Reaksi berantai rt-pcr dalam pengujian covid-19 pengujian covid-19 biasanya dimulai dengan

mengusap lendir hidung atau tenggorokan atau cairan dari paru-paru pasien juga dapat digunakan usapan
seseorang dengan covid-19 akan mengandung campuran partikel virus sel manusia dan mikroba lainnya
seperti semua makhluk hidup sel manusia memiliki DNA sebagai bahan genetik yang meneruskan
informasi dari satu generasi ke generasi berikutnya, molekul DNA terdiri dari heliks ganda, namun virus
covid-19 SARS Kobe ke dan banyak virus lain termasuk HIV memiliki RNA sebagai materi genetik
mereka.
Genom hanya memiliki satu untai virus. RNA dikelilingi oleh protein nukleokapsid di dalam
virus. dan protein lain yang diperlukan untuk mereplikasi virus di dalam sel manusia tes covid-19 objektif
dalam genom virus dalam sampel pasien ini biasanya merupakan akhir protein tidak cukup viral RNA
untuk mendeteksi secara langsung dalam sampel pasien sehingga saya akan memproses yang disebut
reaksi pertamanya rt-pcr memperkuat banyak salinan dari potongan pendek untai tunggal kedua dari DNA
yang disebut primer yang mengenali urutan RNA unik dalam genom virus yang mengurung target
wilayah NG setelah primer pertama menemukan enzim yang disebut transkriptase pertamanya disintesis
yang dikenal sebagai DNA komplementer atau setelah RNA dihilangkan primer kedua berikatan dengan
sisi lain dari untaian rantai tunggal melihat DNA adalah salinan DNA untai ganda dari target.
wilayah siklus RNA virus amplifikasi di mana DNA memisahkan remaja menjadi untaian tunggal
kedua primer mengikat Anil ke urutan target mereka dan pada jumlah salinan di wilayah Target genom
virus berlipat ganda dengan setiap siklus setelah 30 siklus ke miliar salinan DNA dari RNA virus
diproduksi oleh PCR dalam praktiknya virus-virus yang biasanya dideteksi dengan 3245 siklus PCR
memungkinkan jumlah waktu Target DNA dan Terku Pada setiap siklus PCR, grafik ini menunjukkan
pendeteksian 220 dan hanya dua molekul RNA virus dalam hasil penelitian terkontrol dari hasil negatif
juga ditunjukkan covid-19 adalah penyakit menular yang disebabkan oleh coronavirus sindrom
pernafasan akut akut hingga saat seseorang terinfeksi.
gejala yang paling umum termasuk demam batuk dan sesak napas untuk memulai tes, sampel
dapat dikumpulkan oleh usap nasofaring atau usap orofaring untuk spesimen nasofaring, usap
dimasukkan ke dalam lubang hidung dan dengan lembut dipindahkan ke depan ke nasofaring kemudian
diputar untuk a ditentukan. Waktu untuk mengumpulkan sekresi yang mengandung virus setelah
kekalahan ini diterapkan, swab ditempatkan segera ke dalam tabung steril yang mengandung media
transpor virus.
Metode standar pengujian coronavirus adalah reaksi polimerisasi PCR yang merupakan metode
yang digunakan secara luas dalam biologi molekuler untuk menghasilkan jutaan milyaran salinan fragmen
DNA spesifik dengan cepat coronavirus mengandung RNA untai tunggal yang sangat panjang untuk
mendeteksi virus ini dengan molekul PCR. RNA harus diubah menjadi sekuens DNA komplementernya
dengan transkriptase terbalik, kemudian disintesis baru oleh prosedur PCR standar, pendekatan ini secara
universal dikenal sebagai rt-pcr untuk melakukan metode ini pada dasarnya RNA virus harus diekstraksi
beberapa kit pemurnian RNA tersedia untuk isolasi cepat dan efektif yang nyaman untuk mengekstraksi
RNA virus dengan menggunakan kit komersial.
 sampel pertama-tama ditambahkan ke dalam microcentrifuge untuk kemudian dicampur dengan
Buffer Alyssa, buffer ini sangat bersifat denaturasi dan biasanya terdiri dari adas dan 118 isothiocyanate
juga inhibitor RN ACE biasanya hadir dalam buffer untuk memastikan isolasi RNA virus yang utuh
begitu buffer ditambahkan, tabung dicampur dengan vortexing pulsa dan diinkubasi pada suhu kamar
kemudian virus dilisiskan di bawah denaturasi tinggi kondisi yang disediakan oleh buffer Lissa
setelah sampel dilisiskan prosedur pemurnian dilakukan dengan menggunakan spin kolom sampel
dimuat ke spin kolom kemudian sentrifugasi dilakukan prosedur ini adalah metode ekstraksi fase padat di
mana fase diam terdiri dari dari silika Matriks dalam kondisi garam dan pH optimal.
Molekul RNA membeli ke membran gel silika dan pada saat yang sama protein dan kontaminan
lainnya tidak ditahan setelah sentrifugasi kolom spin ditempatkan ke dalam koleksi bersih 2 dan filtrat
dibuang kemudian suatu wash buffer adalah kolomnya dimasukkan ke dalam centrifuge lagi memaksa
buffer cuci melalui membran yang dihilangkan ini setiap kotoran yang tersisa dari membran hanya
menyisakan RNA yang terikat pada silika gel setelah sampel dicuci kolom ditempatkan dalam tabung
microcentrifuge bersih dan buffer elusi ditambahkan kemudian sentrifugasi dilakukan memaksa buffer
elusi melalui membran elusi buffer menghilangkan RNA virus dari kolom spin dan RNA murni yang
bebas protein.
Inhibitor dan kontaminan lainnya diperoleh setelah ekstraksi RNA virus, langkah selanjutnya
adalah persiapan campuran reaksi untuk amplifikasi PCR pada langkah ini master mix digunakan yang
merupakan larutan terkonsentrasi pra-campuran yang terdiri dari nukleotida enzim reverse transcriptase
penyangga primer maju primer terbalik penyelidikan taqman dan DNA polimerase akhirnya untuk
menyelesaikan campuran reaksi ini template RNA adalah bahwa itu dicampur dengan pulsa vortexing
kemudian campuran reaksi dimasukkan ke dalam piring PCR yang umumnya berisi 96 tabung,
memungkinkan analisis beberapa sampel sekaligus pl makan ditempatkan dalam mesin PCR yang pada
dasarnya adalah pengendara sepeda termal waktu RT PCR digunakan untuk mendeteksi coronavirus baru
2019 dengan memperkuat urutan Target dalam RDR PG VG dan pada akhirnya pilihan target tergantung
pada primer.
dalam sekuens penyelidikan langkah pertama dalam RT PCR adalah transkripsi balik untai
pertama sintesis DNA komplementer Perdana-nya dengan primer terbalik PCR yang berhibridisasi
menjadi bagian pelengkap dari virus RNA Jenna reverse transcriptase kemudian menambahkan
nukleotida DNA ke dalam tiga prima dan dari primer mensintesis pelengkap DNA RNA virus suhu dan
durasi langkah ini tergantung pada primer RNA target dan penggunaan reverse transcriptase berikutnya
langkah denaturasi awal diterapkan menyebabkan denaturasi hibrida DNA
RNA
langkah ini diperlukan untuk aktivasi Polimerisasi DNA dan sekaligus inaktivasi reverse
transcriptase icr terdiri dari serangkaian Siklus termal dengan setiap siklus isting of denaturasi anil
langkah ekstensi denaturasi langkah terdiri dari memanaskan ruang reaksi hingga 95 derajat C dan
digunakan untuk denaturasi cetakan DNA beruntai ganda. Langkah Selanjutnya suhu reaksi diturunkan
menjadi 58 ° C memungkinkan berlutut ke depan.
 primer ke bagian komplementer dari templat DNA beruntai tunggal, suhu anil bergantung
langsung pada panjang dan komposisi primer langkah ekstensi polimerisasi DNA ke ukuran adalah untai
DNA baru yang komplementer pada untai templat DNA dengan menambahkan nukleotida bebas dari
reaksi campuran yang komplementer dengan templat dalam 5 Prime to 3 Prime Direction suhu pada
langkah ini tergantung pada polimerisasi DNA yang digunakan setelah siklus pertama
Target DNA beruntai ganda adalah denaturasi dari DNA beruntai ganda ini dilakukan
menghasilkan tunggal molekul DNA yang terdampar di Langkah Berikutnya suhu reaksi diturunkan
memungkinkan masing-masing berlutut dari templat DNA untai tunggal dan anil dari probe taqman ke
bagian pelengkap dari DNA target terdiri dari lantai kovalen yang melekat secara kovalen pada lima
ujung ujung oligonukleotida untuk fluoresensi yang dipancarkan .

ekstensi DNA telah menyerang Monroe hit endogen lima aktivitas glasir Prime baru memisahkan
dadu dari quencher dengan setiap siklus PCR molekul pewarna lebih banyak dirilis menghasilkan
peningkatan intensitas fluoresensi sebanding dengan jumlah amplikon disintesis dari jumlah urutan
tertentu yang ada dalam sampel jumlah tesis DNA untai ganda dua kali lipat dalam setiap siklus di sana
untuk PCR dapat digunakan untuk menganalisis jumlah sampel yang sangat kecil adalah pengukuran
sinyal neon lampu Togen halogen dan filter eksitasi mencerminkan lensa dan filter emisi dan kamera
CCD perangkat charge-coupled yang Anda filter cahaya dari lampu ref cermin terlewatkan melewati
lensa kondensasi dan difokuskan ke tengah masing-masing sumur maka cahaya fluoresen yang
dipancarkan dari sumur memantulkan cermin melewati filter emisi dan dideteksi oleh kamera CCD di
setiap siklus cahaya PCR dari lantai yang bersemangat dari dirinya.
dapat dideteksi oleh kamera CCD yang mengubah cahaya yang ditangkapnya menjadi Data
Digital metode ini dikenal sebagai PCR waktu nyata yang memungkinkan pemantauan perkembangan
reaksi PCR seperti yang terjadi dalam waktu nyata.