Efek ProtekUf Pemberlan ...

-(Srlnlngslh, Agung Eru Wibowo)

EFEK PROTEKTIF PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL HERBA MENIRAN

(Phyllanthus niruri L.) TERHADAP AKTlVlTAS DAN KAPASITAS
FAGOSITOSIS MAKROFAG PERITONEUM TlKUS

Srinlngsih, Agung Eru Wibowo

Pusat Teknologi Farmasi dan Medika BPPT
Gedung BPPT 2 Lantai 15 Jalan MH.Thamr1n 8 Jakarta
-
TeiplFax 021-3169505
Emall :srinlngsih,2202@yahoo.com

Abstrak
Telah dilakukan penalltian untuk mengeksplorasl efek lmunostlmulan ekstrak etanol 50%
herba Meniran (Phyiianthusnimri L.) secara in vivo pada tikus putih. Metoda uji yang digunakan
adalah menghitung niial aktivltas dan kapasitas fagositosis makrofag peritoneum tikus. Sebagai
bakteri patogen digunakan Staphybooccus 8pidermIdi~.Sampel uji diDerikan secara peroral
dengan tiga variasi dosis, yaitu 50 mg (dosls I), 100 mg (dosis 2), dan 200 mg (dosls 3)lkg
berat badan QBB).Seteiah 15 hari pemberlen sampel uji, tikus disuntlk dengan bakteri patogen
sebanyak 10 bakteriiml secara intraperitonial. Hasil percobaan menunjukkan bahwa ketiga
dosls uji memberikan niiai aktivltas fagositosis masinQ-masing sebesar 88% (dosls 3), 81%
(dosls 2), 76% (dosis I ) dan kelompok kontrol76%. Secara statistik, hanya dosls 3 memberikan
nllai aktivitas fagositosis berbeda dlbanding kontrol. Nilal kapasltas fagositosis rnakrofag dari
setlap dosis edaiah 45 bakteriimakrofag (dosis I), 48 bakteriimakrofag (dosls 2), dan 50 bak-
terllmakrofag (dosls 3). Secara statlstlk ketlga nlial dosis tersebut tidak berbeda dibandlng
kontrol (45 bakterilmakrofag). Penaplsan fitokimla menunjukkan ektrak etanol mengandung
golongan senyawa flavonold, saponin, tanin, steroid dan kumarin.

Kah kuncl : PbyIIanfbus nlrurl L., lmunostlmulan, metode kapasltas dan aktlvltas fego-
sltosik, makrofag.

Abstract
Test of immunostimulant effect of ethanol 50% extract of meniran (Phyiianthus niruri I.)
ware explored on rat in vivo. lmmunostimulant effect were tested by macrophag fagocitocic
activity and capacity methods in rat peritoneum. Staphyllocooous epidarmidis was used as
pathogen bactery. The extract was taken orally at dosages of 50 mg (dosage I), 100 mg
(dosage 21, and 200 mg (dosage 3)ikg body weight, Afler 15 days, each rat was induced
lntraperitoneaily by 10' bacterylml of pathogen bactery. Results showed that macrophag
fagocitosic activity value from each doses l.e., 89% (dosage 3), 81% (dosage 2), 78% (dosage
1) and control group 76%. Macrophag fagocitosic activity of dosage 3 was different with control
group statistically. Macrophag fagocitosio capacity of eaoh dosages were 45 bacteryl maoro-
phag (dosage I), 48 bacterylmacrophag (dosage 2), and 50 bacterylmacrophag (dosage 3).
Macrophag fagocitoslc capaclty of each dosages were not different compared with control
group (45 bacterylmaorophag) statistically. Preliminary pytochemical screening Indicated the
presence of flavonoid, saponin, tanln, steroid and cumarin.

Key word : Phyllanthus nfrurl L., lmmunostimulant, fagasltoslc capacity and activity
methods, macrophag.

Pendahuluan rangsang sistem pertahanan tubuh. Tubuh

Di dalam hutan tropis indoncsia diperki-
rakan terdapat sekitar 30.000 jenis turnbuh-
an. Diduga dari jumlah tersebut sekitar 9.600
jenis diketahui berkhasiat obat dan sekitar
200 jenis diantaranya merupakan tumbuhan
obat penting bagi industri obat tradislonal (1).
Dari sejumlah tanaman obat yang
. .ada di
Indonesia beberapa diantaranya mempunyai
sifat sebagai imunostimulan, yaitu dapat rne-
manusia memiliki sistem imun yang bertuju-
an melindungl tubuh dari serangan kuman
penyakit dan antigen. Sistem imun dapat dl-
pandang sebagai sistem adaptasi dirnana tu-
buh berupaya untuk mempertahankan ho-
meostatis antara lingkungan internal dan
iingkungan eksternal tubuh (2). Peneiitian
mengenai peran lmunostimulan terhadap pe-
ningkatan mekanisme pertahanan tubuh dan
Amcarpus, Vol. 6 No. 2 September 2006 :91 - 96
penggunaannya sebagai penunjang pada
pengobatan suatu penyakit makin berkem-
bang dari tahun ke tahun. Hal ini disebabkan
secara kiinis imunostimulan memiiiki peranan
strategis baik dalam pengobatan dan pence-
gahan suatu penyakit (3).
Salah satu tumbuhan yang bersifat imu-
nostimuian adalah meniran (Phyllanthus niru-
riL.1. Meniran memiliki banvak khasiat daiam
pen'gobatan. Penelitian tetang meniran seba-
gai imunostimulan pertama kaii dilakukan o-
leh Thabrew pada tahun 1991, dimana eks-
trak meniran mampu meningkatkan aktivitas
sistem kompiemen melalui jalur klasik. Se-
mentara itu pada tahun 1994 Suresh juga
,membuktikan bahwa ekstrak meniran mam*
pu meningkatkan sitostoksisitas sei NK (4).
Penelitian klinis ekstrak meniran terhadap
penderita TBC, menunjukkan bahwa pem-
berian kombinasi antara obat anti tuberku-
losis dan ekstrak meniran mampu menurun-
kan kadar interleukin-10 Dada fase intensif
walaupun tidak mernberikan perbedaan yang
bermakna dalam konversi BTA (Basil Tahan
Asam) dan perbaikan radiologis (5).
Berdasarkan ha1 tersebut, dilakukan uji
efek imunostimulan ekstrak etanol 50% her-
ba meniran serta pencarian dosis efektif
yang mampu memberikan efek. Sebagai me-
toda uji digunakan metode fagositosis ma-
krofag peritoneum secara ex-vivo. Di sam-
ping itu dilakukan penapisan fitoklmia untuk
mengetahui golongan senyawa yang terda-
pat dalam ekstrak etanol 50% herba menir-
an. Hasil penelitian ini diharapkan dapat
memberikan informasi tentang besaran dosis
ektrak etanol 50% yang mampu memberikan
efek imunostimulan, serta golongan kan-
dungan kimia herba meniran.
Metode penelitian
Bahan penelitian
Simplisia
Simplisia yang digunakan adaiah herba
meniran (Phyllanthus niruri L.), diperoleh
dari kebun Laboratorium Teknologi Farmasi
dan Medika, Puspiptek, Serpong. Determi-
nasi tanaman dilakukan oieh Herbarium Bo-
goriense, Pusat Penelitian Biologi
Bogor.
-LiPl
Hewan coba
Hewan coba yang digunakan adalah ti-
kus putih jantan galur wistar, umur 2,5-3 bu-
Ian, bobot 150-200 g, diperoleh dari Pusat
Penelitian Fannasi, Puslitbang-Departemen
Kesehatan RI.
Bakteri
Bakteri sebagai antigen adalah Staphylo-
coccus epidermidis, diperoleh dari Laborato-
rium Bakteriologi, Bagian Mikrobioiogi Kese-
hatan Departemen IPHK, Fakuitas Kedokter-
an Hewan, lnstitut Pertanian Bogor.
Bahan kimia dan pereaksi
Bahan untuk pemerlksaan golongan se-
nvawa kimia antara lain amonia (10%. 30%),
asam kiorida (I%, 1:10), peregksi Dragen-
dorf, pereaksi Meyer, lempeng Magnesium,
asam klorida pekat, besi (ill) kiorida I % , pe-
reaksi Stiasny dan lain-lain.
Bahan peiarut untuk ekstraksi adalah
etanol teknls yang didestilasi dan akuades.
Bahan untuk uji fagositosis antara lain
iarutan lugol, Brain Heart Infusion (BHI), la-
rutan Giemsa, larutan kristal violet, larutan
natrium kiorida fisiologis, iarutan safranin,
CMC Na, minyak imersi, air suling steril, di-
natrium hidrogen pospat (di-Na-EDTA), kali-
um hidrogen pospat, dan lain-lain.
Alat
Alat-aiat yang digunakan antara lain:
pengaduk (RZR 2051 confrol), pompa vakum
(vacuubmnd-type ME 2C), autoklaf (ALP
Go., Ltd Japan-model KT-30L), rotavapor
(BuchiEL 131), inkubator (Inco 2), mikroskop
listrik (Olympus BH-2), laminar air flow ca-
binet, timbangan analitik (Precissa), kan-
dang tikus beserta tempat makanan dan mi-
numan serta hand tally counter.
Metode Kerja
Penyiapan ekstrak
Herba meniran dicuci dan dibersihkan
dari pengotor, dikeringkan dengan lemari pe-
ngering. Herba kering diserbuk, diayak de-
ngan ayakan mesh 18. Serbuk meniran di-
maserasi dengan etanol 50% selama 1 jam
pada suhu kamar dengan pengadukan pada
*
kecepatan 300 rpm, disaring dengan kertas
saring. Ampas diekstraksi kembali sebanyak
2 kali. Filtrat dikumpuikan, dikeringkan de-
ngan alat rotavapour hingga diperoleh eks-
trak kental.
Penapisan fitokimia
Penapisan fitokimia dilakukan terhadap
ektrak kentai dengan menggunakan metode
Materia Medika (6), dan dilakukan untuk
mengidentifikasi golongan senyawa alkaloid,
Ravonoid, saponin, tanln, kuinon, steroid dan
trlterpen-oid, minyak atsiri, dan kumarin
Pelaksanaan uji in vivo
Pengelompokkan hewan coba
Hewan coba yang teiah diaklimatisasi se-
Efek Protektlf Pemberlan ...- (Srlningslh,Agung Eru Wlbowo)
lama kurang lebih 1 minggu dalam kondisi wan dikelompokkan secara acak menjadi 4
percobaan dipilih secara acak. Hewan yang kelompok masing-masing terdiri dari 6 ekor.
sakit dengan tanda-tanda bulu berdiri, akti- Pengelompokkan hewan coba dapat dilihat
vitas motorik dan berat badan menurun, ma- pada Tabel I berikut.
ta buram tidak dipakai dalam penelitian. He-

Tabel I.Pengelompokkan hewan coba

No I Kelompok Perlakuan.
I I I Kontrol Normal I Diberikan larutan CMC Na 0,5% I
2 Dosis 1 Diberikan ekstrak meniran dosis 50 mgkg BB
3 Dosis 2 Diberikan ekstrak meniran dosis 100 mglkg 'BE
4 Dosis 3 Diberikan ekstrak meniran dosis 200 mglkg BB

Pemberian sampel uji absolut selama 15 menit, diwarnai dengan

Sampel uji (ekstrak meniran) diberikan
dalam bentuk suspensi dalam CMC 0,5% pa-
da setiap hewan coba sesuai masing-masing
kelompok per oral, setiap hari selama 15 ha-
ri. Makan dan minum diberikan adlibiturn.
Uji aktivitas dan kapasitas fagositosis ma-
krofag
Suspensi bakteri diambil satu ose (seng-
kelit) dari koloni yang tumbuh dari biakan
bakteri induk, dimasukkan ke dalam 100 ml
media BHI steril, diinkubasi selama 18-24
jam, 37% di dalam otoklaf. Bakteri dipisah-
kan dari media dengan disentrifugasi pada
5000 rpm selama 15 menit, supernatan di-
buang. Endapan bakteri dicuci mengguna-
kan lamtan NaCl 0.9% dengan cara sebagai
berikut: endapan bakteri ditambah 10 mL
NaCl 0,9% dihomogenkan menggunakan
vortek, disentrifugasi 5000 rpm selama 15
menit, supernatan dibuang. Pencucian di-
lakukan sebanyak 3 kali. Endapan bakteri di-
tambah NaCl 0.9% dan diukur nilai transrni-
tannya menggunakan spektrofotometer UV-
Vis pada h maksimum 620 nm hingga
memberikan nilai transmitan (%T) sekitar
10%. Pada nilai tersebut jumlah bakteri per
mL sekitar 10' cfu (bakterilml).
Setelah hari ke-15 pemberian sampel
uji, setiap hewan coba diinjeksi suspensi
bakteri Staphylococcus epidermidis secara
intraperitoneum (i.p) sebanyak 1 ml kemu-
dian dimasukkan kembali ke dalam kandang
dan dibiarkan selama 1 jam. Hewan coba di-
eutanasi dengan cara deslokasi leher, kemu-
dian bagian perut dibedah dan cairan peri-
toneumnya diambil menggunakan spuit injek-
si 1 mL, jika perlu ke dalam rongga perito-
neum dicuci dengan 1 mL larutan NaCl 0,9%
steril. Cairan peritoneum dibuat preparat uias
pada gelas objek, difiksasi dengan metanol
perwamaan Giemsa 10% dan diamkan se-
lama 15 menit, dibilas dengan air mengalir,
dikeringkan dengan cara diangin-anginkan
dan ditutup dengan gelas obyek. Preparat
siap dilihat di bawah mikroskop dalam pem-
besaran 1000 kali dengan bantuan minyak
imersi, dan dihitung jumlah makrofag aktif
serta jumlah bakteri yang dimakan oleh ma-
krofag aktif.
Dipilih 100 makrofag secara acak, ke-
mudian dihitung jumlah makrofag yang hidup
(mampu memfagositosis bakteri) dari 100
makrofag tersebut. Penghitungan dilakukan
sebanyak tiga kali dari 3 preparat yang ber-
beda untuk satu hewan coba. Nilai aktivitas
fagositosis ditetapkan berdasarkan banyak-
nya jumlah sel makrofag yang aktif mela-
kukan proses fagositosis dari 100 makrofag
dan dinyatakan dalam persen (%). Nilai akti-
vitas fagositosis makrofag ditetapkan dengan
rumus sebagai berikut:
Aktivitas fagositosis makrofag =
(Makrofag aktifI100 Makrofag) x 100%
Dipilih 25 makrofag aktif secara acak,
kemudian dihitung jumlah bakteri yang difa-
gositosis oleh setiap makrofag. Penghitung-
an dilakukan sebanyak tiga kali dari 3 pre-
parat yang berbeda untuk satu hewan coba.
Nilai kapasitas fagositosis ditetapkan berda-
sarkan jumlah bakteri Staphylococcus epi-
derrnidis yang difagositosis oleh 25 set ma-
krofag aktif. Nilai kapasitas fagositosis ma-
krofag ditetapkan dengan rumus sebagai
berikut:
Kapasitas fagositosis makrofag =
Jumlah bakterilJumiah Makrofag aktif
 -
Altocarpus, Vol. 6 No. 2 September 2006 : 91 96

Analisis data Hasil dan pembahasan

Data hasii penelitian dianalisis untuk
melihat adanya perbedaan aktivitas dan
kapasitas fagositosis makrofag dari masing-
masing kelompok perlakuan. Analisis statistik
dilakukan dengan program SPSS 12.0 Yang
meliputi uji himog-enitas, uji kenormalan, u j
parametrik (Anova) atau non parametrik
'(Kruskall Wallis).
Setelah dilakukan penghitungan nilai
aktivitas dan kapasitas fagositosis makmfag
terhadap setiap hewan coba dari setiap ke-
lompok dosis kemudian dirata-ratakan. Nilai
rata-rata dari setiaw Darameter tersebut da-
pat dilihat pada amb bar 1, sedangkan gam-
baran fisik efek fagositosis makrofag dapat
dilihat pada Gambar 2.

Gambar 1. Rata-rata nilai aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag peritoneum

tikus dari setiap kelompok dosis uji
Keterangan : Nilai aktivitas dan kapasitas dari enam tikus hasil rata-rata dari tiga preparat.
'= berbeda dengan kelompok lain secara bermakna (a= 0,05).

Gambar 2. Foto makrofag yang aktif dan tidak aktif dari cairan peritoneum tikus
Keterangan : I = makrofag mati. 2 = makrofag hidup.

Dari nilai yang tersaji pada Gambar 1,
terlihat bahwa baik nilai aktivitas dan kapa-
sitas fagositosis makrofag meningkat sejalan
dengan peningkatan dosis uji. Guna meiihat
sejauh mana kebermaknaan peningkatan ni-
lai tersebut dibanding dengan kontrol normal.
data yang diperoieh dianaiisis secara statistik
(a = 0.05).
Berdasarkan anaiisis statistik terhadap
nilai aktivitas fagositosis menunjukkan bah-
wa semakin tinggi nilai dosis, nilai aktivitas
semakin meningkat. Nilai aktivitas pada do-
sis 3 adalah paling tinggi dan secara statistik
berbeda bermakna dibanding dua dosis yang
lain dan kelompok kontrol normal. Hasil ini
sesuai dengan peneiitian sebelumnya (4)

Efek Protektlf PPemberlan ...-(Srlningslh, Agung Eru Wlbowol
dimana ekstrak meniran yang dibeiikan se-
cara oral pada mencit mampu meningkatkan
aktivitas makrofag meiaiui metoda kemotak-
sis dengan rangsangan kemoatraktan f-Me-
tionin-Leusin-Fenilalanin (f-MLP).
Saat ini telah banyak ditemukan metode
uji imunomoduiasi baik secara in-vivo atau
in-vitro. Metode uji yang dipakai pada pene-
. litian ini lebih ditujukan untuk melihat respon
imun non spesifik. Respon imun non spesifik
adaiah respon pertahanan inheren yang se-
cara non seiektif mempertahankan tubuh dari
invansi benda asing atau abnormal dari jenis
apapun dimana baru pertama kaii terpajan
(3). Bakteri Staphylococcus epidermidis digu-
vakan sebagai antigen karena termasuk da-
lam jenis bakteri gram positif yang mampu
mengikat warna Giemsa dengan jeias serta
memiiiki bentuk yang buiat sehingga memu-
dahkan daiam perhitungan di bawah mikros-
kop. Keuntungan lain, bakteri ini tidak meng-
andung protein A, yaitu protein yang bersifat
antifagositik. Dengan ketidakadaan protein
tersebut menyebabkan S, epidermidis tidak
dapat menghindar dari fagositosik makrofag
peritoneum. Seiain itu ketiadaan protein A
menyebabkan bakteri ini tidak bersifat virulen
sepertl halnya jenis Staphy-lococus lain, mi-
salnya S. aureus (7).
Beberapa saat seteiah bakteri diinduksi-
kan ke dalam tubuh hewan coba secara in-
traperitoneal, makrofag yang sudah ada da;
lam peritoneum (makrofag residen) segera
memfagositosik bakteri asing tersebut. Ke-
mampuan makrofag untuk mengenal sub-
stansi asing tersebut disebabkan oieh ada-
nya reseptor untuk fosfolipid (seiain reseptor
lain seperti fragmen Fc igG1, lgG3 dan igE
serta reseptor komplemen) sedangkan fungsi
sebagai sei efektor yaitu menghancurkan
mikroorganisma serta sel-sel ganas dan ben-
da-benda asing dimungkinkan karena sei in1
mempunyai sejumlah iisosom di dalam sito-
plasma yang mengandung hidroiase maupun
peroksidase yang merupakan enzim perusak
(8). Makrofag termasuk ke daiam pertahanan
dl iini pertama daiam sistem imunitas. Wa-
iaupun biasanya tidak berada dalam jumlah
cukup untuk menghadapi serangan tersebut,
makrofag residen mampu menahan infeksi
selama periode sekitar satu jam pertama se-
beium mekanisme imunitas iain dapat dimo-
biiisasi (3). Atas dasar pertimbangan terse-
but maka pengambiian makrofag diiakukan
sekitar 1 jam setelah induksi bakteri, sehing-
ga akan diketahui sejauh mana kemampuan
makrofag residen dalam mengatasi invasi
bakteri.
-
Hasil analisis statistik terhadap nilai ka-
pasitas fagositosis, menunjukkan bahwa
sampei uji pada k e 3 dosis tidak memberikan
nilai yang berbeda dengan kontroi normal.
Hal ini kemungkinan disebabkan karena ken-
dala teknis daiam peiaksanaan penghitung-
an bakteri secara manual menggunakan mi-
kroskop. Seringkaii dijumpai makrofag yang
padat terisi bakteri sehingga suiit untuk
menghitung jumlahnya secara tepat daiam
medan pandang mikroskop. Kondisi ini akan
teratasi jika diiakukan penghitungan dengan .
menggunakan alat khusus yang dapat meng-
hitung secara otomatis. Faktor lain yang ke-
mungkinan juga berpengaruh adalah pemi-
lihan nilai dosis uji. Beberapa peneiitian efek
imunitas dari ekstrak atau isolat tanaman
menunjukkan bahwa efek yang muncui sa-
ngat tergantung dari dosis uji, dimana efek
imunosupresifisitotoksikakan muncui mana-
kaia pengujian dilakukan pada dosis besar,
sementara efek imunostimulator akan terlihat
pada dosis rendah. Sebagai contoh, briosta-
tin, senyawa makrolida iakton yang diisolasi
dari organisma laut Budula neritina, an di-
uji pada konsentrasi 1c5sampai WY4~ o i l L
menunjukkan efek stimuiasi fagositosit iimfo-
sit yang optimal pada konsentrasi 10" moVL
(9). Berhubung efek imunomoduiator dise-
babkan oieh mekanisme sistem tubuh yang
kompiek, maka periu dilakukan pengujian ie-
bih ianjut dengan metoda uji yang lebih kom-
prehensif.
Menurut Liu, efek imunomodulator eks-
trak meniran disebabkan oieh kandungan se-
nyawa golongan fiavonoid (4). Daiam peneii-
tian ini sam~eiuli . .yang- digunakan juga
mengandungsenyawa flavonoid yang dlbuk-
tikan dari hasii uji penapisan fitokimia. Seiain
itu juga mengandung senyawa kimia goiong-
an yang iain seperti saponln, tanin, steroid
dan kumarin.
Simpulan
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan
bahwa ekstrak etanol 50% herba meniran
(Phyllanthus niruri L.) pada dosis 200 mglkg
BB mampu memberikan nilai aktivitas fago-
sitosis makrofag yang secara statistik berbe-
da bermakna dibanding keiompok kontrol
normal. Sementara itu, nilai kapasitas fagosi-
tosis makrofag pada ketiga dosis uji tidak
berbeda bermakna dibanding kelompok kon-
troi. Dengan demikian dapat dikatakan bah-
wa pada ke tiga dosis uji tersebut, ekstrak e-
tanol 50% herba meniran tidak memberikan
efek sebagai imunostimulan dengan meng-
gunakan metoda uji fagositosis makrofag
 -
Artocarpus, Val. 6 No. 2 September 2006 :91 96
peritoneum tikus. Oleh karena itu, untuk
memastikan khasiat imunostimulan ekstrak
etanoi 50% herba meniran, perlu dilakukan
serangkaian uji in vivo lebih lanjut dengan
menggunakan metoda uji yang lebih bera-
gam, ha1 ini mengingat mekanisme imunitas
di dalam tubuh melibatkan serangkaian me-
tabolisme enzimatik yang sangat kompleks.
Penapisan fitokimia menunjukkan eks-
trak etanol herba meniran mengandung go-
iongan senyawa flavonoid, saponin, tanin,
steroid dan kumarin.
Daftar pustaka
1. Kardinan A, Kusuma FR. Meniran Pe-
nambah Daya Tahan Tubuh Alami, Ja-
karta: Agromedia Pustaka, 2004: 5 14. - 8. Kresno SB. Imunologi: Diagnosis dan
2. Bellanti JA.. lmunologi ill. Diterjemahkan
oleh Wahab AS, Soerlpto N. Yogyakarta:
Gajahmada University Press, 1993: 18.
3. Shemood L., Human Physiology: From
Cells to Systems, dlterjemahkan oleh
Brahm UP (Fisiologi Manusia Dari sel Ke
Sistem), edisi 2, Jakarta: Penerbit Buku
Kedokteran EGC, 1996: 354-6, 366-76.
4. Maat S. imunomodulasi Ekstrak Phyl-
lanthus nirurl L. untuk Mengatasi lnfeksi
Virus Hepatitis, Prosiding Kongres llmiah
lkatan Sarjana Farmasi Indonesia XIi1,
2000: 83-7.
5. Halim H dan Saleh K. Keefektifan Eks-
trak Phylanthus nirurl pada Penatalak-
sanaan Tuberkulosis Paru, Dexa Media
2005: 3 (18):103-7.
6. ~epartemenKesehatan RI. Materia Me-
dika Indonesia, Jilid 1, Jakarta: Dit Jen
POM, 1977: 34-9.
wccus.html.
Prosedur Laboratorium. edisi ke.4. Balai
Penerbit Fakultas Kedokteran ~niversi-
tas Indonesia, 2001: 3-7, 33-5, 172,
9. Wagner H. lmmunomodulatory Agents
from Plants, Basei, Switzerland: Birkhau-
ser Verlag, P.O. BOX 133, CH-4010,
1999: 18-22.