2.2.

Metode Penelitian

2.2.1. Bahan

Dipilih anggur, dicuci dalam air, dikemas dalam kantong polietilen dan dibekukan pada
suhu 18°C sampai digunakan. Bahan enkapsulasi adalah gum Arab, Polidekstrosa dan guar
gum terhidrolisis sebagian. DPPH (2,2-difenil-1-pikril-hidrazil), Trolox (6-hidroksi-
2,5,7,8-tetrametil kroman-2-asam karboksilat), neocuproine, dan asam galat.

2.2.2. Persiapan ekstrak

Anggur dicairkan dan direbus pada suhu 80°C selama 5 menit dan didinginkan
menggunakan es / waterbath selama 3 menit. Setelah memisahkan biji dari pulp, polifenol
diekstraksi dari kulit menggunakan air yang diasamkan dengan asam sitrat (2%, b / v).
Kulitnya dicampur dengan pelarut pada rasio 1: 3 (b / v), campuran ditumbuk
menggunakan blender, dan disimpan dalam keadaan gelap selama 20 jam pada 22 ± 1°C.
Lalu, ekstrak disaring dengan kertas saring Whatman No. 1 untuk memisahkan padatan
dan residu.

2.2.3. Persiapan bubuk mikroenkapsulasi

Empat dispersi disiapkan dari ekstrak, sebagai berikut: A (5% GA dan 5% PD), B (10%
GA), C (5% PHGG dan 5% PD), dan D (10% dari PHGG). Dispersi disiapkan pada 6500
rpm untuk 5 menit menggunakan Ultra-Turrax (T25, IKA). Selanjutnya, dispersi
dienkapsulasi dengan spray-drying dan freeze-drying, total ada delapan cara.

Enkapsulasi dengan metode spray-drying dilakukan menggunakan alat penyemprot

cairan ganda, tipe pneumatik (Mini Spray Dryer LM MSDI 1.0 LABMAQ, Brasil), dengan
diameter nozzle umpan 1,0 mm. Sampel dibawa keluar menggunakan pompa peristaltik
pada laju aliran 0,60 L / jam, suhu udara pengeringan 140°C, tekanan udara 3,5 kgf / cm 2,
dan laju aliran udara 40,5 L / jam.

Untuk freeze-drying, dispersi dibekukan dalam freezer ultra pada suhu 68°C selama 24
jam. Kemudian, sampel ditempatkan di freezer (LIOTOP L101, Liobras, Brasil) dan ke
freeze-dried pada suhu 57°C, tekanan vakum kurang dari 20 lmHg selama 48 jam. Setelah
freeze-drying, sampel dihancurkan menggunakan lumpang dan alu.

Sampel spray-dried dan freeze-dried segera ditempatkan di kantong polietilen, disegel

dan ditempatkan di kantong aluminium. Sampel disimpan dalam desikator yang
mengandung silika untuk analisis lebih lanjut, yang dilakukan triplo/rangkap tiga.
2.2.4. Analisis spektrofotometri

Ekstrak dan bubuk mikroenkapsulasi diencerkan dengan air suling dalam proporsi
berbeda sesuai dengan kebutuhan dari setiap analisis. Semua pembacaan dilakukan dalam
spektrofotometer Genesys S10, Thermo Scientific.

2.2.4.1. Total fenolik

Total fenolik ditentukan dengan menggunakan reagen Folin-Ciocalteu (Singleton &

Rossi, 1965). Pembacaan dilakukan dalam spektrofotometer pada 765 nm, dan hasilnya
dinyatakan sebagai mg asam galat (GAE) per g sampel secara kering

2.2.4.2. Total monomer Antosianin

Total monomer Antosianin ditentukan berdasarkan metodologi yang dijelaskan oleh

Lee, Durst, dan Wrolstad (2005). Ekstrak dan bubuk diencerkan dicampur dengan
larutan buffer pH 1.0 dan 4.5. Absorbansi diukur dalam spektrofotometerpada 520 dan
700 nm. Hasilnya dinyatakan sebagai mg malvidin-3,5-diglucoside per g sampel secara
kering, menggunakan absorptivitas molar 37.000 l / cm / mol, dan berat molekul 724,5 g
/ mol (Toaldo et al., 2013).

2.2.4.3. Kapasitas memulung DPPH

Aktivitas antioksidan ditentukan oleh uji DPPH seperti yang dilakukan oleh Brand-
Williams, Cuvelier, dan Berset (1995). Absorbansi diukur menggunakan
spektrofotometer pada 515 nm setelah 3 jam reaksi. Kurva standar Trolox sebelumnya
disiapkandan hasilnya dinyatakan sebagai lmol setara Trolox (TE) per g sampel secara
kering.

2.2.4.4. Cupric-reducing antioxidant capacity (CUPRAC)

Uji CUPRAC dilakukan sesuai dengan metodologi dijelaskan oleh Apak, Güçlü,
Özyürek, dan Karademir (2004). Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer
pada 450 nm setelah 60 menit reaksi. Kurva standar Trolox dibuat dan hasilnya
dinyatakan sebagai lmol TE per g sampel berdasarkan kering.

2.2.4.5. Hydroxyl radical-scavenging activity (HRSA)

Aktivitas antioksidan oleh uji HRSA sebagaimana dijelaskan oleh Meng, Fang, Qin,
Zhuang, dan Zhang (2012). Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer pada 593
nm. Itu hasilnya dinyatakan sebagai %scavenging, dan dihitung sesuai ke persamaan
berikut:

Scavenging activity (%) = [1- (Asampel /Acontrol) ] x 100%

2.2.5. Analisis kolorimetri

Warna bubuk mikroenkapsulasi diukur menggunakan kolorimeter (CR400 / 410,

Minolta Co. Ltd., Osaka, Jepang), menurut sistem CIELAB (L* a*, b*), di mana L*
menunjukkan cahaya (0 = hitam dan 100 = putih), a*dan b* adalah koordinat untuk hijau
(a*) / merah (+ a*), dan biru (b*) / kuning (+ b*). Instrumen telah dikalibrasi
-1
menggunakan piring keramik putih. Sudut rona (H* = tan b*/ a*) dihitung, yang
menunjukkan warna sampel (0 atau 360° = merah, 90° = kuning, 180° = hijau, dan 270° =
biru), sementara Chroma (C* = [a+2 + b+2] 1/2) menunjukkan kemurnian atau saturasi warna.

2.2.6. Penentuan sifat fisik bubuk mikroenkapsulasi

Kadar air dari sampel dihitung dari penurunan massa sampel setelah dipanaskan pada
suhu 105°C menurut AOAC(1990). Aktivitas air (Aw) diukur dengan pembacaan langsung
pada elektronik meter (Aqualab 3TE-Decagon, Pullman, USA) menurut AOAC (1990).

Menurut Cano-Chauca et al.(2005) kelarutan ditentukan dengan beberapa modifikasi. 1

g sampel dan 100 mL suling air dicampur dalam gelas kimia dan diaduk dalam pengaduk
magnetik (Lab Disc, IKA) selama 5 menit. Kemudian, cairannya ditempatkan dalam
tabung dan disentrifugasi pada 3000 g (Thermo 16R, Thermo Scientific) untuk 15 menit.
25 mL alikuot supernatan dipindahkan ke gelas kimia 50 mL dan dikeringkan dengan oven
pada suhu 105°C sampai berat konstan. Kelarutan (%) dihitung berdasarkan perbedaan
berat.

Untuk penentuan hygroscopicity, 1 g sampel bubuk ditimbang dan ditempatkan dalam

wadah kaca kedap udara dengan jenuh NaCl (kelembaban relatif 75%), dan disimpan
dalam inkubator ruang (411 / FDP Teknologi Etik, Brasil) pada 25°C (Tonon, Brabet, &
Hubinger, 2008). Setelah 1 minggu, sampel ditimbang setiap 24 jam sampai tercapai
keseimbangan. Higroskopisitas dinyatakan sebagai persentase (%) atau 1 g kelembaban
teradsorpsi per 100 g padatan kering (g / 100 g) (Caparino et al., 2012).

Suhu transisi gelas (Tg) dari sampel ditentukan oleh diferensial pemindaian kalorimetri
(DSC) (DSCQ2000, Instrumen TA, New Castle, DE). Sekitar 8 mg sampel ditempatkan di
panci aluminium kedap udara (Tzero, Instrumen TA). Panci aluminium kosong digunakan
sebagai acuan. Gas pembersih yang digunakan yaitu nitrogen ultra-murni (aliran 50 mL /
menit). Suhu berkisar antara 80°C hingga 120°C pada tingkat pemanasan 40°C /min. Nilai
Tg dihitung menggunakan TA Universal perangkat lunak Analisis 5.5.3.
2.2.7. Morfologi partikel dan ukuran distribusi

Struktur partikel diuji mikroskopi elektron (JSM 6060, JEOL Ltd., Jepang). Sampel
dipotong menggunakan tape karbon dua sisi, logam dengan karbon, dan selanjutnya
diperiksa dalam mikroskop yang beroperasi pada tegangan 8 kV dan 300 perbesaran untuk
bubuk freeze-dried, dan 2000 untuk bubuk spray-dried.

Distribusi ukuran partikel ditentukan dalam analisaukuran partikel dengan difraksi laser
(CILAS 1180, Compagnie Industrielle de Laser, Perancis). Sampel terdispersi dalam
alkohol isopropil pengadukan konstan dan disonikasi menggunakan peralatan USG selama
30 detik. Diameter rata-rata (D [4, 3]) dan diameter volume yang setara pada 10%, 50%,
dan 90% volume kumulatif ditentukan. Distribusi ukuran partikel dalam bubuk (rentang)
dihitung menggunakan persamaan berikut: Span = [(d90 - d10) / d50] (Fernandes, Borges, &
Botrel, 2014).

2.2.8. Analisis statistik

Data untuk uji ANOVA, dan untuk tes perbandingan Tukey's, menggunakan program
SAS 9.3.