TUGAS TERJEMAHAN

JURNAL INTERNASIONAL
FISIOLOGI REPRODUKSI
(Long Term (6-Wk) Hindlimb Suspension
Inhibits Spermatogenesis In Adult Male Rats)

Disusun Oleh:
Cynthia Putrima Zakirman
1602101010042
Kelas 6

Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Syiah Kuala
Banda Aceh
2020
 Suspensi Kaki Belakang Jangka Panjang (6 Minggu) Menghambat
Spermatogenesis pada Tikus Janatan Dewasa
Ruang Stasiun Internasional akan memungkinkan untuk tempat tinggal yang luas di ruang
angkasa dan paparan jangka panjang untuk gaya berat mikro (μG). Kekhawatiran adalah
dampak dari jangka panjang μG pada kemampuan spesies untuk mereproduksi. Model yang
sering digunakan untuk mensimulasikan μG adalah suspense kaki belakang tikus jantan (HLS),
dimana kaki belakang ditinggalkan di atas lantai kendang dengan memanfaaatkan ekor.
Experiment yang di jelaskan disini adalah yang pertama untuk menguji efek HLS jangka
panjang fungsi testis pada tikus jantan dewasa. Free-roaming (con-Trols)/berkeliaran bebas
(kontrol) hewan dengan ekor yang dimanfaatkan tetapi bagian belakangnya bersentuhan
dengan lantai kandang (TO), dan hewan HLS diuji selama 6 minggu. Cryptorchidism dicegah
pada hewan TO dan HLS dengan penyempitan parsial kanal inguinalis dengan jahitan. Semua
parameter dibandingkan pada akhir percobaan 6 minggu. Bobot testis dan spermatogenesis
berkurang secara signifikan oleh HLS, sehingga tidak ada sel sperma di luar spermatid bulat
yang hadir dan epidimid tidak memiliki sperma dewasa. Dalam banyak tubulus, hilangnya
semua sel benih, kecuali beberapa spermatogonia, menghasilkan histopatologi yang mirip
dengan sel Sertoli, diamati. Sperogenogenesis muncul tidak terpengaruh pada kontrol dan TO
hewan. Penampilan sel Sertoli dan Leydig, testosteron, hormon luteinisasi, dan kadar hormon
perangsang folikel, dan berat vesikula epitelidinal dan mani tidak berubah oleh HLS. Kortison
tidak meningkat oleh HLS; jadi stres mungkin bukan faktor. Hasil ini menunjukkan bahwa
spermatogenesis sangat dihambat oleh HLS jangka panjang, sedangkan produksi hidrogen
testis tidak. Hasil ini memiliki implikasi yang signifikan mengenai efek serius pajanan jangka
panjang terhadap μG pada kemampuan reproduksi mamalia skrotum, termasuk manusia. testis;
gayaberat mikro; simulasi; penerbangan luar angkasa; kesuburan

SEBAGAI PERENCANAAN
Stasiun Luar Angkasa Internasional yang diolah dan tempat tinggal jangka panjang dalam
microgravit direalisasikan, Badan Penerbangan dan Antariksa Nasional telah menyatakan
perlunya menentukan apakah kemampuan organisme untuk bereproduksi dipengaruhi dalam
lingkungan μG. Berkenaan dengan laki-laki, kapasitas untuk bereproduksi ditentukan oleh 1)
kemampuan testis untuk menghasilkan, dalam jumlah yang cukup, spermatozoa dengan
morfologi normal dan pelengkap DNA haploid dan 2) apakah sperma ini dapat matang,
menjadi motil, dan akhirnya mengikat dan membuahi sel telur. Dalam studi berbasis tanah,
suspensi belakang (HLS) telah banyak digunakan sebagai model untuk meniru perubahan
fisiologis (kehilangan tulang dan massa otot) yang terjadi dalam μG dan digunakan sebagai
kontrol tanah untuk percobaan penerbangan μG (6, 10, 30, 36, 41, 46, 48, 49). Sehubungan
dengan dampak μG pada testis dan spermatogenesis, penurunan yang cepat dalam testosteron
yang bersirkulasi telah diamati secara konsisten pada tikus (dalam percobaan bio-satelit) dan
astronot selama penerbangan Space Shuttle (3, 15, 28, 47). Penurunan testosteron telah
diamati, bahkan tanpa adanya peningkatan kortisol, menunjukkan bahwa respon stres yang
terkait kortikosteroid tidak mungkin bertanggung jawab atas penurunan androgen dan
kehilangan tulang yang terkait pada hewan tersebut (28). Namun, respons stres tampaknya
bervariasi dalam studi yang berbeda. Beberapa penelitian menemukan peningkatan kortisol
dalam μG atau selama HLS, sedangkan penelitian lain tidak menunjukkan perubahan
signifikan (14, 20, 21, 25, 33, 45, 47, 50).
Dalam beberapa studi HLS, desain eksperimental tidak menjelaskan anatomi tikus yang
memungkinkan testis memasuki perut melalui kanal inguinal ketika bagian belakang diangkat
(37, 54). Dalam percobaan semacam itu, ada kemungkinan bahwa perubahan fungsi testis
dapat, sebagian besar, dikaitkan dengan perubahan yang dihasilkan dari testis cryptorchid
hipertermik. Sebagai contoh, dalam kontrol ground HLS untuk COSMOS-1667 dan COSMOS
1887, kanal inguinal tidak diikat sebagian untuk mencegah cryptorchidism pada tikus (42).
Kegagalan untuk ligasi kanal inguinalis pada hewan HLS jelas memungkinkan testis menjadi
abdominal dan menyebabkan penurunan yang cepat dan nyata pada populasi sel spermatogenik
(3). Dalam penelitian selanjutnya, potensi cryptorchidism dihilangkan dengan ligasi parsial
kanal inguinal. Dalam percobaan semacam itu, Amann et al. (3) menunjukkan penurunan
testosteron yang beredar dan peningkatan hormon luteinizing (LH) setelah 7 hari HLS pada
tikus berumur 56 hari. Pada 27% dari hewan HLS ini, ada pengurangan diameter tubulus
seminiferus dan beberapa kehilangan sel spermatogenik. Pada hewan yang terpapar μG selama
14 hari, testosteron dan diameter tubulus seminiferus yang beredar berkurang secara signifikan
dan jumlah sel kuman per penampang tubulus menurun dibandingkan dengan kontrol tanah
HLS untuk COSMOS-2044 (3). pada COSMOS-605, tikus cal- Setelah paparan 22 hari μG
untuk menunjukkan peningkatan berat testis relatif, sebagai berat testis weight berat badan
(34). Namun, jika bobot rata-rata testis aktual adalah recalcudecrease dalam testis yang
dihitung dari data mereka, maka bobot relatif terhadap kontrol diamati dalam μG. meskipun
data untuk hewan HLS (kontrol penerbangan simulasi) untuk COSMOS-1887 tidak dapat
digunakan (tidak ada ligasi inguinal yang dilakukan), ada pengurangan yang signifikan dalam
sirkulasi kadar testosteron, testis pada hewan penerbangan vs kontrol freeroaming (15, 39 ).
Berat yang serupa, dan jumlah hasil spermatogonia diperoleh untuk tikus jantan yang
diterbangkan e7 hari Space Shuttle Space Lab 3 (STS-51B) misi (32).
Atas dasar pengamatan di atas, hipotesis untuk penelitian ini adalah bahwa HLS jangka
panjang dari tikus jantan dewasa menghambat spermatogenesis. Studi-studi yang dibahas di
atas berfokus pada simulasi waktu paparan pG mirip dengan durasi sebagian besar penerbangan
Space Shutitle (7-16 hari). Sampai penelitian yang dilaporkan di sini, tidak ada investigasi
yang diterbitkan mengenai HLS efor pada fungsi testis dalam kondisi jangka panjang yang
serupa dengan yang dialami di Stasiun Luar Angkasa atau direncanakan untuk penerbangan
luar angkasa jangka panjang seperti Misi berawak ke Mars. Kami menjadi matang pada
kesimpulan dari laporan Internasional di sini bahwa memperpanjang HLS hingga 6 minggu
pada tikus dewasa menghasilkan perubahan spermatogenesis yang jauh lebih dramatis dan
sangat negatif. Temuan baru ini mendukung saran Amann et al. (3) bahwa μG untuk > 2
minggu dapat menghasilkan perubahan negatif tambahan dalam fungsi spermatogenesis dan
testis. Hasil ini sangat penting jika hasil serupa diperoleh dalam μG. Jika ini terbukti, maka
astronot yang kembali ke Bumi setelah lama terpapar pG mungkin tidak subur.

BAHAN DAN METODE

Bahan, Semua reagen adalah kelas American Chemical Society atau lebih baik kecuali
ditentukan lain. Air adalah MilliQ (Millipore, Bedford, MA) dideionisasi menjadi ≥ 18.2 MΩ.
 HLS tikus dan kelompok kontrol. Kandang HLS dibangun berikut desain yang
disediakan oleh Dr. Emily Holton (30, 56) dengan modifikasi yang diterbitkan oleh Park dan
Schultz (31). Secara singkat, harness yang terdiri dari strip Skintrac (Zimmer, Lenexa, KS)
diikat ke ekor dengan tingtur semprotan aerosol benzoin (Kemasan Profesional, Aurora, IL)
dan pita filamen dan kemudian dipasang ke perangkat suspensi di atas kandang yang dirancang
khusus. Perangkat suspensi mengangkat kaki belakang di atas lantai kandang pada sudut 30 °
tetapi memungkinkan gerakan bebas hewan dengan kaki depan sambil mencegah kaki belakang
menyentuh lantai kandang atau dinding. Semua hewan (Fisher 344, National Institutes of
Health) adalah peternak pensiunan yang sudah terbukti berumur 13 hingga 15 bulan dan sering
ditangani selama 1 minggu sebelum dimulainya percobaan. Kelompok kedua dari hewan
[hanya ekor] (kontrol) juga dikekang, dijahit di kanal inguinal, dan melekat pada perangkat
suspensi, tetapi kaki belakang diizinkan untuk terus memiliki kontak penuh dengan lantai
kandang. Jahitan dompet di sekitar saluran inguinalis cukup ketat untuk menjaga testis dalam
skrotum tetapi tidak membatasi aliran darah (3) diterapkan pada kelompok HLS dan TO.
Kelompok kontrol TO penting untuk membedakan efek HLS dari pemanfaatan dan ligasi.
Jenis kandang yang sama digunakan untuk kelompok HLS dan Tõ digunakan untuk
menampung kelompok hewan ketiga, kontrol jelajah bebas. Semua kelompok terdiri dari
setidaknya enam hewan. Protokol perawatan hewan untuk HLS yang memanfaatkan ekor tikus
yang digunakan sebelumnya (30) diikuti dalam penelitian ini (7, 19, 51, 56). Semua hewan
ditempatkan di kandang individual dengan air yang disediakan ad libitum. Tikus HLS diberi
makan ad libitum. Karena perbedaan konsumsi makanan oleh hewan HLS, kelompok kontrol
(TO dan roaming gratis) diberi makan rata-rata konsumsi makanan dari kelompok HLS yang
sesuai sehingga semua kelompok memiliki asupan kalori yang sama. Hewan dipelihara pada
siklus 12: 12-jam terang-gelap dan pada 24 ° C, suhu netral secara metabolik di mana tikus
tidak mendapatkan atau kehilangan panas.
Tes hormon. Darah dikumpulkan dari masing-masing hewan dalam semua kelompok
pada saat kematian pada akhir percobaan 6 minggu. Semua tes hormon dilakukan pada serum
dari masing-masing hewan dalam rangkap tiga. Hormon perangsang folikel (FSH) dan LH
diuji dengan ELISA (Amersham, Piscat-away, NJ). Kit ELISA termasuk tikus rujukan LH dan
tikus FSH dengan informasi tentang reaktivitas silang dengan masing-masing standar Institut
Kesehatan Nasional. Čortikosteron diuji oleh radioimmunoassay (ICN, Costa Mesa, CA).
Tessteron diuji oleh radioimmunoassay dengan reagen yang disediakan oleh Dr. Paul
Terranova (Pusat Medis Universitas Kansas). Sensitivitas tes hormon adalah 62,5 pg / ml untuk
testosteron, 8,66 ng / ml untuk FSH, 0,1 ng / ml untuk LH, dan 25 ng / ml untuk kortikosteron.
Koefisien variasi intra-assay adalah 4,5% untuk testosteron, 12,4% untuk FSH, 5,0% untuk
LH, dan 0,43% untuk kortikosteron. Koefisien variasi interassay adalah 3,4% untuk
testosteron, 5,4% untuk FSH, dan 4,0% untuk LH. Nilai kortikosteron ditentukan dalam uji
tunggal rangkap tiga; dengan demikian ada koefisien variasi; tidak ada nilai untuk interassay
koefisien variasi.
Berat badan keseluruhan, analisis berat organ, histologi testis, dan morfometri.
Selama percobaan 6 minggu, hewan ditimbang untuk memantau nutrisi dan kesehatan umum.
Hewan-hewan HLS ditimbang dengan menggunakan alat suspensi pada skala elektronik
sehingga kaki belakang tetap tertunda selama penimbangan. Pada akhir 6 minggu, setelah
dijauhkan dengan pemenggalan kepala dan pengumpulan darah, testis diangkat, dipisahkan
dari epididimida, dan ditimbang dengan tunika albuginea utuh. Bobot epididimis dan vesikula
seminalis (SV) juga ditentukan pada saat ini. Satu testis dan satu epididimis difiksasi dalam
fiksatif Bouin dan diproses dalam parafin untuk dipotong dan diwarnai dengan hematoxylin
Gill dan tanpa counterstaining. Testis lain dari masing-masing hewan diproses inti sel
spermatogenik yang resisten-homogenisasi (memperpanjang spermatid dan sperma testis)
dengan menggunakan rasio tetap dari berat testis per mililiter larutan homogenisasi dengan
metode Robb et al. (35) Data untuk jumlah sperma diekspresikan sebagai jumlah sperma per
mililiter dari testis homogate. Tubulus seminari dan diameter luminal dikuantisasi pada
gambar digital penampang bundar tubulus yang dikumpulkan dengan menggunakan iluminasi
bidang terang dengan tujuan × 4 pada mikroskop terbalik (Optiphot, Nikon, New York, NY)
dan kamera Magnafire ( Optronics, Goleta, CA). Analisis gambar digital dengan Optimas
versi 6.5 (Media Cybernetics, Silver Spring, MD) digunakan untuk mengukur tubulus semi-
niferous dan diameter lumen pada ~ 10 secara acak memilih potongan melintang sen di masing-
masing dari tiga daerah daerah testis untuk total ~ 30 sampel per testis.
Analisis statistik. Kelompok rata-rata kadar hormon, jumlah sperma, berat organ, dan
parameter tubulus seminiferus dibandingkan dengan uji-t. Perubahan berat badan diukur
selama percobaan 6 minggu dibandingkan dengan ANOVA.

JAMINAN SUSPENSI HINDLIMB JANGKA PANJANG SPERMATOGENESIS

Tabel 1. Perbandingan parameter organ reproduksi laki-laki dan parameter hormon dalam
kontrol, ekor tunggal, dan tikus belakang gantung ANOVA.
Parameter Kontrol Ekor Suspensi Kaki
Belakanng
Testicular wt, g Jumlah 1.70 ± 0.06 1.60 ± 0.13 1.10 ± 0.11a,b
sperma, sperma × 10 / ml
Lemen tubulus 7.82 ± 0.46 4.66 ± 1.06c 1.04 ± 0.24a
seminiferous, diameter µm
Tubulus seminiferous, 231.2 ± 2.3 239 ± 3.4 188.9 ± 1.9d,e
diameter µm
Serum testoteron, pg/ml 1,099 ± 580 722 ± 127 1,347 ± 156f
Epididymis wt, g 528 ± 31 596 ± 50 527 ± 58
Vesikula seminalis wt, mg 240 ± 50 156 ± 4 189 ± 13
Serum FSH, ng/ml 162 ± 38 140 ± 33 119 ± 15
Serum LH, ng/ml 6.9 ± 1.6 4.8 ± 0.9 7.6 ± 1.0h
Serum kortikosteron, ng/ml 76.0 ± 16.0 76.4 ± 20.0 42.6 ± 12.8

* Statistik mewakili perbandingan uji-t dari kelompok dengan kelompok kontrol (C )

atau kelompok hanya-ekor (TO), masing-masing, sebagaimana ditunjukkan dalam tanda
kurung. Nilai-nilai adalah rata-rata SE FSH, kontrol roaming yang merangsang folikel ..
hormon; LH, hormon luteinisasi. aP <0,001 vs kontrol; bP <0,01 vs. ekor saja; cP <0,01 vs
kontrol; dP <0,000001 vs kontrol; eP <0,000001 vs ekor saja; fP <0,001 vs ekor saja; gP
<0,02 vs ekor saja (uji-t).
HASIL
HLS tikus jantan dewasa selama 6 minggu mengurangi berat testis dan menghambat
spermatogenesis. Setelah 6 minggu HLS, tikus menunjukkan penurunan yang signifikan dalam
berat testis dibandingkan dengan kelompok kontrol dan TO (Tabel 1). Kelompok TO tidak
menunjukkan perbedaan yang signifikan dari kelompok kontrol. Penurunan yang signifikan
dalam jumlah sperma testis dan memanjangnya spermatid bersamaan dengan penurunan berat
testis pada hewan HLS juga (Tabel 1). Memanjang spermatid dan jumlah sperma testis
ditentukan dengan menghitung inti sel spermatogenik yang tahan-homogenisasi (35).
Penurunan 41% dalam sel-sel spermatogenik yang lebih matang ini diamati pada kelompok TO
vs kontrol. Namun, penurunan 87% yang lebih mencolok pada sel dewasa terjadi pada
kelompok HLS relatif terhadap kontrol roaming bebas.

Gambar 1. Spermatogenesis diblokir setelah 6 minggu suspensi belakang (HLS). Satu testis dari
masing-masing hewan difiksasi dalam fiksatif Bouin, tertanam dalam parafin, dibelah, diwarnai
dengan hematoksilin Gill, dan diperiksa dengan mikroskop cahaya. Perbesaran × 4 untuk A, C, E,
dan G; bilah skala di A, 500 µm. Perbesaran × 60 untuk B, D, F, dan H; bilah skala dalam B, 50 µm.
A dan B: testis dari hewan kontrol bebas-jelajah, tempat spermatogenesis tampak normal. C dan
D: kelompok kontrol hanya-ekor; spermatogenesis tampak normal dengan ekor (ST) dari spermatid
yang memanjang dan sperma testis mirip dengan yang ada di kontrol bebas-jelajah. E-H: testis dari
kelompok HLS. Dua kelompok utama histopatologi diamati pada kelompok hewan HLS. Dalam E
dan F, testis berisi tubulus yang menunjukkan semua tahap spermatogenesis hingga spermatid
bulat, termasuk spermatogonia (G), spermatosit (C), dan spermatid bulat (RT), tetapi tidak ada
spermatid yang memanjang atau sperma testis. Dalam G-H, testis berisi tubulus yang hampir tanpa
semua sel spermatogenik; tubulus pada dasarnya hanya mengandung sel Sertoli (S). Penampilan
sel interstitial, termasuk sel Levdig di semua grots mirip dengan kelompok kontrol.

Penurunan ekstensif sel spermatogenik dewasa pada kelompok HLS dikonfirmasi oleh
pemeriksaan histologis testis (Gbr. 1). Spermatogenesis normal diamati pada kontrol bebas-
jelajah (Gbr. 1, A dan B) serta pada hewan kontrol T0 (Gbr. 1, C dan D). Namun, pada hewan
HLS, spermatogenesis sangat berkurang (Gbr. 1, E-H). Sebagian besar hewan menunjukkan
beberapa spermatogenesis hingga tetapi tidak melebihi sperma bulat (Gbr. 1, E dan F). Namun,
banyak tubulus hanya menunjukkan spermatogonia dan spermatosit. Dalam banyak kasus,
hampir semua tubulus dalam suatu bagian hanya mengandung sel Sertoli kecuali sangat sedikit
sperogogonia (Gbr. 1, G dan H). Namun, pada semua hewan HLS, ada daerah yang
mengandung setidaknya sperogogonia. Berbeda dengan perubahan yang diamati dalam
tubulus seminiferus, daerah interstitial tampaknya tidak terpengaruh pada hewan HLS.
Meskipun tidak secara khusus dikuantifikasi, keseluruhan penampilan dan jumlah sel Leydig
pada hewan HLS serupa dengan yang ada pada kontrol bebas-jelajah dan hewan TO. Histologi
testis (Gambar 1) menunjukkan bahwa diameter tubulus seminiferus berkurang pada testis HLS
relatif terhadap kelompok kontrol dan TO. Ini dikonfirmasi oleh pengukuran morfometrik
menggunakan analisis gambar digital (Tabel 1). Meskipun diameter lumen tidak berbeda
secara signifikan di antara kelompok eksperimental (Tabel 1), diameter tubulus pada kelompok
HLS sangat berkurang secara signifikan sebesar 18% relatif terhadap kontrol roaming bebas
(Tabel 1). Tubulus seminiferus HLS, sementara menunjukkan diameter yang lebih kecil, tidak
sepenuhnya runtuh. Level testosteron yang bersirkulasi pada hewan HLS 6 minggu tidak
berkurang. Tabel 1 menunjukkan bahwa, setelah 6 minggu HLS, kadar testosteron yang
beredar tidak berbeda secara signifikan antara kelompok HLS dan kontrol roaming bebas.
Tingkat testosteron dalam kelompok TO juga tidak berbeda secara signifikan dengan kontrol
bebas roaming. Di sisi lain, testosteron berkurang (sebesar 46%) pada kontrol TO relatif
terhadap hewan HLS. HLS selama 6 minggu tidak mengubah berat epididimis atau SV. Pada
hewan HLS, tidak ada perubahan berat epididimis yang diamati (Tabel 1). Gambar 2
menunjukkan histologi epididimis cauda hewan yang mewakili dari masing-masing kelompok
perlakuan. Hewan Kontrol dan TO (Gbr. 2, A dan B) menunjukkan lumen epididim yang berisi
sperma, sedangkan kelompok HLS (Gbr. 2C) berisi lumen dengan puing seluler atau ruang
kosong dan tidak ada bukti sperma. Hanya dua hewan HLS yang menunjukkan bukti sperma.
Sedikit (<50 sperma / hewan) yang bisa diperoleh dengan cara ekstrusi ke dalam buffer
kapasitasi yang imotil dan dipenggal, dan kepala sperma sering bulat atau memiliki bentuk
abnormal. Di sisi lain, kelompok kontrol dan kontrol TO memiliki sperma matang normal di
cauda epididymis (Gambar 2) yang menunjukkan motilitas yang baik pada paparan buffer
kapasitasi. SV juga merupakan organ yang tergantung androgen, penting untuk produksi cairan
tambahan selama ejakulasi. Berat SV juga tidak berkurang pada tikus HLS (Tabel 1).
Kelompok kontrol TO menunjukkan sedikit penurunan berat SV, tetapi ini tidak berbeda secara
signifikan dari kelompok kontrol bebas roaming. Gonadotropin tidak meningkat pada tikus
HLS. Tingkat sirkulasi FSH dan LH tidak berubah secara signifikan pada hewan HLS relatif
terhadap kontrol roaming bebas (Tabel 1). Ada sedikit perbedaan dalam sirkulasi LH antara
kelompok HLS dan TO, tetapi tidak satu pun dari kelompok ini yang secara signifikan berbeda
dari kelompok kontrol bebas roaming. Penurunan spermatogenesis pada tikus HLS bukan
karena stres hewan atau perbedaan nutrisi. Tabel 1 menunjukkan bahwa kadar kortikosteron
tidak secara signifikan lebih tinggi pada kelompok perlakuan dibandingkan kelompok kontrol.
Tingkat kortikosteron sedikit tetapi tidak secara signifikan lebih rendah pada kelompok HLS
daripada pada kedua kelompok kontrol. Untuk mengontrol pengurangan asupan makanan oleh
hewan HLS, semua kelompok lain diberi makan rata-rata dari berat makanan yang dikonsumsi
oleh kelompok HLS. Gambar 3 merangkum perubahan berat hewan selama periode percobaan
6 minggu. Semua kelompok menunjukkan sedikit (~ 10%) penurunan berat badan selama
percobaan 6 minggu. Pada 6 minggu, tidak ada perbedaan yang signifikan antara kontrol
roaming bebas, TO, dan kelompok HLS.
PEMBAHASAN

Gambar. 2. Sperma absen dari lumen epididimis hewan HLS. Epididimida Cauda disiapkan untuk histologi
seperti yang dijelaskan dalam BAHAN DAN METODE. A: hewan kontrol yang representatif menunjukkan
lumen yang diisi dengan ekor sperma. B: hewan kontrol hanya-ekor juga menunjukkan lumen yang
mengandung ekor sperma. C: Hewan HLS menunjukkan lumen yang mengandung puing-puing seluler dan
tidak memiliki ekor sperma. Skala bar, 500 µm.
Eksperimen yang dijelaskan di sini adalah yang pertama untuk menguji efek HLS jangka
panjang pada fungsi testis pada tikus jantan dewasa. Setelah 6 minggu HLS, spermatogenesis
berkurang secara signifikan, demikian sehingga tidak ada sel spermatogenik di luar spermatid
bulat yang hadir di testis dan tidak ada sperma dewasa normal yang ditemukan di cauda
epididymis. Dalam banyak kasus, hilangnya spermatogenesis disertai dengan hilangnya semua
sel spermatogenik, termasuk spermatogonia, menghasilkan histopatologi yang mirip dengan
sel Sertoli. Gambaran histologis keseluruhan sel Sertoli serta sel Leydig interstitial tampaknya
tidak terlindungi pada hewan HLS. Fakta bahwa lumen tubulus seminiferus dari hewan HLS
tidak runtuh menunjukkan bahwa sel Sertoli masih berfungsi sehubungan dengan proses
sekresi mereka. Ini bisa menjelaskan perubahan diameter tubulus tanpa adanya perubahan
diameter lumen pada kelompok HLS. Ini juga konsisten dengan perubahan epitel seminiferus
yang terbatas pada komponen sel germinal. Hilangnya spermatogenesis disertai dengan
penurunan berat testis tetapi tidak ada perubahan dalam berat epididimis atau SV relatif
terhadap kelompok kontrol. Perbedaan antara perubahan epididimis dan berat SV dalam tidak
adanya perubahan testosteron beredar dicatat dalam 28 hari cryptorchidism pada tikus (17).

Gambar 3. Total berat badan ditentukan pada interval mingguan selama percobaan 6 minggu. Berat
badan sedikit menurun (~ 10%) di semua kelompok selama periode 6 minggu, tetapi tidak ada perbedaan
yang signifikan (oleh ANOVA) dalam berat badan rata-rata dalam 3 kelompok. UNTUK, kontrol hanya-
ekor
 Dalam percobaan kami, kadar testosteron, FSH, dan LH yang bersirkulasi normal pada
6 minggu pada hewan HLS dan tidak berbeda secara signifikan dari analitik kontrol bebas
jelajah berpasangan. Panel perubahan ini mirip dengan yang ada di cryptorchidism (4, 17);
namun, binatang-binatang TO dan HLS sebagian diikat di kanal inguinalis untuk mencegah
testis turun ke perut. Spermatogenesis dapat dihambat pada hewan yang stres (1, 27).
Peningkatan kadar kortikosteron adalah indikator stres yang sensitif dalam kondisi ini (1, 2).
Jadi stres juga disingkirkan karena tidak ada peningkatan kortikosteron yang bersirkulasi yang
diamati. Kemungkinan lain adalah bahwa penurunan sementara testosteron yang bersirkulasi
terjadi lebih awal selama percobaan HLS yang serupa dengan yang ditunjukkan dalam
penelitian HLS dengan durasi yang lebih pendek (3, 12). Dengan demikian, dalam percobaan
6 minggu kami, penurunan berat SV mungkin terjadi sebelumnya dalam percobaan tetapi pulih
bersama dengan kadar testosteron pada akhir percobaan 6 minggu. Akhirnya, nutrisi sebagai
faktor yang mungkin dalam hilangnya spermatogenesis (26) juga dikesampingkan karena
kelompok kontrol dan kelompok TO diberikan pada kelompok HLS. Perbedaan utama antara
penelitian ini dan penelitian sebelumnya adalah durasi percobaan. Dalam sebagian besar studi
HLS sebelumnya, durasi pengobatan adalah 1-4 minggu (3, 12, 18). Kemampuan untuk
mendeteksi efek suatu pengobatan pada spermatogenesis sangat tergantung pada tahap
spermatogenesis yang dipengaruhi oleh pengobatan. Semakin awal tahap spermatogenesis
terlibat, semakin lama waktu yang dibutuhkan untuk perubahan populasi sel spermatogenik
untuk diamati (38). Seperti yang diungkapkan oleh histologi percobaan kami, semua populasi
sel spermatogenik turun. Dengan demikian, tidak mengherankan bahwa penelitian sebelumnya
tentang durasi HLS yang lebih pendek menunjukkan efek yang lebih terbatas pada
sperogenogenesis.
Penurunan aliran darah juga dapat berkontribusi untuk memblokir spermatogonia yang
dipengaruhi oleh HLS. spermatogenesis. Penurunan laju aliran 30% peningkatan yang
signifikan dalam jumlah sper- dan matogonia pada tikus (5). Dengan demikian, jika aliran
darah berkurang karena spermatosit yang menunjukkan kontrol reaktif inguinalis diharapkan
menghasilkan hasil yang lebih mirip dengan kelompok HLS daripada kontrol bebas-jelajah.
Selain itu, pada hewan HLS sel-sel sperma yang dipertahankan adalah spermatogenisia,
spermatosit, dan spermatid bulat, yang merupakan kebalikan dari hasil yang diamati dengan
berkurangnya aliran darah, jahitan adalah faktor utama, maka TO Namun, terlokalisasi
perubahan aliran darah bisa menjadi faktor.
Masih menjadi studi HLS sebelumnya pada testis tikus jantan dapat dibagi menjadi dua
kategori. Pertama, desain eksperimental dalam studi awal tidak memperhitungkan anatomi
tikus yang memungkinkan testis turun ke perut ketika bagian belakang diangkat. Pada
manusia, saluran inguinalis biasanya menyempit untuk mencegah testis menjadi abdominal.
Dalam pengalaman seperti itu, ada kemungkinan bahwa perubahan dalam fungsi testis
sebagian besar, untuk perubahan yang dapat dikaitkan, dengan terjadi sebagai akibat dari testis
hipertermik yang serupa dengan yang diamati dalam kontrol Bround untuk COSMOS
JGSmple, dalam HLS 1887, yang r evem dan COSMOS- cryptorchidism. Untuk OSMOS,
saluran inguinalis tidak diikat sebagian untuk mencegah kriptorkismus pada tikus (42).
Kegagalan ligate testis menjadi abdominal dan menyebabkan kanal yang ditandai dan inguinal
pada tikus HLS jelas memungkinkan pengurangan cepat dalam populasi sel (12). Kategori
kedua HLS menyumbang potensi ligasi kanal inguinalis untuk mencegah relokasi perut testis.
Namun, tidak satu pun dari penelitian ini percobaan spermatogenik oleh cryptorchidism parsial
termasuk kontrol yang tidak dievelasikan tetapi masih dijahit yang merupakan bagian dari
penelitian ini. (12) menunjukkan penurunan yang nyata dalam testosteron yang bersirkulasi
dan peningkatan LH setelah 7 hari HLS pada hewan berusia 56 hari. Pada sebagian besar
hewan mereka, morfologi testis normal. Namun, pada 27% hewan HLS, ada pengurangan
diameter tubulus seminiferus dan beberapa kehilangan sel spermatogenic. Eksperimen ini
mewakili kontrol dasar pendahuluan untuk eksperimen µG berikutnya pada COSMOS-2044
(3). Pada hewan yang terpapar μG selama 14 hari, testosteron dan diameter tubulus seminiferus
yang beredar berkurang secara signifikan dan jumlah bagian menurun dibandingkan dengan
kontrol tanah HLS (3). Setelah 22 hari paparan μG pada COSMOS-605, tikus menunjukkan
peningkatan berat testis relatif, dihitung sebagai berat testis. Namun, jika bobot rata-rata testis
aktual dihitung ulang dari data mereka, maka penurunan berat testis relatif terhadap kontrol
diamati Meskipun data untuk hewan HLS (kontrol penerbangan simulasi) untuk COSMOS-
1887 tidak dapat digunakan (tidak ada ligasi inguinal), ada pengurangan yang signifikan dalam
sirkulasi kadar testosteron, berat testis, dan jumlah spermatogonia pada hewan penerbangan.
vs. kontrol bebas-jelajah (15, 39). Hasil serupa diperoleh untuk tikus jantan yang diterbangkan
pada misi Space Shuttle Space Lab 3 7 hari (STS-51B) (32).
Satu perbedaan yang signifikan antara hasil dalam sel benih ini per tubulus berat badan
silang (34). dalam μG. mempelajari dan besarnya penurunan testosteron yang bersirkulasi
pada hewan yang diobati dengan HLS yang lebih pendek dan dalam μG. Dalam percobaan
kami, tidak ada perbedaan dalam sirkulasi testosteron antara hewan HLS dan kelompok kontrol
lainnya pada 6 minggu. Penurunan testosteron yang bersirkulasi dimungkinkan selama tahap
awal. Fakta bahwa kadar LH normal pada 6 minggu dan fakta bahwa populasi sel Leydig juga
secara morfologis tidak terpengaruh oleh 6 minggu HLS konsisten dengan kesimpulan ini. Di
sisi lain, pada hewan HLS jangka pendek, penurunan testosteron yang bersirkulasi diamati
dengan tidak adanya peningkatan LH, kecuali pada dua dari delapan hewan (12). Itu
berspekulasi bahwa perubahan mikrosirkulasi dan / atau perubahan halus dalam suhu testis
analog dengan cryptorchidism dalam μG dan HLS (12). Pada individu dengan kriptorkismus,
kadar androgen sedikit berkurang, tetapi dalam rentang fisiologis, sehingga terdapat fenotip
pria normal, termasuk karakteristik dan perilaku seks sekunder, tetapi spermatogenesis
dihambat. Pada manusia, jika cryptorchidism adalah bilateral, maka orang-orang ini tidak
subur dan berisiko lebih tinggi untuk mengembangkan kanker testis. Sudah tahun 1920-an (11,
29) bahwa studi spermatogenik selektif yang diterbitkan yang dibahas di atas adalah 6-minggu
pengalaman kompensasi untuk perbedaan ini dihipotesiskan karena kegagalan adalah karena
paparan spermatogenesis ke suhu perut, yang umumnya hanya 2–3 ° C di atas suhu skrotum.
Hipertermia testis juga telah diusulkan sebagai penyebab mendasar ketidaksuburan pada kasus
varikokel pada manusia (13, 40, 55, 57).
Potensi penghambatan spermatogenesis seperti cryptorchidism seperti pada HLS dan
μG karena peningkatan pertimbangan testis khusus. Dalam model HLS, meskipun testis
dicegah dari turun ke perut dengan ligasi parsial kanal inguinalis, testis dapat menghabiskan
sebagian besar waktu bersandar pada tubuh. Dalam μG, tidak adanya tarikan gravitasi pada
suhu massa testis adalah kemungkinan yang memerlukan pertimbangan serius. dalam model
HLS, meskipun testis dicegah dari turun ke perut dengan ligasi parsial kanal inguinalis, testis
dapat menghabiskan sebagian besar waktu istirahat melawan tubuh. pada μG, tidak adanya
gravitasi pada massa dapat menyebabkan testis terletak secara signifikan lebih dekat ke perut.
Dalam kedua kasus, ini dapat meningkatkan suhu testis, yang dalam kondisi jangka panjang
dapat sangat berdampak pada spermatogenesis (22). Bukti luas bahwa suhu perut merugikan
spermatogenesis pada mamalia skrotum telah dipublikasikan oleh Setchell dalam sebuah
tinjauan (43), di mana ia menyatakan, "Masih merupakan misteri mengapa testis sebagian besar
mamalia tampaknya membutuhkan suhu yang lebih rendah untuk fungsi normal. " Suhu
skrotum berkurang dibandingkan dengan suhu abdomen dengan kombinasi setidaknya tiga
faktor: 1) struktur dan fungsi pembuluh darah, termasuk pendinginan arus balik darah arteri
testis oleh pleksus pampiniformis vena dan, mungkin, vasomotion, 2) kontraksi / relaksasi
otot-otot kronik di dalam dinding skrotum, menarik testis ke arah perut di kanalis inguinalis
(atau ke kanalis inguinalis pada tikus), dan 3) kelenjar keringat skrotum. Kepentingan relatif
dari ketiga faktor ini untuk spermatogenesis normal tidak jelas (16). Ada kemungkinan bahwa
dalam model GG dan tikus HLS kontribusi dari otot kremasterik terhadap pendinginan testis
terganggu oleh kurangnya tarikan gravitasi 1-G, menjaga testis dari dinding perut yang lebih
hangat.
Dalam kondisi lain, pria yang menderita cedera medulla spinalis sering menunjukkan
berkurangnya kesuburan namun hanya mengalami sedikit perubahan fungsi endokrin testis (8,
9). Dalam hal ini, mekanisme yang mendasari berkurangnya spermato- genesis mungkin juga
merupakan suhu testis yang mendekati suhu tubuh sebagai akibat dari duduk kronis (52). Bukti
lebih lanjut bahwa panas berlebihan mengganggu spermatogenesis manusia berasal dari
penelitian yang menunjukkan bahwa kualitas pekerja di luar ruangan menurun selama musim
panas (23). Wang et al. (53) menemukan peningkatan yang signifikan pada dUTP nick end
yang dimediasi label TdT-sel spermatogenik apoptosis bernoda 7, 10, dan 14 hari setelah
cryptorchidism yang diinduksi oleh pembedahan. Studi tentang pemanasan suprafisiologis
testis menunjukkan bahwa suhu hingga 43 ° C selama 15 menit meningkatkan apoptosis sel
spermatogenik (24, 43). Studi terbaru juga secara khusus memeriksa penurunan sel
spermatogenik dengan in situ TdT-mediated dUTP nick nick labeling analysising untuk sel
testis apoptosis (44, 53).
Singkatnya, pengamatan baru yang penting ini menunjukkan bahwa HLS tikus jantan
dewasa dewasa selama 6 minggu menghasilkan penyumbatan spermatogenesis yang nyata,
sehingga sel spermatogenik di luar spermatid bulat tidak ada. Karena model HLS diterima
secara luas sebagai model untuk μG, akan sangat penting untuk menentukan mekanisme yang
mendasari penghentian sperma. Hasil ini juga memiliki implikasi yang signifikan mengenai
potensi efek serius dari pajanan jangka panjang terhadap μG pada kemampuan mamalia,
termasuk manusia, untuk bereproduksi. Jika temuan ini berlaku dalam μG, itu menyiratkan
bahwa astronot laki-laki dapat menjadi tidak subur setelah terpapar lama untuk μG. Jika
penyumbatan spermatogenesis terbukti tidak dapat dipulihkan, maka kemandulan yang
diinduksi μG ini dapat terjadi.