Stress Oksidatif Pada Kehamilan Awal dan Resiko Terjadinya Pre-

eklampsia

1. Pendahuluan

Preeklampsia (PE), adalah salah satu penyebab utama kelahiran premature, morbiditas dan
mortalitas ibu di seluruh dunia. Pre-eklampsia merupakan suatu kondisi yang lebih parah dari
hipertensi selama kehamilan. Ini ditandai dengan hipertensi berkelanjutan, proteinuria dan
penurunan kondisi lainnya pada trisemester kedua kehamilan. Meskipun ada perekembangan
signifikan dalam memahami patofisiologi PE, etiologi pastinya masih belum diketahui. PE
diusulkan sebagai "model 2-tahap" di mana terjadi penurunan perfusi plasenta menyebabkan
sindrom maternal yang ditandai dengan disfungsi endotel dan hipertensi; Namun, hubungan
antara tahap-tahap ini masih belum jelas. Stres oksidatif, sering disebut sebagai
ketidakseimbangan antara reactive oxidative stress (ROS) dan antioksidan, yang meningkat
selama PE dan menghasilkan peningkatan produksi lipid peroksida dan ROS, seperti
superoksida (O2% ). Stres oksidatif diketahui sebagai salah satu penyebab disfungsi endotel
yang menyebabkan terjadinya PE. Beberapa penelitian telah melaporkan kerusakan oksidatif
akan meningkat dan kadar vitamin antioksidan lebih rendah pada wanita dengan PE). Dengan
demikian, masih tidak jelas apakah perubahan stres oksidatif merupakan penyebab atau
dampak PE.

Dengan demikian, tujuan analisis sekunder ini adalah untuk mengidentifikasi biomarker
pada awal kehamilan yang mungkin terkait dengan perkembangan PE. Temuan ini akan
meningkatkan pemahaman kita tentang peran stres oksidatif pada awal kehamilan dengan
kejadian PE. Tujuan penelitian kami adalah untuk: 1) mengidentifikasi perbedaan antara
tingkat ROS ibu dan antioksidan antara minggu ke- 12 dan 20 kehamilan pada wanita yang
menderita PE dan mereka yang tidak; dan 2) mengidentifikasi hubungan prediktif O2% ibu -,
dan antioksidan diukur antara minggu ke- 12 dan 20 minggu kehamilan dengan kejadian PE.

2. Bahan dan Metode

2.1 Pengumpulan sampel
 Desain longitudinal prospektif digunakan untuk merekrut 140 wanita hamil dengan usia
kehamilan 12 dan 20 minggu dari kelompok praktik kedokteran dan kelompok praktik
obstetri umum yang terkait dengan pusat perinatal tersier di negara bagian Midwest.
Penelitian ini ditinjau dan disetujui oleh Institutional Review Board of University of
Nebraska Medical Center (Protokol No. 154-14-EP dan 794-15-EP), dan persetujuan
tertulis diperoleh dari masing-masing peserta. Rincian lebih lanjut dari penelitian asli
dapat ditemukan di Moore et al. Data demografi (usia, indeks massa tubuh (BMI), ras,
etnis, diabetes mellitis (DM)) dan hasil (maternal PE, usia kehamilan neonatus saat lahir,
berat lahir neonates) dikumpulkan dari rekam medis ibu hamil setelah pengiriman. Semua
wanita hamil diikuti sampai melahirkan dan dikategorikan sebagai PE. Keparahan PE
didiagnosis dengan 1 dari 3 cara: (1) tekanan darah tinggi gestasional lebih tinggi
daripada tekanan darah tinggi (TD) (TD sistolik> 140Hg dan / atau TD diastolik> 90Hg);
(2) PE ringan jika ada proteinuria dan TD tinggi (TD sistolik> 140Hg dan / atau TD
diastolik> 90Hg); (3) PE parah ditegakkan dengan tekanan darah tinggi persisten (TD
sistolik> 160Hg atau diastolik TD ≥110Hg) dan proteinuria, dan salah satu kondisi buruk
berikut: kreatinin> 1.0, enzim hati 2 × normal atau lebih, trombosit <100, dan gejala
seperti sakit kepala, perubahan visual, sesak napas, dan nyeri dada
 
2.2 Sampel darah
Sampel darah dikumpulkan dari semua wanita hamil ke dalam tabung EDTA pada usia
kehamilan 12-20 minggu. Sel darah merah (eritrosit) dipisahkan dari plasma dengan cara
sentrifugasi pada 2500 × g pada 4 ° C selama 5 menit dan sampel plasma dan eritrosit
kemudian disimpan pada suhu -80 ° C sampai dianalisis.

2.3 Pengukuran O2
O2% - diukur dalam darah lengkap menggunakan electron paramagnetic resonance
(EPR) spektroskopi. Secara singkat, 30 menit setelah pengumpulan darah, seluruh darah
diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C dengan putaran EPR super-sensitif, 1-
hydroxy-3-methoxycarbonyl2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine (CMH), kemudian dibekukan
dalam cairan nitrogen. Oksidasi ini menghasilkan pembentukan radikal nitroksida stabil
yang dapat dideteksi dengan spektroskopi EPR. Amplitudo spektrum EPR berbanding
 lurus dengan konsentrasi O2% -. Semua pengukuran EPR dilakukan dengan Bruker
eScan EPR spektrometer (Bruker BioSpin GmbH, Rheinstetten / Karlsruhe, Jerman) dan
dinyatakan sebagai EPR arbitrary units (A.U.).

2.4 Pengukuran antioksidan

Semua antioksidan (yaitu superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), reduced
glutathione (GSH) dan oxidized glutathione (GSSG)) diukur dalam lisat sel darah merah
menggunakan alat tes yang tersedia secara komersial [(SOD Assay Kit-WST (DOJINDO,
Inc, Rockville, MD, USA), Kit Pengujian Aktivitas Aktivitas OxiSelect Catalase (Cell
Biolab, Inc., San Diego, CA, USA), kit Kuantifikasi GSSG / GSH (DOJINDO, Inc.,
Rockville, MD, USA)] dan sesuai instruksi pembuatan

2.5 Analisis statistic

SPSS versi 25 (SPSS Inc, Chicago, IL) digunakan untuk analisis statistik. Statistik
deskriptif dan tes parametrik digunakan untuk menggambarkan dan membandingkan
variabel demografi dan hasil antara PE dan kelompok hamil normal. Semua biomarker
ditransformasi-log ke data dan rata-rata perbebedaan pada seitap penanda antara
keparahan PE dan kelompok hamil normal dipelajari, menggunakan ANOVA dan koreksi
post hoc Bonferroni. Korelasi Spearman antara biomarker stres oksidatif dan keparahan
PE juga diteliti. Model regresi logistik untuk memprediksi hasil dikotomi PE / kehamilan
normal dilakukan menggunakan data log-transformed.

3. Hasil
Deskripsi demografi dan karakter klinis dari kelompok studi ditunjukan pada Tabel 1. Semua
kelompok hamil dengan PE akan melahirkan sekitar dua minggu lebih awal dibandingkan
dengan kelompok kehamilan normal (p <0,001, Tabel 1). Kelompok hamil PE lebih banyak
terdiri dari orang putih dibandingkan dengan kelompok kehamilan normal (p = 0,007, Tabel
1). Seperti yang diharapkan, lebih banyak wanita dengan PE mengalami diabetes
dibandingkan dengan wanita dengan kehamilan normal (Tabel 1). Parameter biokimia untuk
setiap kelompok kehamilan ada pada Tabel 2. O2 secara signifikan, lebih tinggi pada wanita
dengan PE ringan dibandingkan dengan mereka yang memiliki hipertensi gestasional dan
 pada kelompok kehamilan normal (p <0,05). Aktivitas CAT secara signifikan lebih rendah
pada semua kelompok hamil PE dibandingkan dengan kelompok kehamilan normal dan juga
secara signifikan lebih rendah pada wanita dengan PE berat dibandingkan dengan kelompok
kehamilan normal (p <0,01). Tingkat aktivitas CAT tampaknya terkait dengan tingkat
keparahan penyakit. Total glutathione (TGSH) dan kadar GSH secara signifikan lebih rendah
pada semua kelompok hamil PE daripada pada kelompok kehamilan normal (p <0,01). Tidak
ada perbedaan yang signifikan pada nilai SOD dan konsentrasi GSS antara kelompok PE atau
antara semua kelompok hamil PE dan kelompok kehamilan normal (p> 0,05, Tabel 2).
Seperti ditunjukkan pada Tabel 3, perubahan tingkat antioksidan dari CAT, TGSH dan
GSH berkorelasi negatif dengan tingkat keparahan PE. Terdapat peningkatan O2% yang
spesifik pada kelompok dengan PE ringan dibandingkan kehamilan normal dan wanita
hipertensi gestasional (Tabel 2), CAT adalah satu-satunya parameter yang secara signifikan
terkait terkait dengan resiko pengurangan PE (Tabel4). Diperkirakan bahwa untuk satu unit
peningkatan log CAT, kemungkinan terjadinya preeklampsia berkurang 64% (dihitung: (rasio
odds (OR) −1) * 100, p <0,05, Tabel 4)

4. Pembahasan
Penelitian ini menunjukkan hubungan yang kuat antara beberapa parameter stres oksidatif
yang dinilai pada usia kehamilan 12-20 minggu dan PE. Tingkat yang lebih tinggi dari CAT
secara signifikan terkait dengan penurunan risiko PE. CAT adalah satu-satunya antioksidan
yang diketahui terkait dengan tingkat keparahan PE. Temuan kami menunjukkan bahwa stres
oksidatif merupakan factor resiko untuk PE. Kadar ROS yang tinggi merusak sel yang
menyebabkan kerusakan oksidatif pada molekul seperti lipid, protein, dan DNA. Namun,
tubuh dilengkapi dengan sistem antioksidan untuk mengatasi peningkatan kadar ROS.
Antioksidan non-enzimatik termasuk GSH, asam askorbat, tokoferol, karoten, asam urat,
bilirubin dan antioksidan enzimatik termasuk SOD, glutathione peroxidase, dan CAT. Dengan
demikian, penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan lebih lanjut di dalam perhatian terhadap
stres oksidatif sebelum diagnosis PE (yaitu 12-20 minggu kehamilan) dan untuk lebih
memahami dan memprediksi kejadian PE.
Sejumlah penelitian telah menilai kadar berbagai jenis antioksidan selama kehamilan,
tetapi setelah pasien diagnosis PE. Namun, hanya beberapa penelitian yang meneliti
perbedaan kadar sebelum didiagnosis, yang biasanya terjadi setelah usia kehamilan 20
minggu. Di antara penelitian sebelumnya yang mengukur antioksidan sebelum diagnosis PE,
penelitian kami adalah penelitian pertama yang diketahui untuk mengukur aktivitas CAT dan
kadar O2% pada awal kehamilan (mis. Usia kehamilan 12-20 minggu). Hasil kami
menunjukkan bahwa stres oksidatif yang terkait dengan peningkatan aktivitas CAT dapat
diimplikasikan pada onset awal PE dan dapat meningkatkan agresi penyakit.
Dalam penelitian ini, peningkatan O2% - kadar PE ringan yang diamati pada kelompok
kehamilan normal dapat dikaitkan dengan tingkat keparahan EP. Namun, hasil penelitian
kami tidak menunjukkan hubungan yang signifikan antara O2% dan keparahan PE (Tabel 3).
Meskipun, SOD adalah penghalang pertama dan pertahanan antioksidan terhadap O2% - [32],
aktivitas SOD eritrosit pada ibu tidak berubah secara signifikan antara kedua kelompok. Hasil
ini sesuai dengan penelitian lain yang tidak menunjukkan perubahan aktivitas SOD pada usia
kehamilan 16-20 minggu. Sebuah studi sebelumnya melaporkan kadar SOD yang lebih
rendah pada wanita dengan PE pada 10-14 dan 20-24 minggu kehamilan. Perbedaan antara
data kami dan penelitian sebelumnya mungkin disebabkan sumber sampel yang berbeda.
Aktivitas CAT eritrosit pada ibu lebih rendah pada kelompok hamil PE pada usia kehamilan
<20 minggu dibandingkan dengan kelompok kehamilan normal. Defisiensi aktivitas CAT
pada wanita dengan PE parah sebelum diagnosis mungkin sangat penting dalam memahami
mekanisme patofisiologis yang terkait dengan PE, karena O2% yang dihasilkan secara terus
menerus oleh berbagai sumber di seluruh tubuh dengan cepat diubah menjadi H 2O2, yang jika
tidak diidentifikasi dapat berkontribusi terhadap stres oksidatif. Sayangnya, kami tidak
mengukur kadar H2O2 dalam penelitian kami, namun, kami mengukur kadar aktivitas dan
GSH. Menariknya, ada lebih sedikit penelitian tentang aktivitas CAT eritrosit selama
kehamilan pada wanita dengan PE setelah diagnosis, sedangkan tidak ada penelitian yang
menilai perbedaan nilai aktivitas CAT sebelum diagnosis PE
GSH adalah antioksidan intraseluler utama. Eritrosit mengandung konsentrasi GSH yang
tinggi, hampir 98% dari total kandungan darah. Selain fungsi detoksifikasi, GSH dan tiol
lainnya mempertahankan keseimbangan redoks sel, sehingga mencegah kerusakan oksidatif.
Dalam penelitian ini, ada penurunan antioksidan GSH yang siginifikan pada kelompok hamil
dengan PE dibandingkan dengan kelompok kehamilan normal. Hasil kami didukung oleh
penelitian sebelumnya. Namun, CAT adalah satu-satunya antioksidan yang diketahui secara
signifikan terkait dengan tingkat keparahan penyakit. Satu unit peningkatan dalam log CAT,
kemungkinan menjadi preeklampsia berkurang 64%, Tabel 4. Temuan ini menunjukkan
peningkatan stres oksidatif yang mungkin berperan dalam patogenesis PE. Jika temuan ini
dikuatkan dalam penelitian di masa depan, CAT mungkin merupakan antioksidan yang bisa
dipertimbangkan dalam percobaan pencegahan PE
Singkatnya, penelitian ini menunjukkan aktivitas CAT berhubungan terbalik dengan
keparahan PE dan menunjukkan korelasi antara stres oksidatif dengan inisiasi dan
perkembangan PE. Lebih lanjut, dibutuhkan penelitian yang dirancang dengan baik dan cukup
kuat diperlukan untuk menyelidiki penggunaan CAT sebagai terapi baru untuk pengobatan PE
yang lebih baik.