Anda di halaman 1dari 13

A.

Ionisasi Kimia (Chemical Ionization)


Metode ionisasi kimia adalah model ionisasi energy rendah yang
digunakan untuk menganalisis senyawa yang susah menghasilkan sinyal ion
molekuler dalam model EI. Pada dasarnya, CI berbagi rakitan sumber ion umu
dengan EI, namun telah megalami modifikasi. Prinsip operasi dari ionisasi
kimia yaitu ionisasi kimia membutuhkan jumlah energy yang lebih rendah
dibandingkan dengan ionisasi electron (EI), tetapi ini tergantung pada bahan
reaktan yang digunakan.
Secara konseptual, proses CI sangat berbeda dengan EI. CI tercapai
melalui reaksi asam-basa gas antara molekul sampel dan ion gas reagen. 3
langkah yang terlibat dalam proses CI. Langkah perama, mengatur gas eagen
dengan tekanan parsial yang 10 sampai 100 kali lebih besar dari tekanan
sampel, terionisasi pada tekanan 0,1 sampai 1 torr dengan pengeboman
dengan berkas elektron 200 hingga 500-eV. Pada langkah kedua, satu atau
lebih pereaksi stabil ion diproduksi oleh reaksi ion-molekul. Akhirnya,
molekul sampel adalah terionisasi oleh reaksi molekul-ion fase gas dengan ion
reagen stabil.
Spektrum CI memiliki puncak ion molekuler terprotonasi yang mudah
diidentifikasi sehingga memungkinkan penentuan massa molekul dengan
mudah. Teknik ini membutuhkan transfer netitas bermassa tinggi dari gas
reagen ke analit. Dengan demikian CI cukup berguna dalam kasus-kasus
dimana energy dari electron yang memborbardir dalam EI tinggi,
menghasilkan secara ekslusif dalam fragmentasi analit, meyebabkan puncak
molekul ion menjadi kurang terdeteksi atau benar-benar tidak ada.
Contoh dari spectrum yang dihasilkan menggunakan metode ionisasi
kimia ini dapat dilihat pada Gambar 1 dan mekanisme fragmentasinya dapat
dilihat pada Gambar 2.
Gambar 1. Spektrum CI p-nitrophenol glucuronide

COOH COOH
O O O HO
H NH4+ H
H H
OH H OH H
OH OH
H H
H OH NO2 H OH NO2

m/z: 315.06 m/z: 177.04 m/z: 139.03

NH3 NH4+

COOH
O HO
H NH3
H NH4+
OH H
OH
H
H OH NO2
m/z: 194.07 m/z: 157.06

Gambar 2. Fragmentasi p-nitrophenol glucuronide

B. Ionisasi Kimia Langsung (Direct Chemical Ionization)


Ionisasi kimia langsung adalah metode yang berhubungan dengan probe
paparan langsung. Pada DCI analit yang digunakan berupa cairan atau
suspense yang secara langsung terkena plasma gen reagen ketika mengalami
pemanasan dengan cepat. DCI dapat digunakan untuk mendeteksi senyawa
arsenik yang ada di lingkungan laut dan darat, dan menyediakan pengaturan
eksperimental yang sesuai, resolusi tinggi dan pengukuran massa yang akurat
juga dapat dicapai dalam mode DCI. Contoh spectrum DCI dapat dilihat pada
Gambar 3 dan fragmentasinya dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 3. Spektrum DCI p-nitrophenol glucuronide
COOH
O
H H
NO2
O NO2
OH H O
OH H
H OH
m/z: 315 m/z: 138

Gambar 4. Fragmentasi DCI p-nitrophenol glucuronide

C. Ionisasi Semprotan Elektron (Electronspray Ionization, ESI)


Ionisasi electrospray adalah teknik ionisasi lunak yang biasanya digunakan
untuk menentukan berat molekul protein, peptida, dan makromolekul biologis
lainnya. Ionisasi lunak adalah teknik yang berguna ketika mempertimbangkan
molekul biologis dari massa molekul besar, seperti yang telah ditentukan,
karena proses ini tidak memecah molekul makromolekul menjadi partikel
bermuatan lebih kecil, melainkan mengubah makromolekul yang diionisasi
menjadi tetesan kecil. Tetesan-tetesan ini selanjutnya akan terdesolasikan
menjadi tetesan yang bahkan lebih kecil, yang menciptakan molekul dengan
proton yang melekat. Ion molekuler terprotonasi dan terurai ini kemudian
akan dilewatkan melalui penganalisa massa ke detektor, dan massa sampel
dapat ditentukan.
Spektrometri massa ionisasi elektrospray adalah metode ionisasi desorpsi.
Metode ionisasi desorpsi dapat dilakukan pada sampel padat atau cair, dan
memungkinkan sampel menjadi tidak stabil atau secara termal tidak stabil. Ini
berarti bahwa ionisasi sampel seperti protein, peptida, olgiopeptida, dan
beberapa molekul anorganik dapat dilakukan. Spektrometri massa ionisasi
electrospray mensyaratkan bahwa molekul harus dari massa yang cukup besar.
Instrumen memiliki rentang massa kecil yang dapat dideteksi, sehingga massa
sampel yang disuntikkan yang tidak diketahui dapat dengan mudah
ditentukan; karena harus dalam kisaran instrumen. Analisis kuantitatif ini
dilakukan dengan mempertimbangkan massa untuk mengisi rasio berbagai
puncak dalam spectrum.
Ada beberapa keuntungan yang jelas untuk menggunakan spektrometri
massa ionisasi elektrospray sebagai metode analitik. Salah satu keunggulannya
adalah kemampuannya menangani sampel yang memiliki massa besar.
Keuntungan lain adalah bahwa metode ionisasi ini adalah salah satu metode
ionisasi terlembut yang tersedia, oleh karena itu ia memiliki kemampuan
untuk menganalisis sampel biologis yang ditentukan oleh interaksi non-
kovalen. Alat penganalisa massa quadrupole juga dapat digunakan untuk
metode ini, yang berarti bahwa struktur sampel dapat ditentukan dengan
cukup mudah. Rentang rasio m / z instrumen quadrupole cukup kecil, yang
berarti bahwa massa sampel dapat ditentukan dengan tingkat akurasi yang
tinggi. Akhirnya, sensitivitas untuk instrumen ini mengesankan dan karenanya
dapat berguna dalam pengukuran kuantitatif dan kualitatif yang akurat.
Beberapa kerugian untuk spektrometri massa ionisasi electrospray juga
hadir. Kerugian utama adalah bahwa teknik ini tidak dapat menganalisis
campuran dengan sangat baik, dan ketika dipaksa untuk melakukannya,
hasilnya tidak dapat diandalkan. Aparat juga sangat sulit untuk dibersihkan
dan cenderung menjadi terlalu terkontaminasi dengan residu dari percobaan
sebelumnya. Akhirnya, beberapa muatan yang melekat pada ion molekuler
dapat membuat data spektral membingungkan. Kebingungan ini semakin
dipicu oleh penggunaan sampel campuran, yang merupakan alasan lain
mengapa campuran harus dihindari ketika menggunakan spektrometer massa
ionisasi electrospray. Contoh spectrum ESI dapat dilihat pada gambar 5 dan
pola fragmentasi dapat dilihat pada gambar 6.

Gambar 5. Spektrum ESI Berberine


O O
O
O N N
O N - CO -CH3 HO

O
O O
O
m/z: 292.10 m/z: 277.07
m/z: 320.09
- (2H,CO) - CO

- CO O
O N N
O N
HO

O
m/z: 234.09 m/z: 262.09 m/z: 249.08

Gambar 6. Fragmentasi ESI Berberine

D. Pengeboman atom cepat (Fast Atom Bombandment, FAB)


Pemboman atom cepat (FAB) adalah teknik ionisasi yang digunakan
dalam spektrometri massa di mana seberkas atom berenergi tinggi
menghantam permukaan untuk menghasilkan ion. Ketika berkas ion berenergi
tinggi digunakan sebagai pengganti atom (seperti dalam spektrometri massa
ion sekunder), metode ini dikenal sebagai spektrometri massa ion sekunder
cair (LSIMS). Dalam FAB dan LSIMS, bahan yang akan dianalisis dicampur
dengan lingkungan perlindungan kimia yang tidak mudah menguap, yang
disebut matriks, dan dibombardir di bawah vakum dengan berkas atom
berenergi tinggi (4000 hingga 10.000 elektron volt). Atom-atom biasanya dari
gas inert seperti argon atau xenon. Matriks umum meliputi gliserol, tiogliserol,
3-nitrobenzyl alkohol (3-NBA), 18-crown-6 eter, 2-nitrophenyloctyl ether,
sulfolane, diethanolamine, dan triethanolamine. Teknik ini mirip dengan
spektrometri massa ion sekunder dan spektrometri massa desorpsi plasma.
Contoh spectrum dapat dilihat pada Gambar 7 dan pola fragmentasi dapat
dilihat pada Gambar 8.

Gambar 7. Spektrum FAB sterculic acid

O2C
m/z: 293

O2 C O2C
m/z: 128.08 (100.0%), 129.09 (7.6%) m/z: 194

Gambar 8. Fragmentasi FAB sterculic acid


E. Desopsi Medan (Field Desorption, FD)
Field desorption (FD) adalah metode pembentukan ion yang digunakan
dalam spektrometri massa (MS) di mana medan listrik berpotensi tinggi
diterapkan pada emitor dengan permukaan yang tajam, seperti pisau cukur,
atau lebih umum, filamen dari mana "kumis" kecil telah terbentuk. Ini
menghasilkan medan listrik yang tinggi yang dapat menghasilkan ionisasi
molekul gas analit. Spektrum massa yang diproduksi oleh FD memiliki sedikit
atau tidak ada fragmentasi karena FD adalah metode ionisasi lunak. Mereka
didominasi oleh kation radikal molekuler M +. dan lebih jarang, molekul
terprotonasi. Teknik ini pertama kali dilaporkan oleh Beckey pada tahun 1969.
Ini juga merupakan metode ionisasi pertama untuk mengionisasi senyawa
yang tidak mudah menguap dan labil secara termal. Satu perbedaan utama FD
dengan metode ionisasi lainnya adalah bahwa ia tidak memerlukan sinar
primer untuk membombardir sampel
Untuk analisis kualitatif, FD-MS dapat diterapkan ke bidang biokimia,
kedokteran, garam, polimer, dan analisis lingkungan. Misalnya, dalam
biokimia, dapat digunakan untuk mengkarakterisasi peptida, nukleosida dan
nukleotida, pestisida, dan vitamin. Dalam kedokteran, dapat diterapkan pada
obat kanker dan metabolitnya, dan antibiotic. FD-MS juga dapat digunakan
untuk analisis kuantitatif ketika metode standar internal diterapkan. Ada dua
mode umum menambahkan standar internal: baik penambahan senyawa
homolog dengan berat yang diketahui ke sampel, atau penambahan senyawa
tersubstitusi isotopik dengan berat yang diketahui. Contoh spectrum dapat
dilihat pada Gambar 9 dan pola fragmentasi dapat dilihat pada Gambar 10.
Gambar 9. Spektrum FD Z-Glu-Tyr
COOH COOH
H2C H2C
O H2C H2C
H H+ H
N N COOH
O N COOH H2N
H O CH2
O CH2

HO HO

m/z: 444 m/z: 309

CH2
COOH
H2C
O H2C

O N HO
H
O m/z: 108
m/z: 264

H+

OH

HO
m/z: 108
m/z: 93

m/z: 92

Gambar 10. Fragmentasi FD Z-Glu-Tyr


F. Ionisasi Kinetik Medan (Field Ionization Kinetic, FIK)
FIK adalah suatu metode yang dapat digunakan untuk mengungkapkan
mekanisme disosiasi ion meskipun terbatas pada laboratorium tertentu. Teknik
ini mempelajari ion dengan masa hidup dalam kisaran 10-11 hingga 10-9
detik. Ion dihasilkan dibawah pengaruh potensi yang sangat tinggi oleh
medan. Data tersebut digunakan untuk memperoleh hubungan fungsi
konstanta laju dengan reaksi wajtu. Dalam kombinasi dengan pelabelan
isotope, FIK telah berhasil mengidentifikasi mekanisme fragmentasi ion fase
gas. Contoh Spektrum dapat dilihat pada Gambar 11 dan pola grafmentasi
dapat dilihat pada Gambar 12.

Gambar 11. Spektrum FIK Uridine


O

NH O

O N O NH
HO
H H
N O
O O
m/z: 111.02

m/z: 284.10

HO O
H H

O O

m/z: 174.09

Gambar 12. Fragmentasi FIK uridine

G. Metode Ionisasi
Ada banyak jenis metode ionisasi yang digunakan dalam metode
spektrometri massa. Metode klasik yang akrab dengan kebanyakan ahli kimia
adalah dampak elektron (EI) dan Pengeboman Atom Cepat (FAB). EI
dilakukan dengan menguapkan sampel secara langsung di sumber yang
terkandung dalam sistem vakum yang langsung melekat pada alat analisis.
Molekul fase gas dihujani oleh berkas elektron yang dibentuk dengan
memanaskan bias filamen pada tegangan negatif dibandingkan dengan
sumbernya. Tegangan bias biasanya pada -70 volt. Sinar elektron
mengeluarkan ion dari molekul fase gas yang menghasilkan ion radikal.
Teknik ini dianggap sebagai teknik ionisasi keras, karena menyebabkan ion
terfragmentasi. EI juga merupakan metode yang paling umum digunakan
untuk GC-MS. Contoh spectrum dapat dilihat pada Gambar 13 dan pola
fragmentasi dapat dilihat pada Gambar 14.
Gambar 13. Spektrum EI Hexyl Phenylcarbamate

O NH C O
NH C OH

m/z: 151.06
CH3
m/z: 134.06
O

O
NH C O

m/z: 235.16

O
O C

NH2

CH3

m/z: 107.07

Gambar 14.Fragmentasi EI Hexyl Pehnylcarbamate


H. GC MS
Spektrometri massa (MS) adalah teknik analitik yang mengukur rasio
massa terhadap muatan ion. Hasilnya biasanya disajikan sebagai spektrum
massa, sebidang intensitas sebagai fungsi dari rasio massa terhadap muatan.
Spektrometri massa digunakan dalam berbagai bidang dan diterapkan pada
sampel murni serta campuran kompleks. Spektrum massa adalah plot sinyal
ion sebagai fungsi dari rasio massa terhadap muatan. Spektra ini digunakan
untuk menentukan tanda tangan unsur atau isotop dari sampel, massa partikel
dan molekul, dan untuk menjelaskan identitas kimia atau struktur molekul dan
senyawa kimia lainnya.
Dalam prosedur MS yang khas, sampel, yang mungkin padat, cair, atau
gas, terionisasi, misalnya dengan membombardirnya dengan elektron. Ini
dapat menyebabkan beberapa molekul sampel pecah menjadi fragmen
bermuatan atau hanya menjadi dibebankan tanpa fragmen. Ion-ion ini
kemudian dipisahkan menurut rasio massa terhadap muatannya, misalnya
dengan mempercepatnya dan menjadikannya medan listrik atau magnet: ion
dengan rasio massa terhadap muatan yang sama akan mengalami jumlah
defleksi yang sama. Ion-ion dideteksi oleh mekanisme yang mampu
mendeteksi partikel bermuatan, seperti pengali elektron. Hasil ditampilkan
sebagai spektrum intensitas sinyal ion yang terdeteksi sebagai fungsi dari rasio
massa terhadap muatan. Atom atau molekul dalam sampel dapat diidentifikasi
dengan menghubungkan massa yang diketahui (mis. Seluruh molekul) dengan
massa yang diidentifikasi atau melalui pola fragmentasi yang khas. Contoh
spectrum dapat dilihat pada Gambar 15 dan pola fragmentasi dapat dilihat
pada Gambar 16.
Gambar 15. Spektrum MS Lidocaine

CH3
O CH3
O
-CH3
N C CH2CH3
H CH2 N N C CH CH2CH3
H 2 N
CH2CH3
CH3 CH2
CH3
m/z: 234.17 CH2CH3 m/z: 219.15
N
CH2CH3

CH3
O O
C CH2CH3 N C
CH2 N H
CH2CH3
CH3
m/z: 148.08

CH3

NH

CH3
m/z: 120.08