Hepatoprotective effect of Lobelia

alsinoides Lam. in Wistar rats

Anggota Kelompok
01 Sukma Anora Wahyunia (162210101019)

02 Gustia Alinda Lintarsari (182210101045)

03 Nadia Kholidatul Yumna (182210101046)

04 Rizva Aulia Purnamasari (182210101047)

PENDAHULUAN
Penyakit hati telah menjadi fokus perhatian global di seluruh
dunia dan kematian yang disebabkan oleh penyakit hati
meningkat setiap tahun pada tingkat yang mengkhawatirkan.
Banyak strategi manajemen medis telah diusulkan untuk
mengatasi penyakit hati tetapi pencarian formulasi dan metode
baru untuk mengobati gangguan hati masih terus berlanjut

Ayurveda, sistem praktek medis India membagikan koleksi

lengkap literatur dokumentasi dari penggunaan selama ribuan
tahun tanaman obat dan berbagai formulasi untuk
menyembuhkan penyakit hati .
Penggunaan berbagai tanaman dan formulasi yang sebagai
persiapan medis bervariasi secara ekstensif dan dipengaruhi
oleh berbagai aspek termasuk gaya/sistem praktek dan
tradisi etnis. Ayurvedic menggunakan formulasi tanaman
kalka, secara lokal disebut sebagai Cheriya Manganari
(Lobelia alsinoides Lam Lobeliaceae), untuk menghilangkan
penyakit kuning. Tanaman ini digunakan terapi dalam
gangguan Pitta bersama dengan tanaman Kakamachi
lainnya (Solanum nigrum L.) dan Mandukaparni (Centella
asiatica L.). penggunaan obat ramuan ini tidak dijelaskan
dalam buku Ayurveda lainnya. Selain itu, data tentang
penggunaan L. alsinoides Lam. untuk mempersiapkan
formulasi Ayurvedic modern tidak tersedia dalam literatur
kontemporer. Jadi dalam penelitian ini, efek hepatoprotektif
in vivo L. alsinoides Lam. telah dievaluasi dalam model
hepatotoksisitas yang diinduksi dari Karbon-Tetra klorida
pada tikus albino. Toksisitas akut, in-vitro antioksidan
aktivitas dan sifat fitokimia juga menjadi bagian yang
dinilai dari studi.
Bahan Metode

Pengumpulan dan identifikasi tanaman

1 Digunakan tanaman L. alsinoides Lam.

Membuat pasta halus ( Kalka )

Seluruh tanaman segar L. alsinoides Lam dibersihkan dan dipotong kecil.
2 Diambil 6 gram untuk dibuat pasta halus dengan cara menggiling pada
kecepatan rotasi permenit menggunakan mortar batu dan alu elektronik
selama 1 jam
Hewan
Digunakan 36 tikus dewasa Wistar albino yang sehat dengan BB
3 200-250 gram. Hewan-hewan tersebut ditempatkan di kandang
polypropylene pada suhu terkontroll (22±2°C) dengan siklus gelap /
terang selama 12 jam.
4 Studi Toksisitas
Lima tikus betina Nulipara Wistar albino yang sehat berumur 10-12 minggu dengan
BB 120-160 g dipilih untuk penelitian ini dan dilarang makan semalam dan 3 jam
setelah pemberian kalka. Dosis uji yang diberikan 2500 mg / kg kalka diberikan
secara oral dan diamati secara individual untuk mortalitas (dua kali sehari) dan
gejala toksik pada 10 mnt, 30 mnt, 1 jam, 2 jam, 4 jam dan 6 jam dan sekali sehari
sesudahnya selama 14 hari.

5 CCl4 menginduksi hepatotoksisitas

Hewan-hewan yang teraklimatisasi dibagi menjadi enam kelompok
• Hewan Kelompok I diberi makan makanan dan air normal ad libitum dan tidak menerima
perawatan obat apapun.
• Semua hewan Grup II, Grup III, Grup IV, Grup V dan Grup VI menerima 1: 1 campuran CCl 4 dalam
minyak zaitun sebagai dosis tunggal 1,25 ml/kg/hari secara oral selama 7 hari berturut-turut
untuk menginduksi hepatotoksisitas.
• Tikus grup II mendapat air suling 1 ml/kg (oral) dan tikus Grup III diberi perlakuan Silymarin,
senyawa yang dikenal sebagai hepatoprotektif dengan dosis 100 mg / kg setiap hari (oral).
• Semua hewan dari Grup IV, Grup V dan Grup VI diberikan pasta halus L. alsinoides ( kalka ) (
kurang dari 1 jam) selama tujuh hari berturut-turut di tingkat dosis masing-masing 0,54 g/kg;
1,08 g/kg dan 2,16 g/kg sebagai oral bolus dicampur dalam 2 mL air suling. Berdasarkan tabel
konversi dosis manusia ke tikus, dosis yang diharapkan untuk tikus adalah 1,08 g/kg yang
diberikan pada Grup V. Untuk Grub IV diberikan dosis setengahnya (0,54 g/kg) dan untuk Grub VI
diberikan dosis gandanya yaitu 2,16 g/kg.
6 Analisis biokimia serum
Pada hari ke 8, darah diambil dari sinus okular dan
Enzim serum dianalisis menggunakan kit uji merkuri
yang diperoleh dari diagnostik Erba. Kemudian tikus
dikorbankan dengan cara dislokasi servikal,
abdomen dibedah dan kondisi lesi morfologis hati
dicatat. Sampel jaringan hati dieksisi dan segera
direndam dalam formalin buffer netral.
7 Histomorfologi
Sampel jaringan hati yang dikumpulkan di necropsy
diproses untuk histopatologi menggunakan prosesor
9 Analisis statistic
jaringan otomatis dan blok paraffin disiapkan. Bagian
paraffin dipotong tipis pada ketebalan 4mm
menggunakan mikrotom semi-otomatis. Bagian jaringan
kemudian diwarnai dengan Hematoksilin dan Eosin dan
diperiksa dibawah mikroskop Olympus BX57 dan gambar
ditangkap dengan perbesaran 10 dan 40 menggunakan
sistem kamera digital DP71.
8 Analisis fitokimia awal
Parameter fisik dan fisikokimia seperti kadar
air, minyak atsiri, nilai abu, kadar serat,
kadar gula, nilai ekstraktif dan analisis
kualitatif untuk keberadaan
phytoconnstituens dinilai sesuai dengan
prosedur standar yang digunakan dalam API
(Ayurvedic Pharmacopoiea of India). Tiga
sampel dievaluasi tiga kali untuk masing-
masing pengujian. Nilai rata-rata diambil dan
dinyatakan sebagai rata-rata ± SE.
Parameter pergeseran kimiawi ditujukan
sebagai kesalahan standar. One-way
analysis of variance (ANOVA) dan beberapa
uji perbandingan Tukey dilakukan untuk
menentukan signifikasi statistic. Nilai
probabilitas < 0,05 dianggap signifikan.
 1. Aktivitas pembilasan radikal hidroksil
Konsentrasi berbeda dari pasta L. alsinoides 125-2000 µg/ml dari konsentrasi stok 10
mg/ml dicampur dengan 500 ml campuran reaksi dibuat hingga volume akhir 1 ml.
Setelah diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37°C ditambah 1 ml TCA 2,8% lalu ditambah 1
ml TBA dan campuran diinkubasi pada suhu 90°C selama 15 menit untuk mengembangkan
warna. Setelah pendinginan, absorbansi diukur pada panjang gelombang 532nm
terhadap larutan kosong yang sesuai dan Asam galat (konsentrasi 125-2000 μg/mL
dari konsentrasi stok 10 mg/mL) diambil sebagai standar. Nilai IC50 dievaluasi
menggunakan Perangkat Lunak IC50 PLUS V1.0
2. Estimasi aktivitas penghambatan radikal oksida nitrat
Sodium nitroprusside (5 mmol/L) dicampur dengan konsentrasi yang berbeda dari pasta

10 L. alsinoides 125-2000 µg/ml dari konsentrasi stok 10 mg/ml dan diinkubasi pada suhu
25°C selama 30 menit dalam campuran fosfat. Setelah 30 menit, 1,5 ml larutan yang
telah dihilangkan diencerkan dengan 1,5 ml reagen Griess. Absorbansi kromofor yang
membentuk polimerisasi nitrat dengan sulfanilamid dan penggandengan berikutnya
dengan N- (1naphthyl) etilen diamina dihidroklorida diukur pada 546 nm dan persentase

Aktivitas aktivitas penghambatan diukur dengan mengacu pada standar, asam galat (125-2000
μg/mL konsentrasi dari konsentrasi stok 10 mg / mL.
3. Perkiraan uji pembersihan radikal DPPH

anti oksidan Larutan methanol (1,48 mL) DPPH (0,04 g/L) ditambahkan ke berbagai konsentrasi (12,
5 mg/ml hingga 200 mg/ml, konsentrasi stok 10 mg/ml) dari pasta L. alsinoides dan
dibiarkan bereaksi pada suhu kamar selama 20 menit. Kemudian absorbansi diukur

in vitro dengan panjang gelombang 517nm. 3 mL DPPH diambil dan digunakan sebagai control,
dan Asam askorbat (10 mg/ml DMSO) digunakan sebagai standart.
Hasil dan Pembahasan

Penelitian dilakukan untuk menguji apakah sediaan kalka dari tanaman L.

alsinoides Lam. memiliki efek hepatoprotektif terhadap karbon tetraklorida
yang menyebabkan hepatotoksisitas pada tikus Wistar albino. Karbon-
tetraklorida adalah bahan kimia yang umum digunakan untuk menginduksi
eksperimen toksisitas hati pada model hewan termasuk studi yang dimaksudkan
untuk evaluasi obat-obatan yang penting.
Hasil histopatologis pada hati (A), ginjal (B), limpa (C) terlihat normal. Hal ini
menunjukkan sediaan kalka (pasta) dari daun Lobelia dosis 2500 mg/kg aman
digunakan pada tikus
Pengamatan kotor dalam studi hepatoprotektif

Hewan uji terlihat sehat, normal

dan tidak ada perubahan perilaku.
Tampilan fisik organ hati dari
masing2 kelompok hewan uji: Kel.1:
berwarna merah cerah Kel.2:
berwarna merah pucat dan ukuran
sedikit membesar Kel.3-6: berwarna
merah dan ukuran membesar
Parameter biokimia serum
• Dibandingkan dg kel.2 pada kel.3-6 terjadi penurunan seluruh parameter kecuali pada
serum albumin dan protein total

• Apabila kel.4-6 dibandingkan satu sama lain, efek nyata terlihat pada kel.6 (pasta L.
alsinoides dosis 2,16 g/kg) sama seperti pada kel.3 (silymarin)
Pengamatan histomorfologis

a. Kel.1: normal
b. Kel.2: nekrosis
centrilobular parah
c. Kel.3: degenerasi vakuola
ringan atau nekrosis
d. Kel.4: mitosis sesekali
e. Kel.5: lebih banyak mitosis
f. Kel.6: terjadi mitosis
Persentase mitosis, degenerasi vakuola dan nekrosis

• Persentase mitosis lebih tinggi pada kel.5

• Degenerasi vakuola paling tinggi pada kel.2
• Nekrosis paling tinggi pada kel.2
Aktivitas B
antioksidan Pasta halus dari L.
alsinoides menunjukkan
in vitro aktivitas antiradikal
yang baik (62,98%)
dengan menghambat
radikal oksida nitrat
A yang mirip dengan asam
Galat (80,77%) pada 2000
Pasta halus dari L.
alsinoides μg/ml
menunjukkan aktivitas
antiradikal yang baik
(61,55%) dengan
menghambat radikal
C
Pasta halus dari L.
hidroksil yang mirip
alsinoides menunjukkan
dengan asam Galat (61,
aktivitas antiradikal (48,
55%) pada 2000 μg/ml
07% pada 200 μg/ml)
dengan menghambat DPPH
tergantung pada dosis
 Hewan dalam Kelompok ll (diinduksi CCl4) memiliki semua ciri hepatotoksisitas.
Ada peningkatan yang signifikan dalam nilai parameter biokimia ALT, AST, ALP
dan bilirubin total dibandingkan dengan hewan normal pada Kelompok I

Pada kelompok II, morfologi hati terlihat

kasar menunjukkan adanya kerusakan
yang luas. Pada histopatologi terdapat
nekrosis sentrilobular yang kuat, dilatasi
vena sentral, kongesti sinusoid, dan
degenerasi hepatosit vakuolar. Terdapat
perlemakan ringan sampai sedang di
hepatosit midzonal dan periportal.
 Pada kelompok III yang diberi Silymarin, tikus tidak menunjukkan
gangguan dalam kadar serum ALT, AST, ALP, bilirubin total dan
kolesterol total, dan penurunan yang signifikan dalam protein total
dan albumin (p<0.01) serta hati berwarna merah terang. Pada
histopatologi, terlihat nekrosis ringan dan degenerasi vakuolar.
Tingkat lesi lebih sedikit dibandingkan kelompok II.

Pada kelompok IV, V, dan VI yang diobati dengan kalka (pasta)

secara signifikan telah mengurangi bilirubin total, nilai ALP, dan
kolesterol total dan mempertahankan nilai protein total dan albumin,
bila dibandingkan dengan kelompok II.
 Adanya mitosis mengindikasikan kemungkinan respons regeneratif. Persentase mitosis tertinggi di kelompok V.
 Pada semua kelompok perlakuan L. alsinoides (kelompok IV, V, VI), regenerasi hati terbukti dengan angka mitosis yang tersebar
di parenkim dan tingkat kerusakan minimal.
 Pada gambar DEF (kelompok IV, V, VI) lesi-lesi itu sebagian besar merupakan perubahan lemak dan degenerasi vakuolar, yang
merupakan respons yang reversibel. Namun, nekrosis juga ada, tetapi sangat berkurang pada semua kelompok perlakuan L.
alsinoides dan lesi sangat minimal pada Kelompok VI (gambar F)
 Spesimen hati dari kelompok III (gambar C) menunjukkan degenerasi vakuola ringan dan nekrosis menunjukkan bahwa efek
hepatoprotektif dari L. alsinoides setara dengan Silymarin.
Berdasarkan Sarngadhara Samhita, dosis kalka (pasta halus) adalah 12 g / hari untuk pria. Berdasarkan tabel konversi dosis manusia
ke tikus, dosis terapi yang diharapkan (per os) untuk tikus adalah 1,08 g / kg Yang diberikan : Kelompok IV : 0,54 g / kg (dosis
setengahnya) Kelompok V : 1,08 g / kg Kelompok VI : 2,16 g / kg (dosis ganda) -> aktivitas hepatoprotektif maksimum Formulasi kalka
(pasta halus) sesuai Ayurvedic Pharmacopoeia India memiliki efek hepatoprotektif pada tikus Wistar albino.

Aktivitas antioksidan pasta halus L. alsinoides dievaluasi oleh radikal

hidroksil, oksida nitrat dan uji DPPH dan telah menunjukkan adanya
aktivitas anti-oksidan L. alsinoides dalam ketiga metode. Skrining
fitokimia menunjukkan adanya steroid, alkaloid, fenol dan tanin.
Mekanisme hepatoprotektif dimungkinkan terkait dengan kapasitas
turunan tanaman untuk mencegah peroksidasi lipid dengan aktivitas
pembersihan radikal bebas di hati.

Tidak ada kematian dan morbiditas dari hewan percobaan yang

diamati, pemeriksaan patologis dan histopatologis menunjukkan
tidak ada kelainan, dapat diasumsikan bahwa obat tidak memiliki
toksisitas akut hingga 2500 mg / kg.
Kesimpulan
  Sediaan kalka (pasta halus)
dari L. alsinoides sesuai
farmakope ayurvedic India
KESIM memiliki efek hepatoprotektif
thd toksisitas CCl4 pada tikus
PULAN  efek nyata pd dosis 2.16 g/kg
tikus yg setara dg dosis
manusia 24 g/hari
THANKYOU !