See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/347793916

STRATEGI PENINGKATAN EKSPRESI PROTEIN REKOMBINAN SECARA

INTRASELULER PADA Escherichia coli MENGGUNAKAN FUSI PROTEIN
PENINGKAT KELARUTAN

Article · December 2020

CITATIONS READS

0 27

1 author:

Eva Annisa Nurhakim

Universitas Padjadjaran
1 PUBLICATION   0 CITATIONS   

SEE PROFILE

All content following this page was uploaded by Eva Annisa Nurhakim on 24 December 2020.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

Artikel Review

STRATEGI PENINGKATAN EKSPRESI PROTEIN REKOMBINAN SECARA

INTRASELULER PADA Escherichia coli MENGGUNAKAN FUSI PROTEIN
PENINGKAT KELARUTAN

Eva Annisa Nurhakim (140210170040)

Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas
Padjadjaran

ABSTRAK
Escherichia coli masih menjadi salah satu bakteri yang paling banyak digunakan sebagai inang
pada produksi protein rekombinan. Penggunaan E. coli sebagai inang memiliki kelebihan
diantaranya pertumbuhannya yang cepat, biaya produksi relatif murah, dan tingkat ekspresi
protein target yang tinggi. Terlepas dari kelebihan yang telah disebutkan, penggunaan E. coli
sebagai inang juga memiliki kelemahan yaitu protein rekombinan yang diekspresikan pada E.
coli sering kali gagal mencapai konformasi yang benar. Protein-protein dengan pelipatan yang
tidak tepat akan membentuk badan inklusi yang dapat menyebabkan protein menjadi tidak
aktif. Salah satu strategi yang telah dikembangkan untuk mengatasi keterbatasan tersebut
adalah penggunaan fusi protein yang berfungsi untuk meningkatkan perolehan protein larut.
Teknologi fusi protein telah banyak dilaporkan efektif dalam meningkatkan hasil ekspresi
protein rekombinan pada E. coli. Dalam artikel review ini, akan dipaparkan gambaran umum
mengenai fusi protein yang paling sering digunakan. Artikel ini diharapkan dapat menjadi
referensi untuk produksi protein rekombinan pada E. coli menggunakan teknologi fusi protein.

Kata kunci: Escherichia coli, badan inklusi, fusi protein

PENDAHULUAN

Teknologi DNA rekombinan pertama kali lebih cepat dan mudah dibandingkan dengan
diperkenalkan pada tahun 1970-an dengan sumber alaminya (Costa et al., 2014).
ditemukannya struktur DNA oleh Watson Escherichia coli masih menjadi salah satu
dan Crick. Pada tahun 1977, ilmuwan dari bakteri yang paling banyak digunakan
Genentech bersama dengan peneliti lain sebagai inang pada produksi protein
berhasil mengekspresikan protein rekombinan (Maksum et al., 2019). E coli
somatostatin manusia menggunakan bakteri diklasifikasikan sebagai bakteri Gram-
sebagai inangnya (Maksum et al., 2017). negatif berbentuk batang yang termasuk ke
Sejak saat itu, protein mulai banyak dalam famili Enterobacteriaceae (Melati et
diekspresikan menggunakan inang dari al., 2019). Penggunaan E. coli sebagai inang
berbagai organisme dengan proses yang produksi protein rekombinan memiliki
beberapa kelebihan diantaranya: (1)

1
Artikel Review
pertumbuhan yang cepat dengan siklus
hidup yang pendek, (2) informasi dan
karakter genom yang sudah lengkap
sehingga mudah dimanipulasi, (3) biaya
produksi relatif murah, (4) tingkat ekspresi
protein target yang tinggi, dan
ketersediaan vektor dan strain mutan yang
semakin banyak (Maksum et al., 2019;
Silaban et al., 2019; Silaban et al., 2016).
Selain kelebihan yang telah disebutkan,
penggunaan E. coli sebagai inang juga
memiliki kelemahan yaitu ketidakmampuan
E. coli untuk mengekspresikan protein
dengan berat molekul tinggi, kaya ikatan
disulfida, atau protein yang memerlukan
modifikasi pasca-translasi (Silaban et al.,
2019). Tidak jarang protein rekombinan
yang diekspresikan pada E. coli gagal
mencapai konformasi yang benar (Maksum
et al., 2019). Hal ini disebabkan karena
keadaan tereduksi pada sitosol
terbatasnya protein chaperon yang tidak
mampu mengimbangi tingginya tingkat
ekspresi protein rekombinan pada E. coli.
Protein-protein dengan pelipatan yang tidak
tepat akan saling berinteraksi membentuk
badan inklusi yang dapat menyebabkan
protein menjadi tidak aktif (Maksum et al.,
2019). Beberapa strategi
dikembangkan untuk meningkatkan efisiensi
produksi protein rekombinan pada E. coli
seperti penggunaan strain mutan,
penggunaan ko-ekspresi chaperon,
optimalisasi kondisi ekspresi, dan
penggunaan fusi protein yang berfungsi
untuk meningkatkan perolehan protein larut
pada protein rekombinan (Costa et al.,
2014). Dalam beberapa tahun terakhir,
(5) banyak fusi protein dikembangkan untuk
produksi protein rekombinan. Artikel ini
menyajikan ringkasan komprehensif dari
fusi protein yang paling banyak digunakan
untuk produksi dan pemurnian protein
rekombinan yang diekspresikan pada E. coli.
Maltose-binding protein (MBP)
Maltose binding protein (MBP)
merupakan protein periplasma pada E. coli
dengan berat molekul 40,6 kDa yang tidak
memiliki residu sistein (Gambar 1) (Malik,
2016). MBP dikenal dapat meningkatkan
kelarutan protein target ketika difusikan
pada N-terminal protein target (Malik, 2016;
dan
Raran-Kurussi & Waugh, 2012). Sejumlah
vektor untuk mengekspresikan protein target
yang difusikan dengan MBP telah tersedia
secara komersial diantaranya seri pMAL
dari New England Biolabs dan seri pIVEX
dari Roche yang telah berisi situs
pembelahan protease di daerah antara MBP
dengan multi-cloning site (Young et al.,
telah
2012). MBP memiliki afinitas terhadap
maltosa (~10 mM) sehingga fusi MBP dapat
dimurnikan menggunakan kromatografi
afinitas (Young et al., 2012; Malik, 2016).
2
Artikel Review
Gambar 1. Struktur MBP (PDB: 1ANF).
Dalam meningkatkan kelarutan protein
target, MBP dapat bertindak sebagai holdase
dengan melibatkan interaksi sementara
antara MBP dengan bagian protein target
yang terlipat sebagian (Gambar 2). MBP
Gambar 2. Ilustrasi peran MBP sebagai holdase dalam meningkatkan kelarutan protein
rekombinan (Raran-Kurussi & Waugh, 2012).
mencegah protein yang terlipat sebagian
membentuk agregat yang tidak larut sampai
pelipatan spontan atau pelipatan yang
dimediasi oleh chaperon endogen terjadi.
Beberapa protein yang difusikan dengan
MBP dapat mencapai konformasi aslinya
melalui pelipatan spontan setelah satu atau
lebih siklus pelipatan. Dalam kasus lain,
MBP memfasilitasi pelipatan protein target
yang dimediasi oleh satu atau lebih chaperon
endogen. MBP juga dapat diekspresikan
bersama dengan chaperon GroEL/GroES
ketika perolehan protein aktif dari protein
target terhitung rendah meskipun telah
difusikan dengan MBP (Raran-Kurussi &
Waugh, 2012).
3
Artikel Review
Raran-Kurussi & Waugh (2017) berhasil
mengilustrasikan penggunaan MBP pada
ekspresi protease Chikungunya
(ChikV) pada E. coli Rosetta 2 (DE3) yang
ditunjukkan dengan hasil analisis SDS
PAGE (Gambar 3). Lajur 1 menunjukkan
bahwa Rosetta 2 (DE3)
mengekspresikan His6-ChikV
induksi. Namun, lajur 2 menunjukkan bahwa
sebagian besar protein His6-ChikV tidak
ditemukan sebagai fraksi
Sebaliknya, lajur 4 dengan
menunjukkan bahwa sebagian besar dari
protein fusi His6-MBP-ChikV ditemukan
sebagai fraksi terlarut. Maka dapat diambil
kesimpulan bahwa penggunaan MBP pada
ekspresi protein ChikV dapat meningkatkan
perolehan protein ChikV terlarut (Raran-
Kurussi & Waugh, 2017).
Gambar 3. Perbandingan kelarutan protein
His6-ChikV dan His6-MBP-
ChikV yang diekspresikan
pada E. coli Rosetta 2 (DE3).
M = marker; 1 = total protein
His6-ChikV; 2 = fraksi terlarut
protein His6-ChikV; 3 = total
virus protein His6-MBP-ChikV; 4 =
fraksi terlarut protein His6-
MBP-ChikV (Raran-Kurussi
& Waugh, 2017).
N-utilization substance A (NusA)
mampu
setelah N-utilization substance A (NusA)
merupakan protein multi-domain dengan
berat molekul 55 kDa yang berfungsi dalam
terlarut. terminasi dan anti-terminasi transkripsi
jelas (Gambar 4). NusA berkaitan dengan RNA
polimerase sepanjang fase elongasi dan
terminasi transkripsi (Costa et al., 2014;
Cohen et al., 2010). NusA dikenal dapat
meningkatkan ekspresi protein larut pada E.
coli bahkan untuk protein yang sangat
hidrofobik. Dalam meningkatkan kelarutan
protein target, NusA memperlambat proses
translasi melalui mekanisme transcriptional
pauses oleh RNA polimerase sehingga dapat
memberikan lebih banyak waktu untuk
pelipatan protein (Costa et al., 2014; Young
et al., 2012). Berbeda dengan MBP, NusA
tidak memiliki afinitas terhadap molekul
tertentu sehingga diperlukan penambahan
tag afinitas seperti His-tag untuk pemurnian
protein. Beberapa vektor telah
dikembangkan untuk mengekspresikan
protein target dengan NusA seperti pETM60
(NusA-His-TEV) dari EMBL dan pET43
(NusA-His) dari Novagen dengan situs
pembelahan trombin dan enterokinase di
4
Artikel Review

antara tag fusi dengan protein target (Costa
et al., 2014).
Gambar 4. Struktur NusA (PDB: 5LM9)
Terlepas dari sifat fisikokimia dan
struktur yang berbeda, NusA dan MBP dapat
meningkatkan kelarutan protein target
secara keseluruhan tanpa mempengaruhi
struktur protein yang rentan mengalami
agregasi. NusA dan MBP dilaporkan
memiliki mekanisme yang serupa dimana
NusA bertindak seperti MBP yaitu berperan
secara pasif pada pelipatan protein. Oleh
karena itu, NusA dan MBP digolongkan
sebagai dua fusi peningkat kelarutan protein
target terbaik (Costa et al., 2014).
Raran-Kurussi & Waugh (2014)
membandingkan penggunaan NusA dan
MBP sebagai fusi peningkat kelarutan
terhadap protein G3PDH, GFP, DHFR,
DUSP14, dan protease TEV (Gambar 5).
Kedua fusi peningkat kelarutan sama-sama
memberikan hasil yang baik dengan tingkat
kelarutan protein target berkisar antara 50-
90%. NusA lebih unggul dalam
meningkatkan kelarutan protein G3PDH dan

Gambar 5. Persentase kelarutan protein target dengan penambahan His (tanpa fusi peningkat
kelarutan), His-MBP, dan His-NusA. G3PDH = Glyceraldehyde 3-phosphate
dehydrogenase; GFP = Green Fluorescent Protein; DHFR = Dihydrofolate
Reductase; DUSP14 = Dual Specificity Phosphatase; TEV = Tobacco Etch Virus
(Raran-Kurussi & Waugh, 2014).

5
Artikel Review

GFP, sementara MBP lebih unggul dalam Penggunaan TrxA dapat menghindari
meningkatkan kelarutan protein DHFR, pembentukan badan inklusi dengan
DUSP14, dan protease TEV. Hasil ini memanfaatkan aktivitas oksido-reduktase
menunjukkan bahwa kemampuan NusA dan TrxA untuk pengurangan ikatan disulfida.
MBP dalam meningkatkan kelarutan protein TrxA tidak memiliki sifat yang dapat
target dipengaruhi oleh karakteristik dari digunakan dalam pemurnian sehingga
protein target itu sendiri (Raran-Kurussi & diperlukan tag afinitas seperti His-tag untuk
Waugh, 2014). pemurnian protein (Costa et al., 2014;
Young et al., 2012). Salah satu vektor yang
Thioredoxin A (TrxA) telah tersedia secara komersial yaitu pET32
(His-TrxA) dari Novagen dapat digunakan
Thioredoxin termasuk ke dalam keluarga
untuk produksi dan pemurnian protein
enzim oksido-reduktase yang mengkatalisis
rekombinan (Costa et al., 2014).
reaksi pengurangan ikatan disulfida melalui
Chen et al. 2017 berhasil
pertukaran tiol-disulfida. Salah satu
mengekspresikan protein hairpin yang
thioredoxin pada E. coli, TrxA, merupakan
difusikan dengan Trx pada E. coli BL21
protein termostabil berukuran 11,6 kDa yang
(DE3). Protein Trx-hairpin diekspresikan
menunjukkan kelarutan yang tinggi dalam
dengan berat molekul sebesar ~62 kDa
sitoplasma (Gambar 6). TrxA telah
dengan fraksi terlarut sebesar ~45,3% (85,6
digunakan sebagai protein fusi pada N- atau
mg) dari total protein (189 mg) (Gambar 7).
C-terminal protein target untuk
meningkatkan ekspresi protein larut dari
protein rekombinan (Young et al., 2012).

Gambar 7. Hasil analisis SDS-PAGE

protein Trx-hairpin. M =
Gambar 6. Struktur TrxA (PDB: 2TRX)
6
Artikel Review

marker; 1 = Trx-hairpin tanpa (Costa et al., 2014). Protein fusi GST dapat
induksi; 2 = Trx-hairpin
dimurnikan dengan kromatografi afinitas
dengan induksi; 3 = fraksi
terlarut; 4 = fraksi tidak terlarut menggunakan turunan glutation yang
(Chen et al., 2017).
diimobilisasi. GST dapat dielusi
menggunakan glutation di bawah kondisi
Glutathione-S-transferase (GST)
non-denaturasi. GST juga dapat
Glutathione-S-transferase (GST) dari digabungkan dengan tag afinitas lain seperti
Schistosoma japonicum merupakan protein His-tag untuk meningkatkan kelarutan
dengan berat molekul 26 kDa yang dapat protein (Young et al., 2012; Costa et al.,
meningkatkan kelarutan protein rekombinan 2014). Vektor ekspresi GST yang telah
(Gambar 8) (Costa et al., 2014; Young et tersedia secara komersial adalah seri pGEX
al., 2012). GST dapat difusikan pada N- atau dari GE Healthcare yang telah menyertakan
C-terminal protein target namun menjadi situs pembelahan protease di antara tag fusi
lebih efisien jika difusikan pada N-terminal dengan protein target untuk penghilangan
protein target. GST dapat melindungi protein tag selama atau setelah proses pemurnian
target dari degradasi proteolitik dan (Young et al., 2012).
menstabilkan protein target dalam fraksi
larut sebagai monomer atau homodimer
(Costa et al., 2014). Namun, GST dianggap
sebagai fusi peningkat kelarutan yang buruk
karena beberapa protein yang difusikan
dengan GST tidak dapat larut sebagian atau
bahkan seluruhnya. Protein target yang
diperkaya dengan residu hidrofobik, residu
bermuatan, atau memiliki ukuran yang lebih
besar dari 100 kDa berpotensi diekspresikan
sebagai fraksi tak larut (Young et al., 2012). Gambar 8. Struktur GST (PDB: 1M9A)
Glutathione transferase adalah enzim
yang mengkatalisis reaksi adisi nukleofilik Raran-Kurussi & Waugh (2012)

tiol dari glutation ke berbagai molekul membandingkan penggunaan GST dan MBP

elektrofil hidrofobik. Melalui mekanisme sebagai fusi peningkat kelarutan terhadap

ini, pemurnian protein fusi GST dilakukan protein G3PDH, GFP, DHFR, DUSP14, dan

dengan memanfaatkan aktivitas katalitiknya protease TEV dengan tingkat kelarutan

7
Artikel Review
protein target berkisar antara 40-90%
(Gambar 9). Hasil penelitian menunjukkan
bahwa fraksi terlarut protein yang difusikan
dengan GST lebih rendah dari pada MBP
namun lebih tinggi dari pada His (tanpa fusi
peningkat kelarutan) terkecuali untuk
protein GFP dan protease TEV. Kelarutan
Gambar 9. Persentase kelarutan protein target dengan penambahan His, His-MBP, dan His-
NusA (Raran-Kurussi & Waugh, 2012).
Small ubiquitin-related modifier (SUMO)
Small ubiquitin modified (SUMO) adalah
protein kecil berukuran 11 kDa yang
ditemukan dalam ragi (satu gen tunggal yang
mengkode Smt3) (Gambar 10) dan
vertebrata (tiga gen yang mengkode SUMO-
1, SUMO-2, dan SUMO-3). SUMO baru-
baru ini digunakan sebagai fusi peningkat
kelarutan jika difusikan pada N-terminal
protein His-GFP dan His-TEV protease
lebih besar dibandingkan dengan kelarutan
His-GST-GFP dan His-GST-TEV protease.
Hal ini diperkirakan terjadi karena GST
menghalangi proses pelipatan protein GFP
dan protease TEV (Raran-Kurussi & Waugh,
2012).
protein target (Costa et al., 2014). Dalam
kondisi aslinya, Saccharomyces cerevisiae
Smt3 adalah suatu bentuk modifikasi pasca-
translasi yang berperan dalam transportasi
nukleus-sitosol, apoptosis, aktivasi protein,
respon terhadap stress, dan siklus sel (Young
et al., 2012).
Ketika digunakan sebagai fusi peningkat
kelarutan, SUMO mempromosikan
pelipatan dan stabilitas struktural yang
8
Artikel Review

mengarah pada peningkatan ekspresi protein dalam meningkatkan kelarutan protein

larut pada protein rekombinan. Salah satu
keuntungan penggunaan SUMO adalah
SUMO dikenali oleh protease spesifik (S.
cerevisiae Ulpl) yang mengenali
memotong SUMO pada residu Gly-Gly
(Young et al., 2012). Protease ini mengenali
struktur tersier SUMO sehingga
pemotongan yang terjadi bersifat spesifik
dan menghasilkan protein target dengan
komposisi asam amino seperti aslinya (Costa
et al., 2014). SUMO tidak memiliki sifat
yang dapat digunakan dalam pemurnian,
namun SUMO dengan His-tag
dikembangkan untuk memfasilitasi
pemurnian protein rekombinan (Young et
al., 2012).
Gambar 10. Struktur Smt3 (PDB: 1L2N)
Protein SUMO mirip dengan Ubiquitin
dan dianggap sebagai aggota keluarga
Ubiquitin-like protein. Oleh karena itu,
targetnya SUMO bertindak seperti chaperon
melalui mekanisme pelipatan yang mirip
dengan Ubiquitin. Karena kemiripannya,
dan Wang et al. (2012) membandingkan
penggunaan Ubiquitin dan SUMO-2 untuk
meningkatkan kelarutan protein MMP13
dan eGFP yang diekspresikan pada E. coli
DH5α. Dibandingkan dengan Ubiquitin,
SUMO-2 memproduksi lebih banyak protein
MMP13 dan eGFP dalam fraksi terlarut.
Wang et al. (2012) juga mengembangkan
strategi baru peningkatan ekspresi protein
telah MMP13 dan eGFP menggunakan sistem
SUMO2-intein (Costa et al., 2014; Wang et
al., 2012). Namun, baik pada ekspresi
protein MMP13 maupun eGFP, penambahan
intein tidak mengubah tingkat ekspresi dan
kelarutan protein (Wang et al., 2012).
Li et al. (2018) berhasil mengekspresikan
protein EH-IscS (chimeric cysteine
desulfurase) pada E. coli BL21 (DE3)
menggunakan fusi SUMO (Smt3) dan GST
(Gambar 11). Dibandingkan dengan GST,
protein EH-IscS yang diekspresikan
menggunakan fusi SUMO memiliki
aktivitas, kelarutan, dan stabilitas yang lebih
tinggi (data tidak ditampilkan). Selain itu,
protease SUMO (Ulp1) secara efisien
mengenali struktur tersier SUMO
menghasilkan efisiensi pembelahan fusi
SUMO hingga 95% (Li et al., 2018).

9
Artikel Review
Gambar 11. Hasil analisis SDS-PAGE
protein EH-IsCs. T = total
protein; S = fraksi terlarut;
M = marker; 1 = tanpa
induksi (Li et al., 2018).
Referensi
Chen, Y., Tan, S., Yang, F., Chen, Z., Wu,
Z., & Huang, J. (2017) Soluble
expression and purification of a
functional harpin protein in
Escherichia coli. Process
Biochemistry. 57, 200–206.
Cohen, S.E., Lewis, C.A., Mooney, R.A.,
Kohanski, M.A., Collins, J.J., Landick,
R., & Walker, G.C. (2010) Roles for the
transcription elongation factor NusA in
both DNA repair and damage tolerance
pathways in Escherichia coli.
Proceedings of the National Academy
of Sciences of the United States of
America. 107(35), 15517–15522.
Costa, S., Almeida, A., Castro, A., &
Domingues, L. (2014) Fusion tags for
protein solubility, purification, and
immunogenicity in Escherichia coli:
The novel Fh8 system. Frontiers in
Microbiology. 5(63), 1–20.
Li, J., Han, Q., Zhang, T., Du, J., Sun, Q., &
Pang, Y. (2018) Expression of soluble
native protein in Escherichia coli using
a cold-shock SUMO tag-fused
expression vector. Biotechnology
Reports. 19, 1–8.
Maksum, I.P., Hassan, K., Sriwidodo,
Subroto, T., Gaffar, S., & Soemitro, S.
(2017) Teknik Biologi Molekular.
Sumedang: Alqaprint.
Maksum, I.P., Lestari, A., Fauzia, R.P.,
Rachman, S.D., & Soedjanaatmadja,
U.M.S. (2019) Escherichia coli BL21
(DE3) expression system using TorA
signal peptide for recombinant human
albumin (rHA) secretion. International
Journal of Research in Pharmaceutical
Sciences. 10(4), 3319–3324.
Maksum, I.P., Sriwidodo, & Yosua (2019)
Strategi Peningkatan Ekspresi Protein
Rekombinan Secara Intraselular pada
Inang Escherichia coli. Sumedang:
Alqaprint.
Malik, A. (2016) Protein fusion tags for
efficient expression and purification of
recombinant proteins in the periplasmic
space of E. coli. 3 Biotech. 6(1), 1–7.
Melati, R., Indriyani, A., Gaffar, S.,
Sriwidodo, & Maksum, I.P. (2019)
Comparison extracellular secretion of
recombinant human epidermal growth
factor using TorA and PelB signal
peptides in Escherichia coli BL21
(DE3). Asian Journal of
Pharmaceutical and Clinical Research.
12(11), 81–84.
Raran-Kurussi, S. & Waugh, D.S. (2017)
Expression and purification of
recombinant proteins in Escherichia
coli with a His 6 or dual His 6-MBP tag.
Methods in Molecular Biology. 1607,
1–15.
10
 Artikel Review

Raran-Kurussi, S. & Waugh, D.S. (2012)

The ability to enhance the solubility of
its fusion partners is an intrinsic
property of maltose-binding protein but
their folding is either spontaneous or
chaperone-mediated. PLoS One. 7(11),
1–10.

Raran-Kurussi, S. & Waugh, D.S. (2014)

Unrelated solubility-enhancing fusion
partners MBP and NusA utilize a
similar mode of action. Biotechnology
and Bioengineering. 111(12), 2407–
2411.

Silaban, S., Gaffar, S., Simorangkir, M.,

Maksum, I.P., & Subroto, T. (2019)
Construction and optimization of
prethrombin-2 human genes in E. coli
for the production of active thrombin.
In Journal of Physics: Conference
Series. pp. 1–6.

Silaban, S., Maksum, I.P., Enus, S., Hasan,

K., Subroto, T., & Soemitro, S. (2016)
Kajian ekspresi gen pretrombin-2
manusia sintetik pada Escherichia coli
secara in silico untuk produksi trombin
sebagai komponen lem fibrin. Jurnal
Pendidikan Kimia. 8(1), 58–64.

Wang, Z., Li, N., Wang, Y., Wu, Y., Mu, T.,
Zheng, Y., Huang, L., & Fang, X.
(2012) Ubiquitin-intein and SUMO2-
intein fusion systems for enhanced
protein production and purification.
Protein Expression and Purification.
82(1), 174–178.

Young, C.L., Britton, Z.T., & Robinson,

A.S. (2012) Recombinant protein
expression and purification: A
comprehensive review of affinity tags
and microbial applications.
Biotechnology Journal. 7(5), 620–634.

11

View publication stats