Pembahasan

Pada praktikum kali ini dilakukan pewarnaan bakteri berupa pewarnaan tahan asa
m. Bakteri tahan asam adalah jenis bakteri yang tidak
dapat diwarnai dengan pewarnaan biasa kecuali dengan menggunakan asam
alkohol dan dengan pemanasan.Bakteri tahan asam merupakan bakteri yang kandu
ngan lemak
nyasangat tebal, sehingga tidak bisa diwarnai dengan reaksi pewarnaan biasa,tetap
i harus dengan pewarnaan tahan asam. Bakteri ini disebut bakteri tahan
asam karena dapat mempertahankan zat warna pertama sewaktu dicuci
dengan larutan pemucat. Ketika proses pewarnaan, bakteri tahan asam ini
melawan dekolorisasi dengan asam sehingga bakteri tersebut disebut bakteri
tahan asam.

Pertama yang dilakukan adalah sterilisasi kaca objek dengan cara
di celupkan kedalam larutan desinfektan kemudian dicelupkan kedalam
alkohol 70%. Sterilisasi bertujuan untuk memusnahkan atau mengeliminasi
semua mikroorganisme termasuk spora bakteri yang resisten dalam alat yang
akan digunakan. Setelah melakukan sterilisasi, kemudian melakukan olesan bakter
i pada kaca 
objek, tetapi sebelumnya ose di fiksasi di api pada pembakar spiritus yang bertuju
an untuk mematikan bakteri dengan cepat pada
ose, supaya tidak tercampur dengan bakteri yang akan di uji.Sebelum melakukan 
pengolesan bakteri, kaca objek di beri tanda
lingkaran di bawahnya sebagai tanda area untuk melakukan pengolesan sel bakteri 
dari suspens.

Pada percobaan kali ini pengolesan di lakukan dengan
sampel suspensi bakteri saprofit (Mycobacterium  tuberculosis).Kemudian
olesan di teteskan pewarna karbol fuksin. Karbol fuchsin merupakan pewarna das
ar, yang mengandung fenol untuk membantu melarutkandinding sel. Fenol diguna
kan sebagai pelarut untuk membantu pemasukanzat warna kedalam sel bakteri se
waktu proses pemanasan. Tujuan
memberikan pewarna karbol fuksin adalah untuk mewarnai seluruh sel bakteri.Set
elah memberikan pewarna karbol fuksin kemudian di panaskan diatas penangas ai
r, tetapi jangan sampai terlalu panas, mendidih atau kering.Tujuan dari memanask
an sampel di atas penangas air yaitu supaya pewarnakarbol fuksin masuk menemb
us dinding sel bakteri, karena dinding bakteriyang tahan asam mempunyai lapisan 
lilin dan lemak yang sukar di tembus pewarna bakteri.

Karena pengaruh fenol dari pewarna karbol fuksin dan juga pemanasan maka lapi
san lilin dan lemak dapat ditembus pewarnakarbol fuksin. Dengan pemanasan me
nyebabkan pelebaran pori-pori
lemak bakteri tahan asam sehingga pewarna karbol fuksin dapat masuksewaktu di
cuci dengan larutan pemucat, dan zat warna pertama tidak mudahdilunturkan. Sete
lah 5 menit dibilas dengan air. Pencucian dengan
menggunakan air mengalir bertujuan untuk menutup kembali
lemaknya.Kemudian sampel di tetesi asam alkohol selama 15 detik. Asam
alkohol berfungsi sebagai peluntur. Pada saat pencucian, lapisan lilin dan
lemak yang tadinya terbuka akan menutup kembali. Bakteri tahan asam pada saat 
dicuci dengan asam alkohol warna karbol fuksin tidak lepas atauhilang, sedangkan 
pada bakteri tidak tahan asam akan lepas atau hilang.Setelah itu sampel di tetesi at
au di genangi pewarna tandinganmetilen biru. Metilen biru adalah pewarna yang b
iasa di pakai dalam pewarnaan umum. Biasanya hanya untuk membedakan sel bak
teri denganlatar belakangnya. Setelah 2 menit sampel dibilas dengan air lalu dikeri
ngkan dengan kertas saring.Setiap akhir pemberian reagen atau pewarna, selalu dil
akukan pembilasan terhadap kaca objek dengan menggunakan air. Pembilasan
ini bertujuan
untuk mengurangi kelebihan setiap zat warna yang sedangdiberikan. Objek yang t
elah dibasuh  air kemudian dikeringkan dengan
menggunakan kertas saring, tidak ditiup-tiup karena dikhawatirkan ada
kontaminasi bakteri lain yang menempel pada objek glass.Sampel yang sudah di k
eringkan, di  tetesi dengan emersi oil. Minyak
emersi adalah minyak yang di pakai untuk olesan pada mikroskop, yang
fungsinya untuk memperjelas objek, dan melindungi mikroskop. Minyak
emersi memiliki indeks refraksi yang tinggi dibandingkan dengan air,sehingga obj
ek yang kita 
amati dapat terlihat lebih jelas dibandingkandengan tanpa minyak emersi. Lalu dia
mati dengan mikroskop, dengan pembesaran 100X.

Mycobacterium tuberculosis
berbentuk batang langsing, lurus atau berbentuk filament. Sekali mycobacteria dib
eri warna ole
h pewarnaan gram,maka warna tersebut tidak dapat dihilangkan dengan asam. Ket
ika proses pewarnaan, bakteri tahan asam ini melawan dekolorisasi dengan asam. 
Olehkarena itu, maka mycobacteria disebut sebagai bakteri tahan asam. Bakteriini 
memiliki sejumlah besar zat lipoidal (berlemak) di dalam dinding selnya
sehingga menyebabkan dinding sel tersebut relative tidak permeabel terhadap zat-
zat warna yang umum sehingga sel-sel bakteri tersebut tidak
terwarnai oleh metode pewarnaan biasa, seperti pewarnaan sederhana.

https://www.academia.edu/11704147/Pewarnaan_Tahan_Asam