Anda di halaman 1dari 3

Pewarnaan Feulgen dalam tubulus Malpighian

ISSN- 0102-9010 31

Pewarnaan FEULGEN DI TABUL MALPIGHIAN DARI Lebah MELIPONID:


KONTRIBUSI METODOLOGI *

Andr Roberto Mampumbu, Benedicto de Campos Vidal dan Maria Luiza S. Mello

Departemen Biologi Sel, Institut Biologi, Universitas Negeri Campinas (UNICAMP), Campinas, SP, Brasil.

ABSTRAK
Tubulus Malpighian yang terpasang utuh dari larva dari dua spesies lebah meliponid yang difiksasi dalam asam asetat-etanol menunjukkan
pewarnaan sitoplasma positif dengan pereaksi Schiff ketika diserahkan ke reaksi Feulgen di mana hidrolisis asam dilakukan dalam 4 M HCl pada
suhu kamar. Kemampuan berbagai perawatan diterapkan sebelum hidrolisis asam Feulgen untuk menghapus pewarnaan sitoplasma ini.
Kelompok-kelompok aldehida fosfolipid yang ada dalam sitoplasma tubulus Malpighian diblokir atau dihilangkan dengan perlakuan berurutan
dengan 5% natrium borohidrida dan asetonkloroform (1: 1, v / v) selama 15 menit masing-masing sebelum hidrolisis HCl.

Kata kunci: Aldehida, fosfolipid sitoplasma, pewarnaan Feulgen, tubulus Malpighian, lebah meliponid, reaksi plasmal

PENGANTAR langkah untuk memblokir atau menghancurkan aldehid sitoplasma yang

Seperti pada sebagian besar serangga dengan metamorfosis bertanggung jawab atas reaksi kuat, sambil mempertahankan pewarnaan

lengkap, organ larva pada lebah tumbuh oleh endopoliploidi bukan Feulgen positif dari DNA nuklir.

oleh pembelahan sel [4]. Derajat ploidi dalam sel larva tubulus
Malpighian dari beberapa spesies lebah telah diperkirakan dalam BAHAN DAN METODE
sediaan sitologi yang diserahkan pada reaksi Feulgen di mana Kelima instar predefekasi dari Melipona quadrifasciata anthidioides Lep.

langkah hidrolisis asam dilakukan dalam 1 M HCl pada 60 Hai C [3]. dan Melipona rufiventris Lep. (Hymenoptera, Apoidea) digunakan dan dipasok oleh
Universitas Federal Vi osa digunakan. Sediaan tubulus Malpigh yang dipasang
Saat ini, langkah hidrolitik dari reaksi Feulgen sering dilakukan
sepenuhnya dari larva dalam larutan Ringer difiksasi dalam asam asetat
dalam 4 M HCl pada suhu kamar, terutama karena fasilitas etanol-glasial absolut (3: 1, v / v) selama 1 menit, diikuti dengan membilas etanol
operasional dan hasil yang lebih dapat diandalkan diperoleh [5]. 70% selama 1-5 menit. Tubulus menjadi sasaran reaksi Feulgen, dengan
Dalam kondisi ini, ketika menganalisis respon Feulgen dalam sel hidrolisis dalam 4 M HCl pada 25 Hai C selama 90 menit diikuti dengan pengobatan

tubulus Malpigh dari lebah genus Melipona difiksasi dalam asam dengan pereaksi Schiff selama 40 menit. Sediaan kemudian dibilas tiga kali
dalam air belerang dan sekali dalam air suling sebelum dikeringkan dengan
asetat etanol-glasial absolut (3: 1, v / v) selama 1 menit, kami juga
udara. Organ-organ dibersihkan dalam xylene dan dipasang di balsam Kanada
telah mengamati pewarnaan yang dalam dan positif dalam
alami (Vetec, Rio de Janeiro).
sitoplasma sel-sel ini. Pewarnaan tambahan ini, yang merupakan
tipikal dari aldehida sitoplasma fosfolipid (plasmalogens) yang
bereaksi dengan pereaksi Schiff [7], dapat menghambat kuantifikasi Untuk menentukan pewarnaan sitoplasma sebagai reaksi plasmal
[ 2,7], beberapa sediaan tetap hanya diperlakukan dengan pereaksi Schiff tanpa
DNA nuklir yang andal dan diskriminasi fenotipe nuklir dengan
langkah hidrolisis asam. Penghapusan reaksi sitoplasma diperiksa dengan
menggunakan mikrospektrofotometri atau analisis gambar video.
memvariasikan durasi pembilasan air belerang dari 3 hingga 10 menit masing-masing
dan dengan memperlakukan sediaan dengan (a) 5% larutan natrium borohidrida [2],
pH 9,8, selama 1 hingga 15 menit, (B) aseton-kloroform (1: 1, v / v) selama 15 menit,
atau larutan natrium borohidrida 5% diikuti oleh asetonkloroform (1: 1, v / v)
masing-masing selama 15 menit, sebelum hidrolisis asam.

Dalam penelitian ini, kami menguji kemampuan berbagai perawatan


Persiapan diamati dan difoto dalam mikroskop Zeiss Axiophot II
yang digunakan sebelum hidrolisis asam Feulgen (Oberkochen, Jerman).

Korespondensi dengan: Dr. Maria Luiza S. Mello


Departamento de Biologia Celular, Instituto de Biologia, Universidade Estadual de
HASIL
Campinas (UNICAMP), CEP 13084-971, Campinas, SP, Brasil. Tel: (55) (19) 3788-6122, Tubulus yang diobati dengan pereaksi Schiff tanpa hidrolisis asam
Faks: (55) (19) 3788-6111, Email: mlsmello@unicamp.br
sebelumnya menunjukkan pewarnaan sitoplasma yang khas dari reaksi
* Naskah ini adalah bagian dari tesis PhD oleh ARM plasmal [2,7].

Braz. J. morphol. Sci. ( 2004) 21 (1), 31-33


32 Mampumbu et al.

SEBUAH

Gambar 1. Tubulus Malpighian bernoda Feulgen dari M. quadrifasciata. SEBUAH - Bilas air belerang masing-masing berlangsung selama 10 menit. B - Reaksi didahului dengan perlakuan
natrium borohidrida. C - Reaksi didahului dengan pengobatan dengan natrium borohidrida dan aseton-kloroform. Bar = 30 μ m.

Braz. J. morphol. Sci. ( 2004) 21 (1), 31-33


Pewarnaan Feulgen dalam tubulus Malpighian
33

Perpanjangan bilasan air belerang masing-masing hingga 10 konten dari lebah tubulus Malpighian, tidak ada pewarnaan
menit tidak mempengaruhi reaksi sitoplasma positif di tubulus sitoplasma diamati, mungkin karena langkah hidrolisis asam
Malpighian. M. quadrifasciata diajukan ke reaksi Feulgen (Gbr. 1A). Feulgen telah dilakukan pada 60 Hai C [3]. Dalam organ lebah yang
Dari berbagai perlakuan yang digunakan sebelum hidrolisis asam, tidak mengandung butiran fosfolipid seperti yang ada di tubulus
bahwa dengan larutan borohidrida menurunkan intensitas reaksi Malpighian, tidak ada pewarnaan sitoplasma setelah reaksi
plasmal setelah 15 menit paparan zat pereduksi ini (Gambar 1B), Feulgen, bahkan ketika langkah hidrolisis asam dilakukan pada
sedangkan perlakuan aseton-kloroform tidak mempengaruhi reaksi suhu kamar [1].
sitoplasma. Sebaliknya, kombinasi kedua perlakuan (natrium
borohidrida diikuti oleh aseton-kloroform untuk masing-masing 15 Sebagai kesimpulan, hasil kami menunjukkan bahwa potensi
menit) sambil menggunakan bilasan air belerang yang interferensi oleh aldehida sitoplasma dalam reaksi Feulgen dengan
berlangsung masing-masing 3 menit setelah perlakuan pereaksi hidrolisis asam pada suhu kamar yang digunakan dalam tubulus
Schiff benar-benar menghapuskan reaksi plasmal (Gbr.1C). Hasil Malpighian utuh dari lebah meliponid dapat dihilangkan dengan
serupa diperoleh untuk perlakuan berurutan dengan 5% natrium borohidrida dan
asetonkloroform (1: 1, v / v) selama 15 menit masing-masing
sebelum hidrolisis HCl.
M. rufiventris.

DISKUSI UCAPAN TERIMA KASIH


Penulis berterima kasih kepada Drs. L cio AO Campos dan S lvia G.
Hasil kami menunjukkan bahwa kelompok aldehida
Pompolo (Universitas Federal Vi osa) karena memasok lebah, dan Dr. Stephen
bertanggung jawab atas pewarnaan sitoplasma yang terlihat pada Hyslop karena merevisi bahasa Inggris. Investigasi ini didukung oleh hibah dari
sel tubulus Malpighian dari M. quadrifasciata dan M. rufiventris setelah CNPq dan FAPESP. Para penulis didukung oleh beasiswa penelitian dari
reaksi Feulgen. Larutan alkali dari natrium borohidrida mengurangi CNPq.

aldehida menjadi alkohol primer, [4RCHO + NaBN 4 + 4 j 2 HAI →


REFERENSI
4RCH 2 OH + B (OH) 3 + Na + + OH-] dengan demikian menghalangi 1. Falco JRP (1995) Semua yang ada di sini adalah sel-sel s-fecunda oe com
o envelhecimento em gl ndulas de espermateca de rainhas de Apis
pewarnaan Schiff positif yang disebabkan oleh aldehida yang ada
mellifera (Hymenoptera, Apoidea). Tesis master, UNICAMP, Campinas.
dalam jaringan [2]. Penghapusan lengkap aldehida hadir dalam
sitoplasma tubulus Malpighian membutuhkan perawatan natrium 2. Kiernan JA (1990) Metode Histologis & Histokimia:
borohidrida diikuti oleh aseton-kloroform (1: 1, v / v). Pengamatan ini Teori & Praktek. 2nd ed. Pergamon Press: Oxford.
3. Mello MLS (1969) Contribui o esto da poliploidia
menunjukkan bahwa aldehida yang terlibat disediakan oleh fosfolipid
entah itu apa lagi rg os de insetos. Tesis PhD, USP - FMRP, Ribeir o Preto.
[2], sebuah kesimpulan dalam perjanjian dengan demonstrasi
sitokimia dari komponen-komponen ini di tubulus Malpighian. M. 4. Mello MLS (1970) Poliploidi somatik pada serangga. Ci nc.
Kultus. 22, 348-350.
quadrifasciata [ 6].
5. Mello MLS (1997) Sitokimia DNA, RNA, dan protein nuklir. Braz. J. Genet. 20, 257-264.

Penggunaan preparat yang dipasang secara keseluruhan 6. Mello MLS, Bozzo L (1969) Histokimia, refraktometri, dan struktur halus
gumpalan ekskretoris dalam larva tabung Malpighian dari Melipona
dan hidrolisis asam yang dilakukan pada suhu kamar
quadrifasciata ( Hym., Apoidea). Protoplasma 68, 241-251.
kemungkinan bertanggung jawab untuk menjaga aldehida
sitoplasma yang bereaksi dengan pereaksi Schiff. Reaksi serupa 7. Pierse AGE (1985) Teoritis dan Terapan Histokimia.
telah dilaporkan untuk bagian beku dari bahan lain, tetapi jarang Vol. 2, 4th ed. Churchill Livingstone: Edinburgh.

di bagian parafin [7]. Dalam penelitian sebelumnya tentang DNA


Diterima: 14 Juli 2003 Diterima:
18 Agustus 2003

Braz. J. morphol. Sci. ( 2004) 21 (1), 31-33