Tingkat konsentrasi dalam bentuk bebas (disesuaikan

kreatinin) berkisar dari batas deteksi hingga 15,9 ng g − 1, sementara kreatinin menyesuaikan
BPA total terdeteksi pada 0,46-24,5 ng g − 1 level. Nilai yang dilaporkan adalah dalam sesuai

dengan penelitian sebelumnya [7,34,40].

Konten BPA gratis untuk pasien diabetes menunjukkan rata-rata nilai ± standar deviasi

2,7 ± 3,9 ng g − 1 (C. Saya rata-rata 1,8), sedangkan total BPA untuk pasien diabetes adalah 8,1

± 7,5 ng g-1 (C.I. rata-rata 3,5). Sebaliknya, untuk pasien non-diabetes, BPA gratis konten

adalah 1,5 ± 2,0 ng g − 1 (C dari rata-rata 0,96), sedangkan BPA total untuk pasien non-diabetes

adalah 5,8 ± 6,4 ng g-1 (C. I dari rata-rata 3.0). Sebuah perbandingan kandungan BPA untuk

kedua kelompok pasien terungkap bahwa nilai rata-rata yang sedikit lebih tinggi diperoleh untuk

BPA gratis dan total BPA untuk pasien diabetes (2,7 dan 8,1, masing-masing), daripada untuk

pasien non-diabetes (1,5 dan 5,8, masing-masing). Namun demikian, a perbandingan statistik

dari isi BPA untuk kedua non-diabetes dan pasien diabetes yang menggunakan uji Mann-

Whitney mengungkapkan hal itu tidak ada perbedaan yang signifikan antara kedua kelompok

karena nilai Pv adalah 0,379, 0,617 dan 0,441, untuk kreatinin bebas, tingkat BPA terkonjugasi

dan total, masing-masing. Tidak adanya perbedaan yang signifikan ini diduga karena variabilitas

yang tinggi BPAcontent dalam sampel yang berbeda, yang menyebabkan standar tinggi nilai

penyimpan.

Metode ini divalidasi menggunakan bahan referensi bersertifikat yang terdiri dari

"kontaminan organik dalam perokok (beku)" (SRM 3672), dengan konten BPA bersertifikat dari

3,05 ± 0,16 g kg − 1, dilengkapi dengan hidrolisis enzimatik langkah dalam perawatan. SRM

dianalisis tanpa dan dengan langkah hidrolisis enzimatik. Ketika tidak ada hidrolisis yang

dilakukan, tidak BPA terdeteksi. Namun, dengan adanya hidrolisis enzimatik, kandungan BPA

yang ditemukan adalah 3,12 ± 0,22 ng mL − 1 (n = 3). Sebuah perbandingan keduanya, hasil

yang diperoleh untuk urin SRM diajukan ke hidrolisis enzimatik dan nilai bersertifikat,
menggunakan one-sample t-test mengungkapkan bahwa tidak ada perbedaan yang signifikan

ditemukan pada tingkat kepercayaan 95% (t = 0,47; P = 0,68).

 BAB V
PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Asosiasi konsentrasi urin BPA dan diabetes bisa diperiksa dengan metode sensitif

berdasarkan asetilasi in-situ bisphenol, prekonsentrasi menggunakan DLLME dan pemisahan

kromatografi dengan GC-MS. Eksposur ke BP lain juga bisa diperiksa untuk penilaian risiko.

Metode ini kuat dan andal, menggunakan teknik persiapan sampel hijau, dan memungkinkan

konsumsi rendah pelarut organik dan kuantifikasi yang tepat di konsentrasi rendah terhadap

standar air. Sebagian besar BPA di sampel urin terkonjugasi dalam bentuk glukuronidasi. Hasil

diperoleh menunjukkan bahwa, meskipun nilai rata-rata sedikit lebih tinggi diperoleh untuk BPA

gratis dan total untuk pasien diabetes daripada untuk pasien non-diabetes, tidak ada perbedaan

yang signifikan antara kadar BPA urin berhubungan dengan diabetes karena tingginyadispersi

konten BPA dalam sampel urin yang berbeda.

DAFTAR PUSTAKA