Skrining toksisitas beberapa fraksi metanol

(Rumondang Bulan Nasution)

SKIRINING TOKSISITAS BEBERAPA FRAKSI METANOL

DARI DAUN Lantana camara L.

Rumondang Bulan Nasution

Jurusan Kimia FMIPA
Universitas Sumatera Utara
Jl. Bioteknologi No. 1 Kampus USU Medan 20155

Abstrak

Telah dilakukan skirining toksisitas terhadap beberapa fraksi ekstrak etanol daun Lantana camara L. Fraksinasi
terhadapekstrak etanol daun L. camara L. dilakukan dengan kromatografi kolom menggunakan adsorben silika
gel G 60, eluen campuran benzen dan etanol. Setiap fraksi dikontrol dengan kromatografi lapis tipis, dan fraksi
yang memiliki harga Rf yang sama dikelompokkan menjadi satu. Terhadap masing-masing fraksi dilakukan
skirining toksisitas secara in vitro dengan menggunakan sel leukemia L1210. Toksisitas ditentukan dengan
metode Fujimoto berdasarkan nilai IC50

Kata kunci: Ekstrak metanol, Lantana camara L., sel leukemia L1210, toksisitas.

PENDAHULUAN menurunkan tekanan darah dan

Sejak dahulu masyarakat Indonesia
terutama penduduk di pedesaan mengenal
dan memakai tanaman berkhasiat obat
sebagai salah satu upaya dalam
penanggulangan masalah kesehatan yang
dihadapinya jauh sebelum pelayanan
formal dan obat-obatan modern menyentuh
masyarakat. Pengetahuan mengenai
tanaman berkhasiat ini merupakan
pengalaman turun temurun yang diwarisi
dari generasi dahulu ke generasi berikutnya
(Wijayakusuma et al, 1995)
Salah satu tumbuhan yang sudah lama
digunakan masyarakat sebagai ramuan
obat tradisional untuk berbagai penyakit
adalah tumbuhan Lantana camara L.
Menurut informasi yang diperoleh
(Soedigdo S., 1995) daun tumbuhan L.
camara L. dapat digunakan sebagai obat
penyakit kulit menahun dengan cara
menempelkan daun segar yang dihaluskan
ke tempat yang sakit.
Ahmed menyatakan ekstrak etanol
daun L. camara L. antara lain adalah
meningkatkan respirasi (Ahmed et al,
1972) Daun L. camara L. selain digunakan
sebagai obat juga pernah digunakan untuk
pengendalian hama penggerek umbi
kentang di dalam gudang penyimpanan
(Setiawati dan Sastrosiswoyo, 1986)
Selain efek positif yang telah
diusebutkan di atas, tumbuhan L. camara
L. dapat menimbulkan efek negatif yaitu
dapat menyebabkan keracunan pada hewan
memamah biak. Misalnya di Kabupaten
Donggala, Sulawesi Tengah, tumbuhan L.
camara L. dilaporkan dapat menyebabkan
keracunan pada sapi. Keracunan biasanya
terjadi 24 jam setelah ternak memakan L.
camara L. dalam jumlah cukup banyak
dengan gejala-gejala antara lain lesu dan
gelisah, nafsu makan hilang, peradangan
mata, kulit menjadi peka terhadap sinar
matahari dan terjadinya luka pada kulit
sapi, pada beberapa kasus setelah 2 atau 3
hari ternak tersebut akan mati (Anonimous,
1993; Anonimous, 2002)

51

Menurut De vita (1982) dan juga
Alberts et al., (1994), obat yang digunakan
untuk membunuh sel-sel kanker biasanya
toksik untuk sel-sel normal. Mengingat
adanya efek farmakologi dan toksisitas dari
tumbuhan L. camara L. maka ada
kemungkinan komponen yang bersifat
toksik dari daun L. camara L. apabila
digunakan dalam dosis yang tepat dapat
digunakan sebagai obat untuk penyakit
kanker.
BAHAN DAN METODA
Bahan
Daun L. camara L. yang digunakan
dalam penelitian ini dikumpulkan dari
daerah Soreang Bandung, metanol, benzen,
etanol, kloroform, dimetil sulfoksida,
larutan biru tripan, nitrogen cair, medium
MEM eagle’ glutamine, larutan fortal calf
serum, indikator universal, silika gel G 60,
lapisan silika kiesel gel 60 F254 akuades
dan sel leukemia L1210.
Metoda
Penyediaan Bahan
Daun Lantana camara L. setelah
diambil, dibersihkan dan hanya daunnya
saja yang digunakan untuk penelitian.
Kemudian dikeringkan pada suhu kamar
dengan cara diangin-anginkan. Setelah
kering, dihaluskan dengan mesin
penggiling hingga menjadi serbuk. Diayak
dengan ayakan untuk mendapatkan serbuk
berukuran –40+60 mesh. Serbuk yang
diperoleh disimpan di tempat kering dalam
botol coklat. Sel leukemia L1210 yang
digunakan untuk uji toksisitas berasal dari
Jepang.
Jurnal Sains Kimia
Vol 7, No.2, 2003: 51-54
1. Pembuatan dan pemisahan ekstrak
metanol
Ekstrak metanol diperoleh dengan cara
ekstraksi panas dengan pelarut metanol di
dalam labu Soxhlet (direfluks), sampai
tetes sari dari pipa samping labu kelihatan
jernih. Untuk setiap 50 g serbuk digunakan
500 mL metanol. Selanjutnya sari metanol
diuapkan pada tekanan yang direduksi
dengan rotavapor (Vaccum evaporation)
pada suhu 50 0C, sehingga diperoleh
larutan jenuh metanol. Larutan jenuh
metanol diuapkan di atas penangas air
sampai diperoleh Zat padat yang disebut
sebagai ekstrak kasar.
Fraksinasi ekstrak metanol (ekstrak
kasar) dilakukan secara kromatografi
kolom gravitasi dengan menggunakan
adsorben silica gel G 60 (-70+230 mesh)
dengan perbandingan berat sampel dan
adsorben 1 : 60. Elusi dilakukan dengan
eluen Campuran benzen dan etanol (4:1
v/v). Silika gel G 60 ditimbang 90 g,
ditambahkan sedikit demi sedikit larutan
campuran benzen dan etanol (4:1 v/v),
campuran diaduk hingga rata kemudian
dimasukkan ke dalam kolom. Sebanyak 1,5
g ekstrak kasar dilarutkan dalam pelarut
campuran benzen dan etanol (4:1 v/v) dan
dimasukkan ke dalam kolom dengan
menggunakan pipet tetes dielusi dengan
campuran benzen dan etanol (4:1 v/v).
Setiap fraksi ditampung sebanyak 2,5
sampai 3,0 mL dengan laju elusi 0,40 mL/
menit. Tiap fraksi yang diperoleh dianalisis
dengan kromatografi lapis tipis (KLT)
menggunakan adsorben silica kiesel gel 60
F254 dengan penampak noda uap iodium.
Fraksi-fraksi dengan Rf yang sama
dikumpulkan dan diuapkan dengan gas
nitrogen. Diperoleh 5 fraksi yaitu fraksi F-
I, F-II, F-III, F-IV, dan F-V.
52
Skrining toksisitas beberapa fraksi metanol
(Rumondang Bulan Nasution)
2. Skrining Toksisitas dengan
Leukemia L1210
a. Pengujian sampel
Masing fraksi F-I, F-II, F-III, F-IV,
dan F-V dilarutkan dalam metanol dengan
kadar 1 mg /mL Uji toksisitas ekstrak
methanol, fraksi F-I, F-II, F-III, F-IV, dan
F-V terhadap sel leukemia L1210
dilakukan secara in vitro menurut prosedur
yang digunakan oleh Fujimoto. Uji
toksisitas dilakukan dalam multiwell plate
tissue culture (1,00 mL sel setiap lubang
dengan kapasitas 20 x 105 sel /mL). Ke
dalam sel tersebut ditambahkan ekstrak
metanol sebanyak 10 μl dengan variasi
konsentrasi 10,00; 7,50; 5,00; dan 2,50
μg/mL. Sebagai kontrol digunakan 10μl
methanol. Kemudian diinkubasi dalam
incubator CO2 pada suhu 37 0C, selam 48
jam. Setelah diinkubasi, jumlah sel
dihitung di bawah mikroskop dengan
menggunakan Haemocytometer Fuch
Rosenthal (0,200 mm; 0,0625 mm2).
Percobaan dilakukan secara duplo. Hal
yang sama dilakukan terhadap fraksi F-I,
F-II, F-III, F-IV, dan F-V.
b. Analisis Data
Analisis data dilakukan dengan
menghitung IC50. Harga IC50< 4 μg/mL
dinytakan toksik dan berpotensi sebagai
antikarsinogenik.
HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Hasil Ekstraksi dan Kromatografi
Kolom
Dari 1 kg serbuk daun yang diektraksi
diperoleh 64,52 g (6,45 %) ekstrak kasar.
Untuk pemisahan selanjutnya, setelah
dilakukan berbagai percobaan KLT
terhadap ekstrak tersebut ternyata
53
Sel diperoleh system KLT yang paling sesuai
yaitu dengan adsorben silika gel G60 dan
eluen campuran benzen dan etanol (4:!
v/v). Berdasarkan analisis dengan KLT,
fraksi hasil kromatografi kolom dapat
dikelompokkan ke dalam 5 bagian menurut
harga Rf masing-masing fraksi. Kelima
fraksi tersebut adalah F-I, F-II, F-III, F-IV,
dan F-V. Hasil pemisahan kromatografi
kolom terdapat pada Tabel I.
Fraksi 1 hingga 6 (F-I) merupakan zat
padat berwarna hijau tua dengan harga Rf
0,66 dan 0,78; fraksi 7 hingga 16 (F-II)
merupakan zat padat berwarna hijau coklat
dengan harga Rf 0,55; 0,66 dan 0,78; fraksi
17 hingga 25 (F-III) merupakan zat padat
hijau coklat dengan endapan putih
kehijauan dengan harga Rf 0,32 dan 0,55;
fraksi 26 hingga 50 (F-IV) merupakan zat
padat warna coklat tua sedangkan fraksi
methanol (F-V) merupakan zat padat
warna coklat tua. F-III mengindikasikan
senyawa triterpenoida yang ditunjukkan
dengan munculnya warna ungu dengan
pereaksi Salkowsky. Hal ini sesuai dengan
hasil penelitian sebelumnya yang
menyatakan bahwa di dalam tumbuhan L.
camara L. terdapat senyawa triterpenoida.
2. Skirining Toksisitas dengan Sel
Leukemia L1210.
Tingkat toksisitas dari ekstrak
tumbuhan tersebut ditentukan berdasarkan
nilai IC50nya. Suatu senyawa disebut
bersifat toksik bila aktivitasnya terhadap
sel uji mempunyai nilai IC50<4 μg/mL (zat
murni) dan IC50<20 μg/mL (ekstrak kasar).
Tingkat toksisitas tersebut memberi makna
terhadap potensi aktivitasnya sebagai
antitumor. Hasil yang diperoleh
memperlihatkan bahwa ekstrak methanol
memiliki nilai IC50= 5,59 μg/mL sehingga
 Jurnal Sains Kimia
Vol 7, No.2, 2003: 51-54

Tabel 1. Hasil kromatografi kolom dengan pengelusi campuran benzen dan etanol (4:1 v/v)

No Fraksi Warna Berat (%) Rf

1 F-I Hijau tua 18,20 0,66; 0,78
2 F-II Hijau coklat 16,49 0,55;0,66;0,78
3 F-III Hijau coklat dengan endapan putih 23,25 0,32; 0,55
4 F-IV Coklat tua 5,35 0,0
5 F-V Coklat tua 7,68 0,0

Tabel 2. Nilai IC50 ekstrak metanol dan fraksinya terhadap Sel Leukemia L1210

No. Ekstrak/Fraksi IC50 (μg/mL)

1 Ekstrak metanol 5,59
2 F-I 6,55
3 F-II 6,00
4 F-III 3,82
5 F-IV 4,75
6 F-V 4,47

dapat dikatakan memiliki toksisitas yang

tinggi karena harga tersebut relatif jauh lebih
kecil dari 20 μg/mL . Oleh karena itu perlu
dilakukan fraksinasi terhadap ekstrak tersebut
untuk lebih mempersempit pencarian
kandungan senyawa yang aktif sebagai
antitumor.Hasil skirining toksisitas ekstrak
dan fraksi metanol daun L. camara L. dapat
dilihat pada Tabel II.
Fraksi F-III memiliki nilai IC50< 4 μg/mL
. Fraksi F-IV dan F-V memiliki nilai IC50
mendekati 4 μg/mL. Fraksi F-I dan F-II
memiliki nilai IC50> 4 μg/mL. Hal ini dapat
diartikan bahwa F-III, F-IV dan F-V memiliki
toksisitas yang relatif tinggi, sedangkan F-I
dan F-II memiliki toksisitas yang relatif
rendah.
KESIMPULAN
Hasil penelitian ini menyimpulkan bahwa
ekstrak methanol daun tumbuhan Lantana
camara L. memiliki IC50<20 μg/mL sehingga
dapat dikatakan memiliki toksisitas yang
relatif tinggi. F-III memiliki IC50< 4 μg/mL
berpotensi sebagai antitumor.
Ahmed, Z.F. et al. 1972, Planta Medika, 282-288.
Alberts, B. et al. 1994.,Cancer dalam Molecular
Biology of the Cell, Gerland Publishing Inc.,
New York, 1255-1272.
Anonim, 1993, Keracunan Tanaman Lantana Camara
pada ternak dalam Warta Penelitian dan
Pengembangan Pertanian, XV, 5, Bogor, 1-2.
Anonim, 2002, Production Animal Clinical
Toxicology, http://www.library.usyd-
edu.au/VEIN/links/pact/lantana.html
De Vita, V.T. 1982, Principles of Chemotherapy dalam
Cancer, Principles and Practice of Oncology,
Editor DeVita, V.T., S. Hellmann, S.A.
Rosenberg, J.B. Lippin Cott Company, Toronto
133-145.
Fujimoto, Y., M. Satoh, 1986, Chem. Pharm. Bull.,
34(11), 4540-4544.
Itokawa, H., K. Takeya, 1993, Heterocycles, 35, 2,
Tokyo, 1467-1501.
Kloppenburg, Versteegh 1983, Petunjuk Lengkap
Mengenai Tanam-tanaman di Indonesia dan
Khasiatnya sebagai Obat-obatan Tradisionil,
Terjemahan, Yayasan Dana Sejahtera dan CD.,
RS. Bethesda, Yogyakarta, 170.
Setiawati, W., S. Sastrosiswono, 1986, Bull. Penelitian
Hortikultura, XIV, 1, Lembang, 6-11.

DAFTAR PUSTAKA

54