Cultivo de microorganismos

Cultivo de microorganismos
Para estudiar a los microorganismos
se han diseñado diversos métodos
que permiten cultivarlos en
condiciones artificiales, donde se
controlan las condiciones
experimentales y se tiene un sólo
tipo de microorganismo.
 Cultivo de microorganismos
• Cultivar un microorganismo significa
promover intencionalmente su
desarrollo en medios de cultivo y
condiciones de laboratorio controladas.
• Cultivo: Población de microorganismos
desarrollada en un medio.
 Cultivo puro o axénico
• Es aquel en el que
existe un solo tipo
de microorganismo.
Cultivo mixto
• Es aquel que
presenta una
mezcla (más de 2
especies) de
microorganismos
 Cultivo tipo o cepa de
referencia
• Es el que contiene un genero y especie
conocida de microorganismo debido a que
esta perfectamente caracterizado. Son
proporcionados por laboratorios públicos o
privados (ATCC, CECT,DSMZ) y se emplea
como control en diversos ensayos (validación
de medios, control de equipo, pruebas de
susceptibilidad a antibióticos, etc).
 Colecciones microbianas
• http://www.cect.org/
• http://www.atcc.org/
• http://www.cbs.knaw
.nl/
• http://www.dsmz.de/
• http://www.jcm.riken.
go.jp/
 Definiciones
• Técnica aséptica: conjunto de
procedimientos realizados para prevenir
o evitar la contaminación del material
estéril.
 Medios Líquidos
• Inoculación • Ventajas
Pipetas serológicas Agitación
Asas bacteriológicas Homogenización
Pipeta Pasteur • Desventajas
Hisopo No se detecta
• Desarrollo contaminación
Superficie o a través
de todo el tubo
Medio líquido
 Siembra en medio sólido
• Obtención de
colonias aisladas a
partir de una mezcla
de microorganismos
Colonia: acumulo de microorganismos visibles a simple vista,
que provienen de una sóla célula o acumulo de células que
comparten las mismas características fenotípicas y
genotípicas
Características macroscópicas

FORMA
Características macroscópicas

ELEVACIÓN
Características macroscópicas

BORDES
 Características macroscópicas

TEXTURA COLOR
cremosa Circunscrito a la colonia
membranosa Difunde al medio
Viscosa

Butirosa
Medio sólido (agar inclinado)
• Se emplea para
conservar
microorganismos.
• La inoculación
puede ser por estría
recta o estría
ondulada
Medio semisólido
• Se emplea para ver
la movilidad de los
microorganismos.
• La forma de
inoculación es por
es por picadura
Condiciones para el desarrollo
de los microorganismos
• Temperatura
• Requerimientos de oxígeno
• pH
• Concentración de solutos
 Temperatura

• La temperatura es uno de los parámetros

ambientales más importantes que condicionan
el crecimiento y la supervivencia de los
microorganismos.
• La temperatura afecta a la velocidad de
crecimiento de los microorganismos. Cada
bacteria muestra una curva característica de
tasa de crecimiento en función de la
temperatura, donde podemos distinguir tres
puntos característicos llamados temperaturas
cardinales.
Temperaturas cardinales
 Clasificación en base a su
temperatura óptima de crecimiento
 Temperatura

• Psicrófilos:
microorganismos cuya
temperatura óptima de
crecimiento es <15°C.
• Psicrotolerantes:
Microorganimos que
crecen a 0°C pero cuya
temperatura óptima de
crecimiento es de 20-
30°C. (bacterias, algas ,
hongos, protozoarios).
Mesófilos

• Microorganismos
cuya temperatura
óptima es de 35°C.
Pueden desarrollar
en un intervalo entre
15-42°C.
• Se encuentran en
animales de sangre
caliente acuáticos o
terrestres.
 Termófilos

Son microorganismos
cuya temperatura
óptima de
crecimiento es >
65°C, se desarrollan
en un intervalo de
45-80°C.

Se encuentran en
aguas termales.
Hipertermófilos
• Son
microorganismos
cuya temperatura
óptima de
crecimiento es
>80°C

• Microorganismos
que se encuentran
en Geisers,
chimeneas
submarinas, etc.
 Requerimientos de oxígeno
• Los microorganismos muestran
una gran diversidad en cuanto a su
capacidad para utilizar el oxígeno
libre (O2) durante la respiración
celular.
 Requerimientos de oxígeno
• Aerobios (21% O2 o más)
• Microaerofilicos (2-10 % O2)
• Anaerobios facultativos
• Anaerobios aerotolerantes
• Anaerobios estrictos
 Microorganismos aerobios
• Necesitan el
oxígeno atmosférico
para poder crecer.
• Emplean el oxígeno
como último aceptor
de electrones
durante la
respiración
• Ejemplos: Bacillus,
Pseudomonas,
Micrococcus, etc
Microorganismos microaerofílicos
• Requieren poca
cantidad de oxígeno
para su desarrollo (2-10
% O2).
• Un exceso de oxígeno
bloquea la actividad de
sus enzimas y provoca
la muerte de los
microorganismos.
• Ejemplo:
Campylobacter jejuni,
Neisseria,
Mycobacterium, etc
 Microorganismos anaerobios
facultativos
• Estos microorganismos
crecen en tanto en
presencia como en
ausencia de oxígeno,
empleándolo durante la
respiración aerobia.
• En ambientes carentes
de oxígeno realizan
respiración anaerobia
utilizando NO3 y SO4
como aceptores finales
de electrones.
• Ejemplos: Las
enterobacterias
 Microorganismos anaerobios
aerotolerantes
• Son microorganismos
que crecen en
presencia de oxígeno,
pero no lo utilizan para
su desarrollo. Emplean
compuestos orgánicos
como aceptores de
electrones.
• Fermentan los
carbohidratos a ácido
láctico
• Ejemplo Lactobacillus,
Streptococcus.
Microorganismos anaerobios
estrictos
• No crecen en presencia
de oxígeno, este resulta
letal para su desarrollo.
• La presencia de
oxígeno genera la
acumulación de
sustancias tóxicas
como el ión superóxido
(O2-).
• Carecen de enzimas
para descomponer este
ión.
Equipo para crear condiciones
anaerobicas
Especies reactivas de oxígeno
 Enzimas destoxificantes
Superóxido
2O2- + 2H+ H 2O 2 + O 2
dismutasa

catalasa
2H2O2 2H2O + O2

peroxidasa
H2O2 +NADH + H+ 2H2O
 Enzimas destoxificantes

Superóxido reductasa
2O2- + 2H+ + cit c reducido H2O2 + cit c oxidado

Los anaerobios aerotolerantes utilizan una enzima libre de

Mn2+ para convertir:

2O2- H 2O 2 + O 2

En ausencia de estas enzimas, cantidades pequeñas de

oxígeno resultan letales para los microorganismos
anaerobios. Ejemplo: Clostridium,
 pH
pH
Clasificación externo
Ejemplo

Bacterias lácticas.
Acidófilos 1.0 - 5.0 Lactobacillus,
Helicobacter
La mayoría de las
bacterias
Neutrófilos 5.5 - 8.5 Micrococcus,
Bacillus, Serratia,
etc

Alcalófilos 9.0 - 10.0 Vibrio

Concentración de solutos
(NaCl)

• Halotolerantes S.
aureus (1-7.5 %)
• Halofilos Vibrio
cholerae (3.0 %)
• Halofilos extremos
(>10 %)
Concentración de solutos
carbohidratos
Plasmólisis Plasmóptisis