CRITICAL JOURNAL REVIEW

Quantitative analysis of urea in human urine and serum by H nuclear magnetic

resonance†
(Analisis kuantitatif urea dalam urin manusia dan serum oleh 1 H
resonansi magnetik nuklir †)

Disusun untuk Memenuhi Tugas dalam Matakuliah Kimia Analitik Lanjut

Dosen Pengampu : Prof. Drs. Manihar Situmorang, M.Sc., Ph.D

Disusun Oleh :
Hiranda Wildayani (8196142007)

MAGISTER PENDIDIKAN KIMIA

PROGRAM STUDI PASCA SARJANA
UNIVERSITAS NEGERI MEDAN
2019
PENDAHULUAN
Urea adalah salah satu metabolit yang mengandung nitrogen penting dalam sistem
biologis. Pada manusia,sintesis urea adalah rute utama untuk menghilangkan nitrogen limbah,
yang dihasilkanoleh protein dan metabolisme asam amino. Proses ini terjadi di hati melalui
ureasiklus. Urea kemudian dikeluarkan dari darah dan diekskresikan ke dalam urin oleh
ginjal. Keduanya produksi dan regulasi urea berkorelasi erat dengan berbagai proses
metabolisme seperti itusebagai metabolisme protein dan asam amino, siklus urea,
metabolisme arginin dan prolin, hidrolisis urea, serta metabolisme amonia dan glutamin.
Kisaran urea normal adalah 2,6 hingga 6,5 mM dalam darah manusia, 6 dan dapat 50 kali
lipat lebih terkonsentrasi dengan variasi tinggidalam urin manusia (ekskresi harian 342 ± 67
mmol dalam 490 hingga 2690 mL urin). 6–8 Abnormal kadar urea sering merupakan
indikator berbagai penyakit metabolik termasuk penyakit hati, ginjal penyakit, kelainan siklus
urea herediter (misalnya argininosuccinic aciduria 10 ), jantung. Kuantifikasi urea dalam urin
dan darah menggunakan reaksi kimia ditambah kolorimetri dan fluorometrik metode deteksi
untuk menentukan urea dalam darah. Dalam dekade terakhir, berbagai biosensor urea
berbasis polimer milikitelah diterapkan untuk menentukan konsentrasi urea. Namun,
pengukuran ini adalah berdasarkan hidrolisis urea yang dikatalisis oleh urease amobil;
karenanya, aktivitas urease dan masalah kontaminasi amonia masih ada.
Pendekatan spektrometri massa milikitelah digunakan untuk mengukur urea untuk
mencapai presisi dan akurasi yang dapat diterima (99,7 ~ 109,7%). Sebagai contoh, 13 urea
berlabel C dalam serum manusia telah dianalisis dengan cairan kromatografi-tekanan
atmosfer spektrometri kimia ionisasi massa (HPLC-APCI-MS) untuk diagnosis infeksi
helicobacter pylori. 13 C- 15 urea berlabel N digunakan sebagaistandar internal untuk
mengukur urea endogen dengan kromatografi gas ditambah MS. NMR juga dapat digunakan
untuk mengukur konsentrasi urea. Metode NMR dilaporkan untuk kuantifikasi urea pada
1987. 29Namun, pendekatan ini dilakukan dalam DMSO dan membutuhkan internal atau
tambahanreferensi konsentrasi eksternal. Untuk bio-fluida, gangguan air karena sifatnya yang
kuatintensitas dan pertukaran bahan kimia berpotensi membahayakan akurasi. Sebaliknya,
kitamenyajikan metode yang memanfaatkan air pelarut sebagai referensi konsentrasi internal
aslidan menunjukkan bahwa urutan penekanan air WET dengan pulsa selektif yang
dioptimalkan cukup untuk mengatasi gangguan dari air. Metode ini cepat dan akurat
(3%kesalahan atau lebih baik) dan tidak memerlukan persiapan sampel khusus.
METODOLOGI
Kristal urea dibeli dari Mallinckrodt Baker (Paris, KY) dengan kemurnian yang
diuji100,1%, dan digunakan tanpa pemurnian lebih lanjut. Deuterium oksida (99,9% D)
adalahdibeli dari Cambridge Isotop Labs (Andover, MA) pada suhu −80 ° C sampai
digunakan. Persiapan sampel NMRSerangkaian sampel air disiapkan dengan konsentrasi urea
mulai dari 1 mM hingga0,5 M (Tabel Tambahan S1 † ). Dua larutan stok urea disiapkan
dengan melarutkan0,3092 g dan 0,3440 g kristal urea untuk membuat 25,0 ml dan 5,00 ml
larutan air di kamarsuhu, mengarah ke solusi stok dengan konsentrasi urea 0,206 M dan 1,15
M,masing-masing. Dalam setiap sampel, jumlah relatif larutan stok urea ditimbang
danditambahkan ke labu volumetrik.
Densitas larutan urea 1.0007 g ml −1 dan 1.0138 g ml −1 untuk solusi 0,206 M dan 1,15
M urea, masing-masing, digunakan untuk menghitung final, terdilusi konsentrasi urea. 30
Solusi stok 0,206 M urea digunakan untuk menyiapkan sampel dengan konsentrasi urea akhir
dari 1 hingga 100 mM. Solusi stok 1,15 M urea digunakan untukbuat sampel dengan urea 0,2
hingga 0,5 M. Buffer fosfat (PBS, 0,20 M) dengan pH = 7,50 adalah ditambahkan ke setiap
sampel untuk membuat konsentrasi penyangga akhir sama dengan 0,05 M. 31 D 2 O dan air
suling ditambahkan sehingga konsentrasi D 2 O akhir adalah 5% (v / v; ) 500 μl masing-
masing sampel kemudian dipindahkan ke tabung NMR 5mm standar untuk pengukuran.
Untuk percobaan penambahan standar, 1,245 g kristal urea dilarutkan untuk membuat
10,0 mllarutan berair pada suhu kamar menghasilkan solusi stok urea 2,07 M. Air senisampel
tambahan standar disiapkan dengan melonjak jumlah yang berbeda dari stok ureasolusi ke
dalam urin yang ditimbang (Tabel Tambahan S2 † ). Densitas urin 1,01 g ml −132–34dan
kepadatan larutan urea 1,0304 g ml -130 digunakan untuk perhitungan. 1,0 ml 0,25 Buffer M
PBS (konsentrasi akhir 0,05 M) dan 5% (v / v) D 2 O ditambahkan untuk penyesuaian pHdan
penguncian bidang NMR, masing-masing. Sekali lagi, 500 μl dari setiap sampel digunakan
untuk NMR pengukuran. Sampel serum disiapkan dengan menambahkan 25 μl D 2 O dan
475 μl serum manusia yang dicairkan ke dalamTabung NMR .

HASIL
Metode yang mudah dan cepat untuk mengukur urea dalam biofluida ditunjukkan
menggunakan NMR analisis dan sinyal air pelarut sebagai referensi konsentrasi. Konsentrasi
urea dapat ditentukan secara akurat dengan kesalahan kurang dari 3% antara 1 mM dan 50
mM, dan kurang dari 2%di atas 50 mM dalam urin dan serum. Metode ini menjanjikan untuk
berbagai aplikasi dengankeuntungan dari kesederhanaan, akurasi tinggi, dan deteksi cepat
yang tidak merusak. Dengan kemampuan mengukur metabolit lain secara bersamaan, metode
NMR ini juga cenderung untuk menemukan aplikasi dalam profil metabolik dan biologi
sistem.

KESIMPULAN
Mengusulkan metode NMR sederhana untuk penentuan konsentrasi urea yang
menggunakanpelarut sebagai referensi konsentrasi. Metode ini tepat dan akurat dengan
amenunjukkan rentang kerja antara 1 mM hingga 500 mM. Metode ini mudah diterapkan
untuk berbagai cairan bio. Pendekatan ini akan menjanjikan untuk klinis pengukuran, dan
area penelitian seperti profil metabolik dan biologi system.