TUGAS INDIVIDU

MIKROBIOLOGI ANALISIS
KELAS B
Spatial structure increases the benefits of
antibiotic production in Streptomyces

DYAH AYU HERLINA

2443016220

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA SURABAYA
2019-2020
 Struktur spasial meningkatkan manfaat produksi antibiotik Streptomyces

Latar Belakang
Streptomyces adalah produsen antibiotik yang produktif, termasuk lebih dari setengah antibiotik
yang digunakan dalam praktik klinis, serta keanekaragaman metabolit sekunder lainnya dengan aktivitas
antijamur, antiparasit, atau antikanker. S. griseus menghasilkan streptomisin, antibiotik aminoglikosida
spektrum luas. Produksi streptomisin di Indonesia S. griseus diatur oleh sekresi sinyal gamma-
butyrolactone yang disebut faktor-A. Jurnal ini menguji manfaat produksi streptomisin oleh bakteri
berfilamen Streptomyces griseus memberikan bukti bahwa produksi streptomisin dari S. griseus untuk
membunuh dan menyerang spesies yang rentan, S. coelicolor. Kemudian menunjukkan manfaat dari
produksi streptomisin tergantung pada kepadatan, karena skala produksi positif dengan jumlah sel, dan
frekuensi bergantung dengan ambang batas invasi dan secara signifika difasilitasi oleh struktur spasial.

Material dan metode

STRAIN DAN KONDISI BUDAYA
Dua spesies Streptomyces digunakan dalam penelitian ini: penghasil streptomisin S. griseus
IFO13350 (MIC 92 μ g / mL) dan streptomisin-sensitif S. coelicolor A (3) 2 M145 (MIC 2 μ g / mL)
membawa resistensi apramisin pSET152 plasmid yang terintegrasi. Strain ditanam secara rutin selama
empat hari pada usia 30 ° C pada SFM yang mengandung 20 g tepung kedelai, 20 g mannitol, dan 15 g
agar per liter (pH 7.2-7.4). Stok spora densitas tinggi dihasilkan oleh pelat yang merata dengan 50 μ L
larutan yang mengandung spora. Setelah beberapa hari pertumbuhan, spora dipanen dengan cakram
kapas yang direndam dalam 3 mL 30% gliserol setelah spora diekstraksi dari kapas dengan melewatkan
cairan melalui jarum suntik 18g untuk menghilangkan miselium vegetatif. Stok spora dititrasi dan
disimpan pada –20 ° C.
PERCOBAAN KOMPETISI
Eksperimen kompetisi dimulai dengan mencampur galur pada frekuensi yang diberikan dan
pelapisan 50 μL mengandung 105 spora. Untuk menentukan fraksi inokulum yang resisten streptomisin
atau apramisin, dilakukan melarutkan pengenceran campuran ini pada SFM yang mengandung 40 μ g /
mL streptomisin sulfat atau 50 μ g / mL apramycin sulfate. Setelah empat hari pertumbuhan, lempengan
dipanen dan jumlah masing-masing pesaing dihitung setelah pelapisan pada SFM dengan streptomisin
atau apramycin.
PRODUKSI STREPTOMYCIN QUANTIFYING
Menyiapkan pelat dengan konsentrasi streptomisin dan lempeng yang diketahui dengan
berbagai kepadatan inokulasi S. griseus spora dan diinkubasi selama empat hari pada usia 30 ° C.
Kemudian mengambil sumbat agar 10 mm dari pelat ini menggunakan ujung belakang ujung pipet 1 mL
steril dan melepaskan 2 mm teratas untuk melepaskan S. griseus miselium. Pada kepadatan inokulasi
102 spora, kepadatan terendah diuji dan pertumbuhan terdiri dari koloni tunggal. Kemudian
menginkubasi coloni selama tiga hari pada 50 μ g / mL apramycin SFM plate (untuk mencegah residu S.
griseus pertumbuhan) diinokulasi dengan 10 5 spora streptomisin rentan atau resisten S. coelicolor
sebelum kita mengukur diameter halo.
EKSPERIMEN TRANSFER SERI
Untuk menentukan efek struktur ruang pada invasi, S. coelicolor dan S. griseus dicampur pada
frekuensi yang ditunjukkan dan 105 spora dipelat dan ditanam selama empat hari. Pelat terus direplikasi
dengan cara yang sama setelah empat hari pertumbuhan untuk total empat atau delapan transfer
tergantung pada percobaan. Sebelum setiap transfer, pelat dicek menggunakan pemindai flatbed.
Setelah setiap transfer, spora yang tersisa di pelat selesai dan perbandingan S. griseus dan S. coelicolor
diukur setelah pelapisan pada SFM dengan streptomisin atau apramisin.
HASIL DAN DISKUSI
STREPTOMYCIN ENABLES S. GRISEUS TO INVADE S. COELICOLOR
Hasil menunjukkan bahwa kebugaran S. griseus menurun dalam persaingan dengan strain yang
resisten streptomisin. Hasil ini memberikan bukti langsung bahwa produksi streptomisin, daripada
metabolit yang dikeluarkan dari S. griseus, memungkinkan spesies ini untuk menyerang S. coelicolor.
Data juga menunjukkan S. griseus pada kepadatan ini menghasilkan konsentrasi streptomisin yang
cukup tinggi, karena hanya strain S. coelicolor dengan MIC tertinggi (192 μ g / mL) mampu mencegah S.
griseus invasi.
PRODUKSI STREPTOMYCIN MENINGKAT DENGAN DENSITAS INOKULASI
Untuk memperkirakan berapa banyak streptomisin S. griseus menghasilkan, dilakukan
mengukur ukuran zona hambatan terhadap S. coelicolor dan membandingkannya dengan zona yang
diproduksi oleh konsentrasi streptomisin murni yang diketahui. Hasil menunjukkan bahwa produksi
streptomisin terjadi pada tingkat tinggi dan tergantung kepadatan.

KONDISI MEMODIFIKASI S. GRISEUS INVASI

Hasil menunjukkan lebih sedikit streptomisin diproduksi ketika jumlahnya lebih sedikit S. griseus
sel di pelat, sehingga menyebabkan kurang penghambatan S. Coelicolor dan ketika spora lebih sedikit
dilapisi, jarak antar koloni meningkat berarti bahwa di sekitar produsen ada koloni yang rentan lebih
sedikit untuk dihambat yang mengurangi manfaat memproduksi antibiotik.
Pada jurnal ini ditemukan bahwa mempertahankan struktur spasial memungkinkan invasi dari frekuensi
yang lebih rendah. Ketika mempertahankan struktur spasial, S. griseus mampu menyerang dari frekuensi
awal serendah 0,001% dan kemudian menjadi tetap pada populasi. Diberikan total kepadatan inokulasi
awal 105 spora, ini menunjukkan bahwa tidak lebih dari 10 spora diperlukan untuk invasi. Sebaliknya,
ketika struktur ruang dihancurkan pada setiap siklus transfer, ambang batas invasi meningkat 100 kali
lipat 0,1%. Penyebab dari hasil ini menunjukkan bahwa lingkaran cahaya menit meluas melalui waktu
dan akhirnya bergabung ketika struktur spasial dipertahankan, tetapi lingkaran cahaya ini menghilang
ketika dihancurkan. Namun, penting untuk dicatat bahwa struktur ruang itu sendiri tidak cukup untuk
memungkinkan invasi, karena S. griseus bersaing melawan strain yang sangat tahan terhadap S.
coelicolor, invasi dicegah meskipun diinokulasi pada frekuensi yang relatif tinggi.

KESIMPULAN
Hasil pada jurnal ini menunjukkan bahwa antibiotik Streptomycetes dapat digunakan sebagai senjata
ofensif untuk menyerang populasi pesaing yang sudah ada dari frekuensi rendah dan menguntungkan
untuk invasi evolusi produsen antibiotik.