18 TIP Rev. Esp.Cienc.Cuím.Biol. Vol.7, No.

MENGULAS ARTIKEL

DR © TIP Jurnal Khusus dalam Ilmu Kimia-Biologi, 7 (1): 18-25, 2004

SELULOSA BAKTERI PADA PTGLUCONACETOBACTER

XYLINUM: BIOSYNTHESIS DAN APLIKASI

Juan Luis Chávez-Pacheco, Suri Martínez-Yee,

Martha Contreras-Zentella dan Edgardo Escamilla-Marván *
Dept. Biokimia, Institut Fisiologi Seluler, UNAM. Kotak Pos 70-242,
CP 04510, Ciudad Universitaria, México, DF E-mail: eescami@ifc.unam.mx

RINGKASAN
Selulosa adalah molekul organik yang paling melimpah di alam dan sangat penting di tingkat industri; itu disintesis oleh
berbagai organisme, termasuk tumbuhan, alga, jamur, bakteri, dan hewan. Gluconacetobacter xylinum merupakan
bakteri dengan kapasitas penghasil selulosa tertinggi dan merupakan organisme model dalam penelitian proses yang
mengatur biosintesis polimer. Dokumen ini menawarkan tinjauan kemajuan dalam memahami proses sintesis selulosa,
karakteristik khusus selulosa bakteri sebagai sumber alternatif selulosa nabati, dan aplikasi bioteknologinya.
Kata kunci: Biosintesis selulosa, selulosa bakteri, Gluconacetobacter xylinum.

ABSTRAK
Selulosa adalah molekul organik paling melimpah di alam dan sangat penting untuk industri; itu disintesis oleh berbagai
organisme, termasuk tumbuhan, alga, jamur, bakteri dan hewan. Gluconacetobacter xylinum merupakan bakteri dengan
laju produksi selulosa tertinggi dan merupakan organisme model dalam penelitian biosintesis polimer. Makalah ini
menawarkan tinjauan kemajuan dalam pemahaman proses sintesis selulosa, karakteristik khusus dari selulosa bakteri
sebagai sumber alternatif selulosa nabati dan aplikasi bioteknologinya.
Kata kunci: Biosintesis selulosa, selulosa bakteri, Gluconacetobacter xylinum.

PENGANTAR 1) asal nabati, dari tanaman berkayu (lebih banyak

Selulosa adalah molekul alami yang paling digunakan dan penting di tingkat industri)

L melimpah, 1011 hingga 1012 ton diproduksi

setiap tahun dari sumber yang berasal dari
tumbuhan. Polimer ini adalah komponen
struktural utama dinding sel tumbuhan.
2) dari organisme dari kerajaan yang berbeda: Jamur
(Dictyostelium),

Catatan: Artikel diterima pada 22 Maret 2004 dan diterima

Organisme yang termasuk dalam kerajaan yang pada 14 Juni 2004.
berbeda mampu mensintesisnya. Selulosa adalah bahan Monera (Agrobacterium, Rhizobium,
baku serbaguna: itu adalah bahan konstruksi, pembuatan Gluconacetobacter),
serat tekstil dan pembuatan kertas, selain itu, turunannya Hewan (Tunicidae);
(ester, asetat, nitrat) terlibat dalam berbagai proses 3) melalui sintesis enzimatik in vitro1,2; dan
industri.
4) Sintesis kimiawi in vitro dari turunan glukosa
berbensil 3.
Saat ini selulosa dapat diperoleh dari berbagai sumber:

Sintesis in vitro dengan reaksi kimia

memungkinkan diperolehnya jumlah minimum
 Juni 2004 Chávez-Pacheco, JL dkk.
polimer, peningkatannya dapat menjadikannya
sebagai alternatif untuk selulosa nabati. Selulosa
bakteri (CB) karena kemurnian dan struktur
kristalnya menonjol sebagai sumber alternatif selain
yang berasal dari tumbuhan. Dalam ulasan ini kami
menyajikan kemajuan dalam biosintesis CB
(biokimia, molekuler dan struktural) dan
relevansinya dalam aplikasi bioteknologi.
Gluconacetobacter xylinum: DIA ORGANISME MODEL
Produksi CB di kerajaan Monera beragam, sintesis
diamati pada spesies dalam genera Achromobacter,
Agrobacterium, Rhizobium, Sarcina, Zoogloea dan
: Selulosa bakteri: Gluconacetobacter xylinum
Gluconacetobacter, yang terakhir termasuk G.
xylinum, spesies dengan kapasitas produksi
tertinggi. Bakteri ini adalah pola dasar untuk studi
biogenesis CB, karena produknya memiliki
kemurnian tinggi dan memiliki struktur yang mirip
dengan asal tumbuhan4. Keuntungan nyata untuk
manipulasi dan studi proses biosintesis telah
membuat G. xylinum model yang unik.
Gluconacetobacterxylinum (dahulu Acetobacter
xylinum) 5, adalah bakteri Gram negatif yang termasuk
dalam famili Acetobactereaceae; aerobik ketat yang
melakukan oksidasi tidak lengkap berbagai gula dan
alkohol (proses yang dikenal sebagai fermentasi
oksidatif). Habitat aslinya adalah buah dan sayur dalam
proses pembusukan; Ia mampu menghasilkan CB pada
media cair dan padat dengan membentuk "film" atau
"krim" di permukaan.
Film CB bekerja sebagai mekanisme "pelampung",
memungkinkan G. xylinum berada di antarmuka
udara / cairan agar lebih mudah mendapatkan O2
yang diperlukan untuk pertumbuhannya. Film
adalah penghalang fisik yang melindungi bakteri
dari radiasi UV, meningkatkan kemampuan untuk
menjajah substrat, dan sifatnya yang sangat
higroskopis memungkinkannya untuk
mempertahankan kelembapan yang mencegah
substrat mengering6.
Kondisi tumbuh
Budidaya G. xylinum untuk produksi selulosa
dilakukan dalam kondisi statis seperti dalam
produksi makanan penutup Filipina nata de coco7
atau dalam kultur terguncang untuk tujuan
bioteknologi8,9. Kisaran suhu optimal untuk
tanaman adalah 28-30 ° C, meskipun produksi
berlangsung pada 20 hingga 35 ° C, pH media
kultur dapat bervariasi dari 4,0 hingga 6,0, pH
19
optimum tergantung pada menghasilkan regangan
10.
Komposisi media kultur bervariasi sesuai dengan
strain yang digunakan dalam sistem, karbohidrat
merupakan sumber karbon yang cukup untuk
sintesis CB, produksi CB dilaporkan dalam media
yang mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa,
laktosa, manitol11, 12; bakteri dapat mensintesis
glukosa de novo dari asam laktat atau asam
suksinat. Ekstrak ragi merupakan sumber nitrogen
yang paling banyak digunakan untuk pertumbuhan
G. xylinum; pepton, polipepton, tripton, cairan
jagung, dan
amonium
sulfat juga
digunakan dalam produksi CB. Penambahan
natrium atau kalium fosfat umum terjadi pada
perubahan pH buffer, dan penambahan magnesium
sulfat atau klorida telah dilaporkan11,12.
Masa inkubasi tergantung pada sistem kultur, periode
kultur terguncang selama 24 hingga 72 jam digunakan
untuk produksi. Kultur statis ditandai dengan periode
pertumbuhan yang lama mulai dari satu hingga dua
minggu.
SELULOSA BAKTERI
Selulosa dari sumber manapun, termasuk CB, adalah
polimer dari residu glukosa yang secara kovalen
dihubungkan antara karbon 1 dan 4 (β1-4) membentuk
rantai lurus. Rantai linier dari asosiasi polimer
(mengkristal) dengan ikatan hidrogen dan gaya Van der
Waals. Asosiasi rantai (setidaknya 10) membentuk
struktur yang disebut selulosa "mikrofibril" (Gambar 1).
Dua karakteristik khusus untuk mikrofibril CB:
polaritasnya searah dan ketebalannya bervariasi.
Mekanisme kristalisasi mikrofibril pada G. xylinum
dapat memunculkan dua aloform selulosa: jika
mikrofibril diorientasikan secara paralel, selulosa I
disintesis, sedangkan jika susunan mikrofibril antiparalel,
diperoleh selulosa II.
Aloform yang dominan di alam adalah selulosa I, namun
dalam beberapa kondisi selulosa II disintesis; dia
Perlakuan kimiawi terhadap selulosa I atau II (proses
mercerisasi industri) menimbulkan aloform lain yang
disebut selulosa III dan IV13 yang dibedakan oleh
struktur kristalnya. Mikrostruktur CB terdiri dari
mikrofibril dengan diameter 4 hingga 7 nm dan derajat
polimerisasi 2.000 hingga 14.000 molekul glukosa14,15.
20
Mikrofibril pada gilirannya mengkristal menjadi paket
dan pita, yang mencapai ketebalan 1 sampai 9 µm dan
membentuk struktur ikatan silang ekstensif yang
distabilkan oleh ikatan hidrogen16. Kondensasi pita
menimbulkan struktur tiga dimensi atau struktur makro
CB.
Struktur makro CB sepenuhnya bergantung pada kondisi
budaya; Di bawah kondisi kultur statis, "film" atau
"krim" dihasilkan pada antarmuka udara / cairan dari
media kultur. Mikrofibril yang terus menerus dilepaskan
oleh bakteri, mengkristal menjadi pita, yang tumpang
tindih membentuk bidang paralel17. Dalam kultur
terguncang, tingkat penggumpalan yang lebih rendah
tercapai, jumlah bidang paralel lebih sedikit dan
akibatnya butiran yang tidak teratur, rantai CB18 berserat
atau bercabang terbentuk (Gambar 2).
a) Budaya statis
b) Budaya yang gelisah
Gambar 2. Struktur Makro Panel CB a) Film CB dalam kultur statis, b) Butiran
CB dalam kultur terguncang.
Karakteristik selulosa bakterial Secara umum, CB
stabil dalam larutan basa tetapi rentan terhadap
hidrolisis alkali dalam kondisi drastis (1 M NaOH,
TIP Rev. Esp.Cienc.Cuím.Biol. Vol.7, No.1
170 ° C). Berbagai zat pengoksidasi dapat
mempengaruhi sifatnya dengan memutus rantai
dan mengubah strukturnya.
Mekanisme sintesis CB memberikan kemurnian
lebih tinggi daripada yang ada di sumber nabati
manapun (Tabel I) 19, yang memberikan
karakteristik yang hanya ada dalam selulosa asal
bakteri: tingkat kristalisasi tinggi, ketahanan tinggi
terhadap tekanan, elastisitas dan daya tahan.
Selulosa memiliki kapasitas yang tinggi untuk
menyerap air dan karena diameter mikrofibril yang
lebih kecil, CB memiliki luas permukaan yang
lebih besar daripada yang terdapat pada selulosa
kayu. Selain sifat fisikokimia dari kepentingan
industri ini, CB secara metabolik inert, tidak
beracun, dan tidak menyebabkan reaksi alergi pada
kontak, sifat yang sangat penting untuk tujuan
biomedis dan kosmetik20.
Komposisi (%)
Sumber Selulosa Hemiselulosa Lignin
Extrbertindak
Bakteri 98 0 0 0
Kapas 95 dua satu 0.4
Henequen 78 4-8 13 4 Ixtle 73 4-8 17 2
Kayu 43-47 23-35 16-24 2-8
Bagasse 40 30 dua puluh 10
Tabel I. Kandungan selulosa dari sumber tumbuhan yang berbeda
dibandingkan dengan selulosa bakteri. Diadaptasi dari Klemm et al.,
200219
BIOGENESIS SELULOSA
Selama lebih dari tiga dekade, kelompok penelitian
yang berbeda telah bekerja untuk mengkarakterisasi
enzim yang bertanggung jawab untuk sintesis rantai
CB dan bagaimana rantai ini diekskresikan dan
dirakit untuk membentuk sebuah film. Kelompok
Hestrin21 adalah pelopor dalam pekerjaan dengan
G. xylinum, menetapkan kondisi budidaya yang
optimal dan jalur dasar dalam metabolisme karbon;
Selanjutnya, studi Colvin22 meletakkan dasar-dasar
pada aspek morfologi dan struktural dari film CB
dan kelompok Glaser23 menunjukkan bahwa
sintesis CB dikaitkan dengan membran plasma.
Pada tahun 1964, Preston mengusulkan "hipotesis
butiran tersusun" di mana enzim sintetik
membentuk kompleks untuk menghasilkan rantai
glukan bersama-sama; rantai ini berasosiasi sendiri
dalam proses ekstrusi. Kelompok Brown24
mengidentifikasi kompleks ini dalam membran
 Juni 2004 Chávez-Pacheco, JL dkk.
plasma menggunakan teknik cryofracture.
Kompleks terminal G. xylinum menunjukkan
susunan linier dan merupakan tempat ekstrusi
polimer25. Kemajuan terpenting dalam pemahaman
biosintesis CB telah terjadi dalam dua puluh tahun
terakhir.
: Selulosa bakteri: Gluconacetobacter xylinum
Biokimia biosintesis
Untuk biosintesis CB, dua jalur amphibole penting
beroperasi pada bakteri ini: siklus fosfat Pentoses dan
siklus Krebs26. Yang pertama berpartisipasi dalam
oksidasi karbohidrat sedangkan yang kedua
mengoksidasi asam organik. Glikolisis tidak dapat
digunakan karena kurangnya enzim fosfofruktokinase 1,
yang bertanggung jawab untuk konversi fruktosa-6-fosfat
menjadi fruktosa-1,6-bifosfat. Bakteri ini mampu
menghasilkan glukosa de novo dari substrat seperti
gliserol, sitrat, dan zat antara lain dari siklus Krebs
melalui glukoneogenesis dan dapat mengubah heksosa
fosfat (fruktosa, manosa) menjadi glukosa6-fosfat, untuk
sintesis polisakarida27.
Jalur biosintesis CB di G. xylinum dipahami
dengan baik: produksi polisakarida dilakukan dari
glukosa yang diangkut dari luar atau diperoleh dari
sumber internal (Lihat Gambar 3), yang
difosforilasi menjadi glukosa-6-fosfat dengan cara
enzim glukokinase. Selanjutnya, glukosa-6-fosfat
diubah menjadi glukosa-1-fosfat oleh enzim
fosfoglukomutase; UDPGpyrophosphorylase dari
glukosa-1-fosfat dan dengan adanya uridine
triphosphate (UTP) mengkatalisis produksi UDP-
glukosa; Nukleotida gula ini adalah substrat untuk
enzim selulosa sintase (CS) 28 (Gambar 3).
Ada kontroversi tentang cara penggunaan media
oleh CS; satu hipotesis menyiratkan hubungan
21
UDPglucose dengan lipid membran plasma29,30
sedangkan varian lain31 menganggap bahwa
prekursor terlarut berinteraksi langsung dengan CS.
Tidak ada data yang pasti untuk memvalidasi
proposal ini.
Reaksi global dalam sintesis CB melibatkan pengeluaran
dua ikatan energi
tinggi untuk setiap
residu glukosa yang
ditambahkan ke polimer (proses intensif energi), yang
menghabiskan hingga 10% ATP yang dihasilkan oleh
metabolisme. Kontribusi energi untuk sintesis berasal
dari metabolisme aerobik, di mana rantai pernapasan
berperan penting dalam sintesis CB.
Fluks karbon menuju CB atau siklus pentosa tampaknya
diatur oleh keadaan energi seluler, titik krusialnya adalah
enzim glukosa-6-fosfat dehidrogenase; dalam G. xylinum
terdapat dua isoenzim, salah satunya tidak aktif pada
konsentrasi ATP yang tinggi dan mendukung aliran
karbon menuju sintesis polisakarida32.
Gen untuk biosintesis
Pemurnian dan identifikasi CS memfasilitasi identifikasi
gen yang mengkodekannya. Kompleks CS terdiri dari
empat subunit protein yang disebut A, B, C dan D, yang
dikodekan dalam operon bcs33 (sintesis selulosa bakteri)
pada kromosom G. xylinum.
Analisis fungsional menunjukkan bahwa subunit A (83
kDa) mengandung situs katalitik enzim34. Analisis
komparatif dengan subunit katalitik dari CS yang berbeda
menunjukkan kesamaan yang lebih besar dari 70% 35
dalam urutan asam amino dari enzim ini. Fungsi subunit
B (90 kDa) adalah untuk mengikat regulator alosterik
positif, asam diguanilikik siklik bis (2 ', 5') (c-di-GMP)
dan dengan demikian meningkatkan laju sintesis polimer.
22 TIP Rev. Esp.Cienc.Cuím.Biol.
Gambar 3. Sintesis selulosa dan jalur metabolisme di G. xylinum. CS, sintase
selulosa; FBP, fruktosa bifosfatase; FC, fruktokinase; F1FC, fruktosa-1-P
kinase, FGI, fosfoglikomerase; FGM, fosfoglukomutase; FTS,
fosfofruktotransferase; GC, glukokinase; GP, glukosa menghilang; G6P-DH,
glukosa-6-P dehidrogenase; UGP, uridine diphosphate
glycopyrrophosphorylase.
Subunit C dan D (masing-masing 138 dan 17 kDa), tampaknya
memiliki fungsi struktural. Strain mutan pada gen subunit D
menghasilkan selulosa tipe II, menunjukkan bahwa subunit ini
tidak berpartisipasi dalam sintesis CB tetapi terlibat dalam
proses kristalisasi. Operon kedua telah dilaporkan dalam
genom G. xylinum dengan gen untuk produksi CB36, yang
produk proteinnya berfungsi, dan ulasan rinci tentang biologi
molekuler sintesis selulosa di G. xylinum dan bakteri lain telah
dipublikasikan.35 , 37.
CS adalah protein membran integral, secara keseluruhan, rantai
polipeptida melintasi membran delapan sampai sepuluh kali,
dengan daerah bola yang mengandung situs katalitik.
Penyelarasan CS dengan anggota keluarga β-glikosil
transferase menunjukkan empat residu aspartat yang sangat
kekal dan motif QXXRW. Motif ini diamati pada semua aditif
β-glikosil transferase, yaitu mentransfer lebih dari satu residu
gula pada satu waktu; transferase β-glikosil non-aditif (yang
mentransfer satu residu gula per reaksi) hanya memiliki tiga
residu aspartat yang dilestarikan.
Sifat katalitik enzim telah dievaluasi dalam keadaan terlarut
dan tertanam di membran, dalam kedua bentuk ketergantungan
oleh Mg + 2 diamati. Kisaran pH optimum adalah 7,5 hingga
8,5, suhu optimumnya adalah 30 ° C dan menunjukkan
perilaku kinetik tipe Michaelis-Menten sehubungan dengan
UDP-glukosa (Km = 125 µM). CS dihambat secara kompetitif
oleh uridine 5 fosfat (UTP atau UDP, KI = 14 µM, UMP KI =
71 µM) 26. Keduanya terlarut dan terikat pada membran,
enzim ini sensitif terhadap pengatur alosterik c-di-GMP,
meningkatkan laju reaksi hingga 200 kali lipat26.
Vol.7, No.1
Selain CS, dua gen di hulu operon bcs diperlukan
untuk biosintesis. Yang pertama mengkodekan
endoglikanase β1-4, yang fungsinya akan menjadi
penghentian rantai CB; yang kedua mengkodekan
protein kaya prolin dengan fungsi yang tidak
diketahui. Gangguan kedua gen menyebabkan
hilangnya kapasitas sintesis in vivo tetapi tidak
secara in vitro38.
Faktor protein lain yang terkait dengan sintesis
adalah protein pengikat c-di-GMP39, yang
dianggap mengatur konsentrasi pengatur alosterik
dalam bentuk bebas dan pada gilirannya
menyalurkannya ke CS. Ada kontroversi mengenai
keberadaan protein ini, ada kemungkinan
merupakan produk degradasi dari subunit B CS,
yang juga mengikat c-di-GMP, dilema ini belum
teratasi38.
Akhirnya, gen yang mengkode sintesis dan
degradasi dari pengatur alosterik c-di-GMP
memiliki peran yang relevan. Genom G. xylinum
mengandung tiga operon cdg yang mengandung
gen pdeA dan gen dgc, yang masing-masing
mengkode fosfodiesterase A dan diguanylate
cyclase.
Siklase diguanylate mengkatalisis sintesis c-di-
GMP dari GTP dan fosfodiesterase A berpartisipasi
dalam degradasi. Sangat menarik bahwa keduanya
terletak dalam operon yang sama40 mengingat
keduanya melakukan fungsi enzimatik yang
berlawanan. Selain pdeA dan dgc, operon cdg1
mengandung gen cdg1a yang mengkodekan
aktivator transkripsi teregulasi O2 dan gen cdg1d
yang mengkode protein dengan fungsi yang tidak
diketahui. Gangguan pada gen dgc mengurangi
produksi in vivo, menunjukkan pentingnya
aktivator. Peran diguanylate cyclase dan
phosphodiesterase A dalam laju sintesis kofaktor
dijelaskan di bawah ini.
Pengaturan proses sintesis
Mekanisme yang mengatur laju sintesis G. xylinum
sangat khusus, karena nukleotida siklik baru adalah
pengatur alosterik41 dari enzim CS. Kehadiran c-
di-GMP dalam sistem in vitro mampu mempercepat
laju sintesis dengan faktor hingga 200 kali dan
inaktivasi in vivo sangat mengurangi polimerisasi
glukan. Konsentrasi bersih c-di-GMP dikontrol
oleh sintesis dan degradasinya. Diguanylate cyclase
mensintesis c-di-GMP dari dua molekul guanosine
triphosphate (GTP); Proses degradasi
 Juni 2004 Chávez-Pacheco, JL dkk. 23

: Selulosa bakteri: Gluconacetobacter xylinum keberadaan dua

membutuhkan dua enzim: fosfodiesterase A, yang
mengkatalisis pecahnya cincin c-di-GMP, menghasilkan
molekul linier, dan fosfodiesterase B, yang mengkatalisis
pembelahan dinukleotida linier menjadi dua molekul 5
'guanosin monofosfat.
Dalam proses ini, O2 menunjukkan peran pengaturan
pada sintesis CB, karena baik siklase diguanilat dan
fosfodiesterase A mengandung domain penginderaan O2.
Phosphodiesterase A mengandung pada N-terminusnya
domain PAS dengan gugus heme dan pada C-terminus
domain phosphodiesterase. Domain PAS didistribusikan
secara luas dan berpartisipasi dalam transduksi sinyal. Di
antara sinyal yang dideteksi domain PAS adalah:
oksigen, cahaya, potensi redoks, dll. Domain PAS dari
fosfodiesterase A homolog dengan yang ada dalam
protein penginderaan oksigen seperti FixL. Kelompok
heme PDEA bisa dalam dua bentuk: oxyheme atau
deoxyheme tergantung pada ada atau tidak adanya O242
terkait.
Dengan adanya O2, bentuk oxyheme menurunkan
aktivitas fosfodiesterase dan akibatnya meningkatkan
konsentrasi bersih c-di-GMP sementara dengan tidak
adanya O2, bentuk deoksiam mengaktifkan enzim dan
akibatnya meningkatkan degradasi aktivator,
menurunkan dengan demikian, laju sintesis. Sistem
pengaturan ini menghubungkan sintesis CB dengan
keadaan energi, bergantung pada fosforilasi oksidatif,
mempertahankan kecepatan proses polimerisasi sesuai
dengan metabolisme sel, melalui mekanisme di mana
aktivitas diguanylate cyclase terkait dengan proses
dependen lainnya. GTP sebagai sintesis protein atau
asam nukleat. Di sisi lain, O2 sangat penting untuk
fosforilasi oksidatif, diperlukan untuk sintesis ATP yang
diperlukan dalam sintesis CB.
pusat katalitik
dalam enzim diasumsikan43.
CB adalah polimer glukosa yang residu di
sekitarnya diputar 180 ° terhadap satu sama lain;
perubahan orientasi pada monomer ini
menyebabkan masalah torsi pada katalisis. Untuk
memecahkan masalah torsi, Saxena43,44
mengusulkan model "dua pusat katalitik" yang
bekerja untuk transferase β-glikosil aditif lainnya
(seperti kitin dan sintase hyaluron).
Model dua pusat katalitik didasarkan pada analisis
kelompok hidrofobik, yang mengidentifikasi dua
domain dalam CS: domain dengan tiga
karakteristik residu aspartat dari aditif β-glikosil
transferase dan domain kedua dengan residu
aspartat diikuti oleh domain katalitik QXXRW .
Arsitektur domain ganda memungkinkan model di
mana, dua pusat katalitik berfungsi untuk
menambahkan dua molekul UDP-glukosa per
reaksi, masing-masing pusat berorientasi 180 °
terhadap satu sama lain memungkinkan sintesis
polimer tanpa masalah puntiran. Meskipun
modelnya layak dan tampaknya menjadi perantara
lipid untuk pengiriman ke CS. Meskipun model
memperlihatkan kedatangan substrat ke CS,
ekstrusi polimer memerlukan penjelasan. a) Situs
katalitik terletak di sitoplasma,
Model IV. Asosiasi glikosil-transferase.

MEKANISME SINTESIS DAN EKSTRUSI CB

Katalisis dalam sintase selulosa
Mekanisme aksi SC penuh dengan spekulasi dan
kontradiksi, berbagai hipotesis telah dirumuskan atas
data yang dikumpulkan. Pada awalnya, diasumsikan
bahwa rantai CB disintesis dari ujung reduksi D-glukosa,
tetapi saat ini dianggap berlanjut melalui ujung non-
pereduksi31. Dinyatakan juga bahwa prekursor UDP-
glukosa ditransfer melalui partisipasi lipid dari membran
plasma30, meskipun dianggap lebih layak karena
ketersediaannya, transfer langsung dari sitoplasma.
Akhirnya, kontroversi terbaru dalam CS dan transferase
β-glikosil aditif lainnya terletak pada hipotesis bahwa
24 TIP Rev. Esp.Cienc.Cuím.Biol. Vol.7, No.1

Ini adalah model yang paling kompleks, ini melibatkan dua

transferase β-glikosil, satu di sisi sitoplasma (non-aditif) dan
yang lainnya ekstraseluler (aditif). Model menunjukkan bahwa
glukosa pertama-tama menambahkan senyawa lipid (lipidyl-
UDP-Glukosa) di sisi sitoplasma membran sel, zat antara lipid
bergerak ke sisi ekstraseluler membran sel, di mana transferase
aditif mengkatalisis polimerisasi, dengan cara ini, a) dua situs
katalitik diperlukan, satu terletak di sisi sitoplasma dan
ekstraseluler lainnya, b) polimerisasi berlangsung

memecahkan mekanisme katalitik, jalur ekstrusi polimer tetap

menjadi misteri.

Model sintesis dan ekstrusi

Untuk mengatasi cara CB disintesis dan kemudian
diekstrusi, harus dipertimbangkan bahwa CS adalah
enzim membran integral dan oleh karena itu
sintesisnya dikaitkan dengan membran plasma.
Polimer harus melintasi membran plasma dan muncul
di ruang ekstraseluler di mana, melalui ikatan
hidrogen, ia bergabung dengan rantai polimer lain
yang membentuk pengaturan kristal. Memperhatikan
tiga tahap
(Polimerisasi, ekstrusi dan kristalisasi), beberapa
model hipotetis dihasilkan untuk menjelaskan proses
kompleks dalam biogenesis CB31.

Model I. Situs katalitik CS berorientasi ke sitoplasma.

Berdasarkan prediksi segmen transmembran dan
ketersediaan substrat, diusulkan bahwa jika
polimerisasi terjadi di sitoplasma, maka: a) terjadi
katalisis di sitoplasma, b) terjadi polimerisasi di sana,
dan c) ekstrusi ia membutuhkan struktur "pori" yang
disediakan oleh CS atau oleh protein lain yang terkait
dengannya (Gambar 4a).

Model II. Situs katalitik CS berorientasi ke ruang ekstraseluler.

Model ini memungkinkan untuk menghindari proses
ekstrusi; Meski data yang ada tidak mendukung,
namun kendala utamanya adalah ketersediaan substrat.
Jadi, a) situs katalitik terletak di ruang ekstraseluler, b)
polimerisasi terjadi di ruang ekstraseluler, dan c) tidak
diperlukan
proses ekstrusi (Gambar 4b). Gambar 4. Model mekanisme sintesis dan ekstrusi CB di G. xylinum. a) Situs katalitik CS
berorientasi sitoplasma, Model III. Katalisis terkait dengan zat antara lipid. Katalisis terkait dengan zat antara lipid, d) Asosiasi
b) Situs katalitik CS berorientasi ke ruang ekstraseluler, c)
Model ini mengusulkan pengikatan UDP-glukosa ke a transferase glikosil.
 Juni 2004 Chávez-Pacheco, JL dkk. 25

menempatkan di ruang ekstraseluler, dan c) ekstrusi tidak bergerak. Gengiflex® dikembangkan untuk
diperlukan (Gambar 4d). memulihkan jaringan periodontal.

Model-model ini dimaksudkan untuk menjelaskan sintesis dan Industri Aplikasi

ekstrusi polisakarida dan juga didalilkan untuk transferase β-
Kosmetik Stabilisasi emulsi, kondisioner,
glikosil lainnya.Kunci dalam memecahkan model yang paling
krim.
tepat untuk proses ini akan berasal dari data yang diperoleh
Generasi kuku palsu.
dari studi kristalografi CS. Setelah menganalisis kemajuan
yang diperoleh selama beberapa dekade di G. xylinum, banyak Tekstil Bahan serapan air tinggi.
di antaranya diekstrapolasi ke pabrik yang lebih tinggi, kami Kilang minyak Bahan untuk penyerapan racun dan
akan meninjau aplikasi CB potensial saat ini dan di masa minyak.
depan.
Kertas Pemulihan dokumen, kertas berkualitas
tinggi. Makanan Aditif makanan, pengemulsi, serat
P.ERSPEKTIF BIOTEKNOLOGI DARI ITU CB Karena
makanan.
kemurniannya yang tinggi dan sifat fisikokimia yang
Maquiladora Komponen suku cadang dan suku
tidak biasa, CB menawarkan berbagai macam cadang.
aplikasi potensial (Tabel II)dua puluh. Dalam 10 tahun Wisata Pakaian olahraga dan perlengkapan
terakhir, setidaknya lima puluh paten terkait sistem produksi berkemah.
dan aplikasi CB telah dibuat.
Penyelidikan Imobilisasi protein dan sel, resin
Membran CB memiliki kapasitas sonik yang tinggi (sifat yang untuk kromatografi.
sebanding dengan film aluminium atau titanium), properti ini Teknologi Diafragma sensitivitas tinggi di
digunakan oleh Sony Corp. dan Ajinomoto (Jepang) untuk mikrofon dan headphone.
membuat diafragma dengan ketepatan akustik yang tinggi Obat Pembuatan "kulit buatan" dalam
(PATEN AS 4,724,164). Pada tahun delapan puluhan, Johnson
terapi luka bakar.
& Johnson mulai menggunakan CB sebagai pembalut jenuh Komponen dalam implan gigi.
cairan untuk tujuan perawatan kulit (PATEN AS 4.655.758),
Tabel II. Aplikasi industri selulosa yang berasal dari bakteri. Diadaptasi
memanfaatkan kapasitas penyerap bahan yang tinggi. dari Krystynowicz dan Bielecki, 2002dua puluh.

Dengan cara yang sama penggunaan CB berserat untuk

pembuatan kertas dengan keawetan dan fleksibilitas yang lebih
besar sedang dipersiapkan oleh perusahaan Mitsubishi Paper
Mills Co. dalam konsorsium dengan Ajinomoto Co (JP
PATENT 63.295.793), karakteristik makalah ini ideal dalam
digunakan sebagai uang kertas atau bahan baku dalam
elaborasi buku10.
Penggunaan CB terbaru telah di bidang kedokteran. Kekuatan
mekanik yang tinggi dari film CB dalam keadaan terhidrasi,
permeabilitasnya terhadap cairan dan gas dan sedikit iritasi
kulit yang disebabkan oleh kontaknya, mendalilkannya sebagai
pengganti kulit dalam terapi luka bakar. Biofill® dan
Gengiflex® adalah produk CB dengan kegunaan luas dalam
bedah gigi dan implan.
Biofill® digunakan dalam kasus luka bakar derajat dua dan
tiga serta bisul45; khasiatnya telah dibuktikan di lebih dari 300
kasus, Biofill® memungkinkan penggunaan antibiotik
mengurangi risiko infeksi; penyerapan yang tinggi
menghindari dehidrasi pada pasien, risiko utama pada luka
bakar. Satu-satunya kelemahan dan kelemahan utamanya
adalah elastisitas terbatas di area tubuh yang sangat mudah
Sebuah grup Jerman telah menghasilkan
BASYC® (untuk akronimnya Bacterial
Synthetized Cellulose), yang merupakan
biomaterial dengan desain tubular yang
ditujukan untuk aplikasi dalam bedah mikro
arteri dan vena46. Kedokteran hewan juga
telah memanfaatkan keunggulan CB dan
Cellumed® telah dikembangkan untuk terapi
ulkus pada kuda47.
KESIMPULAN
Sifat pengemulsi, kohesif dan absorptif, selain
tidak menyebabkan reaksi alergi pada aplikasi
dermal atau dalam pemrosesan makanan,
menjanjikan selulosa bakteri masa depan yang
menjanjikan dalam aplikasi di industri
makanan dan kosmetik. Banyak dari
penggunaannya yang terhambat oleh
ketersediaan dan biaya polimer; titik kritis
untuk eksploitasi sumber daya ini terletak
pada peningkatan tingkat produksi dan
pengurangan biaya. Pembangkitan sistem
26 TIP Rev. Esp.Cienc.Cuím.Biol. Vol.7, No.1

produksi yang efisien akan menjadi dasar untuk mulai Bioteknologi Polandia di. www.biotechnology-pl.com/
mengeksploitasi kualitas sumber daya alam terbarukan science / krystynowicz.html.
21. Hestrin, S. & Schramm, M. Sintesis selulosa oleh A.
ini. xylinum:
persiapan sel kering beku yang mampu
mempolimerisasi glukosa menjadi selulosa.
REFERENSI Biochem. J. 58, 345 (1954).
1. Kobayashi, S., Kashiwa, K. & Shoda, S. Metode novel untuk 22. Colvin, J. & Leppard, G. Biosintesis selulosa oleh
polisakaridesintesis menggunakan enzim: sintesis selulosa in vitro Acetobacter xylinum. Anjing. J. Microbiol. 23, 701-709
pertama melalui jalur nonbiosintetik yang memanfaatkan selulase (1977).
sebagai katalis. J. Am. Chem. Soc. 118, 1677-1678 (1991). 23. Glaser, L. Sintesis selulosa dalam ekstrak bebas sel
2. Lee, J., Brown, R., Kuga, S., Shoda, S. & Kobayashi, S. Perakitan Acetobacter xylinum. J. Biol. Chem.232, 627-636
selulosa sintetis I. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 7425-7429 (1994). (1958).
3. Nakatsubo, F., Kamitakahara, H. & Hori, M. Polimerisasi pembukaan 24. Brown, R., Willison, J. & Richardson, C. Biosintesis
cincin kationik 3,6 D O-benzil-α-D-Glukosa 1,2,4-ortopivalat dan selulosa di Acetobacter xylinum: 1. Visualisasi tempat
sintesis kimia selulosa pertama. J. Am. Chem. Soc. 118, 1677-1678 sintesis dan pengukuran langsung proses in vivo. Proc.
(1996) Natl. Acad. Sci. USA. 73, 4565-4569 (1976).
4. Yamanaka, S., Watanabe, K., Kitamura, N. & Iguchi, M. Struktur dan 25. Kimura S., Chen, H., Saxena, I & Brown, M. Lokalisasi
sifat mekanik lembaran disiapkan dari selulosa bakteri. J. Mater. protein pengikat c-di-GMP dengan kompleks terminal
Sci.24, 3141-3145 (1989). linier Acetobacter
: Selulosa bakteri: Gluconacetobacter xylinum xylinum. J.
5. Yamada, Y, Hoshino, K. & Ishikawa, T. Biosci. Biotechnol. Biochem. Bacteriol. 183, 5668-
61, 1244-1251 (1997). 5674 (2001).
6. Williams, S. & Cannon, R. Peran lingkungan alternatif untuk selulosa 26. Ross, P., Mayer, R. & Benziman, M. biosintesis selulosa
yang diproduksi oleh Acetobacter xylinum. Appl. Mengepung. dan fungsi pada bakteri. Mikrobiol. Wahyu 55, 35-58
Mikrobiol. 55, 2448-2452 (1989). (1991).
7. Budhiono, A., Rosidi, B. & Iguchi, M. Aspek kinetik pembentukan 27. Weinhouse, H. & Benziman, M. Regulasi
selulosa bakteri dalam sistem kultur nata de coco. Karbohidrat Polym. fosfatemetabolisme heksosa di Acetobacter xylinum.
40: 137-143 (1999). Biochem. J. 138, 537-542 (1974).
8. Mormino, R. & Bungay, H. Komposit selulosa bakteri dan pembuatan 28. Swissa, M. et al. Langkah-langkah perantara dalam
kertas dengan bioreaktor disk berputar. Appl. Mikrobiol. Biotechnol. sintesis selulosa di Acetobacter xylinum: studi dengan sel
65: 503-506 (2003). utuh dan preparat bebas sel dari tipe liar dan mutan tanpa
9. Cheng, H., Wang, P., Chen, J. & Wu. W. Budidaya selulosa. J. Bacteriol. 143, 1142-1150 (1980).
Acetobacterxylinum untuk produksi selulosa bakteri dalam reaktor 29. Matthysse, A., Thomas, D. & White, A. Mekanisme
angkutan udara yang dimodifikasi. Biotechnol. Appl. Biochem. 35: sintesis selulosa di Agrobacterium tumefaciens. J.
125-132 (2002). Bacteriol. 177, 1076-1081 (1995).
10. Iguchi, M., Yamanaka, S. & Budhiono, A. Selulosa bakteri - 30. Hans, N. & Robyt, J. Mekanisme biosintesis selulosa
mahakarya seni alam. J. Mater. Sci.35, 261-270 (2000). Acetobacter xylinum: arah pemanjangan rantai dan peran
11. Heo, M. & Son, H. Pengembangan medium yang telah ditentukan intermediet pirofosfat lipid dalam membran sel.
secara kimiawi dan dioptimalkan untuk produksi selulosa bakteri oleh Karbohidrat Res.313, 125-133 (1998).
Acetobactr sp. A9 dalam budaya gemetar. Biotechnol. Appl. Biochem. 31. Brown, R. & Saxena, I. Biosintesis selulosa: Sebuah
36: 41-45 (2002). model untuk memahami perakitan biopolimer. Fisiol
12. Ramana, K., Tomar, A. & Singh, L. Pengaruh berbagai sumber karbon Tanaman. Biochem. 38, 57-67 (2000).
dan nitrogen pada sintesis selulosa oleh Acetobacter xylinum. Dunia J. 32. Benziman, M. & Mazover, A. NAD dan NAD phosphate
Microbiol. Biotechnol. 16: 245-248 (2000). specificglucose-6-phosphate dehydrogenases of
13. Pérez, S. & Mackie, B. Struktur dan Morfologi selulosa. Acetobacter xylinum dan perannya dalam regulasi siklus
Dikonsultasikan di www.cermav.cnrs.fr/cours/smc_anglais/contenu/ pentosa. J. Biochem. Chem. 248, 1603-1608 (1973).
Chap_4 / 4.html, 8 Januari 2003. 33. Wong, H. dkk. Organisasi genetik dari operon sintase
14. Fengel, D. & Kayu, G. Kimia, Ultrastruktur, Reaksi. (Fengeland selulosa di Acetobacter xylinum. Proc. Natl. Acad. Sci.
Wegener Eds.) Walter de Gruyter, New York, AS 66-105 (1989). USA 87, 81308134 (1990).
15. Watanabe, K., Tabuchi, M., Morinaga, Y. & Yoshinaga F. Fitur 34. Saxena, I., Kudlika, K., Okuda, K. & Brown, M.
struktural dan sifat selulosa bakteri yang diproduksi dalam kultur Karakterisasi gen dalam operon sintesis selulosa (operon
agitasi. Selulosa 5, 187-200 (1998). acs) dari Acetobacter xylinum: Implikasi untuk
16. Yamanaka, S. & Ishihara, M. & Sugiyama, J. Modifikasi struktural kristalisasi selulosa J. Bacteriol. 176, 5735-5752 (1994).
selulosa bakteri. Selulosa 7, 213-225 (2000). 35. Romling, U. biologi molekuler produksi selulosa pada
17. Jonas, R. & Farah, L. Produksi dan aplikasi mikroba selulosa.Polym. bakteri. Res. Microbiol. 153, 205-212 (2002).
Degrad. Menusuk. 59, 101-106 (1998). 36. Saxena, I. & Brown, M. Identifikasi sintasegen selulosa
18. Vandanmme, E., De Baets, S., Vanbaelen, A., Joris, K. & De Wulf, P. kedua (acsII) di Acetobacter xylinum. J. Bacteriol. 177,
Peningkatan Produksi Selulosa Bakteri dan Potensi Aplikasinya. 5276-5283 (1995).
Polym. Degrad. Menusuk. 59, 93-99 (1998). 37. Méndez-Ortiz, M. & Membrillo-Hernández, J.
19. Klemm, D., Schmauder, H. & Heinz, T. Selulosa bakteri di Mekanisme molekuler sintesis selulosa pada bakteri. TIP
Biopolimer Vol. 5 Polisakarida dari prokariot (Alexander Steinbüchel Jurnal Khusus dalam Ilmu Kimia-Biologi 7 (1), 26-34
Ed.) Wiley (2002). Dalam pers (2004).
20. Krystynowicz, A. & Bielecki, S. Biosintesis selulosa bakteri dan
aplikasi potensinya di industri yang berbeda. Konsultasi Berita
 Juni 2004 Chávez-Pacheco, JL dkk. 27

38. Delmer, P. Biosintesis selulosa: Waktu yang menyenangkan untuk

bidang studi yang sulit. Annu. Rev. Plant Physiol. Tanaman Mol.
Biol.50, 245-276 (1999).
39. Weinhouse, H., Shapir, S. & Benziman, protein pengikat M. c-di-
GMP, faktor baru yang mengatur sintesis selulosa di A. xylinum.
FEBS Lett. 416, 207-211 (1997).
40. Tal, R. dkk. Tiga operon cdg mengontrol pergantian seluler dari
diGMP siklik di Acetobacter xylinum: organisasi genetik dan
terjadinya domain yang dilestarikan dalam isoenzim. J. Bacteriol. 180,
44164425 (1998).
41. Ross, P., Mayer, R., Weinhouse, H., Amikan, D. & Benziman, M.
Sistem pengaturan asam diguanylic M. Thecyclic dari sintesis selulosa
di Acetobacter xylinum. J. Biol. Chem.265, 18933-18943 (1990).
42. Gilles-González, M. Transduksi sinyal oksigen. IUBMB Life 51,
165173 (2001).
43. Saxena, I., Brown, M., Fevre, M., Geremia, A. & Henrissat, B.
Arsitektur multidomain dari β glikosil transferase: implikasi untuk
mekanisme aksi. J. Bacteriol. 177, 1419-1424 (1995).
44. Brown, R., Saxena, I. & Kudlika, K. biosintesis selulosa di tanaman
yang lebih tinggi. Trends Plant. Sci. 1, 149-156 (1996).
45. Fontana, J., De Souza, A. & Torriani, L. Acetobacter selulosa pelikel
sebagai pengganti kulit sementara. Appl. Biochem. Biotechnol. 24/25,
253-264 (1990).
46. Klemm, D., Schumann, D. & Marsch, S. Pembuluh darah buatan
selulosa buatan bakteri untuk bedah mikro. Prog. Polym. Sci.26, 1561-
1603 (2001).
47. Schmauder, H., Frankenfeldt, K. & Lindner, B. Bakterienzellulose-
einteressantes biomaterial. Bioforum 2000 23, 484-486 (2000).