Biomaterials xxx (2014) 1 e 10

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Biomaterial

beranda jurnal: www.elsevier .com / loc / biomaterial

Genukin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat

bukal

Jinke Xu Sebuah , Satu Strandman b , Julian XX Zhu b , Jake Barralet c , Marta Cerruti Sebuah , c , *
Sebuah Departemen Teknik Pertambangan dan Material, Universitas McGill, Montreal H3A 0C5, Kanada
b Departemen Kimia, Universit e de Montr eal, Montreal H3C 3J7, Kanada
c Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas McGill, Montreal H3A 2B2, Kanada

artikel info abstrak

Sejarah artikel: Pemberian obat melalui mukosa bukal adalah strategi pemberian obat yang menarik karena kepatuhan pasien yang baik, efek obat terlokalisasi
Diterima 24 Juli 2014 Diterima 2 berkepanjangan, dan penghindaran metabolisme obat gastrointestinal dan fi rstpass eliminasi. Sistem pengiriman obat bukal perlu
Oktober 2014 Tersedia xxx online
mempertahankan kontak intim dengan lapisan mukosa dalam kondisi basah rongga mulut cukup lama untuk memungkinkan pelepasan dan
penyerapan obat. Selama beberapa dekade, polimer mukoadhesif seperti kitosan (CS) dan turunannya telah dieksplorasi untuk mencapai hal
ini. Dalam penelitian ini, terinspirasi oleh adhesi basah yang sangat baik dari protein perekat kerang laut, kami mengembangkan sistem
Kata kunci:
pengiriman obat bukal dengan menggunakan hidrogel CS (Cat-CS) berfungsional katekol baru. Kami secara kovalen mengikat gugus fungsi
Chitosan Hydrogel Catechols
katekol ke tulang punggung CS, dan mengaitkan polimer dengan crosslinker genipin (GP) yang tidak beracun. Kami mencapai dua tingkat
Mucoadhesion Pemberian
konjugasi katekol (9% dan 19%), membentuk hidrogel Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP. Kami menipu fi pembentukan ikatan kovalen selama
obat bukal
fungsionalisasi katekol dan ikatan silang GP selama pembentukan gel. Waktu gelasi dan sifat mekanik hidrogel Cat-CS mirip dengan hidrogel
hanya CS. Signi grup katekol fi mukoadhesi yang meningkat secara in vitro (7 dari 10 hidrogel Cat19-CS masih kontak dengan membran mukosa
babi setelah 6 jam, sedangkan semua hidrogel CS kehilangan kontak setelah 1,5 jam). Sistem hidrogel baru mempertahankan pelepasan
lidokain selama sekitar 3 jam. In-vivo, kami membandingkan patch bukal yang terbuat dari Cat19-CS / GP dan CS / GP yang melekat pada
mukosa bukal kelinci. Kami dapat mendeteksi lidokain dalam serum kelinci dengan konsentrasi sekitar 1 ng / ml hanya dari tambalan Cat19-CS,
kemungkinan besar karena kontak intim yang diberikan oleh sistem Cat19-CS / GP mukoadhesif. Tidak masuk fl ammasi diamati pada jaringan
bukal yang bersentuhan dengan salah satu tambalan yang diuji. Hasil ini menunjukkan bahwa katechol-modi yang diusulkan fi ed CS hidrogel
adalah sistem hidrogel mukoadhesif dan biokompatibel yang menjanjikan untuk pemberian obat bukal.

© 2014 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.

1. Perkenalan
Pemberian obat bukal adalah metode pemberian obat non-invasif yang telah mendapatkan
banyak perhatian dalam beberapa tahun terakhir [1] . Lingkungan mukosa bukal terdiri dari lapisan
epitel sekitar 40 e Tebal 50 lapisan sel, lapisan lamina propria, lapisan submukosa, dan lendir yang
mengelilingi sel epitel yang disekresikan oleh kelenjar ludah [2] . Membran mukosa bukal manusia
multilayered, non-keratin kaya akan pembuluh darah yang mendasarinya dan memiliki permeabilitas
obat yang relatif baik melalui rute transelular dan paraseluler [3 e 5] . Pengiriman obat bukal lebih baik
daripada
pemberian obat oral karena menghindari pembersihan presistem pada saluran pencernaan dan juga fi
eliminasi pertama di hati selama sirkulasi sistemik [5,6] . Ini sangat penting untuk terapi yang
menderita tinggi fi metabolisme metabolisme pertama atau bioavailabilitas rendah ketika diberikan
secara oral. Fentanyl citrate tablet
[7] , semprotan insulin [8] , liposom silymarin [9] , dan tambalan carvedilol [10] adalah contoh
pemberian obat bukal untuk obat sistemik. Pemberian obat bukal juga digunakan untuk
memperpanjang efek obat terlokalisasi pada penyakit periodontal [11] , mucositis oral [12] dan infeksi
jamur oral [13] .

Tantangan utama terkait dengan pemberian obat bukal adalah waktu tinggal obat. Selama
persalinan bukal, perangkat perlu tetap berhubungan dengan membran mukosa untuk
memungkinkan obat untuk bertindak di lokasi aplikasi, atau diserap melalui jalur transmukosa.
* Penulis yang sesuai. Departemen Teknik Pertambangan dan Material, Universitas McGill, Montreal H3A 0C5,
Kanada. Tel .: þ 1 514 398 5496; fax: þ 1 514 398 4492.
Namun,

Alamat email: marta.cerruti@mcgill.ca (M. Cerruti). fl riba air liur, konsumsi makanan, gerakan mulut dan tidak terkontrol

http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10.024
0142-9612 / © 2014 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.

Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
2 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10
menelan dapat mencegah alat-alat tersebut dari menempel pada mukosa bukal, menyebabkan
berkurang atau tidak adanya ef farmasi fi kation [5] . Sistem pemberian obat bukal yang ideal harus
mematuhi mukosa bukal dengan cepat dengan suf fi kestabilan efisiensi untuk mempengaruhi
perawatan [14] . Beberapa bahan mukoadhesif telah dilaporkan selama beberapa dekade terakhir
untuk aplikasi pengiriman obat bukal [5,15] . Karbopol (asam poliakrilat berikatan silang) dan
hidroksipropilmetilselulosa (HPMC) banyak digunakan bahan mukoadhesif dalam bukal fi lm / desain
tambalan [16,17] . Sodium carboxymethyl cellulose (SCMC) adalah penambah mukoadhesi lain yang
sering ditambahkan ke tablet bukal
[18,19] . Disk buspirone bukal berdasarkan xanthan gum telah dilaporkan baru-baru ini, dan
menunjukkan peningkatan mucoadhesion karena interaksi musin dengan karboksilat dan gugus
hidroksil dalam permen xanthan [20] .
Polimer mukoadhesif awell-dikenal yang telah diuji secara luas untuk pengiriman bukal adalah
kitosan (CS) [21] e 23] . CS adalah polisakarida kationik biokompatibel dan terurai secara hayati yang
disintesis oleh deasetilasi parsial kitin [24] . Pada pH fisiologis, mukoadhesi utamanya disebabkan oleh
tarikan elektrostatik dengan mucin bermuatan negatif, dikombinasikan dengan kontribusi ikatan
hidrogen dan efek hidrofobik. [25] . Namun, mucoadhesion CS terbatas [26,27] ; jadi banyak penelitian
telah difokuskan pada upaya untuk memperbaikinya. N-trimethyl chitosan (TMC), turunan CS yang
dikuaternisasi sebagian, menunjukkan peningkatan mukoadhesi pada peningkatan derajat
quaternisasi [28] . Dengan mengikat asam ethylenediaminetetraacetic (EDTA) secara kovalen ke CS,
hampir semua gugus amino primer dari CS digantikan oleh EDTA, dan polimer kationik
ditransformasikan menjadi anionogenik. CS-EDTA menunjukkan peningkatan pemuatan
dibandingkan dengan CS, berkat ikatan hidrogen yang terbentuk antara gugus karboksilat dan lendir [29]
. CS tiol yang dibuat oleh konjugasi asam CS-tioglikolat (CS-TGA) menunjukkan peningkatan 10,3
kali lipat dalam total kerja adhesi pada mukosa babi dibandingkan dengan CS polos [30] , mungkin
karena gugus tiol dapat membentuk kovalen disul fi ikatan dengan kelompok sistein yang sebagian
besar hadir dalam glikoprotein lendir [31,32] .
Kelompok Katekol sebagian bertanggung jawab atas adhesi bawah air kerang laut. Katekol
dapat dioksidasi pada pH tinggi, atau di hadapan zat pengoksidasi dan katalis [33,34] . Banyak bahan
yang berbeda telah dimodifikasi fi ed dengan katekol
[34] e 38] , termasuk CS [39] . Lee et al. mengembangkan alginatecatechol hidrogel yang
mengeksploitasi oksidasi katekol untuk pengikatan silang, alih-alih pengikatan silang ionik
konvensional [36] . Wu et al. menyiapkan multilayer fi lm dengan lapis demi lapis perakitan
catechol-functionalizezd poli (asam akrilat) dan poli (allylamine hidroklorida) dalam kondisi oksidatif
ringan [34] . Hidrogel katekolalginat ini tidak hanya menunjukkan biokompatibilitas yang sangat baik,
tetapi juga sifat mekanik yang dapat dirubah berbeda dengan hidrogel alginat yang saling terkait
kalsium. Juga dalam kasus ini, ikatan silang dicapai dengan oksidasi katekol, dan fi nal fi Saya
menunjukkan stabilitas besar terhadap lingkungan yang keras. Kehadiran katekol juga meningkatkan
stabilitas dan viabilitas sel punca yang dibiakkan fi lms. Fullenkamp et al. mengembangkan hidrogel
katekolpolitetilen glikol antibakteri yang diikat oleh perak nitrat, yang dapat mempertahankan
pelepasan Ag 0 untuk 2 minggu [37] . Hong et al. menunjukkan bahwa sel induk saraf manusia melekat
dan layak digunakan pada katekol-modi fi ed hidrogel asam hialuronat [38] . Dalam penelitian lain oleh
Ryu et al., Catechol modi fi ed CS dihubungkan dengan Pluronic thiolated, membentuk gel yang
merupakan perekat untuk jaringan lunak [39] . Meskipun bagian dari kelompok katekol pada rantai
polimer berpartisipasi dalam ikatan silang e SH oleh penambahan basis-Schiff, kelompok katekol yang
tersisa berkontribusi pada peningkatan bioadhesion pada permukaan jaringan. Baru-baru ini, Zhang
et al. mengembangkan poli hiperbranched (dopamin-co-akrilat) sebagai prekursor perekat dengan
adhesi jaringan basah yang kuat [40] . Kelompok kami baru-baru ini melaporkan peningkatan
mucoadhesion ketika katekol dan CS
Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
dicampur dalam hidrogel, dan zat pengoksidasi hadir di permukaan mukosa [41] .
Sebagian besar studi yang disebutkan di atas menggunakan katekol untuk mengikat silang gel;
ini menyiratkan bahwa beberapa kelompok katekol tidak digunakan untuk menginduksi mukoadhesi,
dan karena itu potensi penuh katekol sebagai penambah mukoadhesi tidak dieksploitasi. Untuk
menghindari hal ini, di sini kita crosslink sebuah catechol-modi fi ed CS hidrogel menggunakan genipin
sebagai pengikat silang alami [34,36] , dan kami menguji gel ini untuk pengiriman obat bukal.
Penggunaan genipin sebagai pengikat silang alih-alih katekol teroksidasi memungkinkan untuk
eksploitasi penuh sifat mukoadhesi katekol, seperti yang ditunjukkan oleh tingginya tingkat gel yang
melekat pada mukosa bukal babi selama 6 jam secara in vitro dan dengan peningkatan pelepasan
lidokain hidroklorida (LD), obat anestesi lokal, in vivo pada model kelinci.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Material
Kitosan dengan berat molekul rendah (CS) (MW 50,000) e 190.000 Da, 85% deacetyla-
tion), N- (3-Dimethylaminopropyl) -N 0- ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) ( 98,0%), dan lidokain hidroklorida
monohidrat (LD) dibeli dari Sigma e Aldrich (AS). Asam hidrokafeat ( 98%) dan prokain hidroklorida (PR) diperoleh dari
Alfa Aesar (AS). Genipin (GP) (98%) dibeli dari Challenge Bioproducts (Taiwan). Lisozim dari ASI ( 100.000 unit / mg
protein) disediakan oleh Sigma e Aldrich (AS). Semua reagen lain yang digunakan dalam penelitian ini dibeli dari Sigma e
Aldrich (USA) dan digunakan langsung tanpa modi lebih lanjut fi kation.
2.2. Sintesis katekol-kitosan (Cat-CS)
Protokol sintesis Cat-CS adalah modi fi ed dari pekerjaan sebelumnya [39] . Brie fl y,
60 ml larutan CS 1% (b / v) dibuat dalam asam klorida (HCl) pada pH 2,5. Kemudian, 0,145 g asam hidrokafeat dan
0,356 g EDC dan dilarutkan masing-masing dalam 15 ml etanol dan 15 ml air deionisasi (DI). Kedua larutan dicampur
dan cepat ditambahkan ke larutan CS dengan pengadukan intensif, diikuti dengan penambahan 1 M. NaOH
meningkatkan pH menjadi 5,5. Reaksi dibiarkan berlanjut selama 18 jam. Setelah masa ini, produknya murni fi ed
dengan dialisis terhadap larutan pH 5,0 HCl selama 3 hari menggunakan tabung membran dialisis (MWCO 5.000,
Spectrum Laboratories, USA). Itu fi Produk akhir beku kering dan disimpan pada 20 C. Untuk mensintesis Cat-CS
dengan rasio konjugasi katekol yang lebih tinggi, bobot asam hidrokafeat dan EDC berlipat ganda (yaitu 0,29 g asam
hidrokafeat dan 0,712 g EDC). Tingkat konjugasi ditentukan menggunakan spektrometer UV-Vis (Carry
5000, USA) dan mengukur absorbansi larutan encer dari dua polimer Cat-CS pada 280 nm. Hasilnya dibandingkan
dengan kurva standar yang dibangun menggunakan asam hidrokafeat, dan menunjukkan kandungan katekol 9% dan
19% ( Data Tambahan S1 ). Oleh karena itu, kedua produk tersebut dinamai masing-masing sebagai Cat9-CS dan
Cat19-CS. Skema reaksi yang digunakan untuk mensintesis kedua polimer Cat-CS ditunjukkan pada Data Tambahan
S2 .
2.3. Persiapan hidrogel tertutup dan pemuatan obat
Penutup pelindung etil selulosa yang mencegah obat agar tidak berdifusi ke lumen rongga bukal dibuat dengan
cara casting pelarut. 120 m l larutan etanol selulosa 4% ditambahkan ke dalam cetakan dan dikeringkan pada suhu
kamar, membentuk tutup silinder terbuka dengan diameter 8,5 mm dan tinggi 1,6 mm ( Fig. 1 B). Tutup yang tidak dapat
ditembus ini menyediakan lapisan pelindung di bagian belakang dan sisi hidrogel, dan memungkinkan obat yang
dimuat dalam hidrogel hanya berdifusi melalui sisi yang bersentuhan dengan mukosa. Tutup itu digunakan sebagai
cetakan untuk menyembuhkan hidrogel. Untuk membuat hidrogel, larutan 1,5% (b / v) dari Cat-CS (Cat9-CS atau
Cat19-CS) disiapkan dalam 3 ml air DI sambil diaduk. 75 m l larutan 30 mg / ml GP dalam etanol ditambahkan ke
larutan Cat-CS pada rasio berat GP: Cat-CS 1: 20.150 m l campuran dipindahkan ke cetakan dan disembuhkan pada
suhu 37 C selama 12 jam. Itu fi nal hidrogel diberi nama Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP tergantung pada konten
katekolnya.
LD, obat anestesi lokal, dipilih sebagai obat model dalam penelitian ini. Untuk menyiapkan LD hidrogel yang
dimuat, LD fi pertama dilarutkan dalam larutan etanol 30mg / ml GP; 75 m l larutan ini ditambahkan ke 3 ml larutan
Cat9-CS atau Cat19-CS, diikuti dengan pengawetan pada suhu 37 C selama 12 jam. Itu fi konsentrasi LD adalah 1 mg /
hidrogel.
Sebagai kontrol, CS / GP hidrogel disiapkan dan dimuat dengan LD. Hidrogel CS / GP disiapkan oleh fi pertama-tama
melarutkan CS dalam asam asetat 1% (v / v), dan prosedur yang sama yang diuraikan di atas untuk persiapan
hidrogel tertutup Cat-CS / GP dan pemuatan obat diikuti setelahnya.
2.4. Karakterisasi fisik hidrogel
Semua hidrogel dibekukan sebelum dikarakterisasi. Spektrometer Bruker Tensor-27 Fourier transform infrared
(FTIR) yang dilengkapi dengan detektor DTGS
 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10
Fig. 1. Hidrogel Cat-CS / GP. A: Skema jaringan hidrogel Cat-CS GP-crosslinked; B: Hidrogel Cat-CS / GP dengan tutup pelindung etil selulosa; C: skema pelepasan obat di permukaan mukosa dari hidrogel tertutup.
dan VariGATR ™ sudut merumput total dilemahkan re fl aksesori ectance digunakan untuk menganalisis gugus fungsi
yang terbentuk pada hidrogel. 256 scan dikumpulkan untuk setiap sampel.
Spektroskopi resonansi magnetik nuklir (NMR) digunakan untuk melakukan con fi dari konjugasi gugus fungsi
katekol menjadi ikatan silang CS dan hidrogel. 13 Spektra C CP-MAS NMR diperoleh pada 100 MHz menggunakan
putaran rotor 7,5 mm pada 5 kHz, waktu kontak 1,5 ms dan waktu daur ulang 2 detik untuk semua sampel (Agilent /
Varian VNMRS-400, USA). Sideband pemintalan dihilangkan oleh urutan TOSS.
Morfologi hidrogel kering beku dianalisis pada JEOL JSM7600F scanning electron microscope (SEM). Potongan
melintang disk CS / GP kering-beku, Cat9-CS / GP dan hidrogel Cat19-CS / GP diamati pada tegangan percepatan 1
kV.
2.5. Erosi hidrogel secara in vitro
Hidrogel beku-kering direndam pada suhu 37 C dalam PBS (pH 6,8) mengandung 5 m g / ml lisozim (larutan
erosi). Sampel ditimbang sebelum dimasukkan ke dalam larutan erosi ( W 0). Setelah spesifik fi c kali, sampel diambil,
beku-kering, dan ditimbang lagi ( W t). Tiga ulangan dilakukan untuk setiap percobaan. Persen penurunan berat badan ( W
L%) dihitung seperti dalam Persamaan (1) :
W L% ¼ ( W 0 W t) / W 0 100 (1)
2.6. Pelepasan obat kumulatif in vitro
Hidrogel yang mengandung 1 mg LD direndam dalam 10 ml dari 10 m M. saline fosfat buffer (PBS, pH 6.8) pada
37 C. Pada setiap titik waktu, 1 ml larutan diambil untuk mengukur pelepasan, dan sementara itu 1ml PBS segar
ditambahkan. Poin waktu dipilih sebagai 15, 30, 45, 60, 90.120, 150 dan 180 menit. Setiap tes direplikasi tiga kali.
Konsentrasi LD yang dirilis dalam media PBS adalah quanti fi ed menggunakan Thermo Finnigan LCQ Duo
Spectrometer System dilengkapi dengan detektor UV. Kami menggunakan fase gerak yang terbuat dari asetonitril / air
(30/70, v / v) dan 0,1% (v / v) tri fl asam uoroacetic (TFA). 10 m l sampel disuntikkan ke instrumen dan melewati kolom
C18 Supelco Discovery (15 cm 3 mm, ukuran partikel 5 m m), pada a fl tingkat laju 0,5 ml / mnt. Puncak relatif terhadap
LD terdeteksi pada panjang gelombang 210 nm, yang muncul 2,5 menit setelah injeksi. Kurva standar diukur dengan
memplot area di bawah kurva (AUC) dari puncak 210 nm dalam serangkaian sampel dengan konsentrasi yang
diketahui. Setiap sampel diulang tiga kali.
Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
3
2.7. Tes reologi
Pengukuran reologi dilakukan untuk mengevaluasi proses pembentukan gel dan sifat viskoelastik dari fi nal
hidrogel pada TA Instruments AR2000 rheometer pengontrol tekanan (AS) yang dilengkapi dengan pelat Peltier untuk
kontrol suhu. Geometri baja kerucut ( d ¼ 40 mm, sudut ¼ 2 ) digunakan untuk semua percobaan. Pengukuran osilasi
dilakukan pada frekuensi konstan ( f ¼ 1 Hz) dan saring ( g ¼ 0,1%) dalam rejim viskoelastik linier (LVR), yang
didirikan oleh tes sapuan tekanan awal. Polimer dan pengikat silang dicampur dengan cepat dan ditempatkan di
rheometer. Proses gelasi pada 37 C diikuti melalui evolusi penyimpanan dan kehilangan moduli (G 0, G 00, masing-masing)
sebagai fungsi waktu. Perangkap pelarut digunakan untuk mencegah dehidrasi hidrogel. Kami melakukan sapuan
waktu untuk total 12 jam pada 37 C; waktu tes yang lebih lama akan mengarah ke signifikan fi tidak bisa dehidrasi gel.
Setelah 12 jam gelasi dan keseimbangan sampel, sapuan tegangan diukur dengan tegangan mulai dari 0,1 hingga
10.000 Pa untuk mengevaluasi integritas struktural jaringan hidrogel. Setiap tes direplikasi tiga kali.
2.8. Uji mukoadesi secara in vitro
Jaringan bukal babi segar direkatkan ke slide kaca mikroskop (membran mukosa menghadap ke atas) dan
ditempatkan ke dalam gelas kimia secara vertikal ( Data Tambahan S3 ). Hidrogel ditekan agar melekat pada
permukaan mukosa. Baik jaringan dan hidrogel direndam dalam 30 ml PBS (pH 6,8) pada 37 C. Batang pengaduk
amagnetik yang berputar pada kecepatan 1000 rpm digunakan untuk menghasilkan fl ow. Setiap 15 menit, jumlah
hidrogel yang masih melekat pada mukosa dicatat. Data dievaluasi menggunakan Kaplan e Meier memperkirakan
bidang kehidupan. Sepuluh sampel dari masing-masing kelompok hidrogel diuji.
2.9. Tes mukoadesi dan pelepasan obat in vivo
Hidrogel tertutup CS / GP dan Cat19-CS / GP disiapkan seperti dijelaskan sebelumnya, masing-masing
mengandung 1 mg LD. Empat kelinci jantan Selandia Baru (dewasa, berat 3,5 kg) digunakan untuk mempelajari
mukoadesi dan pelepasan obat secara in vivo. Hewan diterima dan diizinkan untuk menyesuaikan diri selama minimal
72 jam. Setiap kelinci dipanestesi menggunakan Ketamine-Xylazine-Acepromazine yang disuntikkan secara subkutan.
Setelah itu, perawatan anestesi dijamin dengan intubasi melalui mulut menggunakan yang teregulasi fl ow dari iso fl urane
(konsentrasi 1.5 e 2 vol%). Sebuah kateter ditempatkan ke dalam vena telinga marginal dari setiap kelinci untuk
mengumpulkan sampel darah. Mulut kelinci dibuka, dan lapisan mukosa pipi terbuka. Hidrogel CS / GP diaplikasikan
pada dua kelinci (R1 dan R2) yang digunakan sebagai kelompok kontrol, dan hidrogel Cat19-CS / GP ke dua kelinci
lainnya (R3 dan R4) digunakan sebagai kelompok uji. Setiap hidrogel ditekan pada lapisan pipi kelinci. Hidrogel dulu
4 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10

diizinkan untuk tetap di tempat selama total 3 jam. Kemudian, hewan diberi eutanasia dengan injeksi barbiturat 3. Hasil
overdosis secara intravena. Sampel darah (1 ml pada setiap titik waktu) dikumpulkan setelah 15, 30, 60, 90, 120, 150,
dan 180 menit sejak aplikasi hidrogel. Sampel darah ditempatkan pada suhu kamar selama 20 menit untuk koagulasi,
3.1. Karakterisasi fisik hidrogel
diikuti oleh sentrifugasi pada 3000 rpm selama 15 menit. Serum dikumpulkan dan disimpan beku sampai quanti fi kation.

Fig. 2 A menunjukkan spektrum FTIR dari katekol difungsikan CS (Cat9-CS dan Cat19-CS) dan
Untuk mengekstrak obat dari serum, sampel serum dicairkan ke suhu kamar, dan metode modi fi ed dari hidrogel yang sesuai (Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP). Dalam semua spektrum, puncak pada 905
penelitian sebelumnya digunakan [42] . Brie fl y, 600 m l serum ditambahkan ke tabung centrifuge yang mengandung
cm 1 dan 1159 cm 1 dikaitkan dengan mode getaran unit sakarida [46] , sedangkan puncaknya di 1074
100 m l dari 1 M. Na 2 BERSAMA 3
solusi, diikuti dengan penambahan 10 ml etil asetat. 5 m l dari 5 ppm prokain hidroklorida (PR) ditambahkan larutan air
cm 1 terkait dengan C e O peregangan dan / atau C e N peregangan [47] . Perbedaan utama di antara

pada saat yang sama sebagai standar internal. Campuran vortex selama 2 menit, dan kemudian disentrifugasi pada
4000 rpm selama 5 menit 7 ml lapisan organik supernatan dipindahkan ke tabung centrifuge lain dengan 200 m l dari
0,0025 M. H 2 BEGITU 4. Sekali lagi, campuran itu vortex selama 2 menit dan disentrifugasi pada 4000 rpm selama 5
menit. Supernatan etil asetat dihilangkan, dan larutan yang tersisa dinetralkan dengan menambahkan 100 m l dari 0,01 M.
NaOH. Itu fi solusi akhir dibekukan dikeringkan dan dilarutkan kembali dalam 200 m l air DI dan dianalisis dengan
kromatografi cair e spektrometri massa (LC-MS).
semua spektrum ditemukan pada 1450-1700 cm 1 wilayah. Puncak pada 1.562 cm 1 hadir dalam
spektrum CS, dan terkait dengan gugus amino terprotonasi karena adanya asam asetat sebagai
pelarut [48] ( Fig. 2 A A). Setelah pengikatan silang GP, gugus amino primer dalam CS menurun
jumlahnya, dan amida sekunder terbentuk [49] . Memang, puncaknya pada 1.562 cm 1 penurunan
intensitas dalam spektrum CS / GP ( Fig. 2 SEBUAH-

LC-MS dilakukan pada Thermo Scienti fi c Orbitrap Pindai Penuh Exaktif Plus Benchtop ™ Spektrometer Massa
dilengkapi dengan sumber ionisasi electrospray. Fase seluler fl karena pada tingkat 300 m l / mnt terdiri dari metanol /
b), sedangkan intensitas puncak pada 1640 cm 1 ( amida tipe II [50] ) meningkat. Spektrum modi
air (50/50, v / v) dan 0,1% TFA. Seorang Thermo Scienti fi c Kolom GOLD Hypersil (50 mm 2,1 mm) dengan ukuran
partikel 1,9 m m digunakan untuk pemisahan senyawa. Solusi serum dimuat dalam sampler otomatis, dan 8 m Saya katekol fi ed sampel CS ( Fig. 2 Ac to f) menunjukkan peningkatan intensitas yang drastis di wilayah
disuntikkan oleh auto-sampler ke dalam kolom. Puncak LD dan PR standar internal diidentifikasi fi ed pada nilai sekitar 1620 cm 1, yang sesuai dengan getaran peregangan C] C aromatik [51] , dengan demikian con fi memperkuat
mass-tocharge masing-masing 285.18049 dan 287.15975. Kurva standar berdasarkan rasio AUC LD ke PR pada rasio
kehadiran kelompok katekol dalam sampel Cat-CS. Karena ikatan amida ditemukan di wilayah ini
konsentrasi yang diketahui digunakan untuk menghitung konsentrasi LD dalam sampel serum.
juga

Setelah binatang itu suci fi Selain itu, hidrogel dihilangkan, dan jaringan bukal yang berkontak dengan hidrogel
diekstraksi untuk pemeriksaan histologis. Jaringan yang dipanen adalah fi disimpan dalam paraformaldehyde 2%,
dibedah secara longitudinal, dan tertanam dalam paraf fi n. 5 m m bagian jaringan yang tebal dari sisi mukosa diwarnai
dengan hematoxylin dan eosin (H&E) untuk dideteksi fl ammation, mengikuti protokol literatur [43,44] . Jaringan dari pipi
yang tidak bersentuhan dengan hidrogel juga diekstraksi dan diperiksa sebagai kontrol. Sampel bernoda diperiksa di
bawah mikroskop di magni fi kation 400 .
2.10. Analisis statistik
[50] , pengaitan silang mungkin berkontribusi pada puncak ini untuk Cat9CS / GP dan Cat19-CS / GP
( Fig. 2 Iklan dan f). Puncak kecil di 1730 cm 1 hadir dalam spektrum sampel Cat-CS, yang dapat
dikaitkan dengan aromatik dan alifatik C] O peregangan [51] .
13 C Solid state NMR digunakan untuk con lebih lanjut fi Pembentukan ikatan kovalen terjadi
selama konjugasi katekol dan ikatan silang GP. Fig. 2 Ba menunjukkan spektrum bubuk CS asli. Kami
menetapkan puncak karbon C1 ke C6 dalam struktur glukosa unit berulang CS (lihat representasi
skematik di Fig. 2 B) [52] . Puncak pada 175 ppm dan 24 ppm dihubungkan dengan ikatan C] O dan
CH 3 karena adanya struktur glukosa asetilasi yang tersisa di CS [52] . Dalam spektrum CS / GP ( Fig.
2 Bb), kita melihat peningkatan intensitas CH 3 puncak serta puncak baru pada 184 ppm, karena

Analisis statistik untuk semua tes (kecuali untuk mucoadhesion in vitro study) dilakukan dengan menggunakan kelompok asetat; perubahan-perubahan ini terkait dengan adanya asam asetat untuk melarutkan CS.
Student t uji. Bilah galat di fi angka mewakili standar deviasi (SD). Untuk studi mukoadhesion in vitro, Kaplan e Meier Spektrum kedua Cat-CS
memperkirakan analisis statistik digunakan [45] . Nilai Chi-square dihitung berdasarkan statistik uji logrank, dan
dikonversi ke hal nilai-nilai. Nilai dari hal 0,05 dianggap signifikan fi tidak bisa di semua tes.

Fig. 2. Spektra FTIR (A) dan 13 C solid state NMR spectra (B) dari (a) CS; (B) CS / GP; (c) Cat9-CS; (d) Cat9-CS / GP; (e) Cat19-CS; (f) Cat19-CS / GP.

Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10 5

Fig. 3. Gambar SEM dari struktur jaringan hidrogel. A: CS / GP; B: Cat9-CS / GP; C: Cat19-CS / GP.

polimer sebelum ikatan silang dengan GP ( Fig. 2 Bc dan e) menunjukkan intensitas puncak yang lebih
tinggi pada 175 ppm dibandingkan dengan unmodi fi ed CS. Karena puncak ini disebabkan oleh ikatan
C] O, peningkatan ini terkait dengan pembentukan ikatan amida sekunder tambahan selama
konjugasi EDC. Pada semua sampel Cat-CS, sebelum dan sesudah hubungan silang dengan GP ( Fig.
2 Bc ke f), ada peningkatan intensitas di wilayah karbon aromatik (150 e 110 ppm) dan wilayah alifatik
(50 -20 ppm) [53] e 55] dibandingkan dengan spektrum unmodi fi ed CS ( Fig. 2 Ba dan b), dengan
demikian con fi memperkuat kehadiran kelompok katekol.
menunjukkan bahwa ketiga sistem hidrogel ikatan silang GP menurunkan berat badan selama 3 hari
perendaman. Hidrogel Cat-CS / GP menunjukkan penurunan berat badan yang jauh lebih lambat
daripada hidrogel CS / GP: setelah 3 hari, hidrogel CS / GP kehilangan 24% dari berat kering awal
mereka, sementara hidrogel Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP kehilangan 17 % dan 14%
masing-masing. Ketahanan terhadap erosi pada hidrogel Cat-CS ini dapat dijelaskan oleh
kepadatannya yang lebih tinggi ( Fig. 3 ), yang bisa melambat fl penetrasi cairan dan lisozim.

Fig. 3 menunjukkan gambar SEM CS / GP, Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP. Pori-pori yang
lebih kecil dapat diamati dalam urutan Cat19-CS / GP <Cat9CS / GP < CS / GP, dengan demikian
menyiratkan modi katekol itu fi kation mengarah pada pembentukan hidrogel yang lebih padat.
Pengamatan ini menunjukkan bahwa gugus katekol dapat teroksidasi sebagian dalam hidrogel
Cat-CS: ketika katekol dioksidasi, kuinon terbentuk, yang dapat berkontribusi pada pengikatan silang
antarmolekul CS dengan membentuk kuinon. e ikatan kuinon atau kuinon-amino [34] . Ini mengarah
pada struktur yang lebih padat dengan pori-pori yang lebih kecil.
3.2. Erosi hidrogel secara in vitro
Sistem pengiriman obat bukal dalam bentuk tablet, patch,
fi Lms atau gel mengalami erosi dan degradasi selama aplikasi di rongga mulut [56] . Untuk memahami
tingkat erosi hidrogel yang diusulkan, kami menganalisis penurunan berat badan mereka dalam
larutan buffer PBS dengan penambahan lisozim. Fig. 4 SEBUAH
3.3. Pelepasan obat kumulatif in vitro
Kami memasukkan LD sebagai obat model ke hidrogel CS / GP, Cat9-CS / GP dan Cat19-CS /
GP, dan melakukan studi pelepasan obat kumulatif in vitro untuk memahami tingkat pelepasan obat. Fig.
4 B menunjukkan pelepasan LD yang berkelanjutan dari hidrogel dalam buffer PBS selama 3 jam.
Obat itu dengan cepat dilepaskan dari semua hidrogel selama fi 30 menit pertama, karena signi fi tidak
dapat konsentrasi gradien dari hidrogel ke medium. Rilis kemudian melambat, dan serupa dari semua
hidrogel selama fi 3 jam pertama (180 mnt) Setelah 3 jam, rilis dari Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP
hampir stabil, sedangkan terus meningkat untuk CS / GP. Pada akhir 5 jam, 85 ± 8% dari total LD
​yang dimuat dirilis dari CS / GP, sedangkan hanya 67 ± 11% dan 66 ± 8% dilepaskan dari Cat9-CS /
GP dan Cat19-CS / GP. Hasil ini berkorelasi baik dengan perbedaan ukuran pori yang diamati oleh
SEM ( Fig. 3 ): pori-pori dalam hidrogel Cat-CS / GP lebih kecil daripada di unmodi fi ed CS / GP
hidrogel, dan mereka mungkin menjebak bagian dari LD.

Fig. 4. Erosi hidrogel in vitro dan pelepasan obat. A: Persentase penurunan berat badan selama erosi CS / GP, Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP dalam PBS (pH ¼ 6.8) dengan 5 m g / ml lisozim. *, **, dan *** mewakili hal 0,05 dibandingkan dengan CS / GP pada
masing-masing 3 jam, 1 hari dan 3 hari; B: pelepasan LD kumulatif dari hidrogel dalam PBS (pH 6,8) pada 37 Mewakili C. * dan ** hal 0,05 ketika membandingkan CS / GP dengan Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP, masing-masing.

Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
6 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10

Tabel 1 Meja 2
Ringkasan eksponen difusi n dan koefisien korelasi fi cient R 2 berasal dari Ringkasan tes reologi.
fi t dari fi 60% pertama dari jumlah total obat yang dilepaskan dari CS / GP, Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP menurut
CS / GP Cat9-CS Cat19-CS Cat9-CS / GP Cat19-CS / GP
model Ritger dan Peppas (Persamaan (2) ).

Waktu gelation (min) 92 ± 3 342 ± 14 345 ± 23 136 ± 8 100 ± 11

Hidrogel Eksponen difusi, n R2
Ekuilibrium G 0 ( Pa) 1403 ± 172 4 ± 1 6 ± 1 282 ± 69 439 ± 59
CS / GP 0,51 0,99
Cat9-CS / GP 0,47 0,99
Cat19-CS / GP 0,50 0,98
mulai gelasi, G 0 nilai lebih tinggi dari G 00 untuk semua sampel, menunjukkan bahwa mereka dalam
keadaan seperti cairan dan sifat kental mendominasi. G awal 0 dan G 00 nilai dari kedua sampel Cat-CS
/ GP lebih rendah dibandingkan dengan CS / GP, menunjukkan bahwa Cat9CS dan Cat19-CS yang
Data yang sesuai dengan fi 60% pertama dari jumlah total obat yang dilepaskan dapat fi terkait
dilarutkan dalam air menghasilkan larutan yang lebih tidak kental dibandingkan CS yang dilarutkan
dengan model yang diusulkan oleh Ritger dan Peppas (Persamaan (2) ) untuk memahami kinetika
dalam asam asetat. Setelah beberapa waktu, keduanya G 0 dan G 00 moduli meningkat, tetapi G 0 meningkat
dan mekanisme pelepasan obat [57] :
pada tingkat yang lebih tinggi daripada G 00

Ini menunjukkan bahwa solusi sampel berubah menjadi sampel yang semakin padat, dan secara
M. t / M. ∞ ¼ kt n (2)
bertahap sifat elastisnya mendominasi. Transformasi ini terkait dengan laju dan jumlah ikatan silang
yang terbentuk dalam hidrogel. Waktu pembentukan gel, de fi ned sebagai waktu di mana G 0 dan G 00 berpotongan,
dimana M. t dan M. ∞ mewakili jumlah obat yang dilepaskan saat itu juga t
adalah 92 menit, 136 menit, dan 100 menit untuk CS / GP, Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP,
dan pada keseimbangan (jumlah total obat yang dimuat dalam hidrogel), dan dengan demikian M. t / M. ∞
masing-masing ( Meja 2 ). Setelah 12 jam, semua gel hampir mencapai keadaan keseimbangannya.
mewakili pelepasan fraksional dari obat pada saat itu t. Konstanta proporsionalitas k dan difusi
Itu fi nal G 0
eksponen n
diturunkan berdasarkan daya fi informasi M. t / M. ∞ vs. t. k adalah karakteristik penggabungan konstan
diukur lebih tinggi untuk CS daripada sampel Cat-CS, dalam urutan CS / GP> Cat19-CS / GP> Cat9-CS
yang terkait dengan sistem jaringan makromolekul dan obat, sementara n kembali fl mempengaruhi
/ GP, yang dapat mengindikasikan bahwa katekol mengganggu pengait silang GP, dan bahwa jika
mekanisme pelepasan obat [58] . Untuk sampel silindris, kapan n berada dalam kisaran 0,45 e 0,89,
ada hubungan silang antara katekol teroksidasi, ini tidak meningkatkan sifat mekanik gel Cat-CS.
mekanisme rilisnya adalah de fi ned sebagai difusi non-Fickian [57] .
Faktanya, kami menganalisis selfcrosslinking di Cat-CS dengan melakukan tes reologi yang serupa
pada sampel Cat-CS tanpa menambahkan GP ( Fig. 5 B). G 0 dan G 00 moduli sampel ini meningkat
secara bertahap dengan waktu, dan menyeberang pada waktu gelasi 342 dan 345 menit
Tabel 1 menunjukkan bahwa nilai n untuk CS / GP, Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP berada
masing-masing untuk Cat9-CS dan Cat19-CS, masing-masing (nilai-nilai ini tidak signifikan secara
dalam kisaran 0,45 e 0,89, jadi mereka semua fi ta model difusi non-Fickian. Ini menunjukkan bahwa
statistik fi sangat berbeda, lihat Meja 2 ). Ini menunjukkan bahwa self-crosslinking dapat terjadi, tetapi
LDW dilepaskan oleh difusi dan erosi. Memang, degradasi hidrogel signifikan bahkan di dalam fi 3 jam
jauh lebih lambat daripada crosslinking yang dicapai di hadapan GP ( Fig. 5 SEBUAH). Fig. 5 B
pertama ( Fig. 4 SEBUAH). CS / GP menunjukkan yang tertinggi n
menunjukkan uji reologi yang dilakukan pada sampel CS tanpa GP untuk perbandingan.
Sampel-sampel ini tidak pernah berbentuk gel (G 0 dan G 00 garis horizontal dan tidak pernah
(0,51), yang dapat dijelaskan dengan tingkat penurunan berat badan tertinggi dibandingkan dengan
bersilang), yang mana con fi rms bahwa dengan tidak adanya katekol CS saja tidak dapat gel oleh
dua katekol-modi fi sistem ed.
interaksi antarmolekul. Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa sampel CatCS dapat
melakukan self-crosslink ke gel, meskipun pada tingkat yang lebih lambat daripada dengan adanya
3.4. Tes reologi GP. Ini harus dihubungkan dengan reaksi antara katekol teroksidasi (kuinon) dan kuinon lain atau
gugus amino yang ada dalam Cat-CS [34] .
Sifat mekanik penting untuk dipertimbangkan dalam desain sistem pengiriman obat bukal.
Sistem pengiriman bukal yang ideal harus memiliki suf fi kekuatan mekanik yang efisien untuk
diterapkan pada mukosa bukal [14] . Kami melakukan tes reologi untuk memantau evolusi G 0 dan G 00 moduli
selama pembentukan gel ( Fig. 5 SEBUAH). Pada

Fig. 5. Karakterisasi reologi hidrogel. A: Perubahan G 0 dan G 00 sambil menyembuhkan di 37 C CS dan hidrogel Cat-CS di hadapan GP; B: perubahan dalam G 0 dan G 00 sambil menyembuhkan di 37 C CS dan hidrogel Cat-CS tanpa adanya GP; C:
perubahan dalam G 0 dengan meningkatnya tekanan osilasi untuk hidrogel CS dan Cat-CS di hadapan GP setelah gelasi 12 jam. Untuk semua percobaan f ¼ 1 Hz dan g ¼ 0,1%.

Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10
Untuk mengevaluasi sifat-sifat mekanis dari hidrogel-ikatan silang, kami mengukur
ketergantungan G 0 moduli pada stres osilasi setelah 12 jam gel equilibration ( Fig. 5 C). Dalam rezim
viskoelastik linier (LVR), G 0 tidak tergantung dari tegangan geser yang diterapkan sedangkan
tegangan yang diterapkan berada dalam fase dengan regangan [59] . Memang, ketiga hidrogel yang
bertaut menunjukkan hampir fl di G 0 kurva pada tekanan rendah. Ketika stres meningkat melampaui
LVR, G 0 menurun tajam ketika struktur jaringan hidrogel runtuh, dan tegangan yang diberikan tidak
lagi dalam fase dengan regangan [59] . Perbedaan tegangan geser kritis setelah mana hidrogel
Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP rusak dibandingkan dengan CS / GP tidak signifikan secara
statistik. fi tidak bisa Hidrogel-ikatan silang yang dibuat tanpa GP, Cat9-CS dan Cat19-CS,
menunjukkan tegangan geser kritis yang jauh lebih rendah (sekitar 10 Pa), menunjukkan bahwa
gel-gel ini jauh lebih lemah ( Data Tambahan S4 ).
3.5. Mukoadesi secara in vitro
Sistem pengiriman obat bukal harus mempertahankan daya rekatnya pada permukaan mukosa
bukal untuk waktu yang lama untuk meningkatkan waktu tinggal obat. Kami mengevaluasi
mucoadhesion dari hidrogel CS / GP, Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP secara in vitro, dengan
mencatat jumlah hidrogel yang tersisa yang melekat pada membran mukosa bukal buccal di PBS
sambil diaduk. Fig. 6 menunjukkan evolusi dari angka ini melalui kurva survival estimasi
Kaplan-Merier. Semua unmodi fi ed CS / GP hidrogel terlepas dari membran mukosa di dalam fi pertama
1,5 jam, dengan demikian menunjukkan bahwa CS saja hanya memberikan mucoadhesion yang
lemah ke jaringan bukal. Sebaliknya, hidrogel Cat9-CS / GP dan Cat19-CS / GP melekat pada
jaringan lebih lama: pada akhir 6 jam, dua dari sepuluh hidrogel Cat9-CS / GP dan tujuh dari sepuluh
Cat19-CS / GP Hidrogel masih menempel di mukosa bukal. Ini tidak diragukan lagi menunjukkan
bahwa katekol dapat secara efektif meningkatkan CSmoadoadion ke jaringan bukal, dan peningkatan
tersebut sebanding dengan jumlah kelompok katekol yang diperkenalkan.
3.6. Eksperimen in vivo
Setelah membuktikan bahwa hidrogel Cat-CS / GP dapat menginduksi peningkatan mukoadhesi
in vitro, kami mempelajari pemberian obat in vivo
Fig. 6. Estimasi kurva survival Kaplan-Merier yang menunjukkan adhesi hidrogel CS / GP dan Cat-CS / GP pada mukosa
bukal babi di PBS (pH 6,8) pada 37 C. * mewakili hal 0,05 dibandingkan dengan CS / GP.
Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
7
pada kelinci. Kami memilih unmodi fi ed hidrogel CS / GP sebagai kelompok kontrol, dan hidrogel
Cat19-CS / GP sebagai kelompok uji. Kami memuat hidrogel dengan LD sebagai model obat, dan
menyiapkan hidrogel tertutup dengan membuang hidrogel pada membran etil selulosa yang kedap air
untuk mencegah pelepasan saliva dari sisi hidrogel yang tidak bersentuhan dengan membran bukal.
Setelah mengaplikasikan hidrogel di dalam salah satu pipi kelinci yang bersentuhan dengan
membran mukosa bukal, kami mengambil sampel darah pada titik waktu yang berbeda untuk
memantau konsentrasi obat dalam serum.
Gbr. 7 menunjukkan bahwa konsentrasi LD dalam serum meningkat setelah penerapan hidrogel,
menunjukkan bahwa LD diserap melalui membran mukosa bukal dan mencapai sirkulasi darah.
Konsentrasi serum LD jauh lebih tinggi jika obat dilepaskan dari hidrogel yang dibuat dengan
Cat19-CS (kelinci R3 dan R4, kelompok uji) dibandingkan dengan mereka yang tidak dengan unmodi fi
ed CS (kelinci R1 dan R2, kelompok kontrol). Setelah sekitar 2 jam dari awal aplikasi, konsentrasi LD
yang diukur dalam serum kelompok kontrol menurun signifikan fi yang paling penting, mencapai nilai
yang hampir dapat diabaikan di akhir percobaan. Sebaliknya, konsentrasi LD tetap relatif tinggi pada
kelompok uji; sekitar 1 ng LD per ml serum dapat dideteksi pada akhir percobaan, sehingga
menunjukkan bahwa hidrogel Cat19-CS / GP dapat memberikan pelepasan LD berkelanjutan in vivo
setidaknya selama 3 jam.
Gbr. 8 menunjukkan gambar histologis dari jaringan mukosa bukal yang dikumpulkan dari pipi
yang tidak bersentuhan dengan hidrogel ( Gbr. 8 A dan B) dan dari yang kontak dengan hidrogel
Cat19CS / GP selama 3 jam ( Gbr. 8 C dan D). Gambar-gambarnya sangat mirip. Otot kerangka yang
sehat fi bers ( Gbr. 8 A dan C) dan saluran ekskresi (panah dalam Gbr. 8 B dan D) tanpa signi fi tidak bisa
masuk fl ammasi, nekrosis, atau metaplasia diperlihatkan dalam jaringan yang berkontak dengan
hidrogel, dengan demikian membuktikan bahwa hidrogel Cat9-CS / GP sangat biokompatibel.
4. Diskusi
Kami mengembangkan hidrogel baru yang terbuat dari GPCS, yang menunjukkan menjadi
sistem pengiriman obat bukal mukoadhesif yang menjanjikan. Meskipun ada beberapa penelitian
yang terkait dengan katekol-modi fi ed hidrogel [34] e 39] , ini adalah fi pertama kali seperti itu
Gbr. 7. Konsentrasi LD diukur dalam serum kelinci R1-R4 setelah pemberian tambalan yang diisi obat pada mukosa
bukal kelinci. Hidrogel CS / GP digunakan untuk membuat tambalan yang diterapkan pada kelinci R1 dan R2
(kelompok kontrol); Hidrogel Cat9-CS / GP digunakan untuk tambalan yang diterapkan pada kelinci R3 dan R4
(kelompok uji).
8 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10
Gbr. 8. H & Pewarnaan jaringan mukosa bukal kelinci yang diambil dari jaringan kontrol sehat dari pipi yang tidak bersentuhan dengan tambalan (A dan B) dan dari area yang bersentuhan dengan tambalan Cat19-CS / GP setelah 3 jam aplikasi (C
dan D ).
sebuah sistem digunakan untuk pengiriman obat mukoadhesif. Dalam penelitian sebelumnya, kami
telah menunjukkan bahwa dengan mencampur senyawa katekol dan CS sederhana, mucoadhesion
CS ditingkatkan [41] . Di sini kami menunjukkan peningkatan mukoadhesion yang lebih besar, mungkin
karena fakta bahwa dalam hal ini kami secara kovalen mengikat kelompok katekol ke CS, dan oleh
karena itu kelompok ini tidak dilepaskan selama kontak dengan mukosa.
Sementara CS biasanya larut hanya pada pH asam, fungsionalisasi katekol mengubahnya
menjadi polimer yang larut dalam air pada pH fisiologis [60] . Memang, hidrogel Cat-CS / GP yang
ditunjukkan dalam penelitian ini disiapkan pada pH fisiologis dalam air. Ini menyiratkan bahwa
mereka berpotensi dimuat dan memberikan senyawa bioaktif atau obat yang menjadi tidak stabil
pada kondisi non-fisiologis.
Berbeda dari hidrogel yang mengandung katekol sebelumnya yang diusulkan dalam literatur,
pengikatan silang gel dilakukan dengan GP. Dalam semua penelitian sebelumnya, sejauh yang kami
ketahui, gelasi dicapai baik melalui pengikatan silang kelompok katekol teroksidasi
[34,36] , atau melalui interaksi katekol dengan kelompok lain [37,39] . Kedua strategi mengkonsumsi
kelompok katekol; alih-alih, karena GP hanya mengonsumsi gugus amino untuk ikatan silang, gugus
katekol dalam gel kita tetap utuh. Ketersediaan sebagian besar kelompok katekol dalam hidrogel saat
ini menjelaskan peningkatan luar biasa dalam mukoadhesi yang diamati baik secara in vitro dan
secara tidak langsung in vivo oleh hasil pemberian obat. Memang, pelepasan LD berkelanjutan yang
diamati dari hidrogel Cat19-CS / GP in vivo harus dikaitkan dengan kontak yang lebih intim antara gel
dan mukosa, sehingga memungkinkan obat untuk diserap melalui themucosa. Konsentrasi LD yang
lebih rendah yang terdeteksi pada kelompok kontrol dapat dijelaskan oleh area kontak yang
berkurang karena kegagalan adhesi intim patch CS / GP setelah aplikasi.
Penggunaan GP sebagai pengikat silang memiliki keuntungan lebih lanjut dari sitotoksisitasnya yang
sangat rendah, sekitar 10.000 kali lebih rendah daripada glutaraldehyde
[61] . Memang, analisis histologis tidak menunjukkan bukti apa pun di fl ammasi atau reaksi merugikan
pada saat kontak dengan Cat19-CS /
Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
GP hidrogel. Akhirnya, pengikatan silang GP memungkinkan sintesis gel yang kuat secara mekanis:
tidak ada signifikansi fi tidak dapat perbedaan dalam tegangan geser kritis yang diukur pada
katekol-modi fi ed dan CS hanya hidrogel.
Konsentrasi LD yang diukur dalam serum setelah pelepasan 3 jam dari tambalan Cat19-CS / GP
adalah sekitar 1,4 ng / ml. Nilai rendah ini tidak terduga. LD harus melewati beberapa hambatan
sebelum mencapai aliran darah, sehingga tingkat penetrasi terbatas. Okamoto et al. melaporkan
bahwa tingkat penetrasi LD dilepaskan dari lidocaine-hydroxypropylcellulose fi Lm untuk pemberian
bukal serendah sekitar 5% dari dosis yang dimuat per jam, diukur secara in vitro melalui mukosa
mulut hamster yang dipotong [62] . Selain itu, ketika LD memasuki sirkulasi darah, sejumlah besar
mengikat protein plasma, dan antara 70% dan 90% dengan cepat dimetabolisme oleh hati. [63,64] .
Waktu paruh LD (yaitu waktu setelah setengah konsentrasi LD dalam darah dimetabolisme) adalah
sekitar 1,5 jam [65] . Hersh et al. mengevaluasi konsentrasi plasma LD setelah menerapkan sistem
pengiriman transoral DentiPatch LD komersial pada pipi manusia [66] . Mereka menerapkan 2 cm 2 tambalan
yang mengandung 23mg atau 46mg. Setelah 15 menit, mereka hanya mampu mendeteksi sekitar 15
ng / ml atau sekitar 20 ng / ml plasma dari 2 jenis tambalan. Nilai-nilai ini berkorelasi baik dengan
yang ditemukan dalam penelitian kami, mengingat bahwa kami hanya menempatkan 1 mg LD di
setiap hidrogel, dan area kontak hidrogel kami adalah setengah dari tambalan yang digunakan dalam
Ref. [66] .
5. Kesimpulan
Pemberian obat bukal adalah metode yang menarik untuk memberikan obat yang dapat
bertindak secara sistemik dan lokal. Bahan mukoadhesif sangat penting untuk aplikasi ini, karena
mereka meningkatkan retensi sistem pengiriman pada membran mukosa, sehingga memungkinkan
untuk rilis obat yang diperpanjang. Dalam studi ini, kami mengembangkan hidrogel mukoadhesif yang
terbuat dari GP-CS Cat silang. Hidrogel Cat-CS lebih padat daripada hidrogel CS, sehingga
memungkinkan degradasi yang lebih lambat dan pelepasan obat secara in vitro. Meski kurang
crosslinked dibandingkan CS / GP
 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10
Hidrogel, sifat mekanik hidrogel Cat-CS / GP sebanding dengan hidrogel CS / GP.
Salah satu fitur unik dari hidrogel ini adalah bahwa kami menjaga fungsi kelompok katekol, yang
bertanggung jawab untuk peningkatan mukoadhesi yang sangat baik dibandingkan dengan unmodi fi ed
CS / GP hidrogel. Hidrogel Cat-CS / GP jauh lebih perekat dari gel CS / GP untuk membran mukosa
bukal bukal in vitro. In vivo, Cat19-CS / GP berhasil memberikan LD melalui membran mukosa bukal
kelinci, mencapai tingkat serum yang sebanding dengan yang dicapai dengan tambalan komersial.
Hidrogel bersifat biokompatibel dan tidak memperoleh jaringan apa pun di dalamnya fl ammation.
Dibandingkan dengan formulasi pengiriman obat bukal lainnya termasuk tablet, fi Lms, patches,
partikulat, semipadat dan cairan, hidrogel Cat-CS / GP memiliki keunggulan menyediakan lingkungan
fisiologis yang dapat digunakan untuk memberikan nutraceuticals, protein, atau bahkan sel. Ini, di
samping dengan sifat mekanik yang baik dari hidrogel, membuat sistem ini ideal untuk pengiriman
bioaktif farmasi. Selain pemberian obat bukal, kami membayangkan bahwa hidrogel ini dapat berhasil
digunakan sebagai sistem pengiriman obat mukoadhesif untuk aplikasi lain, termasuk misalnya
saluran pencernaan yang menargetkan untuk pengobatan penyakit seperti kolitis ulserativa.
Ucapan Terima Kasih
Para penulis mengakui dukungan dari Program Ketua Penelitian Kanada, Yayasan Kanada
untuk Inovasi, Dewan Penelitian Ilmu Pengetahuan Alam dan Teknik Kanada, dan Makanan Lanjutan
& Bahan Jaringan. Para penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Bpk. Nadim Saadeh atas
bantuan dalam prosedur eksperimental dan diskusi analisis HPLC dan LC-MS, Dr. Frederick Morin
atas bantuan dalam pengukuran dan interpretasi data karakterisasi NMR, dan Bpk. Sherif Abdalla
dan Nn. Minh Duong untuk persiapan sampel histologis.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan terkait dengan artikel ini dapat ditemukan di http: //
dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10.024 .
Referensi
[1] Smart JD. Pemberian obat bukal. Expert Opin Drug Deliv 2005; 2: 507 e 17 . [2] Shojaei AH. Mukosa bukal sebagai
rute pengiriman obat sistemik: ulasan.
J Pharm Pharm Sci 1998; 1: 15 e 30 .
[3] Squier CA, Kremer MJ. Biologi mukosa mulut dan kerongkongan. JNCI Monogr
2001; 2001: 7 e 15 .
[4] Lesch CA, CA Squier, Cruchley A, Williams DM, Speight P. Permeabilitas
mukosa mulut manusia dan kulit untuk air. J Dent Res 1989; 68: 1345 e 9 .
[5] Patel VF, Liu F, Brown MB. Pemodelan rongga mulut: in vitro dan in vivo
evaluasi sistem pengiriman obat bukal. J Control Release 2012; 161: 746 e 56 .
[6] Patel VF, Liu F, Brown MB. Kemajuan dalam pengiriman obat transmukosa oral.
J Control Release 2011; 153: 106 e 16 .
[7] Darwish M, Kirby M, Robertson Jr P, Tracewell W, Jiang JG. Mutlak dan
ketersediaan hayati relatif tablet fentanil bukal dan fentanil sitrat transmukosa oral. J Clin Pharmacol 2007; 47:
343 e 50 .
[8] Xu HB, Huang KX, Zhu YS, Gao QH, Wu QZ, Tian WQ, dkk. Hipoglikemik
efek dari formulasi bukal insulin baru pada kelinci. Pharmacol Res 2002; 46: 459 e 67 .
[9] El-Samaligy MS, A fi fi NN, Mahmoud EA. Meningkatkan bioavailabilitas silymarin
menggunakan sistem pengiriman liposomal bukal: persiapan dan penyelidikan desain eksperimental. Int J
Pharm 2006; 308: 140 e 8 .
[10] Rana P, Murthy RSR. Formulasi dan evaluasi bukal mukoadhesif
fi Lm diresapi dengan nanosuspensi carvedilol: pendekatan potensial untuk pemberian obat yang memiliki
tinggi fi metabolisme metabolisme pertama. Drug Deliv 2013; 20: 224 e 35 .
[11] Perioli L, Ambrogi V, Rubini D, Giovagnoli S, Ricci M, Blasi P, dkk. Novel
formulasi bukal mukoadhesif yang mengandung metronidazol untuk pengobatan penyakit periodontal. J
Control Release 2004; 95: 521 e 33 .
Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
9
[12] Aksungur P, Sungur A, Ünal S, _ Pengiriman Iskit AB, Squier CA, S¸ enel S. Chitosan
sistem untuk pengobatan mucositis oral: studi in vitro dan in vivo. J Control Release 2004; 98: 269 e 79 .
[13] Codd JE, Deasy PB. Pengembangan formulasi dan evaluasi in vivo sebuah novel
permen bioadhesif yang mengandung kombinasi sinergis agen antijamur. Int J Pharm 1998; 173: 13 e 24 .
[14] Sudhakar Y, Kuotsu K, Bandyopadhyay AK. Pengiriman obat bioadhesif bukal
d pilihan yang menjanjikan untuk kurang efektif secara oral fi obat-obatan. J Control Release 2006; 114: 15 e 40 .
[15] Morales JO, McConville JT. Pembuatan dan karakterisasi mukoadhesif
bukal fi lms. Eur J Pharm Biopharm 2011; 77: 187 e 99 .
[16] Rao S, Lagu Y, Peddie F, Evans AM. Sebuah mukoadhesif bukal tri-layered novel
patch untuk pengiriman obat: penilaian pengiriman nikotin. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 794 e 9 .
[17] Maurya SK, Bali V, Pathak K. Sistem pengiriman obat transmucosal dari Indonesia
pravastatin sodium: optimasi statistik, in vitro, ex vivo, in vivo dan penilaian stabilitas. Drug Deliv 2012; 19: 45 e 57
.
[18] Yehia SA, El-Gazayerly ON, EB Basalious. Flukonazol mukoadhesif bukal
fi lms: kinerja in vitro / in vivo. Curr Drug Deliv 2009; 6:17 e 27 .
[19] Peh KK, Wong CF. Polimer fi lms sebagai kendaraan untuk pengiriman bukal: pembengkakan,
sifat mekanik, dan bioadhesif. J Pharm Pharm Sci 1999; 2: 53 e 61 .
[20] Jaipal A, Pandey MM, Abhishek A, Vinay S, Charde SY. Interaksi kalsium
sulfate with xanthan gum: efek pada bioadhesion dan perilaku pelepasan obat dari xanthan gum buccal
buspirone. Koloid Surf B Biointerfaces 2013; 111: 644 e 50 .
[21] Langoth N, Kahlbacher H, Schoffmann G, Schmerold I, Schuh M, Franz S, et al.
Chitoans thiolated: desain dan evaluasi in vivo dari sistem pengiriman obat peptida bukal mukoadhesif. Pharm
Res 2006; 23: 573 e 9 .
[22] Martin L, Wilson CG, Koosha F, Uchegbu IF. Pengiriman bukal berkelanjutan dari
denbufilin obat hidrofobik menggunakan hidrogel kitosan palmitoil glikol yang dihubungkan secara fisik. Eur J
Pharm Biopharm 2003; 55: 35 e 45 .
[23] Remunan-Lopez C, Portero A, Vila-Jato JL, Alonso MJ. Desain dan evaluasi
chitosan / etilselulosa mukoadhesif perangkat berlapis untuk pengiriman obat bukal. J Control Release 1998;
55: 143 e 52 .
[24] Rinaudo M. Chitin dan chitosan: properti dan aplikasi. Prog Polym Sci
2006; 31: 603 e 32 .
[25] Sogias IA, Williams AC, Khutoryanskiy VV. Mengapa chitosan mukoadhesif?
Biomakromolekul 2008; 9: 1837 e 42 .
[26] Lehr CM, Bouwstra JA, Schacht EH, Junginger HE. Evaluasi in vitro terhadap
sifat mukoadhesif kitosan dan beberapa polimer alami lainnya. Int J Pharm 1992; 78: 43 e 8 .
[27] Grabovac V, Guggi D, Bernkop-Schnürch A. Perbandingan mukoadhesif
sifat berbagai polimer. Adv Drug Deliv Rev 2005; 57: 1713 e 23 .
[28] Sandri G, Rossi S, Bonferoni MC, Ferrari F, Zambito Y, Colo GD, dkk. Bukal
sifat peningkatan penetrasi chitosan N-trimethyl: in fl Pengaruh tingkat quaternisasi pada penyerapan molekul
dengan berat molekul tinggi. Int J Pharm 2005; 297: 146 e 55 .
[29] Bernkop-Schnurch A, Freudl J. studi banding in vitro yang berbeda
konjugat pengomposisi kitosan. Pharmazie 1999; 54: 369 e 71 .
[30] Kast CE, Bernkop-Schnürch A. Poliester yang diisolasi d thiomer: pengembangan
dan evaluasi in vitro kitosan e konjugat asam tioglikolat. Biomaterial 2001; 22: 2345 e 52 .
[31] Snyder GH, Reddy MK, Cennerazzo MJ, Lapangan D. Penggunaan energi elektrostatik lokal
vironments sistein untuk meningkatkan pembentukan spesies yang diinginkan dalam disul reversibel fi reaksi
pertukaran de. Biochim Biophys Acta 1983; 749: 219 e 26 .
[32] Leitner VM, Marschütz MK, Bernkop-Schnürch A. Mucoadhesif dan kohesif
sifat poli (asam akrilat) - sistein konjugat berkenaan dengan massa molekulnya. Eur J Pharm Sci 2003; 18: 89 e 96
.
[33] Jewett SL, Eddy LJ, Hochstein P. Apakah autoksidasi katekolamin terlibat
pada cedera iskemia-reperfusi? Radic Biol Med 1989; 6: 185 e 8 .
[34] Wu J, Zhang L, Wang Y, Long Y, Gao H, Zhang X, et al. Terinspirasi kerang
kimia untuk modi yang kuat dan permukaan fi multilayer mampu fi lms. Langmuir 2011; 27: 13684 e 91 .
[35] Lee H, Dellatore SM, Miller WM, Messersmith PB. Permukaan yang terinspirasi kerang
kimia untuk pelapis multifungsi. Sains 2007; 318: 5 .
[36] Lee C, Shin J, Lee JS, Byun E, Ryu JH, Um SH, dkk. Terinspirasi bio, bebas kalsium
hidrogel alginat dengan sifat fisik dan mekanis yang dapat disesuaikan dan biokompatibilitas yang lebih baik.
Biomakromolekul 2013; 14: 2004 e 13 .
[37] Fullenkamp DE, Rivera JG, Yk Gong, Lau KHA, He L, Varshney R, et al. Remis-
mengilhami hidrogel antibakteri pelepas perak. Biomaterial 2012; 33: 3783 e 91 .
[38] Hong S, Yang K, Kang B, Lee C, Lagu IT, Byun E, dkk. Katekol asam hialuronat:
biopolimer yang menunjukkan perekat yang bergantung pada ph atau sifat kohesif untuk rekayasa sel induk
saraf manusia. Adv. Fungsi Mater. 2013; 23: 1774 e 80 .
[39] Ryu JH, Lee Y, Kong WH, Kim TG, Park TG, Lee H. Catechol difungsikan
kitosan / hidrogel pluronik untuk perekat jaringan dan bahan hemostatik. Biomakromolekul 2011; 12: 2653 e 9 .
[40] Zhang H, Br e LP, Zhao T, Zheng Y, Newland B, terinspirasi Wang W. Mussel
polimer poli (amino ester) hiperbranch sebagai perekat jaringan basah yang kuat. Biomaterials 2014; 35: 711 e 9
.
[41] Xu J, Soliman GM, Barralet J, Cerruti M. Mollusk lem yang menginspirasi mukoadhesif
untuk aplikasi biomedis. Langmuir 2012; 28: 14010 e 7 .
[42] Kawai R, Fujita S, Suzuki T. kuantitasi simultan dari lidocaine dan keempatnya
metabolit dengan kromatografi cair kinerja tinggi: aplikasi untuk
10 J. Xu et al. / Biomaterials xxx (2014) 1 e 10
studi tentang in vitro dan metabolisme in vivo dari lidokain pada tikus. J Pharm Sci 1985; 74: 1219 e 24 .
[43] Thompson SW. Metode histokimia dan histopatologis yang dipilih. CC
Thomas; 1966 .
[44] Sheehan DC, Hrapchak BB. Teori dan praktik histoteknologi. Battelle
Tekan; 1987 .
[45] Bland JM, Altman DG. Probabilitas kelangsungan hidup (metode Kaplan-Meier). Br
Med J 1998; 317: 1572 e 80 .
[46] Mi FL, Sung HW, Shyu SS. Pelepasan indometasin dari chitosan novel
microsphere disiapkan oleh crosslinker yang terjadi secara alami: pemeriksaan crosslinking dan polycation e interaksi
obat anionik. J Appl Polym Sci 2001; 81: 1700 e 11 .
[47] Butler MF, Ng YF, Pudney PDA. Mekanisme dan kinetika dari crosslinking
reaksi antara biopolimer yang mengandung gugus amina primer dan genipin. J Polym Sci Bagian A Polym
Chem 2003; 41: 3941 e 53 .
[48] Mi FL, Sung HW, Shyu SS, Su CC, Peng CK. Sintesis dan karakterisasi
dari manik-manik gel kitosan TPP / genipin yang dapat terurai secara hayati. Polymer 2003; 44: 6521 e 30 .
[49] Kawadkar J, Chauhan MK. Pengiriman intra-artikular dari genipin cross-linked
mikrosfer kitosan dari fl urbiprofen: persiapan, karakterisasi, studi in vitro dan in vivo. Eur J Pharm Biopharm
2012; 81: 563 e 72 .
[50] Chen H, Ouyang W, Lawuyi B, Martoni C, Prakash S. Reaksi kitosan dengan
genipin dan nya fl atribut uorogenik untuk karakterisasi membran mikrokapsul potensial. J Biomed Mater Res A
2005; 75: 917 e 27 .
[51] Ofner J, Krüger HU, Grothe H, P Schmitt-Kopplin, Whitmore K, Zetzsch C.
Karakterisasi fisika-kimia SOA berasal dari katekol dan guaiacol
e zat model untuk fraksi aromatik HULIS atmosfer. Atmos Chem Phys 2011: 11 .
[52] Heux L, Brugnerotto J, Desbri eres J, Versali MF, Rinaudo M. Solid state NMR untuk
penentuan tingkat asetilasi kitin dan kitosan. Biomacromolekul 2000; 1: 746 e 51 .
[53] Zhang M, Haga A, Sekiguchi H, Hirano S. Struktur serangga kitin diisolasi
dari kutikula larva kumbang dan ulat sutera ( Bombyx mori) pupa exuvia. Int J Biol Macromol 2000; 27: 99 e 105 .
Silakan kutip artikel ini di media sebagai: Xu J, et al., Genipin-crosslinked catechol-chitosan mukoadhesif hidrogel untuk pengiriman obat bukal, Biomaterials (2014),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2014.10 0,024
[54] Fründ R, Gonz alez-Vila FJ, Lüdemann HD, Martín Martínez F. Perbandingan
CPMAS keadaan padat dan larutan karbon-13-NMR spektrum asam humat diekstraksi dari sampah kota yang
dikomposkan. Z für Naturforsch 1987; 42: 205 e 8 .
[55] Wyman CE. Pretreatment air biomassa tanaman untuk biologi dan
konversi kimia menjadi bahan bakar dan bahan kimia. John Wiley & Sons; 2013 .
[56] Salamat-Miller N, Chittchang M, Johnston TP. Penggunaan mukoadhesif
polimer dalam pengiriman obat bukal. Adv Drug Deliv Rev 2005; 57: 1666 e 91 .
[57] Ritger PL, Peppas NA. Persamaan sederhana untuk deskripsi pelepasan zat terlarut II.
Pelepasan Fickian dan anomali dari perangkat yang bisa membengkak. J Control Release 1987; 5: 37 e 42 .
[58] Ritger PL, Peppas NA. Persamaan sederhana untuk deskripsi pelepasan zat terlarut I.
Fickian dan non- fi pelepasan ckian dari perangkat yang tidak bisa membengkak dalam bentuk lempengan, bola,
silinder atau cakram. J Control Release 1987; 5: 23 e 36 .
[59] Moura MJ, Figueiredo MM, Gil MH. Studi reologi genipin terkait silang
hidrogel kitosan. Biomacromolekul 2007; 8: 3823 e 9 .
[60] Bhattarai N, Gunn J, hidrogel berbasis Zhang M. Chitosan untuk dikendalikan,
pemberian obat terlokalisir. Adv Drug Deliv Rev 2010; 62: 83 e 99 .
[61] Dinyanyikan HW, Huang RN, Huang LL, Tsai CC. Evaluasi in vitro sitotoksisitas a
reagen cross-linking yang terjadi secara alami untuk jaringan biologis fi xation. J Biomater Sci Polym Ed 1999;
10: 63 e 78 .
[62] Okamoto H, Taguchi H, Iida K, Danjo K. Pengembangan polimer fi lm dosis
bentuk lidokain untuk pemberian bukal: I. Tingkat penetrasi dan laju pelepasan. J Control Release 2001; 77:
253 e 60 .
[63] Leopold A, Wilson S, Weaver JS, Moursi AM. Farmakokinetik lidokain
dikirim dari patch transmucosal pada anak-anak. Anesth Prog 2002; 49: 82 e 7 .
[64] Routledge PA, Barchowsky A, Bjornsson TD, Kitchell BB, Shand DG. Lidocaine
pengikatan protein plasma. Clin Pharmacol Ther 1980; 27: 347 e 51 .
[65] Collinsworth KA, Kalman SM, Harrison DC. Farmakologi klinis PT
lidokain sebagai obat antiaritimik. Sirkulasi 1974; 50: 1217 e 30 .
[66] Hersh E, Houpt M, Cooper S, Feldman R, Wolff M, Levin L. Analgesic ef fi kation
dan keamanan patch lidokain intraoral. J Am Dent Assoc 1996; 127: 1626 e 34 .