Setelah pretreatment, selulosa dihidrolisis menggunakan selulase.

produksi selulase antara jamur adalah

umum, dan dapat ditemukan di berbagai macam spesies, termasuk Trichoderma, Penicillium dan
Aspergillus. Sebuah buku yang diedit oleh Harman dan Kubicek menyajikan penelitian yang paling
penting pada Trichoderma dan Gliocladium (Harman dan Kubicek 1998). Dibandingkan dengan jamur,
bakteri selulolitik menghasilkan jumlah rendah enzim cellulolytically aktif. Sebuah karya perintis
dilakukan oleh Mandels dan Sternberg (1976), yang dikumpulkan dan disaring 14.000 jamur. Dari jumlah
besar ini organisme, yang paling efisien selulosa-hydrolysing organisme adalah jamur Trichoderma. Ini
menghasilkan campuran kompleks enzim selulase. Enzim ini berbagi fitur umum, yang merupakan
kekhususan mereka terhadap obligasi β-1,4-glukosida. Tindakan dari selulase adalah sinergis, yang
berarti bahwa aktivitas gabungan dari enzim lebih besar dari jumlah dari masing-masing komponen.
selobiosa yang larut dalam air dibebaskan dibelah menjadi dua molekul glukosa oleh enzim β-
glukosidase. Tegasnya, β-glukosidase tidak selulase sebuah; Namun, ia memiliki peran yang sangat
penting dalam hidrolisis karena selobiosa adalah inhibitor produk akhir dari banyak selulase (Mandels
dan Reese 1963; Sternberg et al 1977.). Di sisi lain, β-glukosidase dihambat oleh glukosa (Holtzapple et
al. 1990). Karena enzim dihambat oleh produk akhir, build-up dari setiap produk ini secara negatif
mempengaruhi hidrolisis selulosa. Kegiatan selulase maksimum untuk selulase paling fungally berasal
dan -glukosidase terjadi pada 50 ± 5 ° C dan pH 4,0-5,0 (Saddler dan Gregg 1998). Namun,
Proses hidrolisis enzimatik dapat dirancang dalam berbagai cara. Langkah-langkah berikut pretreatment, yaitu
hidrolisis dan fermentasi, dapat dijalankan sebagai hidrolisis terpisah dan fermentasi (SHF) atau sakarifikasi
sebagai simultan dan fermentasi (SSF). Keuntungan dari SHF adalah kemampuan untuk melaksanakan setiap
langkah di bawah kondisi yang optimal, yaitu hidrolisis enzimatik pada 45-50 ° C dan fermentasi pada sekitar
30 ° C. Hal ini juga memungkinkan untuk menjalankan fermentasi secara kontinyu dengan daur ulang sel.
Kelemahan utama dari SHF adalah bahwa gula dirilis menghambat enzim selama hidrolisis. Dalam SSF,
glukosa yang dihasilkan segera dikonsumsi oleh mikroorganisme fermentasi, misalnya Saccharomyces
cerevisiae (ragi roti biasa), yang menghindari penghambatan produk akhir dari-glucosidase. Etanol yang
dihasilkan juga dapat bertindak sebagai inhibitor dalam hidrolisis tetapi tidak sekuat selobiosa atau glukosa.
Keuntungan lain dari SSF dibandingkan dengan SHF adalah integrasi proses diperoleh ketika hidrolisis dan
fermentasi dilakukan dalam satu reaktor, yang mengurangi jumlah reaktor diperlukan Suhu sekitar 35 ° C di
SSF adalah kompromi, tetapi perkembangan strain ragi tahan panas adalah diharapkan dapat meningkatkan
kinerja SSF. Kelemahan utama dari SSF adalah kesulitan dalam daur ulang dan menggunakan kembali ragi
karena akan dicampur dengan residu lignin. Keuntungan sering diklaim adalah pengurangan sensitivitas
terhadap infeksi di SSF (Szczodrak dan Targonski 1989; Wyman et al 1992;. Grohmann 1993). Namun, hal itu
ditunjukkan oleh Stenberg et al. (2000b) bahwa hal ini tidak selalu terjadi. Justru sebaliknya, SSF adalah,

Hasil etanol secara keseluruhan dan tingkat produksi etanol tidak hanya tergantung pada hasil gula, tetapi juga
pada fermentabilitas dari solusi. Hal ini dipengaruhi oleh konsentrasi zat terlarut dilepaskan selama
pretreatment, hadir dalam bahan baku asli, atau dibentuk pada langkah pretreatment. Konsentrasi zat ini dalam
langkah fermentasi tergantung pada konfigurasi langkah-langkah proses sebelumnya. Untuk meningkatkan
konsentrasi gula dalam operasi besar-besaran di masa depan, diasumsikan bahwa seluruh bubur setelah
pretreatment akan digunakan tanpa memperkenalkan langkah-langkah pemisahan yang akan mencairkan aliran
proses. Selanjutnya,

Hal ini tidak mungkin untuk menentukan optimal tunggal untuk hidrolisis enzimatik karena ini bisa berubah
tergantung pada faktor-faktor seperti konten kering peduli, pH, suhu dan waktu tinggal yang diinginkan.
Secara umum, lebih rendah konsentrasi padatan menghasilkan hasil hidrolisis yang lebih tinggi, terutama untuk
konsentrasi bahan kering di bawah 5%. Konsentrasi selulase memiliki dampak yang tinggi pada konversi
selulosa. Ketika kayu lunak dihidrolisis, beban enzim yang sangat tinggi dapat digunakan tanpa tanda-tanda
mendekati saturasi. Tengborg (Tengborg et al. 2001a) menambahkan 220 FPU / g selulosa, untuk SO 2-
impregnated dan uap-dipretreatment cemara, diencerkan sampai 5% bahan kering, tapi masih mencapai
konversi hanya sekitar 78% dari selulosa pada langkah hidrolisis setelah 72 jam.

Suhu dan pH optimum tidak hanya fungsi dari bahan baku dan sumber enzim, tetapi juga sangat tergantung
pada waktu hidrolisis. Hal ini sering menyarankan bahwa suhu 50 ° C adalah optimal (Martín et al 1988;. Krisa
et al 1997;. Saddler dan Gregg 1998). Ini, bagaimanapun, tidak terjadi ketika waktu tinggal dimasukkan
sebagai parameter optimasi (Tengborg et al. 2001a). Ketika waktu tinggal lebih lama dipekerjakan (> 24 jam),
suhu 38 ° C ditemukan menjadi optimal. Demikian juga, pH lebih tinggi (sekitar 5,3) mengurangi perbedaan
antara berbagai suhu. Ini berarti bahwa itu adalah penting tinggi untuk membuat
analisis ekonomi secara keseluruhan saat mengatur kondisi hidrolisis.

Mikroorganisme yang paling sering digunakan untuk fermentasi etanol dalam proses industri adalah S.
cerevisiae, yang telah terbukti sangat kuat dan cocok untuk fermentasi hidrolisat lignoselulosa (Olsson dan
Hahn-Hägerdal 1993). Zymomonas mobilis dapat memfermentasi glukosa menjadi etanol dengan hasil yang
lebih tinggi, karena produksi kurang biomassa, tetapi kurang kuat (Rogers et al 1979;. Lawford dan Rousseau
1998). Sejak hidrolisat lignoselulosa mengandung pentosa, yang tidak mudah difermentasi oleh
mikroorganisme ini, beberapa upaya untuk secara genetik insinyur S. cerevisiae (Walfridsson 1996;. Tonn et al
1997), Z. mobilis (. Lawford et al 1997) dan bakteri Escherichia coli ( Ingram et al. 1997) telah dilakukan.
Meskipun kemajuan signifikan telah dibuat ini pada dasarnya masih pada tahap laboratorium.

Sejak hidrolisat kayu lunak mengandung lebih mannose dari xylose, kebutuhan organisme xylose-fermentasi
kurang saat ini bahan baku yang digunakan. Mengenai hidrolisat kayu lunak, S. cerevisiae memiliki
keunggulan besar atas Z. mobilis, karena S. cerevisiae fermentasi mannose dan, setelah adaptasi, juga
galaktosa. SSF juga telah dilakukan dengan menggunakan ragi tahan panas (Szczodrak dan Targonski 1988;
Spindler et al 1989a;.. Ballesteros et al 1991), dan ragi selobiosa-fermentasi (Spindler et al 1989b;.. Spindler et
al 1992).

Ketika kayu digunakan sebagai bahan baku, baik SHF dan SSF biasanya proses yang cepat, sehingga hasil
yang tinggi etanol. Kayu lunak, dan terutama cemara, berperilaku berbeda. Jika pretreatment uap dilakukan
dalam satu langkah, SSF memiliki beberapa keuntungan, seperti hasil yang lebih tinggi dari etanol dan
produktivitas yang lebih tinggi. Ketika SHF dan SSF dari SO 2-impregnated dan uap-pretreated (215 C, 5
menit) cemara dibandingkan dengan menggunakan konten materi yang sama kering (5%) dan enzim dosis (21
FPU / g selulosa), hasil etanol secara keseluruhan adalah 60% dari teoritis untuk SSF dan 40% untuk SHF.
Ketika konsentrasi enzim meningkat menjadi 32 FPU / g selulosa, hasil etanol keseluruhan di SSF adalah 280 l
/ bahan baku ton metrik, sesuai dengan 68% dari teoritis berdasarkan isi dari gula heksosa dalam bahan baku
(Stenberg et al. 2000a). Namun, ini mungkin berubah selama dua-tahap pretreatment. Soderstrom et al. (2002a,
b) tidak menemukan perbedaan yield etanol secara keseluruhan ketika pengujian dua tahap pretreatment pohon
cemara dengan SHF dan SSF. Ini harus, bagaimanapun,

Apakah SHF atau SSF digunakan untuk menghasilkan etanol, beberapa isu penting adalah kinerja dan produksi
biaya selulase. Hari ini, selulase diproduksi oleh sejumlah kecil perusahaan enzim besar, misalnya Novozymes
dan Genencor, dalam jumlah kecil untuk aplikasi selain hidrolisis selulosa. Ini akan diperlukan untuk
mengembangkan enzim yang lebih efektif, baik dengan seleksi atau dengan menggunakan alat genetik, dan
untuk menurunkan biaya produksi. Yang terakhir ini meliputi produksi di lokasi enzim menggunakan sumber
karbon yang tersedia dalam proses produksi etanol. Untuk kayu lunak, yang mungkin sangat baik menjadi
fraksi pentosa, yang merupakan sekitar 7% dari bahan baku dan yang tidak dapat difermentasi oleh ragi roti
normal. Szengyel et al. (Szengyel 2000; Szengyel et al. 2000) menyelidiki kemungkinan menggunakan
berbagai sumber karbon berdasarkan cemara uap-pra-perawatan untuk produksi selulase menggunakan
Trichoderma reesei RUT C30. Mereka menemukan bahwa adalah mungkin untuk menggunakan baik kayu
lunak pretreated atau aliran cairan untuk produksi enzim meskipun aktivitas enzim maksimum yang diperoleh
adalah agak rendah. Volatil dalam aliran cair terbukti menghambat jamur menunjukkan bahwa penggunaan
aliran stillage, di mana volatil telah dihapus oleh distilasi, harus sesuai untuk produksi enzim.