https://en.m.wikipedia.

org/wiki/Hemagglutination_assay

INGGRIS ➞ INDONESIA OPEN ORIGINAL

Uji
hemaglutinasi

Uji hemaglutinasi sampel influenza yang

berbeda diencerkan dari kiri ke kanan.

Uji hemaglutinasi atau uji

haagaglutinasi ( HA ) dan uji

penghambatan hemaglutinasi ( HI
atau HAI ) dikembangkan pada
tahun 1941-1942 oleh ahli virus
Amerika George Hirst sebagai
metode untuk mengukur
konsentrasi relatif virus , bakteri ,
atau antibodi. [1]

HA dan HI menerapkan proses

hemaglutinasi , di mana reseptor
asam sialat pada permukaan sel
darah merah ( sel darah merah)
berikatan dengan hemagglutinin
glikoprotein yang ditemukan pada
permukaan virus influenza (dan
permukaan virus influenza (dan
beberapa virus lainnya) dan
membuat jaringan, atau struktur
kisi , dari partikel RBC dan virus
yang saling berhubungan. [2] Kisi
yang diaglutinasi mempertahankan
RBC dalam distribusi yang
ditangguhkan, biasanya dipandang
sebagai solusi kemerahan yang
menyebar. Pembentukan kisi
tergantung pada konsentrasi virus
dan RBC, dan ketika konsentrasi
virus relatif terlalu rendah, RBC
tidak dibatasi oleh kisi dan
mengendap di dasar sumur.
Hemaglutinasi diamati dengan
adanya stafilokokus, vibrios, dan

spesies bakteri lainnya, mirip

dengan mekanisme yang
digunakan virus untuk
menyebabkan aglutinasi eritrosit.
[3] [4] RBC yang digunakan dalam uji
HA dan HI biasanya berasal dari
ayam, kalkun, kuda, marmut, atau
manusia tergantung pada
selektivitas virus atau bakteri yang
ditargetkan dan reseptor
permukaan yang terkait pada RBC.

Prosedur
Prosedur umum untuk HA adalah
Prosedur umum untuk HA adalah
sebagai berikut, pengenceran serial
virus disiapkan melintasi baris
dalam pelat mikrotiter 96-lubang
berbentuk U atau V-bottom. [5]
Sampel paling terkonsentrasi di
sumur pertama sering diencerkan
menjadi 1 / 5x dari stok, dan sumur
berikutnya biasanya pengenceran
dua kali lipat (1/10, 1/20, 1/40,
dll.). Sumur terakhir berfungsi
sebagai kontrol negatif tanpa virus.
Setiap baris lempeng biasanya
memiliki virus yang berbeda dan
pola pengenceran yang sama.
Setelah pengenceran serial,
konsentrasi sel darah merah

standar ditambahkan ke masing-

masing sumur dan dicampur
dengan lembut. Piring diinkubasi
selama 30 menit pada suhu kamar.
Setelah masa inkubasi, uji dapat
dianalisis untuk membedakan
antara sumur yang diaglutinasi dan
yang tidak diaglutinasi. Gambar-
gambar melintasi satu baris
biasanya akan berkembang dari
sumur yang diaglutinasi dengan
konsentrasi virus yang tinggi dan
penampilan kemerahan yang
menyebar ke serangkaian sumur
dengan konsentrasi virus yang

rendah yang mengandung pelet

merah gelap, atau tombol, di
tengah sumur. Sumur konsentrasi
rendah tampak hampir identik
dengan sumur kontrol negatif
tanpa virus. Penampilan tombol
terjadi karena RBC tidak ditahan
dalam struktur kisi yang
diaglutinasi dan mengendap di titik
rendah sumur U atau V-bottom.
Transisi dari sumur teraglutinasi ke
non-teraglutinasi terjadi secara
khas, dalam 1 sampai 2 sumur.

Konsentrasi relatif atau titer

Konsentrasi relatif, atau titer,
sampel virus didasarkan pada
sumur dengan penampilan
aglutinasi terakhir, segera sebelum
pelet diamati. [6] Sehubungan
dengan konsentrasi stok virus
awal, konsentrasi virus dalam
sumur ini akan menjadi beberapa
pengenceran stok, misalnya, 1/40
kali lipat. Nilai titer dari sampel
tersebut adalah kebalikan dari
pengenceran, yaitu, 40. Dalam
beberapa kasus, virus pada
awalnya sangat encer sehingga
sumur yang diaglutinasi tidak
pernah diamati. Dalam hal ini, titer
sampel ini biasanya ditetapkan

sebagai 5, yang menunjukkan

konsentrasi setinggi mungkin,
tetapi akurasi nilai itu jelas rendah.
Atau, jika konsentrasi relatif virus
sangat tinggi dan sumur tidak
pernah beralih ke tampilan tombol.
Nilai titer kemudian umumnya
ditetapkan sebagai pengenceran
tertinggi, seperti 5120.

HI terkait erat dengan uji HA, tetapi

termasuk antibodi anti-virus
sebagai "inhibitor" untuk
mengganggu interaksi virus-RBC.
Tujuannya adalah untuk
Tujuannya adalah untuk
mengkarakterisasi konsentrasi
antibodi dalam antiserum atau
sampel lain yang mengandung
antibodi. [7] Uji HI umumnya
dilakukan dengan membuat
serangkaian pengenceran
antiserum melintasi barisan pelat
mikrotiter 96-sumur. Setiap baris
biasanya merupakan sampel yang
berbeda. Sejumlah standar virus
atau bakteri ditambahkan ke setiap
sumur, dan campuran dibiarkan
diinkubasi pada suhu kamar
selama 30 menit. Sumur terakhir di
setiap baris akan menjadi kontrol
negatif tanpa tambahan virus.

Selama inkubasi, antibodi

berikatan dengan partikel virus,
dan jika konsentrasi dan afinitas
pengikatan antibodi cukup tinggi,
partikel virus secara efektif
terhambat sehingga menyebabkan
hemaglutinasi. [8] Selanjutnya,
jumlah sel darah merah standar
ditambahkan ke masing-masing
sumur dan diizinkan untuk
diinkubasi pada suhu kamar
selama 30 menit tambahan.
Gambar pelat HI yang dihasilkan
biasanya berkembang dari sumur
“kancing” non-aglutinasi dengan

konsentrasi antibodi tinggi ke

aglutinasi, sumur difusi merah
dengan konsentrasi antibodi
rendah. Nilai titer HI adalah
kebalikan dari pengenceran serum
terakhir yang sepenuhnya
menghambat hemaglutinasi. [9]

Uraian sebelumnya tentang proses

HA dan HI digeneralisasi, dan
detail spesifik dapat bervariasi
tergantung pada operator dan
laboratorium. Misalnya,
pengenceran serial di baris
dijelaskan tetapi beberapa
dijelaskan, tetapi beberapa
laboratorium menggunakan
orientasi alternatif dan melakukan
pengenceran di kolom. Demikian
pula, pengenceran awal, faktor
pengenceran serial, waktu
inkubasi, dan pilihan pelat U atau
V-bottom dapat bergantung pada
laboratorium tertentu.

Keuntungan
HA dan HI memiliki keunggulan
karena pengujiannya sederhana,
menggunakan instrumen dan
persediaan yang relatif murah dan
tersedia dan memberikan hasil
tersedia, dan memberikan hasil
dalam beberapa jam. Tes juga
mapan di banyak laboratorium di
seluruh dunia, memungkinkan
beberapa ukuran kredibilitas,
perbandingan, dan standarisasi. [10]
[11]

Batasan
Hasil yang optimal dan dapat
diandalkan memerlukan
pengendalian beberapa variabel,
seperti waktu inkubasi, konsentrasi
sel darah merah, dan jenis sel
darah merah. [12] Faktor non-
spesifik dalam sampel dapat
spesifik dalam sampel dapat
menyebabkan gangguan dan nilai
titer yang salah. Sebagai contoh,
molekul dalam sampel selain
antibodi spesifik virus dapat
menghambat aglutinasi antara
virus dan RBC, serta berpotensi
memblokir antibodi agar tidak
berikatan dengan virus. Enzim
penghancur reseptor (RDE)
umumnya digunakan untuk
merawat sampel sebelum analisis
untuk mencegah penghambatan
non-spesifik. [13] Analisis hasil HA
atau HI bergantung pada individu
yang memenuhi syarat untuk
membaca piring dan menentukan

nilai titer. Metode interpretasi

manual memperkenalkan lebih
banyak peluang untuk perbedaan
dalam pengujian karena hasilnya
bisa subjektif dan kesepakatan
antara pembaca manusia tidak
konsisten. [14] Juga, tidak ada
rekaman digital dari pelat atau
penentuan titer sehingga
interpretasi awal membosankan
dan biasanya dilakukan dalam
ulangan. Rentang variabel
potensial dan perbedaan antara
pembaca ahli dapat membuat
membandingkan hasil antar-
laboratorium menjadi sulit. [15]

Lihat juga
Hemaglutinasi
Kuantifikasi virus

Referensi
1. Hirst, GK (1942). "Penentuan
kuantitatif virus Influenza dan
antibodi melalui aglutinasi sel darah
merah" . J Exp Med . 75 (1): 49-64.
doi : 10.1084 / jem.75.1.49 . PMC
2135212 PMID 19871167
 2135212 . PMID 19871167 .

2. "Karakterisasi Antigenik - Flu

Activity & Surveillance- Seasonal
Influenza (Flu)" . CDC . 2019-10-15.
3. Neter, E; Gorzynski, EA; Zalewski, J;
Rachman, R; Gino, RM (1954). "Studi
tentang Hemaglutinasi Bakteri" .
Jurnal Kesehatan Masyarakat
Amerika . 44 (1): 49–54. doi :
10.2105 / ajph.44.1.49 . PMC
1620628 . PMID 13114484 .
4. Neter, E (1956). "Hemaglutinasi
Bakteri dan Hemolisis" .
Laboratorium Penelitian Statler dan
Departemen Pediatri, Rumah Sakit
Anak, Laboratorium Bakteriologi,
Institut Memorial Taman Roswell,
dan Departemen Pediatri dan
Bakteriologi, Universitas Buffalo,
Fakultas Kedokteran, Buffalo, New
York . 20 (3): 166–182. PMC
180858 . PMID 13363771 .
5. SIAPA. "Deteksi serologis infeksi
virus avian Influenza A (H7N9) oleh
kalkun uji hemaglutinasi-inhibisi-
Prosedur Laboratorium" (PDF) .
WHO.
. SIAPA. "Deteksi serologis infeksi
virus avian Influenza A (H7N9) oleh
kalkun uji hemaglutinasi-inhibisi-
Prosedur Laboratorium" (PDF) .
WHO.
7. Nuh, DL; Hill, H; Hines, D; Sementara
EL; Wolff, MC (2009). "Kualifikasi Uji
Penghambatan Hemaglutinasi
untuk Mendukung Lisensi Vaksin
Pandemi Influenza" . Imunologi
Vaksin Klinik . 16 (4): 558–566. doi :
10.1128 / cvi.00368-08 . PMC
2668270 . PMID 19225073 .
. Webster, R; Cox, N; Stohr, K (2002).
Manual WHO tentang Diagnosis dan
Surveilans Hewan Influenza (PDF) .
WHO.
 9. Virocyt. "Tinjauan umum teknik
kuantifikasi virus" (PDF) . Virocyt.
Diarsipkan dari yang asli (PDF)
pada 2016-03-03 . Diperoleh
2015-06-08 .
10. Virocyt. "Tinjauan umum teknik
kuantifikasi virus" (PDF) . Virocyt.
Diarsipkan dari yang asli (PDF)
pada 2016-03-03 . Diperoleh
2015-06-08 .
11. Nuh, DL; Hill, H; Hines, D; Sementara
EL; Wolff, MC (2009). "Kualifikasi Uji
Penghambatan Hemaglutinasi
untuk Mendukung Lisensi Vaksin
Pandemi Influenza" . Imunologi
Vaksin Klinik . 16 (4): 558–566. doi :
10.1128 / cvi.00368-08 . PMC
2668270 . PMID 19225073 .
12. SIAPA. "Deteksi serologis infeksi
virus avian Influenza A (H7N9) oleh
kalkun uji hemaglutinasi-inhibisi-
Prosedur Laboratorium" (PDF) .
WHO.
13. SIAPA. "Deteksi serologis infeksi
virus avian Influenza A (H7N9) oleh
kalkun uji hemaglutinasi-inhibisi-
Prosedur Laboratorium" (PDF) .
WHO.
14. Wood, J; Laurie, K; Engelhardt, O
(September 2013). "Pemeriksaan
Komparatif Protokol Uji
Haemaglutinasi-Inhibisi Influenza -
Pengembangan Protokol HI
Konsensus" (Pertemuan
Internasional ke-4). CONSISE.
 15. Wood, JM; Mayor, D; Heath, A;
Newman, RW; Hoschler, K;
Stephenson, saya; Clark, T; Katz, J;
Zambon, MC (2012).
"Reproduksibilitas tes serologi untuk
pandemi influenza H1N1: Studi
kolaboratif untuk mengevaluasi
kandidat Standar Internasional
WHO". Vaksin . 30 (2): 210-217. doi :
10.1016 / j.vaccine.2011.11.019 .
PMID 22100887 .

Diperoleh dari "

https://en wikipedia org/w/index php?
https://en.wikipedia.org/w/index.php?

title=Hemagglutination_assay&oldid=9504
66676 "

Last edited 17 days ago by Widefox

Konten tersedia di bawah CC BY-SA 3.0

kecuali dinyatakan sebaliknya.