2.1.

Sampel
Sebelas spesies jamur kering, diperoleh dari perusahaan di Indonesia Spanyol, dianalisis
(Tabel 1). Untuk setiap spesies, setidaknya dua sampel dari kelompok berbeda dievaluasi,
masing-masing dibagi menjadi dua bagian. Bagian produk mentah yang ditujukan untuk
analisis dihomogenisasi dan disimpan pada suhu 4 ° C. Pada bagian yang ditakdirkan untuk
dimasak, perawatan kuliner yang ditunjukkan oleh pabrik diterapkan tanpa penambahan
bahan lainnya; setelah itu, sampel dikeringkan, dihomogenisasi, dan disimpan pada suhu -20
° C sampai analisis. Hanya spesies yang mempresentasikan kandungan tertinggi dari unsur-
unsur jejak beracun yang diteliti dipilih untuk evaluasi efek dari memasak dan bio-
aksesibilitas.

2.3. Penentuan merkuri

Sampel jamur (0,25 g mentah, 0,5 g dimasak) atau dapat diakses secara hayati fraksi (4 mL)
ditempatkan dalam reaktor Teflon, 4 mL 14 mol / L HNO3 (Merck, Spanyol) dan 1 mL H2O2
(30% v / v, Panreac, Spanyol) ditambahkan, dan mereka diiradiasi (180 ° C , 15 mnt) dalam
sistem microwave (model MARS, CEM, Vertex, Spanyol). Intisari dibiarkan diam selama 12
jam untuk menghilangkan uap nitrat, setelah itu dibuat hingga 10 mL dengan 0,6 mol / L
HCl, dan kemudian Hg dikuantifikasi oleh pembangkitan uap dingin yang digabungkan
dengan spektrometri fluoresensi atom (CV-AFS, model 10,025 Millennium Merlin, PS
Analytical, UK). Kondisi analitis adalah: agen pereduksi, 2% (m / v) SnCl2 (Scharlau,
Spanyol) di 1,8 mol / L HCl, 4,5 mL / menit; blanko reagen, 0,6 mol / L HCl, 9 mL / mnt; gas
pembawa, Ar, 0,3 L / mnt; gas pengering, udara, 2,5 L / mnt; waktu tunda, 15 detik; waktu
analisis, 40 detik; waktu pencucian memori, 60 detik. Kontrol kualitas untuk kuantifikasi oleh
CV-AFS dilakukan dengan menganalisis bahan referensi air (RTC QC1014, LGC Standards,
Spanyol), dengan konsentrasi Hg bersertifikat 40,8 ± 1,19 μg / L.
2.2. Model pencernaan in vitro
Metode yang digunakan untuk evaluasi bioaksesibilitas adalah statis model yang sebelumnya
dijelaskan oleh Jadán-Piedra, Sánchez, Vélez, dan Devesa (2016) yang mensimulasikan tahap
lambung dan usus dari proses pencernaan manusia. Sampel ditimbang di Erlenmeyer labu (2
g sampel yang dimasak), dan 90 mL air deionisasi ditambahkan. Campuran dihomogenisasi
dengan pengadukan mekanis. PH diatur hingga 2 dengan 6 mol / L HCl (Merck, Spanyol),
dan berat campuran dibawa ke 100 g dengan air deionisasi. Kemudian, porcine pepsin
(aktivitas enzimatik 944 U / mg protein; Sigma, Spanyol) (2 mg pepsin / 100 g larutan)
ditambahkan dan labu Erlenmeyer ditutup dengan Parafilm dan diinkubasi pada suhu 37 ° C
selama 2 jam dengan pengadukan (120 rpm).
Setelah fase lambung selesai, pH disesuaikan menjadi 6,5 oleh penambahan NH3 (Scharlau,
Spanyol). Porcine pancreatin (aktivitas setara dengan 4 × US Pharmacopoeia spesifikasi / mg
pancreatin; Sigma, Spanyol) dan ekstrak empedu babi (terkonjugasi glisin dan taurin) dengan
asam deoksikolat dan garam empedu lainnya; Sigma, Spanyol) (0,25 mg pankreatin dan 1,5
mg ekstrak empedu per 100 g larutan) ditambahkan. Campuran diinkubasi lagi dengan
pengadukan (120 rpm, 2 jam, 37 ° C). Setelah tahap usus, volume dalam labu dipindahkan ke
tabung polipropilen dan fraksi yang dapat larut atau dapat diakses secara biologis dipisahkan
dengan sentrifugasi (10.000 rpm, 20 menit, 4 ° C). Dari fraksi bioaccessible, Hg, Cd, As, dan
Pb dihitung dengan menerapkan metodologi yang dijelaskan dalam Bagian 2.3 hingga 2.5. Itu
bioaksesibilitas dihitung menggunakan ungkapan berikut: Bioaksesibilitas (%) [S / C] 100 =
× di mana S adalah isi elemen yang dilarutkan selama pencernaan; C adalah konten elemen
dalam sampel. Menerapkan metode ini secara in vitro, efek dari beberapa parameter
pencernaan gastrointestinal terhadap bio-aksesibilitas elemen-elemen ini dievaluasi. Pada
tingkat lambung, pengaruh pH lambung (2, 3, dan 4) dan konsentrasi pepsin (0, 1, 2, 4, 8, dan
13 mg / g sampel) dipelajari. Dari parameter pencernaan usus, efek pH (4,5, 6, dan 7) dan
konsentrasi garam empedu (3, 10, dan 300 mg / g sampel) dianalisis. Selain itu, efek dari
serat tidak larut utama dalam jamur - kitin (Santa Cruz Biotechnology, Jerman) dan β-glukan
(Sigma, Spanyol) - pada bioaksesibilitas ditentukan. Senyawa-senyawa ini ditambahkan pada
konsentrasi 100 mg / L ke dalam larutan standar dari unsur-unsur jejak toksik (1 mg / L,
volume akhir 20 mL), dan seluruh larutan dikenai proses pencernaan gastrointestinal yang
dijelaskan di atas.