Transgenik Brassicaceae: Sebuah Pendekatan Menjanjikan untuk Fitoremediasi

Logam Berat

1. PENDAHULUAN
Berlimpahnya polutan beracun meningkat luar biasa setelah revolusi industri, dan
keberadaannya di lingkungan kita (udara, tanah, dan air) secara negatif mempengaruhi
semua bentuk kehidupan di bumi (Gavrilescu et al., 2015). zat pencemar organik
mencakup senyawa-senyawa berbeda seperti senyawa yang mengandung klorin
(Chlorinated solvents), hidrokarbon seperti DDT, senyawa organik yang mudah
menguap, dan bahan peledak seperti trinitrotoluena. Zat pencemar anorganik seperti
Fe, Mo, Mn, Zn, Ni, Cu, dan Co sangat penting untuk tanaman dan hewan tetapi
menjadi merugikan dalam jumlah besar. Namun, logam berat
(HMs) dan metaloid seperti merkuri (Hg), timbal (Pb), kromium
(Cr), dan kadmium (Cd), dan nonmetalloid seperti arsen (As) dan radionuklida seperti
kobalt (Co) dan uranium (U) sangat beracun pada konsentrasi sedikit ( Clemens dan
Ma 2016 ).

GAMBAR (DALAM FILE PDF MASUKKAN PPT)

Tanaman memiliki potensi untuk mengakumulasi, menghilangkan, dan menstabilisasi

HMs beracun dalam sel/jaringan. Cara ini dikenal dengan nama fitoremediasi.
Fitoremediasi menggunakan beberapa mekanisme dimana tanaman
dapat menumpuk, melumpuhkan, menghapus, dan / atau menurunkan HMs.
Mekanisme tersebut antara lain :
1. phytoextraction,
2. rhizofiltration,
3. phytodegradation
4. rhizodegradation,
5. phytovolatilization,
6. Phytostabilization (Khalid et al. 2017).

Banyak spesies tanaman yang berbeda telah diidentifikasi sebagai fitoremediator

potensial dengan sifat utama yang harus ada pada tanaman untuk fitoremediasi efektif
adalah pertumbuhan yang cepat, biomassa yang besar, mudah dikelola, potensi
akumulasi tinggi untuk HMs, toleransi terhadap kondisi lingkungan dan kontaminan
beracun, translokasi HMS yang efisien dari akar ke bagian udara, sistem perakaran
luas, resistens terhadap patogen, dan tidak disukai herbivora ( Gerhardt et al., 2017 ).
Beberapa metallophytes (tanaman yang dapat mentolerir HMs), disebut sebagai
hyperaccumulators, memiliki mekanisme khusus yang memungkinkan mereka
untuk mengakumulasi logam beracun dalam jumlah besar ( Pollard et al, 2014.;
Gerhardt et al., 2017 ). Semua sifat ini mungkin tidak ada secara kumulatif pada
tanaman dan rekayasa genetika bisa menjadi teknologi yang hebat untuk mentransfer
sifat yang diinginkan dengan transgenik. Anggota Brassicaceae telah terbukti sebagai
akumulator baik HMS dan metaloid, yang berarti mereka bisa berfungsi
sebagai reservoir gen untuk transgenik efektif HM dan akumulator metalloid (Grispen
et al, 2011.; Lv et al, 2013.; Chen et al, 2016.; Fasani et al., 2017 ). Artikel ini
berkaitan dengan potensi besar anggota Brassicaceae dalam mengembangkan
transgenik untuk toleransi efisien dan akumulasi terhadap berbagai logam beracun dan
metaloid. Beberapa studi kasus baru-baru ini menunjukkan potensi anggota
Brassicaceae dalam pengembangan transgenik juga telah dibahas secara eksplisit.

2. KONSEP BARU FITOREMEDIASI MENGGUNAKAN TRANSGENIK

TEKNOLOGI TRANSGENIK UNTUK FITOREMEDIASI

A. Sejarah

Laporan/informasi tanaman transgenik pertama muncul pada tahun 1984 ( HORSCH

et al., 1984 ). Negara pertama yang meluncurkan transgenik secara komersial dengan
memperkenalkan tanaman tembakau tahan virus adalah Cina pada tahun 1992.
Tanaman transgenik diproduksi untuk mengurangi kerusakan serangga dan hama serta
meningkatkan hasil panen di bidang pertanian (Paul et al., 2017). Namun akhirnya
ide transgenik berkembang untuk pengembangan tanaman fitoremediasi.

B. Alat Editing Genom

(BAGAN DALAM PDF MASUKKAN PPT)

Penggunaan alat biologis sintetik, yang disebut “alat pengeditan genom,” diperlukan
untuk melaksanakan tugas mengintegrasikan sifat-sifat ke dalam genom tanaman.
Alat-alat ini memiliki potensi untuk mengubah kerangka genom hewan atau
tumbuhan, dengan prediksi dan akurasi yang tinggi. Alat-alat ini secara efektif
digunakan untuk penemuan sifat generasi tanaman dengan hasil panen yang tinggi
dan ketahanan terhadap tekanan biotik dan abiotik termasuk HM.

Beberapa alat editing genom yang digunakan untuk mengubah genom tanaman adalah
rekombinasi homolog (HR), zinc-finger nucleases (ZFNs), transcription activator-like
effector nucleases (TALENs), pentatricopeptide repeat proteins (PPRs), the clustered
regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/ Cas9 system, RNA
interference (RNAi), multiplex genome editing by natural transformation (MuGENT),
cisgenesis, and intragenesis. Metode HR didasarkan pada inisiasi double-stranded
breaks (DSBs) dalam kromosom dan DSBs ini menyebabkan rekombinasi meiotik
selama pembelahan sel. ZFN adalah kelas protein pengikat DNA yang dirancang
khusus dan dapat ditargetkan untuk memotong sekuens DNA di situs tertentu dengan
memfasilitasi pengubahan gen yang ditargetkan melalui pembuatan DSB dalam DNA
untuk menggantikan gen dengan HR. TALEN menggunakan exonucleases
nonspesifik yang menyatu dengan domain pengikat DNA dan dapat dengan mudah
dimodifikasi untuk membuat perubahan pada bagian yang diinginkan dari urutan
DNA. PPR ditemukan dalam genom organel dan merupakan protein mediator yang
mengatur regulasi posttranskripsi. Sistem CRISPR / Cas9 adalah teknologi
pengeditan gen yang lebih baru dan merupakan rangkaian sekuens DNA yang
sebagian besar terdapat pada bakteri. Berisi potongan sisa DNA dari virus yang telah
menyerang bakteri dan digunakan oleh bakteri untuk mengenali dan menghancurkan
DNA virus yang sama jika ada lagi. RNAi adalah mekanisme pengekang gen
posttranskripsi yang mengatur ekspresi gen dengan berbagai cara. RNAi terdiri dari
siRNAs (RNA kecil yang mengganggu), miRNAs (microRNAs), dan / atau piRNAs
(PIWIinteracting RNAs). MuGENT membantu integrasi mutasi dengan efisiensi
tinggi dalam genom. Cisgenesis / intragenesis mengacu pada transfer gen antar
organisme dari spesies yang sama, tanpa ada yang menyertainya. Dalam cisgenesis,
gen tetap tidak berubah, sedangkan dalam intragenesis, bagian dari gen (promotor
atau regulator) ditransfer (Basu et al., 2018)

FAMILI BRASSICACEAE SEBAGAI RESERVOIR TRANSGENIK

Famili Brassicaceae terdiri dari sejumlah besar spesies hiperakumulasi logam
beracun. Sekitar 25% anggota famili ini terdiri dari sekitar 90 spesies adalah
hiperakumulator HM yang telah ditemukan di seluruh dunia dan terbukti menjadi
kandidat potensial untuk fitoremediasi yang efektif. Spesies hiperakumulator tersebut
seperti
Brassica, Arabidopsis, alyssum, dan Noccaea telah dipelajari secara substansial untuk
mengakumulasi, menghilangkan, menurunkan, mengubah, dan/ atau
detoksifikasi HMs. Juga, banyak spesies lain telah diteliti untuk hiperakumulasi
berbagai HMs, misalnya, Thlaspi caerulescens untuk Pb, Cd, Ni, dan Zn; Thlaspi
rotundifolia untuk Ni, Pb, dan Zn; dan Halleri arabidopsis untuk Zn dan Cd.
Brassica termasuk tanaman terbaik yang mengakumulasi Ni (Brooks et al., 1998).

BEBERAPA STUDI KASUS PENGGUNAAN TANAMAN TRASNGENIK

BRASSICACEAE

Beberapa studi kasus menarik tentang tanaman Brassicaceae yang telah direkayasa
untuk fitoremediasi lebih baik dan efektif menggunakan teknologi transgenik :

Tabel 1 Contoh yang Dikembangkan Menggunakan Sumber dan Target Transgenik

Dari Tanaman Famili Brassicaceae serta Berbagai Organisme lain. Transgenik
memperlihatkan Toleransi dan Akumulasi Logam dan / atau metaloid yang lebih baik
dari varietas jenis liar atau Wild-Type (wt)

sumber Tanaman Target Tanaman transgen Efek positif terhadap Referensi

Digunakan Sasaran Tanaman Dengan
konsentarsi HM di
Transgenik dan wt
Arabidopsis Brassica juncea ATP Peningkatan signifikan Wangeline et
thaliana sulfurylase penyerapan konsentarsi Cd, al. (2004)
APS1 Cr, Cu, Mo, V, dan W di
transgenik daripada wt.
Noccaea Arabidopsis Acetyltrans Memperburuk toleransi Ni Freeman et
goesingense thaliana ferase SAT di transgenik daripada wt al.
(2004)
Arabidopsis Arabidopsis HMA4 Toleransi lebih baik untuk Verret et al.
thaliana thaliana Cd, Zn, Co; akumulasi Cd, (2004)
Zn (443 μg Zn g-1 and 167
μg Cd g-1 in transgenic dan
216 μg Zn g-1 and 118 μg
Cd g-1 in wt)
Noccaea Arabidopsis NA Meningkatkan toleransi Pianelli et al.
caerulescens thaliana synthase dan akumulasi Ni 2.5 mg g- (2005)
1
NAS1 in transgenic and 1.5 mg
g-1 in wt

Arabidopsis Brassica juncea ATP Boosted accumulation of Banuelos et

thaliana sulfurylase Se in leaves, about 4.3-fold al. (2005)
APS more than wt
Arabidopsis Arabidopsis Mitochondr Meningkatkan toleraansi Kim et al.
thaliana thaliana ial terhadap Cd and Pb (2006)
transporter
ATM3
Arabidopsis Brassica juncea ATP Meningkatkan toleransi LeDuc et al.
thaliana + sulfurylase dan akumulasi Se lebih (2006)
Astragalus APS + baik daripada wt
bisulcatus SMT
Arabidopsis Arabidopsis Acyl-CoA- Meningkatkan akumulasi Xiao et al.
thaliana thaliana binding dan toleransi terhadap Pb (2008)
protein
ACBP1

Kasus I: Asam amino nikotianamin (NA) nonproteinogen merupakan komponen

kunci asimilasi logam tanaman dan homeostasis karena merupakan chelator logam Fe
dan HMs lainnya; ia memainkan peran kunci dalam penyerapan, transportasi floem,
dan distribusi sitoplasma. Gen NA synthase (NAS1) dari A. thaliana (AtNAS1) secara
ektopik diekspresikan pada tanaman N. tabacum menyebabkan (1) peningkatan kadar
Fe secara signifikan pada daun tanaman dewasa, (2) akumulasi Zn dan Mo, dan (3) )
peningkatan toleransi terhadap 1 mM Ni. Secara bersama-sama, penelitian
memperkirakan bahwa NA memainkan peran kunci dalam serapan Fe, transportasi
floem, dan distribusi sitoplasma, dan tanaman tembakau transgenik menunjukkan
peningkatan toleransi dan akumulasi Ni (Douchkov et al., 2005).

Kasus II: Transgenik India (B. juncea) ditanam dan dipelajari di darat karena
potensinya untuk membuat hiperakumulasi Se dari situs Se-dan yang terkontaminasi
boron. Tanaman transgenik mengeluarkan gen berlebih yang diperoleh dari bakteri E.
coli yang mengkode enzim adenosine triphosphate sulfurylase (APS), γ ECS, dan
glutathione synthetase (GS). Ketiga transgenik, yaitu, APS, ECS, dan GS
mengakumulasikan 4.3-, 2.8-, dan 2.3 kali lipat lebih banyak Se daripada tipe wt di
daunnya.

Kasus III: PCs adalah peptida pengikat logam yang secara aktif terlibat dalam
detoksifikasi HM pada tanaman. Dalam percobaan tersebut, para ilmuwan
mengekspresi berlebihan gen Arabidopsis phytochelatin synthase (AtPCS1) di
tanaman non akumulator N. tabacum dan menunjukkan toleransi HM pada tanaman
transgenik. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada overekspresi gen AtPCS1 di
tanaman yang direkayasa, toleransi Cd+2-nya meningkat dan semakin meningkat
ketika GSH yang berkurang (substrat PCS1) ditambahkan ke media kultur dan
overekspresi AtPCS1 pada seluruh bibit menyebabkan benih. 2 kali lipat akumulasi
Cd+2 di akar dan pucuk. Demikian pula, peningkatan penting dalam akumulasi Cd-1
pada tanaman dewasa dan matang disebabkan oleh produksi PC yang lebih tinggi baik
pada akar maupun pucuk. Sebagai kesimpulan, overekspresi PC heterolog memiliki
potensi untuk meningkatkan toleransi dan akumulasi Cd+2 di pabrik tembakau
transgenik dan menunjukkan bahwa pasokan GSH merupakan faktor pembatas
(Pomponi et al., 2006).

3. KESIMPULAN

Pembersihan polutan lingkungan yang cepat dan efisien diinginkan untuk mendukung
keberlanjutan ekosistem alam. Tanaman menawarkan solusi yang sangat baik untuk
masalah ini. Banyak spesies tanaman yang ditemukan toleran terhadap HMS beracun
dengan tingkat pertumbuhan yang tinggi dan, memiliki potensi akumulasi baik.
Tanaman seperti ini adalah spesies yang ideal untuk memulihkan tanah dan habitat
terdegradasi. Dalam beberapa tahun terakhir, kemajuan signifikan telah dilakukan
untuk meningkatkan efisiensi dan efektivitas fitoremediasi. Menggunakan rekayasa
genetika dalam beberapa tahun terakhir, lompatan besar telah dicapai dalam bidang
fitoremediasi menggunakan tanaman transgenik.

Terakhir, penggunaan teknologi transgenik dalam membuat tanaman rekayasa

genetika adalah strategi yang sangat menjanjikan dan kebutuhan eksplorasi masa
depan dan investigasi sangat berhati-hati dalam penggunaan gen-gen tertentu. Hal ni
harus mematuhi semua pedoman peraturan yang diperlukan sehingga tidak
membahayakan ekosistem asli dan untuk mendapatkan penerimaan di kalangan
masyarakat