KULTUR ENDOSPERM

Mengoptimalkan langkah-langkah awal budaya endosperma yang belum

matang dari pisang unggulan (Musa sapientum L.) kultivar 'Bhutia' dari
Bangladesh

Nama Kelompok :

Muhamad Haidar Hanun As’ari (081711433041)

Sherina Yulia Rose (081711433042)
Putri Afin Nurhayati (081711433043)

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS AIRLANGGA
2019
Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Mengoptimalkan langkah-langkah awal budaya endosperma yang belum

matang dari pisang unggulan (Musa sapientum L.) kultivar 'Bhutia' dari
Bangladesh

P.R. Paul, A.H.K. Robin* and M.R. Hossain Department of Genetics and
Plant Breeding, Bangladesh Agricultural University, Mymensingh-2202, Bangladesh. *E-mail:
gpb21bau@gmail.com

Abstrak

Varietas pisang lokal Bangladesh, yang memiliki persentase brix yang sama
dengan varietas komersial, tumbuh dengan baik di bawah kondisi buruk dengan
perawatan minimum tetapi kurang populer karena adanya benih. Budidaya
endosperma pisang unggulan dapat menghasilkan varietas triploid tanpa biji yang
dapat dibudidayakan secara komersial di lingkungan yang tidak cocok dengan
input pertanian yang lebih sedikit. Penelitian saat ini dilakukan untuk
mengoptimalkan langkah-langkah awal kultur endosperma menggunakan
endosperma yang belum matang dari kultivar pisang unggulan 'Bhutia'. Buah-
buahan muda pada berbagai tahap dikumpulkan dari kebun pisang setempat untuk
mengetahui tahap perkembangan endosperma yang cocok untuk budaya.
Endosperma buah remaja pada usia 25 hari, dipamerkan 'keadaan jeli', dipilih
untuk dikultur karena eksplan endosperma pada usia tersebut bertahan paling
banyak di media MS. Diamati bahwa eksplan yang tidak dirawat menghasilkan
kalus yang lebih besar secara relatif lebih cepat daripada eksplan yang diberi
perlakuan dingin. Kalus terbesar (0,41 cm) dalam periode waktu yang lebih
pendek (27 hari setelah inokulasi) diproduksi dalam media MS dan ditambah
dengan 0,5 ppm 1-Naphthaleneacetic acid (NAA) selain 0,5 ppm 2,4-
Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) dan 0,5 ppm Kinetin (Kn). Kalus yang
diproduksi secara bertahap menjadi kehitaman dalam penampilan dan kandungan
asam askorbat yang lebih tinggi (480 mg / 100g) diamati pada kalus kehitaman.
Menghindari menghitamnya kalus yang berasal dari endosperma pisang unggulan
akan menjadi tantangan untuk membangun protokol produksi triploid yang sukses
di masa depan.

Kata kunci: Musa sapientum L., pisang unggulan, kultur endosperma, tanpa
biji, triploid, penghitam kalus, perlakuan dingin

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Pendahuluan

Pisang (Musa sapientum L.) adalah buah hortikultura yang penting secara
ekonomi di Bangladesh dengan mempertimbangkan harga satuan, produksi,
ketersediaan, dan popularitasnya. Ditanam baik di wisma dan pertanian komersial
di Bangladesh yang menyumbang 41% dari total produksi buah dari 21% dari
total areal (Islam dan Hoque, 2003). Hasil rata-rata pisang adalah sekitar 14 ton
ha-1 (Islam dan Hoque, 2003). Bangladesh menumbuhkan lebih dari satu juta
metrik ton pisang setiap tahun dari 58 ribu ha lahan (BBS, 2009). Bagian terbesar
dari pisang yang diproduksi di Bangladesh dikonsumsi secara lokal tetapi juga
menghasilkan beberapa mata uang asing dari ekspor ke negara-negara Timur
Tengah (Sattar dan Hoque, 2005). Meningkatkan varietas pisang lokal secara
genetik, misalnya induksi versi tanpa biji dari varietas lokal dan meningkatkan
keseluruhan produksi dapat, tidak hanya meningkatkan kesehatan gizi nasional,
tetapi juga meningkatkan aliran mata uang asing dari ekspor pisang. Bangladesh
menumbuhkan sejumlah besar varietas pisang populer, yaitu: Sabri, Amritsagar,
Mehersagar, Dudsagar, Kabri, Champa, Agniswar, Genasundari, BARI Kola-1
dll. Selain varietas populer yang ditanam secara komersial ini, berbagai jenis
kultivar pisang yang diunggulkan sangat beragam juga tumbuh di rumah-rumah
pedesaan, pinggir jalan dan hutan, yaitu: Baghernokh kola, Bhutia kola, Atia kola
dll. Sebagian besar landrace asli ini lebih tinggi dalam kebiasaan tanaman, tahan
toleran terhadap kekeringan dan kekeringan. Karena sebagian besar varietas lokal
yang ditanam secara lokal dan benih ditanam di bawah manajemen yang buruk,
produktivitasnya sangat rendah. Buah-buahan dari varietas lokal ini sering
kehilangan popularitas karena kehadiran banyak biji steril.

Endosperma tanaman tanaman unik menurut asalnya, sifat pertumbuhan dan

tingkat ploidi. Sel endosperma triploid umumnya dibentuk oleh fusi tiga inti
haploid, satu dari induk jantan dan dua dari induk betina (Thomas et al., 2000).
Triploidy yang memiliki penggunaan pertanian yang sangat besar sering dianggap
yang terbaik dibandingkan dengan poliploid lain karena kondisi genomik ini
mendukung kekuatan dan produktivitas vegetatif (Habashy et al., 2004). Tanaman
triploid steril benih tidak diinginkan di mana benih bernilai komersial. Tetapi
dalam kasus banyak buah hortikultura yang berbeda seperti di pisang, jeruk, apel,
pepaya, anggur, dll., Di mana ketidaksukaan diinginkan, induksi tanaman triploid
telah dipraktekkan (Hoshino et al., 2011). Telah diketahui bahwa endosperma
triploid dari varietas diploid sering menghasilkan buah tanpa biji (Gmitter et al.,
1999; Thomas dan Chaturvedi, 2008). Kultur endosperma menyediakan protokol
satu langkah mudah untuk produksi tanaman triploid (Thomas dan Chaturvedi,
2008). Untuk menumbuhkan varietas tanpa biji, aplikasi kultur endosperma yang
belum matang telah dipraktikkan secara luas selama beberapa dekade terakhir di
banyak spesies hortikultura yang berbeda, misalnya dalam Cucumis sativus
(Nakajima, 1962), Malus pumila (Mu et al., 1977), Citrus (Wang dan Chang,

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

1978), Morus alba (Thomas et al., 2000) dan Carica papaya (Sun et al., 2011).
Budidaya jaringan endosperma dengan nutrisi dan konsentrasi hormon yang tepat
dan kombinasi berpotensi menghasilkan bibit triploid (Hoshino et al., 2011).
Dengan visi untuk menghasilkan varietas pisang tanpa biji triploid di masa depan,
penelitian ini direncanakan untuk mengoptimalkan langkah-langkah awal
budidaya endosperma dari varietas pisang yang diunggulkan di Bangladesh.

Bahan dan metode

Penelitian ini dilakukan selama periode dari April, 2013 hingga Oktober, 2014 di
laboratorium kultur jaringan Departemen Genetika dan Pemuliaan Tanaman,
Universitas Pertanian Bangladesh, Mymensingh, Bangladesh. Untuk
membandingkan ukuran buah, brix persen, persen pulp yang ditempati oleh biji
dalam varietas pisang unggulan 'Bhutia' dengan dua varietas paling populer::
Sagor ’dan‘ Sabri ’, lima buah matang dan dipilih secara acak dikumpulkan dari
pasar lokal. Buah-buahan dari varietas ditunjukkan pada Gambar. 1. Masing-
masing kulit buah, pulp dan biji dikumpulkan dan bobot keringnya dicatat.
Persentase brix juga diukur menggunakan refraktometer. Studi perbandingan
ukuran buah, kandungan biji dan persentase brix ini dilakukan untuk
menunjukkan bahwa pisang unggulan memiliki potensi besar dalam hal
kualitasnya dibandingkan dengan varietas tanpa biji populer di Bangladesh.

Bahan tanaman: Pisang hijau unggulan (nama lokal: Bhutia kola, kola adalah
nama Pisang Bengali) pada usia 15, 20, 25 dan 30 hari (hari setelah berbunga)
dikumpulkan untuk mengisolasi endosperma yang belum matang (Gbr. 1A).
Pisang unggulan digunakan untuk mengoptimalkan langkah awal kultur
endosperma. Mengembangkan endosperma pada usia 15, 20 dan 25 hari dikultur
dalam media MS untuk mengamati kemampuan bertahan hidup mereka. Buah-
buahan berumur 15, 20, 25 dan 30 hari dipotong melintang dan tahap
perkembangan endosperma diamati secara visual.

Perlakuan dingin pisang: Seperangkat 10 buah pisang disimpan pada suhu 4 oC

selama 72 jam sementara 10 buah pisang lainnya tidak dirawat.

Persiapan media: Dua komposisi hormon yang berbeda seperti: i) media MS

(Murashige dan Skoog, 1962) mengandung 0,5 ppm 2,4-D + 0,5 ppm Kn
(Perawatan 1) dan ii) Media MS yang mengandung 0,5 ppm 2,4-D + 0,5 ppm
NAA + 0,5 ppm Kn (Perawatan 2) digunakan untuk membudidayakan
endosperma pisang unggulan.

Sterilisasi eksplan: Sterilisasi permukaan buah pisang unggulan dilakukan di

bawah Kabinet Aliran Udara Laminar. Buah dibilas dalam etanol 70% selama 2
menit. Pisang olahan etanol direndam ke dalam larutan HgCl2 0,1% selama 3
menit diikuti dengan 3 kali pembilasan dalam air suling steril untuk

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

menghilangkan jejak HgCl2 yang akan menjadi racun bagi eksplan jika disimpan
dalam durasi yang lebih lama

Inokulasi dan kultur endosperma: Pisang yang disemai terpilih dipotong menjadi
irisan untuk mengekspos benih yang berkembang. Endosperma pada keadaan jeli
secara aseptik dikeluarkan dari biji pisang menggunakan pisau bedah dan forsep
yang halus dan diinokulasi ke dalam botol yang masing-masing berisi 25 mL
media MS dengan konsentrasi hormon yang diinginkan (Gbr. 2). Botol biakan
yang diinokulasi disimpan pada suhu 25 0C, intensitas cahaya 1000 lux dengan 16:
8 jam sehari: siklus malam. Kelembaban relatif yang nyaman dan akses terbatas
juga dipertahankan di ruang budaya.

Endosperma dalam inkubasi dimonitor secara teratur dan kontaminasi apa pun
segera dihapus. Percobaan dilakukan mengikuti rancangan acak lengkap dengan
10 ulangan untuk dua komposisi hormon baik untuk eksplan yang diberi
perlakuan dingin maupun tidak. Hari untuk pembentukan kalus, ukuran kalus,
warna kalus dan persentase kelangsungan hidup kalus dicatat.

Estimasi asam askorbat: Kandungan asam askorbat dari lima ulangan dari masing-
masing kalus kehitaman yang dihasilkan dari kultur endosperma pisang yang
diunggulkan dan kalus putih yang dihasilkan dari bawang putih diukur (Plummer,
1971). Calli keputihan dipilih sebagai 'kontrol' mengingat bahwa mereka tidak
menderita oksidasi sedangkan diasumsikan bahwa kalus menghitam adalah karena
stres oksidatif yang dihasilkan selama kultur.

Analisis statistik: Data dianalisis menggunakan paket perangkat lunak statistik

MINITAB 15 (Minitab Inc., State College, Pennsylvania, USA). Untuk
mengetahui variasi di antara varietas, perawatan yang dikenakan pada eksplan,
komposisi hormonal dan kandungan asam askorbat dalam kalis satu arah analisis
varians (ANOVA) dilakukan. Perbandingan Tukey berpasangan dilakukan ketika
perbedaan rata-rata signifikan.

Hasil

Perbandingan morfo-fisiologis buah pisang: Tujuan penelitian ini adalah untuk

mengoptimalkan tahap awal kultur endosperma dari varietas pisang lokal yang
diunggulkan. Sebelum itu, tiga varietas pisang yaitu, ‘Sagor’, ‘Sabri’ dan pisang-
unggulan dinilai berdasarkan sifat morfologis dan fisiologisnya. Analisis ragam
menunjukkan perbedaan ragam yang signifikan untuk semua sifat berikut:
persentase brix, berat segar, berat pulp kering, berat kulit kering (data tidak
ditunjukkan). Berat total segar, berat pulp kering dan berat kulit kering tertinggi di
pisang unggulan diikuti oleh varietas 'Sagor', dan 'Sabri' (Gbr. 3). Persentase Brix
dari 'pisang unggulan' secara statistik mirip dengan 'Sabri' dan lebih tinggi dari

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

varietas 'Sagor'. Benih dari varietas pisang yang diunggulkan ditemukan

menempati sekitar 31% dari total massa pulp (Gbr. 3).

Pengembangan endosperma: Struktur seperti endosperma mulai berkembang pada

hari ke-15. Benih yang berkembang dari buah pisang berumur 25 hari yang diberi
biji ditemukan diisi dengan bahan yang lembut dan konsentrat agar-agar (Gbr. 2B)
dan buah pisang berumur 30 hari yang ditaburkan ditemukan menjadi padat.
Persen yang selamat dari endosperma dalam kultur diperkirakan dan ditemukan
bahwa lebih dari 85% eksplan bertahan ketika endosperma dikumpulkan dari buah
berumur 25 hari (Gbr. 4).

Penilaian kalus yang diturunkan dari endosperma: Hari ke induksi kalus bervariasi
secara signifikan antara eksplan yang dirawat dengan dingin dan tidak diobati
(Tabel 1). Diamati bahwa eksplan yang tidak dirawat menghasilkan kalus yang
lebih besar (Gambar 5A) relatif lebih cepat daripada eksplan yang diberi
perlakuan dingin (Tabel 1). Pengobatan 2 dari eksplan yang tidak dirawat
menginduksi kalus terbesar dalam periode waktu tersingkat, setelah 27 hari,
dibandingkan dengan perlakuan 1 (Gambar 5B).

Gambar 1. Studi perbandingan antara pisang unggulan dan dua varietas populer,
Sagor dan Sabri. Potongan melintang buah dan seluruh buah yang diunggulkan
pisang (A&B), pisang ‘Sagor’ (E&F) dan ‘pisang Sabri’ (G&H) dan daging
kering (C) dan biji (D) pisang unggulan. 'A' dibandingkan dengan ‘E’ dan ‘G’
menunjukkan ada dan tidak adanya biji di dalam daging yang bisa dimakan. ‘B’,
‘F’, dan ‘H’ membandingkan individu buah.

Gambar. 2. A) pisang unggulan berumur 25 hari, B) Potongan melintang pisang

berumur 25 hari dan C) Inokulasi endosperma ke dalam media kultur jaringan

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Gambar. 3. Berat segar, berat pulp kering, berat kulit kering masing-masing buah
dan brix persen dari biji, 'Sagor' dan 'pisang' varietas pisang. Data disajikan
sebagai rata-rata ± SE (n = 5). Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang
signifikan secara statistik setelah perbandingan berpasangan Tukey.

Gambar 4. Bagan batang menunjukkan persen kelangsungan hidup 15, 20, 25 &
30 hari usai dari pisang unggulan. Data disajikan sebagai rata-rata ± SE (n = 5).
Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik
setelahnya perbandingan Tukey berpasangan.

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Gambar 5. Diameter kalus yang dihasilkan dari endosperma pisang unggulan

varietas: A) pada eksplan yang tidak diberi perlakuan dan diberi perlakuan dingin
(P = 0,03). dan B) di Media MS di bawah dua perawatan hormonal; Media MS +
0,5ppm 2,4-D + 0,5ppm Kn (Perawatan 1) & Media MS + 0,5ppm 2,4-D +
0,5ppm Kn + 0,5 ppm NAA (Perawatan 2) untuk eksplan yang tidak diberi
perlakuan (P = 0,01). Data disajikan sebagai rata-rata ± SE (n = 10). Huruf yang
berbeda menunjukkan secara statistik perbedaan signifikan setelah perbandingan
Tukey berpasangan.

Tabel 1. Hari untuk inisiasi kalus dari endosperma pisang unggulan variasi,
'Bhutia' di media MS di bawah dua perawatan hormonal Data disajikan sebagai
rata-rata ± SE (n = 10).

Hari untuk induksi kalaus

Perawatan eksplan Nilai P
Perawatan 1 Perawatan 2
Eksplan tanpa perlakuan 29 ± 0,3  27 ± 0,4  0,045 
eksplan perlakuan dingin 33 ± 0,5   32 ± 0,6  0,32

Kedua komposisi hormon dalam medium kultur jaringan MS menghasilkan kalus

yang berwarna kehitaman. Asam askorbat isi kalus kehitaman (480 ± 12,4 mg /
100g) secara signifikan lebih tinggi dari kalus keputihan bawang putih (400 ± 7,8
mg / 100 g, P <0,01).

Diskusi

Faktor usia buah: Adapun persentase kelangsungan hidup, endosperma

yang dikumpulkan dari buah pisang berumur 25 hari lebih baik daripada
endosperma yang relatif lebih muda (Gbr. 4). Karena itu, endosperm buah pisang
berumur 25 hari disarankan untuk digunakan sebagai eksplan untuk setiap upaya
di masa depan untuk regenerasi pisang triploid. Endosperma yang lebih muda
pada tahap ini adalah agar-agar dalam konsistensi yang menunjukkan statusnya
yang belum matang berbeda dengan endosperma yang dikumpulkan dari buah

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

berumur 30 hari yang berubah menjadi padat. Diketahui bahwa kematangan

embrio merupakan faktor penting dalam regenerasi dan juga faktor penentu
keberhasilan kultur endosperma dan frekuensi induksi kalus adalah lebih tinggi
dalam kasus embrio belum matang yang berkurang dengan kematangan embrio
(Escalant dan Teisson, 1989; Hoshino et al., 2011; Uma et al., 2011; Dayarani et
al., 2014).

Dapatkah perlakuan yang menginduksi bermanfaat: Suatu perlakuan yang

menginduksi (dingin atau panas) umumnya bermanfaat untuk kultur antera
(Sunderland dan Roberts, 1979; Huang dan Sunderland, 1982) dan perlakuan
dingin ditemukan untuk mengendalikan penggelapan kalus dan meningkatkan
kelangsungan hidup kalus di pir (Poudyal et al., 2008). Perlakuan dingin
kemudian diuji untuk melihat apakah ada efek positif pada keberhasilan budaya
endosperma. Tapi perlakuan dingin tidak memperhitungkan efek positif pada
kalus proliferasi dan ukuran kalus, sedangkan endosperma yang tidak diberi
perlakuan menginduksi kalus dengan cepat dan menghasilkan kalus yang lebih
besar (Gbr. 5).

Penggunaan NAA dalam kultur endosperma: Dalam hal komposisi

hormon dalam media MS, diamati bahwa dimasukkannya 0,5 ppm NAA bersama
dengan 0,5 ppm 2,4-D dan 0,5 ppm Kn dapat meningkatkan parameter kapalan
secara positif (Gbr. 5B, Tabel 1). Inklusi NAA juga diketahui efektif dalam
menginduksi kalus selama produksi pisang pencuci mulut triploid (Navarro et al.,
1997), pepaya triploid (Sun et al., 2011) dan endosperm matang yang berasal dari
induksi kalus dari Annona squamosa (Nair et al., 1986).

Kalus yang Menghitam: Dalam semua kondisi kultur penelitian saat ini
memperoleh kalus yang menghitam telah diamati. Dalam literatur, sebuah
Fenomena serupa, menghitam atau kecoklatan kalus, sebelumnya telah dilaporkan
di banyak spesies buah termasuk pisang (Munguatosha et al., 2014; Chikezie,
2012; Khatri et al., 2005; Nisyawati dan Kariyana, 2013), pir (Gao et al., 2003; Li
dan Qiao, 2001; Yan dan Li, 1998), alpukat (Castro et al., 1995), jambu biji
(Meghwal et al., 2000), jambu mete (Aliyu, 2005) dan lengkeng (Chandra dan
Padaria, 1999). Investigasi lebih lanjut diperlukan untuk mengungkapkan alasan
fisiologis menghitam atau kecoklatan. Suatu upaya untuk mengetahui perbedaan
kadar asam askorbat dalam kalus yang menghitaman didapat dari endosperma
dengan kalus keputihan yang normal (dari bawang putih) menunjukkan
konsentrasi kadar asam askorbat yang lebih tinggi dalam kalus kehitaman.
Hasilnya menyarankan endosperma kalus yang berasal dalam medium MS di
bawah kedua komposisi hormon mungkin menderita stres oksidatif. kalus
keputihan bawang putih digunakan sebagai kontrol.

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Beberapa solusi telah disarankan dalam literatur yang bisa mengurangi

kalus yang menghitam atau kecoklatan yang termasuk penambahan sistein dan
metionin (Khatri et al., 2005), polivinil pyrrolidone (PVP) (Poudyal et al., 2008;
Wei et al., 2007; Zhou, 2007; Zhang et al., 2003), vitamin C (Peng et al., 2007),
arang aktif (Aliya, 2005) dan antioksidan 8- hydroxyquinolin (8- HQS) (Li dan
Qiao, 2001) dalam media kultur. Pra-perawatan eksplan, misalnya, perlakuan
dingin (Poudyal et al., 2008; Zhang et al., 2003; Li dan Qiao, 2001; Liu dan Han,
1986) dan manipulasi kondisi kultur, seperti: kultur gelap (Nisyawati dan
Kariyana, 2013; Poudyal et al., 2008; Zhang et Al. 2003; Aliyu, 2005) diketahui
bermanfaat. Selain itu, penambahan asam askorbat dalam media kultur sebagai
antioksidan ditemukan untuk secara efektif mengontrol penghitaman kalus
(Munguatosha et al., 2014; Peng et al., 2007; Aliya, 2005; He et al., 1995);
sebaliknya, Chikezie (2012) melaporkan tidak ada efek menguntungkan dari asam
askorbat pada minimalisasi penghitaman eksplan yang efektif. Studi ini
mengungkapkan bahwa eksplan endosperma 'jelly like' dari sekitar buah pisang
unggulan berumur 25 hari bertahan di media kultur MS. NAA melengkapi kalus
media MS yang dihasilkan kalus dengan diameter yang lebih besar relatif cepat
dibandingkan dengan medium yang kurang NAA. Penampilan kalus menjadi
kehitaman mungkin karena untuk stres oksidatif seperti yang ditunjukkan oleh
kadar asam askorbat yang lebih tinggi dalam kalus kehitaman dibandingkan
dengan kalus putih. Penelitian lebih lanjut adalah diperlukan untuk menghindari
menghitamnya kalus yang merupakan tantangan untuk membangun protokol
regenerasi planlet triploid yang lengkap melalui kultur endosperma pisang
unggulan.

Pengakuan

Pekerjaan penelitian ini didukung secara finansial oleh Universitas Grants

Commission of Bangladesh (Proyek no. 2013/58 / UGC).

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Daftar Pustaka

Aliyu, O.M. 2005. Application of tissue culture to cashew (Anacardium occidentale)

breeding: an appraisal. African J. Biotech., 4: 14851489.
BBS, 2009. Statistical Year Book of Bangladesh, Bangladesh Bureau of Statistics (BBS).
Ministry of Planning, Government of People’s Republic of Bangladesh.
Castro, M., E. Oyanedel, R. Cautin, 1995. In vitro shoot proliferation in Avocado (Persea
americana) induced by CPPU. Proceedings of the World Avocado Congress III:
223-226.
Chandra, R. and J.C. Padaria, 1999. Litchi shoot bud culture for micro- propagation. J.
Appl. Hort., 1: 38-40.
Chikezie, U.N.Y. 2012. Effect of ascorbic acid on blackening and sprouting of Musa spp
shoot tips. ISABB J. Biotech. Bioinfo., 2:11-17.
Dayarani, M., M.S. Dhanarajan, K. Arun, S. Uma and P. Narayani, 2014. Embryo culture
and embryo rescue studies in wild Musa spp. (Musa ornata). J. Appl. Hort., 16:
126-130.
Escalant, J.V. and C. Teisson, 1989. Somatic embryogenesis and plants from immature
zygotic embryos of the species Musa acuminata and Musa balbisiana. Plant
Cell Rep., 7: 665-668.
Gao, J.S., W.F. Zhang, Y.H. Ou and P.W. Yang, 2003. Effects on the fast propagation by
cultural tissue of pear variety - Xinli 7. J Northern Fruits, 3: 4-6 (in Chinese).
Gmitter, F.G., X.B. Ling and X.X. Deng, 1990. Induction of triploid plants from
endosperm calli in vitro. Theor. Appl. Genet., 80: 785790.
Habashy, A.A., G. Testa, P. Mosconi, R. Cassia, A. Mazzucato, E. Santangelo and G.P.
Soressi, 2004. Parthenocarpy restores fruitfulness in sterile triploid (39)
tomatoes artificially obtained by crossing 4X 9 2X somaclones. J. Hort. Sci.
Biotech., 79: 322-328.
He, Q.Y., D.F. Zhang and R.H. Wang, 1995. A preliminary study on preventing brown
turning of sucker explants from banana by ascorbic acid pre-treatment. J. South
China Agric. Uni., 16: 79-82 (in Chinese).
Hoshino, Y., T. Miyashita and T.D. Thomas, 2011. In vitro culture of endosperm and its
application in plant breeding: Approaches to polyploidy breeding. Sci. Hort.,
130: 1-8.
Huang, B. and N. Sunderland, 1982. Temperature-stress pretreatment in barley anther
culture. Ann. Bot., 49: 77-88.
Islam, M.S. and M.A. Hoque, 2004. Status of Banana in Bangladesh. Advancing banana
and plantain R&D in Asia and the Pacific., 12: 33-42.
Khatri, A., I.J. Khan, M.U. Dahot, G.S. Nizamani, M.A. Siddiqui, S. Raza and M.H.
Naqvi, 2005. Study of callus induction in banana (Musa sp). Pak. J. Biotech., 2:
36-40.
Li, H.X. and N.J. Qiao, 2001. Approaches for reducing explants browning of Cangxi
pear (Pyrus pyrifolia Nakai) in tissue culture. J. Southwest Agric. Uni., 23:
524-526 (in Chinese).
Liu, S.L. and B.W. Han, 1986. Micropropagation techniques for walnut. J. of Beijing
Agric. Uni., 2: 143-148 (in Chinese).

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Liu, S.Q. and J.Q. Liu, 1980. Callus induction and embryoid formation in endosperm
culture of Prunuspersica. Acta Bot. Sin., 22: 198-199.
Meghwal, P.R., H.C. Sharma and S.K. Singh, 2000. Effect of surface sterilizing agents on
in vitro culture establishment of guava (Psidium guajava). Appl. Hort., 2: 94-
95.
Mu, S., S. Liu, Y. Zhou, N. Quan, P. Zhang, H. Xie, F. Zhang and Z. Yen, 1977.
Induction of callus from apple endosperm and differentiation of the endosperm
plantlet. Sci. Sin., 55: 370-376.
Munguatosha, N., M. Emerald and N. Patric, 2014. Control of lethal browning by using
ascorbic acid on shoot tip cultures of a local Musa spp. (Banana) cv. Mzuzu in
Tanzania. African J. Biotech., 13: 1721-1725.
Murashige, T. and F.A. Skoog, 1962. Revised medium for rapid growth and bioassays
with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant., 15: 473-479.
Nair, S., M.V. Shirgurkar and A.F. Mascarenhas, 1986. Studies on endosperm culture of
Annona squamosa Linn. Plant Cell Rep., 5: 132-135.
Nakajima, T. 1962. Physiological studies of seed development, especially embryonic
growth and endosperm development. Bull. Univ. Osaka Pref. Ser. B., 13: 13-48.
Navarro, C., R.M. Escobedo and A. Mayo, 1997. In vitro plant regeneration from
embryogenic cultures of a diploid and a triploid, Cavendish banana. Plant Cell
Tiss. Organ Cult., 51: 17-25.
Nisyawati and K. Kariyana, 2013. Effect of ascorbic acid, activated charcoal and light
duration on shoot regeneration of banana cultivar barangan (Musa acuminata
L.) in vitro culture. Int. J. Res. Rev. Appl. Sci., 15: 13-17.
Peng, X.N., Z.L. Yi, J.X. Jiang and L. Liu, 2007. Preliminary studies on anti-browning
during the tissue culture of bromeliaceae. Hunan Agric. Sci., 4: 67-69 (in
Chinese).
Plummer, D.T. 1971. An Introduction of Practical Biochemistry. Tata McGraw-Hill, New
Delhi. pp 228.
Poudyal, B.K., G. Du, Y. Zhang, J. Liu and Q. Shi, 2008. Studies on browning problem
and phenols content on shoots of Yali, Aikansui and Abbe Fetel pears for in
vitro culture. Frontiers Agric. China., 2: 321-330.
Sattar, M.A. and M.A. Hoque. 2004. Status of Banana in Bangladesh. In: Advancing
Banana and Plantain R&D in Asia and the Pacific. 13: 37-43.
Sun, D.Q., X.H. Lu, G.L. Liang, Q.G. Guo, Y.W. Mo and J.H. Xie, 2011. Production of
triploid plants of papaya by endosperm culture. Plant Cell Tiss.Organ Cult.,
104: 23-29.
Sunderland, N. and M. Roberts, 1979. Cold-pretreatment of excised flower buds in float
culture of tobacco anthers. Ann. Bot., 43: 405414.
Thomas, T.D., A.K. Bhatnagar and S.S. Bhojwani, 2000. Production of triploid plants of
mulberry (Morus alba L.) by endosperm culture. Plant Cell Rep., 19: 395-399.
Thomas, T.D. and R. Chaturvedi, 2008. Endosperm culture: a novel method for triploid
plant production. Plant Cell Tissue Organ Cult., 93: 1-14.
Uma, S., S. Lakshmi, M.S. Saraswathi, A. Akbar and M.M. Mustaffa. 2011. Embryo
rescue and plant regeneration in banana (Musa spp.). Plant Cell Tiss. Organ
Cult., 105: 105-111.

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net

Journal of Applied Horticulture, 18(1): 34-38, 2016

Wang, T.Y. and C.J. Chang, 1978. Triploid citrus plantlet from endosperm culture.
Proceedings of Symposium on Plant Tissue Culture, pp 463-468.
Wei, F., S.C. Su, F.Z. Fu and X.L. Hou, 2007. Phenol contents and browning in tissue
culture of Pistacia vera. Hebei J. Forestry Orchard Res., 22: 50-53 (in Chinese).
Yan, B.J. and H.X. Li, 1998. The relationship between browning ratio in PPO and
phenols of pear explants. J. Sichuan Agric. Uni., 16: 310-313 (in Chinese).
Zhang, W.F., J.S. Gao, Y.H. Ou and P.W. Yang, 2003. Primary study on browning
control in tissue culture of pellicular walnut. Deciduous Fruits, 3: 4-7 (in
Chinese).
Zhou, X.L. 2007. A primary study on reducing browning of callus induced from Aloe
saponaria Haw callus. Acta Agric. Uni. Jiang. Xiensis, 29: 539-544.

Journal of Applied Horticulture (http://horticultureresearch.net