Toxicity Test of Castor Leaves (Ricinus communis, L.

) using Brine Shrimp Lethality

Test (BSLT) Method

Beska Z. Witka, Yasmin Fatinah, Astrina F. Nurfadilah, Yulin Prisdiany, Maratul Mahdiyyah,
Ziyad A. Gathafan
Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran

Abstract
Castor plant is one of Indonesian plants that has potential as a medicine. Some compounds contained in
castor plant leaves are known to have benefits for boosting the immune system and can ward off free
radicals. Previous research stated that castor plant leaves have a toxicity effect on fruit fly species. So, in
this study will look at the level of toxicity to the larvae of shrimp (Artemia salina, Leach) using the
BSLT method. The correlation of shrimp larvae mortality at each concentration of castor leaf extract
will produce an LC50 value of 645,654 ppm. This shows that castor leaf extract has cytotoxic activity
because it can cause the death of 50% of test animals at concentrations <1000 ppm.

Keywords: castor leaves, toxicity, LC50, BSLT

Uji Toksisitas Daun Jarak (Ricinus communis, L.) dengan Metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT)

Abstrak
Tanaman Jarak merupakan salah satu tanaman Indonesia yang memiliki potensi sebagai obat. Beberapa
senyawa yang terkandung dalam daun tanaman jarak diketahui memiliki manfaat untuk meningkatkan
sistem kekebalan tubuh serta dapat menangkal radikal bebas. Penelitian sebelumnya menyatakan daun
jarak memiliki efek toksisitas terhadap spesies lalat buah. Sehingga, pada penelitian ini akan melihat
tingkat toksisitasnya terhadap larva udang Artemia salina, Leach menggunakan metode BSLT.
Hubungan persen kematian larva udang pada tiap konsentrasi ekstrak daun jarak akan menghasilkan
nilai LC50 yang didapatkan yakni sebesar 645,654 ppm. Hal ini menunjukkan ekstrak daun jarak
memiliki aktifitas sitotoksik karena dapat menyebabkan kematian 50% hewan uji pada konsentrasi <
1000 ppm.

Kata kunci: daun jarak, toksisitas, LC50, BSLT

1. Pendahuluan
Indonesia merupakan salah satu
negara yang terletak di daerah tropis
yang kaya akan keanekaragaman hayati.
Hutan tropis Indonesia memiliki sekitar
30.000 spesies tumbuhan, dan 1.845
spesies di antaranya telah diidentifikasi
berkhasiat sebagai obat (Abdullah,
2010).
Tumbuhan obat merupakan
tumbuhan yang mengandung zat aktif
pada salah satu bagian atau seluruh
bagian tumbuhan yang dapat
dimanfaatkan untuk mengobati penyakit
tertentu. Bagian tumbuhan yang dapat
dimanfaatkan meliputi daun, buah,
bunga, biji, akar, rimpang, batang, kulit
kayu, getahnya (Sada & Tanjung, 2010).
United States of Food and Drug
Administration (FDA) menyatakan
bahwa skrining dilakukan terhadap
senyawa yang berpotensi obat atau
toksik pada hewan (FDA, 2018).
Tanaman Indonesia yang
memiliki potensi sebagai obat antara lain
adalah tanaman jarak pagar (Jatropha
curcas, L.), jarak merah (Jatropha
gossypifolia, L.), dan jarak kepyar
(Ricinus communis, L.). Tanaman jarak
termasuk dalam famili euphorbiaceae,
batang tanaman ini diketahui
mengandung senyawa saponin,
flavonoid, tanin dan senyawa polifenol
(Baud et al., 2014). Tanaman jarak
memiliki kandungan senyawa kimia atau
metabolit sekunder di seluruh bagian
tanaman, mulai dari akar hingga daun
(Sinaga, 2005).
Daun tanaman jarak mengandung
berbagai senyawa kimia antara lain
kaempferol, kaempferol-3-rutinosida,
nikotiflorin, kuersetin, isokuersetin, dan
rutin. Disamping itu juga mengandung
astragalin, reiniutrin, risinin, dan vitamin
C (Rumape, 2013).
Tanaman jarak dapat membantu
menyediakan bahan baku yang
terjangkau sebagai alternatif obat dari
berbagai penyakit yang berbahaya
seperti kanker (Kesumasari, 2018).
Manfaat senyawa-senyawa yang
terkadung dalam daun jarak yaitu untuk
meningkatkan sistem kekebalan tubuh,
sebagai antiseptik, dan untuk mengusir
radikal bebas (Nuria, 2009).
Efek farmakologis dari tumbuhan
disebabkan adanya senyawa metabolit
sekunder yang terkandung di dalamnya.
Efektivitas komponen aktif tersebut
sebagai obat herbal dapat ditentukan
melalui analisis awal berupa analisis
toksisitas (Zuraida, 2018). Metode yang
sering digunakan pada analisis toksisitas
yaitu Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT). Uji ini menggambarkan tingkat
ketoksikan ekstrak terhadap larva
Artemia salina. Hasil uji ini dapat
dimanfaatkan untuk mengidentifikasi
bioaktivitas tanaman yang lebih luas
(Zuraida, 2018).
Brine Shrimp Lethality Bioassay
(BSLB) merupakan langkah sederhana
untuk mendapatkan uji toksisitas dari
suatu senyawa aktif. Hal ini didasari
dengan adanya kemampuan suatu
senyawa untuk membunuh udang
(Artemia salina) (Wu, 2014). Suatu
 ekstrak menunjukkan aktivitas
ketoksikan dalam uji toksisitas jika
ekstrak dapat menyebabkan kematian
50% hewan uji pada konsentrasi < 1000
ppm (Meyer et al., 1982).
Penelitian ini bertujuan
mempelajari aktivitas toksisitas ekstrak
daun tanaman jarak yang diuji terhadap
larva A. salina.
2. Metode
2.1. Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan
diantaranya alat-alat gelas yang biasa
digunakan di laboratorium, kertas saring,
mikroskop (Olympus), mikropipet,
penangas air (Memmert), pompa aerasi,
timbangan digital (Mettler Toledo), vial,
dan 96 well-plate (Iwaki).
Bahan yang digunakan pada
penelitian ini diantaranya aquades
(Merck), garam kristal, ragi (Fermipan),
simplisia daun jarak (Ricinus communis
L.), dan telur Artemia salina Lich.
2.2. Prosedur Penelitian
2.2.1. Pembuatan Air Laut Buatan
Sebanyak 40 gram garam kristal
ditimbang dan dilarutkan dalam 1 L aquades,
kemudian ditambahkan 9 mg ragi.
2.2.2. Penyiapan suspensi Artemia salina Lich.
Sebanyak 1 L medium penetasan (air
laut buatan) ditempatkan ke dalam wadah
bersekat yang telah dibagi menjadi dua bagian,
yaitu bagian yang gelap dan bagian terang yang
diberi penerangan dengan cukup. Sebanyak 150
mg telur A. salina dimasukan ke dalam bagian
Tabel 1. Hasil persen kematian dari setiap variasi konsentrasi
wadah yang gelap. Kemudian telur dibiarkan
menetas pada suhu kamar selama 2x24 jam
dengan aerasi.
2.2.3. Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan dengan cara panas,
yaitu infusa. Simplisia daun jarak yang telah
dirajang kemudian ditimbang sebanyak 10
gram. Panaskan aquades sebanyak 250 ml
hingga suhu 90oC. Selanjutnya simplisia
dimasukan ke dalam aquades dan dipanaskan
selama 15 menit dengan sesekali pengadukan.
2.2.4. Uji Aktivitas Sitotoksik Artemia salina
Lich. Metode BSLT
Pengujian BSLT dilakukan dengan
metode vial. Disiapkan 14 buah vial yang sudah
ditara hingga 10 ml. Masukan ekstrak daun
jarak dan suspensi larva (berisi 10 larva A.
salina) sebanyak 10 ml dengan perbandingan
1:1. Pengujian dilakukan secara duplo. Blanko
dibuat dengan media air dan DMSO 1%
kemudian ditambahkan 10 larva A. salina.
Jumlah kematian udang dihitung setelah 24 jam
menggunakan mikroskop. Hitung persen
kematian dan LC50.
3. Hasil
Pada tabel 1 dapat dilihat persen
kematian dari setiap variasi konsentrasi
ekstrak air tanaman Ricinus communis.
Rata-rata persen kematian tertinggi yaitu
sebesar 75% yaitu pada ekstrak dengan
konsentrasi 500 ppm dan hasil rata-rata
persen kematian terendah adalah 0%
pada konsentrasi ekstrak 62,5 ppm,
31,25 ppm, dan 15,625 ppm.
 Konsentrasi Log Kematian/Populasi % Kematian % Rata-rata
(ppm) Konsentrasi kematian
I II I II
1000 3 6/10 5/10 60 50 55%
500 2,7 7/10 8/10 70 80 75%
250 2,4 4/10 4/10 40 40 40%
125 2,1 3/10 2/10 30 20 25%
62,5 1,8 0/10 0/10 0 0 0%
31,25 1,5 0/10 0/10 0 0 0%
15,625 1,2 0/10 0/10 0 0 0%
LC50 ekstrak air daun jarak sebesar 645,654
ppm yang berarti memiliki aktivitas sitotoksik.
Hubungan % Kematian terhadap
Log Konsentrasi
4. Pembahasan
60
Brine Shrimp Lethality Test
50 f(x) = 32.14 x − 40.36
R² = 0.96 (BSLT) merupakan serangkaian alat
40
% Kematian

untuk menguji sitotoksisitas dari ekstrak

30
tumbuhan (Gadir, 2012). Metode
20
pengujian BSLT dipilih karena dinilai
10
mudah untuk memonitoring aktivitas
0
2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2
biologi dari berbagai spesies tumbuhan.
Metode ini cukup dapat memperlihatkan
Log Konsentrasi
pengujian dari potensi toksik yang
dimiliki ekstrak tumbuhan. Selain itu,
Gambar 1. Grafik Hubungan Persen Kematian
dalam pengaplikasiannya waktu yang
terhadap Log Konsentrasi
singkat dalam pengujian yaitu untuk
LC50 selama 24 jam menjadi keuntungan
Berdasarkan Gambar 1, diketahui grafik
dalam pengujian ini (Vanhaecke dan
hubungan antara nilai log konsentrasi ekstrak air
Persoone, 1984).
daun jarak terhadap kematian larva Artemia
Pengujian menggunakan metode
salina, L. yang dianalisa dengan analisa
ini untuk produk ekstrak, dan fraksi
persamaan garis linear dengan persamaan y =
seperti senyawa murni dapat diketahui
32,143x - 40,357. Dari hasil ini dapat diketahui
aktivitas biologi dari tumbuhan yang
parameter LC50. Nilai LC50 didapatkan dengan
diuji. (Asaduzzaman, dkk., 2015). BSLT
cara memasukkan nilai y = 50 ke dalam
telah banyak diterapkan untuk menilai
persamaan tersebut sehingga didapatkan nilai
toksisitas ekstrak, karena dinilai baik
 mengkorelasikan hasil dari konsentrasi
letal yang dapat membunuh 50% dari
populasi yang terpapar (LC50)
menggunakan udang brine (Artemia
salina) dan hasil dari pengujian oral
toksisitas akut pada tikus (Arlsanyolu
dan Erdemgil, 2006). Pengujian
toksisitas dari ekstrak tumbuhan dengan
BSLT LC50 ditunjukkan dengan nilai
kurang dari 1000 µg/mL yang memiliki
aktivitas biologi (Mayer, dkk., 1982).
Ekstrak daun jarak didapatkan dengan
metode infusa, yang berarti ekstrak yang
didapatkan dapat mewakili ekstrak dalam
pelarut polar. Hasil BSLT pada pengujian ini
menunjukkan angka LC50 yang termasuk toksik
karena berada di rentang 1-50 mg. Parameter
LC50 adalah nilai yang menunjukkan
kemampuan konsentrasi yang dapat mematikan
50% populasi larva udang. Uji toksisitas dengan
BSLT juga dilakukan pada minyak esensial biji
jarak dan menunjukkan nilai LC50 serupa
(Abushama et al, 2014). Penelitian serupa
mengenai toksisitas daun jarak yang diujikan
pada spesies lalat buah (B. zonata) juga
menunjukkan nilai LC50 yang masuk ke dalam
kategori toksik (Rampadarath dan Pucooa,
2016). Beragam penelitian mengenai toksisitas
ekstrak tanaman jarak dengan beragam pelarut,
bagian tanaman, dan metode ekstraksi ini
menunjukkan bahwa tanaman jarak memiliki
sifat toksik.
Dari ketoksikannya ini, beragam
penelitian pun telah dilakukan mengenai
aktivitas farmakologis daun jarak.
Utamanya, penelitian yang dilakukan
adalah aktivitas sitotoksisitas dari daun
jarak. Sitotoksisitas daun jarak
mengarahkan penelitiannya ke
pemanfaatan ekstrak daun jarak sebagai
antimikroba dan obat kanker. Walaupun
ekstrak daun jarak tidak menampakkan
aktivitas sitotoksik pada sel Vero (Salem
et al, 2012; Mongalo et al, 2018), tetapi
penelitian lainnya mengenai uji
sitotoksik ekstrak daun jarak
menampakkan hasil yang potensial.
Ekstrak air daun jarak memberikan efek
sitotoksik pada sel Jurkat (sel leukemia),
sedangkan ekstrak kloroform dan etil
asetat memberikan efek sitotoksik pada
sel A-549 (sel kanker paru-paru)
(Mansoor et al, 2016). Pada sel BUD-8,
ekstrak daun jarak tidak memberikan
efek toksik yang berarti pada konsentrasi
rendah dan baru menunjukkan efek
toksik yang signifikan pada konsentrasi
yang tinggi (Nemudzivhadi dan Masoko,
2014). Minyak esensial tanaman jarak
menunjukkan efek sitotoksik pada sel
HeLa yang mewakili sel kanker serviks
(Zarai et al, 2012).
Toksisitas pada daun jarak serta
bagian lain dari tanaman jarak juga
dikaitkan dengan aktivitas antimikroba,
fungisida, larvasida, dan insektisida
(Abew et al, 2014; Dikhoba et al, 2019;
Mandal, 2010; Mansoor et al, 2016;
Mongalo et al, 2018; Rampadarath dan
Pucooa, Rampadarath et al, 2014; 2016;
Zarai et al, 2012). Penelitian serupa
mengangkat aktivitas antioksidan pada
ekstrak daun jarak dan bagian lainnya
yang dihubungkan dengan kandungan
fenol pada tanaman jarak (Abbas et al,
2018; Salem et al, 2012; Mansoor et al,
2016; Mongalo et al, 2018; Rampadarath
et al, 2014).
 Daun jarak, dibandingkan dengan
bagian lainnya dari tumbuhan jarak,
memiliki toksisitas pada konstan tingkat
ini, sekalipun metode ekstraksinya
divariasikan (Abbas et al, 2018).
5. Kesimpulan
Diperoleh nilai LC50 dari ekstrak
daun jarak (Ricinus communis) dengan
metode makro (vial) sebesar 645,654
ppm. Hal tersebut menunjukkan ekstrak
daun jarak bersifat toksik karena dapat
menyebabkan kematian 50% hewan uji
pada konsentrasi < 1000 ppm.
Daftar Pustaka
Abbas, Mazhar, Ali, Abid, Arshad, Muhammad,
Atta, Asia, Mehmood, Zahed, Tahir,
I.M., dan Iqbal, Munawwar. 2018.
Mutagenicity, cytotoxic and antioxidant
activities of Ricinus communis diferent
parts. Chemistry Central Jornal. 12(3):
1--9.
Abdullah, M., Mustikaningtyas, D., &
Widiatningrum, T. 2010. Inventarisasi
jenis-jenis tumbuhan berkhasiat obat di
hutan hujan dataran rendah desa
Nyamplung pulau Karimun Jawa.
Biosaintifika: Journal of Biology &
Biology Education, 2(2), 75–81.
Abew, Bereket, Sahile, Samuel, dan Moges,
Feleke. 2014. In vitro antibacterial
activity of leaf extracts of Zehneria
scabra and Ricinus communis against
Escherichia coli and methicillin
resistance Staphylococcus aureus. Asian
Pacific Journal of Tropical Biomedicine.
4(10): 816--820.
ِAbushama, M.F., Hilmi, Y.I., AbdAlgadir,
H.M., Fadul, Eltayeb, dan Khalid, H.E.
2014. Lethality and Antioxidant Activity
of some Sudanese Medicinal Plants’
Fixed Oils. European Journal of
Medicinal Plants. 4(5): 563--570.
Arslanyolu, M., dan Erdemgil, F. Z. 2006.
Evaluation of the antibacterial activity
and toxicity of isolated arctiin from the
seeds of Centaurea sclerolepis. J Fac
Pharm. 35, 103-109.
Asaduzzaman, Md., Rana, S. Md., Hasan, S. M.
R., Hossain, M., Nittananda. 2015.
Cytotoxic (Brine Shrimp Lethality
Bioassay) and Antioxidant Investigation
of Barringtinoa Acutangula (L.).
International Journal of Pharma
Sciences and Research (IJPSR). Vol. 6
No. 8.
Baud, G. S., Sangi, M. S. & Koleangan, H. S. J.
2014. Analisis senyawa metabolit
sekunder dan uji toksisitas ekstrak etanol
batang tanaman patah tulang (euphorbia
tirucalli l.) dengan metode brine shrimp
lethatity test (bslt). Jurnal Ilmiah Sains,
14(2), 106-112.
Dikhoba, P.M., Mongalo, N.I., Elgorashi, E.E.,
dan Makhafola, T.J. 2019. Antifungal
and anti-mycotoxigenic activity of
selected South African medicinal plants
species. Heliyon. 5: 1--9.
Food and Drug Administration. 2018. FDA
Drug Safety Communication: Low
magnesium levels can be associated with
long-term use of Proton Pump Inhibitor
drugs (PPIs), U.S. Department of Health
and Human Services. Tersedia (online)
di https://www.fda.gov/food/science-
research-food/fda-poisonous-plant-
 database. [Diakses pada 18 Desember
2019].
Gadir, S.A. 2012. Assessment of bioactivity of
some Sudanese medicinal plants using
Brine Shrimp (Artemia salina) Lethality
Assay. J Chem Pharm Res. 4, 5145-
5148.
Kesumasari, Ni Made, Mery Napitupulu, dan
Minarni Rama Jura. 2018. Analisis
Kadar Flavonoid Pada Batang Jarak
Pagar (Jatropha curcas L.), Jarak Merah
(Jatropha gossypifolia L.), Dan Jarak
Kepyar (Ricinus communis L.). J.
Akademika Kimia. Vol. 7(1): 28-31.
Mandal, Shyamapada. 2010. Exploration of
larvicidal and adult emergence inhibition
activities of Ricinus communis seed
extract against three potential mosquito
vectors in Kolkata, India. Asian Pacific
Journal of Tropical Biomedicine. 2010:
605--609.
Mansoor, Shazia, Khan, Imran, Fatima, Jasmine,
Saeed, Mohd, dan Mustafa, Huma. 2016.
Anti-bacterial, anti-oxidant and
cytotoxicity of aqueous and organic
extracts of Ricinus communis. African
Journal of Microbiology Research.
10(8): 260--270.
Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Putnam, J.E.,
Jacobsen, L.B., Nichols, D.E.,
McLaughlin, J.L. 1982. Brine Shrimp: A
convenient general bioassay for active
plant constituents. Planta Medica. 45,
31-34.
Mongalo, N.I., Dikhoba, P.M., Soyingbe, S.O.,
dan Makhafola, T.J. 2018. Antifungal,
anti-oxidant activity and cytotoxicity of
South African medicinal plants against
mycotoxigenic fungi. Heliyon. 4: 1--23.
Nemudzhivhadi, Vhutshilo dan Masoko, Peter.
2014. In Vitro Assessment of
Cytotoxicity, Antioxidant, and Anti-
Inflammatory Activities of Ricinus
communis (Euphorbiaceae) Leaf
Extracts. Evidence-Based
Complementary and Alternative
Medicine. 2014: 1--8.
Nuria, M. C, Arvin Faizatun, dan Sumantri.
2009. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Etanol Daun Jarak Pagar (Jatropha
curcas L.) Terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus , Escherechia coli
dan Salmonela typhi. Jurnal Ilmu–ilmu
Pertanian. 5: (2) 10-12.
Ramparadath, Sillma dan Puchooa, Daneshwar.
2016. In vitro antimicrobial and
larvicidal properties of wild Ricinus
communis L. in Mauritius. Asian Pacific
Journal of Tropical Biomedicine. 6(2):
100--107.
Ramparadath, Sillma, Puchooa, Daneshwar, dan
Ranghoo-Sanmuhkiya, V.M. 2014. A
comparison of polyphenolic content,
antioxidant activity and insecticidal
properties of Jatropha species and wild
Ricinus communis L. found in Mauritius.
Asian Pacific Journal of Tropical
Biomedicine. 7(Suppl.1): S384--s390.
Rumape, O. 2013. Isolasi dan identifikasi
senyawa antifeedant dari daun jarak
kepyar (ricinus communis l.) terhadap
kumbang epilachna varivestis mulsant.
Gorontalo: Universitas Negeri
Gorontalo.
Sada, J., & Tanjung, R. 2010. Keragaman
tumbuhan obat tradisional di Kampung
Nansfori Distrik Supiori Utara,
 Kabupaten Supiori–Papua. Jurnal
Biologi Papua, 2(2), 39–46.
Salem, A.N.B., Zyed, Rouis, Ali, L.M., Nidhal,
Soualeh, Souad, Sfar, dan Mahjoub,
Aouni. 2012. Cytotoxic effect of
nanoparticles synthesized from Salvia
officinalis L. and Ricinus communis
aqueous extracts against vero cell line
and evaluation of their antioxidant
activities. African Journal of
Biotechnology. 11(52): 11530--11534.
Sinaga, E. 2005. Ricinus communis linn (Jarak).
Jakarta: Pusat Penelitian dan
Pengembangan Tumbuhan Obat.
Vanhaecke, P., dan Persoone, G. 1984. The
ARC-test: a standardized short-term
routine toxicity test with Artemia
nauplii. Methodology and evaluation.
Ecotox test mar environ. 2, 588.
Wu, Chao. 2014. An important player in brine
shrimp lethality bioassay: The solvent. J
Adv Pharm Technol Res. Vol. 5(1); 57–
58.
Zarai, Zied, Chobba, I.B., Mansour, R.B., Békir,
Ahmed, Gharsallah, Néjl, dan Kadri,
Adel. 2012. Essential oil of the leaves of
Ricinus communis L.: In vitro
cytotoxicity and antimicrobial
properties. Lipids in Health and Disease.
11(102): 1--7.
Zuraida. 2018. Analisis Toksisitas Beberapa
Tumbuhan Hutan Dengan Metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) (Toxicity
Analysis of Forestry Plants Using Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) Method).
Jurnal Penelitian Hasil Hutan. Vol. 36
No. 3, 239-246.