Anda di halaman 1dari 23

BIOTEKNOLOGI FARMASI:

PROSES PENGEMBANGAN OBAT (1)


Prof. Dr. Harrizul Rivai, M.S.
Guru Besar Kimia Farmasi
Fakultas Farmasi Universtas Andalas

1. PENDAHULUAN
Dalam bab ini, riwayat hidup obat yang berhasil dikembangkan akan diuraikan lebih rinci
(dirangkum dalam Gambar 1).

Penemuan obat

Karakterisasi Awal

Uji Praklinis

Persetujuan pengaturan berusaha


untuk memulai uji coba pada
manusia

Uji Klinis (Fase I, II dan III)

Pengajuan aplikasi otorisasi


pemasaran/manufaktur ke otoritas
pengawas

Otoritas regulator meninjau


informasi dan memberikan (atau
menolak) lisensi pemasaran/
manufaktur

Produk mulai dijual

Pengawasan pasca pemasaran

Gambar 1. Gambaran umum riwayat hidup obat yang berhasil dikembangkan.


Pematenan produk biasanya juga dilakukan, seringkali selama tahap awal kerja uji
klinis

Sejumlah strategi berbeda diadopsi oleh industri farmasi dalam upaya mereka untuk
mengidentifikasi produk obat baru. Pendekatan-pendekatan ini berkisar dari penyaringan

1
acak berbagai bahan biologis untuk identifikasi obat berbasis pengetahuan. Setelah suatu obat
baru yang potensial telah diidentifikasi, kemudian dilakukan serangkaian tes (baik in vitro
dan in vivo pada hewan) untuk mengkarakterisasi dalam hal kemungkinan keamanan dan
efektivitasnya dalam mengobati penyakit targetnya. Pengembang juga akan melakukan
pekerjaan pengembangan yang terkait dengan manufaktur (pengembangan dan optimalisasi
awal pemrosesan hulu dan hilir), serta menyelidiki rute potensial yang cocok untuk
pemakaian (administrasi) produk.
Setelah menyelesaikan uji praklinis semacam itu, perusahaan pengembang itu mengajukan
kepada lembaga yang ditunjuk pemerintah misalnya BPOM di Indonesia, untuk minta
persetujuan untuk memulai uji klinis (yaitu untuk menguji obat pada manusia). Uji klinis
diperlukan untuk membuktikan bahwa obat tersebut aman dan efektif ketika diberikan kepada
pasien manusia, dan uji coba ini dapat memakan waktu 5 tahun atau lebih untuk
menyelesaikannya. Setelah obat dikarakterisasi, dan mungkin kerja klinis awal sedang
berlangsung, obat biasanya dipatenkan oleh perusahaan pengemban untuk memastikan bahwa
ia menerima manfaat komersial maksimal dari penemuan ini.
Setelah menyelesaikan uji klinis, perusahaan pengembang mengumpulkan semua data
praklinis dan klinis yang telah mereka hasilkan, serta informasi terkait lainnya, mis. rincian
proses produksi yang tepat digunakan untuk membuat obat. Mereka mengirimkan informasi
ini sebagai dokumen (pekerjaan multivolume) kepada pihak berwenang. Petugas ilmiah
pengatur kemudian mengakses informasi yang disediakan dan memutuskan (sebagian besar
pada kriteria keamanan dan kemanjuran obat) apakah obat harus disetujui untuk penggunaan
medis umum.
Jika persetujuan pemasaran diberikan, perusahaan dapat menjual produk sejak saat itu.
Karena obat telah dipatenkan, mereka setidaknya tidak akan memiliki persaingan selama
beberapa tahun. Namun, untuk menjual produk, diperlukan fasilitas manufaktur, dan
perusahaan juga harus mendapatkan persetujuan manufaktur dari pihak berwenang. Untuk
mendapatkan lisensi manufaktur, inspektur pengawas akan meninjau fasilitas manufaktur
yang diusulkan. Otoritas pengatur hanya akan memberikan perusahaan lisensi manufaktur
jika mereka puas bahwa setiap aspek dari proses manufaktur kondusif untuk menghasilkan
produk yang aman dan efektif secara konsisten.
Keterlibatan regulasi tidak berakhir bahkan pada titik ini. Pengawasan pasca pemasaran
umumnya dilakukan, dengan perusahaan diwajibkan untuk melaporkan efek samping/reaksi
merugikan yang diinduksi obat berikutnya. Otoritas pengatur juga akan memeriksa fasilitas
manufaktur secara teratur untuk memastikan bahwa standar manufaktur yang memuaskan
dipertahankan.

2. PENEMUAN BIOFARMASI
Penemuan hampir semua biofarmasi yang dibahas dalam teks ini adalah berbasis
pengetahuan. Kemajuan berkelanjutan dalam ilmu molekuler telah memperdalam
pemahaman kita tentang mekanisme molekuler yang mendasari kesehatan dan penyakit.
Pemahaman di tingkat molekuler tentang bagaimana fungsi tubuh dalam kesehatan dan
penyimpangan yang menjadi ciri perkembangan suatu penyakit seringkali membuat strategi
potensial yang jelas untuk menyembuhkan/mengendalikan penyakit itu. Contoh-contoh

2
sederhana yang menggambarkan hal ini termasuk penggunaan insulin untuk mengobati
diabetes dan penggunaan hormone pertumbuhan untuk mengobati bentuk kekerdilan tertentu.
Penyebab-penyebab yang mendasari dari jenis-jenis penyakit ini relatif mudah, yaitu bahwa
mereka pada dasarnya dipromosikan oleh kekurangan/ketiadaan molekul pengatur tunggal.
Namun, penyakit lain mungkin multifaktorial dan karenanya lebih kompleks. Contohnya
termasuk kanker dan peradangan. Namun demikian, sitokin, seperti interferon dan
interleukin, yang dikenal untuk merangsang respon imun / mengatur peradangan, telah
terbukti bermanfaat secara terapi dalam mengobati beberapa penyakit kompleks semacam itu.
Namun, pemahaman pada tingkat molekuler, tentang aksi berbagai protein pengatur, atau
perkembangan penyakit tertentu tidak secara otomatis diterjemahkan ke dalam menentukan
strategi pengobatan yang efektif. Respons fisiologis yang dipicu oleh potensi biofarmasi in
vitro (atau pada model hewan) mungkin tidak secara akurat memprediksi respons fisiologis
yang terlihat ketika produk diberikan kepada manusia yang sakit. Misalnya, banyak agen
terapi biofarmasi yang paling menjanjikan (mis. hampir semua sitokin), menampilkan banyak
aktivitas pada populasi sel yang berbeda. Hal ini membuat sulit, jika bukan tidak mungkin,
untuk memprediksi apa efek keseluruhan pemberian biofarmasi akan memiliki pada seluruh
tubuh, maka perlu untuk uji klinis.
Dalam kasus lain, aplikasi luas dari biofarmasi dapat dihambat oleh terjadinya efek samping
yang relatif beracun (seperti halnya dengan faktor nekrosis tumor α (tumor necrosis factor α
= TNF-α). Akhirnya, beberapa biomolekul telah ditemukan dan dimurnikan karena dari
aktivitas biologis yang khas, yang kemudian ditemukan tidak menjadi aktivitas biologis
utama molekul, TNF-α kembali berfungsi sebagai contoh, pertama kali dicatat karena efek
sitotoksiknya pada beberapa jenis sel kanker in vitro. Selanjutnya, uji coba menilai aplikasi
terapeutik pada kanker terbukti mengecewakan tidak hanya karena efek samping toksiknya,
tetapi juga karena efek sitotoksiknya yang moderat pada banyak jenis sel kanker in vivo.
Aktivitas biologis utama TNF in vivo sekarang dikenal sebagai pengatur respon inflamasi.
Singkatnya, 'penemuan' biofarmasi, dalam banyak kasus, hanya berkaitan dengan aplikasi
logis dari pengetahuan kita yang meningkat pesat tentang dasar biokimia tentang bagaimana
fungsi tubuh. Zat-zat ini dapat secara akurat digambarkan sebagai obat-obatan tubuh sendiri.
Selain itu, bidang penelitian yang berkembang pesat, seperti genomik dan proteomik,
kemungkinan akan mempercepat penemuan lebih banyak produk tersebut, seperti dibahas di
bawah ini.

3. DAMPAK GENOMIK DAN TEKNOLOGI TERKAIT PADA PENEMUAN OBAT


Istilah 'genomik' mengacu pada studi sistematis seluruh genom suatu organisme. Tujuan
intinya adalah untuk mengurutkan seluruh komplemen DNA sel dan memetakan susunan
genom secara fisik (menetapkan posisi yang tepat dalam genom ke berbagai gen/daerah yang
tidak mengkode). Sebelum 1990-an, pengurutan dan studi gen tunggal mewakili tugas yang
signifikan. Namun, peningkatan teknologi sekuensing dan pengembangan sistem perangkat
keras yang lebih otomatis sekarang membuat sekuensing DNA jauh lebih cepat, lebih murah
dan lebih akurat. Sistem sequencing modern dapat mengurutkan ribuan basis per jam. Inovasi
semacam itu mendukung sekuensing 'throughput tinggi' yang diperlukan untuk mengevaluasi
seluruh urutan genom dalam kerangka waktu yang masuk akal. Pada awal 2006, beberapa

3
proyek genom 364 telah selesai (297 bakteri, 26 Archaeal dan 41 Eucaryal, termasuk genom
manusia) dengan lebih dari 1000 proyek sekuensing genom berlangsung.
Dari prospektif penemuan / pengembangan obat, pentingnya data genom adalah bahwa
mereka memberikan informasi urutan lengkap dari setiap protein yang dapat dihasilkan
organisme. Ini harus menghasilkan identifikasi protein yang belum ditemukan sebelumnya
yang akan memiliki aplikasi terapi potensial, yaitu proses tersebut harus membantu
mengidentifikasi potensi biofarmasi baru. Dampak farmasi terbesar dari data sekuens, hampir
pasti akan menjadi identifikasi sejumlah target obat tambahan. Diperkirakan bahwa semua
obat yang ada pada target pasar satu (atau lebih) dari maksimum 500 target. Mayoritas target
tersebut adalah protein (terutama enzim, hormon, saluran ion dan reseptor nuklir).
Tersembunyi dalam data urutan genom manusia diyakini berada di antara 3000 dan 10.000
target obat berbasis protein baru. Selain itu, terdapat dalam data sekuens banyak patogen
manusia adalah data sekuens ratusan, mungkin ribuan, protein patogen yang dapat berfungsi
sebagai target obat terhadap patogen tersebut (mis. produk gen yang penting untuk
kelangsungan hidup patogen atau infektivitas).
Sementara data urutan genom tidak diragukan lagi mengandung arahan / target obat baru,
masalahnya sekarang telah menjadi salah satu yang secara spesifik mengidentifikasi gen
tersebut. Menghambat proses ini adalah fakta bahwa fungsi biologis dari banyak produk gen
berurutan tetap tidak diketahui. Oleh karena itu, fokus penelitian genom sekarang bergeser ke
arah menjelaskan fungsi biologis dari produk-produk gen ini, yaitu beralih ke 'genomik
fungsional'.
Penilaian fungsi sangat penting untuk memahami hubungan antara genotipe dan fenotipe dan,
tentu saja, untuk identifikasi langsung dari lead/target obat. Istilah 'fungsi' secara tradisional
telah ditafsirkan dalam arti sempit tentang apa peran/aktivitas biologis terisolasi yang
ditampilkan produk gen (mis. apakah itu enzim dan, jika demikian, reaksi spesifik apa yang
dikatalisasi). Dalam konteks genomik, fungsi gen diberi makna yang lebih luas, tidak hanya
mencakup fungsi/aktivitas biologis terisolasi dari produk gen, tetapi juga terkait dengan:
• di mana dalam sel yang bertindak produk dan, khususnya, apa elemen seluler lain
yang mempengaruhi / berinteraksi dengan;
• bagaimana pengaruh / interaksi tersebut berkontribusi pada fisiologi keseluruhan
organisme.
Penugasan fungsi pada produk-produk gen berurutan dapat dilakukan melalui berbagai
pendekatan, termasuk:
• studi homologi urutan;
• profil filogenetik;
• Metode batu Rosetta;
• metode lingkungan gen;
• studi hewan knockout;
• Teknologi susunan DNA (chip gen);
• pendekatan proteomik;
• pendekatan genomik struktural.

4
Dengan pengecualian hewan knockout, pendekatan ini menggunakan, setidaknya sebagian,
struktur urutan/interogasi data/perbandingan. Ketersediaan program komputer yang sangat
kuat yang sesuai menjadikan pendekatan ini 'throughput tinggi'. Namun, bahkan dengan
menerapkan metodologi ini, tidak akan terbukti mungkin untuk mengidentifikasi dengan
segera fungsi semua produk gen yang diurutkan.
Studi homologi sekuens bergantung pada perbandingan sekuens berbasis-komputer
(bioinformatik) antara gen fungsi yang tidak diketahui (atau, lebih tepatnya, fungsi produk
gen tidak diketahui) dan gen yang produknya sebelumnya telah ditugaskan fungsi. Homologi
tinggi menunjukkan atribut fungsional yang kemungkinan terkait. Studi homologi sekuens
dapat membantu dalam menetapkan fungsi diduga 40-60 persen dari semua sekuens gen baru.
Pembuatan profil filogenetik memerlukan penetapan pola ada atau tidak adanya pengkodean
gen khusus untuk protein dengan fungsi yang tidak diketahui di berbagai organisme berbeda
yang genomnya telah diurutkan. Jika ini menunjukkan pola ada / tidaknya identik dengan gen
yang sudah ditandai, maka dalam banyak kasus dapat disimpulkan bahwa kedua produk gen
memiliki fungsi terkait.
Pendekatan batu Rosetta tergantung pada pengamatan bahwa kadang-kadang dua polipeptida
yang terpisah (yaitu produk gen X dan Y) yang ditemukan dalam satu organisme terjadi
dalam organisme yang berbeda sebagai satu protein XY tunggal yang menyatu. Dalam
keadaan seperti itu, dua bagian protein (domain), X dan Y, sering menampilkan fungsi
terkait. Oleh karena itu, jika gen X baru-baru ini ditemukan dalam genom yang baru
diurutkan dan memiliki fungsi yang tidak diketahui tetapi gen XY dari fungsi yang diketahui
telah ditemukan sebelumnya dalam genom yang berbeda, maka fungsi X yang tidak diketahui
dapat disimpulkan.
Metode lingkungan gen adalah metode berbasis komputasi lain. Itu tergantung pada
pengamatan bahwa dua gen kemungkinan terkait secara fungsional jika mereka secara
konsisten ditemukan berdampingan dalam genom dari beberapa organisme yang berbeda.
Studi terhadap binatang yang diketemukan, berbeda dengan metode di atas, tergantung pada
pengamatan fenotip. Pendekatan ini memerlukan generasi dan studi tentang tikus di mana gen
tertentu telah dihapus. Studi fenotipik kadang-kadang dapat menghasilkan petunjuk tentang
fungsi gen yang tersingkir.

4. KEPINGAN GEN (GENE CHIPS)


Meskipun data sekuens menyediakan profil dari semua gen yang ada dalam genom, mereka
tidak memberikan informasi tentang gen mana yang diaktifkan (ditranskripsi) dan, karenanya,
yang secara fungsional aktif pada waktu tertentu/dalam keadaan tertentu. Transkripsi gen
menghasilkan produksi RNA, baik mRNA (biasanya kemudian diterjemahkan menjadi
polipeptida) atau rRNA atau tRNA (yang memiliki fungsi katalitik atau struktural). Studi
tentang keadaan di mana spesies RNA diekspresikan/tidak diekspresikan dalam
sel/organisme dapat memberikan petunjuk tentang fungsi biologis RNA (atau, dalam kasus
mRNA, fungsi produk polipeptida akhir). Lebih jauh, dalam konteks penemuan target obat,
kondisi di mana mRNA spesifik diproduksi juga dapat mengarah ke target obat
biofarmasi/obat-obatan. Sebagai contoh, jika mRNA tertentu hanya diproduksi oleh sel

5
kanker, mRNA itu (atau, lebih umum, produk polipeptida) dapat mewakili target yang baik
untuk obat anti kanker baru.
Tingkat RNA (biasanya mRNA spesifik) dalam sel dapat diukur dengan teknik yang sudah
mapan seperti analisis blot utara atau dengan analisis PCR. Namun, kemajuan teknologi
microarray DNA baru-baru ini telah mengubah identifikasi dan pengukuran mRNA tertentu
(atau RNA lain jika diperlukan) menjadi proses 'throughput tinggi'. Susunan DNA juga
disebut susunan oligonukleotida, susunan keping gen atau, kepingan saja.
Teknik ini didasarkan pada kemampuan untuk menahan urutan asam nukleat (biasanya
berdasarkan DNA) pada permukaan plastik / kaca dengan kepadatan yang sangat tinggi.
Robot kisi-kisi standar dapat mengenakan hingga 250.000 probe oligonukleotida pendek
yang berbeda atau 10.000 sekuens cDNA panjang penuh per sentimeter persegi permukaan.
Urutan probe umumnya diproduksi/dirancang dari data urutan genom; karenanya, produksi
chip sering disebut sebagai 'mengunduh genom pada sebuah chip'. RNA dapat diekstraksi
dari sel dan diperiksa dengan chip. Setiap urutan RNA komplementer yang ada akan
berhibridisasi dengan urutan chip yang diimobilisasi yang sesuai (Gambar 2). Hibridisasi
dapat dideteksi karena spesies RNA diberi label pertama kali. Pola hibridisasi jelas
menghasilkan informasi penting mengenai ekspresi gen.

Gambar 2. Gambaran umum kepingan gen.


Dalam contoh ini, sekuens oligonukleotida pendek dilekatkan pada permukaan
penahan (hanya baris luar yang diperlihatkan). Setiap probe menampilkan urutan
nukleotida yang berbeda, dan urutan yang digunakan biasanya didasarkan pada
informasi urutan genom. Urutan satu probe tersebut ditampilkan sebagai AGGCA.
Dengan menginkubasi chip dengan, misalnya, mRNA seluler total dalam kondisi
yang sesuai, mRNA apa pun dengan urutan pelengkap (UCCGU dalam kasus
urutan probe yang ditunjukkan) akan berhibridisasi dengan probe. Pada
kenyataannya, probe akan memiliki urutan yang lebih panjang daripada yang
ditunjukkan di atas

5. PROTEOMIK
Meskipun hampir semua target obat berdasarkan protein, kesimpulan bahwa tingkat ekspresi
protein dapat secara akurat (jika secara tidak langsung) terdeteksi/diukur melalui teknologi
susunan DNA adalah salah, seperti:

6
• Konsentrasi mRNA tidak selalu berkorelasi langsung dengan konsentrasi polipeptida
yang disandikan mRNA;
• proporsi mRNA eukariotik yang signifikan mengalami penyambungan diferensial
dan, oleh karena itu, dapat menghasilkan lebih dari satu produk polipeptida (Gambar
3).

Gambar 3. Penyambungan diferensial mRNA dapat menghasilkan produk polipeptida yang


berbeda.
Transkripsi urutan gen menghasilkan RNA 'transkrip primer'. Ini berisi wilayah
pengkodean (ekson) dan wilayah non-pengkodean (intron). Fitur utama dari
pemrosesan transkrip primer berikutnya adalah 'splicing', proses di mana intron
dihapus, meninggalkan ekson dalam urutan yang berdekatan. Meskipun sebagian
besar transkrip eukariotik primer hanya menghasilkan satu mRNA dewasa (dan
karenanya kode untuk polipeptida tunggal), beberapa dapat disambung secara
berbeda, menghasilkan dua mRNA dewasa atau lebih. Yang terakhir dapat, oleh
karena itu, kode untuk dua atau lebih polipeptida. E: exon; I: intron

Selain itu, lokasi seluler di mana polipeptida yang dihasilkan akan berfungsi sering tidak
dapat diprediksi dari delusi / urutan RNA juga tidak dapat informasi rinci tentang bagaimana
aktivitas fungsional produk polipeptida akan diatur (misalnya melalui mekanisme pasca-
translasi seperti fosforilasi, proteolisis parsial, dll.). Oleh karena itu, arahan/target obat
berbasis protein seringkali lebih berhasil diidentifikasi dengan pemeriksaan langsung
terhadap komplemen protein yang diekspresikan sel, yaitu proteomenya. Seperti transkriptom
(konten RNA seluler total), dan berbeda dengan genom, proteom tidak statis, dengan
perubahan kondisi seluler yang memicu perubahan profil/konsentrasi protein seluler. Bidang
studi ini disebut proteomik.
Proteomik, oleh karena itu, terkait erat dengan genomik fungsional dan memerlukan analisis
sistematis dan komprehensif dari protein yang diekspresikan dalam sel dan fungsinya. Studi

7
proteomik klasik umumnya memerlukan ekstraksi awal dari total kandungan protein dari sel /
jaringan target, diikuti oleh pemisahan protein di dalamnya menggunakan elektroforesis dua
dimensi. 'Bintik-bintik' protein yang terisolasi kemudian dapat dielusi dari gel elektroforesis
dan menjadi sasaran analisis lebih lanjut; terutama untuk degradasi Edman, untuk
menghasilkan data urutan asam amino parsial. Data urutan kemudian dapat digunakan untuk
menginterogasi bank data urutan protein untuk, misalnya, menetapkan fungsi diduga oleh
pencarian homologi urutan (Gambar 4). Elektroforesis dua dimensi, bagaimanapun,
umumnya mampu menyelesaikan tidak lebih dari 2000 protein berbeda, dan protein yang
diekspresikan pada level rendah mungkin tidak terdeteksi sama sekali jika konsentrasi gelnya
di bawah ambang pewarnaan (protein). Poin terakhir dapat menjadi sangat penting dalam
konteks identifikasi obat / target, karena sebagian besar target tersebut cenderung kinase dan
protein pengatur lainnya yang umumnya diekspresikan dalam sel pada tingkat yang sangat
rendah.

Sel/jaringan target

Ekstrak protein

Pemisahan protein
(elektroforesi 2D atau HPLC)

Studi sequencing
(Spektrometri massa atau degradasi
Edman)

Identifikasi
(pencarian urutan homologi)

Gambar 4. Pendekatan proteomik. Lihat teks untuk detailnya


Baru-baru ini, teknik kromatografi resolusi tinggi (khususnya fase-balik dan kromatografi
cair kinerja tinggi (HPLC) berbasis pertukaran ion) telah diterapkan dalam pemisahan protein
proteom dan spektrometri massa resolusi tinggi digunakan untuk membantu throughput tinggi
penentuan urutan.

6. GENOMIK STRUKTURAL
Terkait dengan disiplin proteomik adalah genomik struktural. Yang terakhir ini berfokus pada
studi sistematis skala besar dari struktur produk gen. Sementara ini mencakup rRNA dan
tRNA, dalam praktiknya lapangan berfokus pada struktur protein. Pendekatan dasar untuk
genomik struktural mencakup kloning dan ekspresi rekombinan dari protein seluler, diikuti
oleh pemurnian dan analisis struktural tiga dimensi. Penentuan resolusi tinggi dari struktur
protein adalah di antara penyelidikan molekuler yang paling menantang. Pada tahun 2000,
bank data struktur protein bertempat di wilayah 12.000 entri. Namun, bank data seperti itu

8
sangat redundan, seringkali berisi banyak entri yang menjelaskan varian dari molekul yang
sama. Misalnya, lebih dari 50 struktur 'insulin' yang berbeda telah disimpan (mis. Bentuk asli
dan bermutasi / direkayasa dari berbagai spesies, serta insulin dalam berbagai bentuk polimer
dan dengan adanya berbagai zat penstabil dan bahan kimia lainnya). Pada kenyataannya, pada
tahun 2000, struktur tiga dimensi dari sekitar 2000 protein yang benar-benar berbeda telah
diselesaikan.
Sampai baru-baru ini, kristalografi sinar-X adalah teknik yang digunakan hampir secara
eksklusif untuk menyelesaikan struktur tiga dimensi protein. Selain itu, teknik itu sendiri
secara teknis menantang, keterbatasan utama kristalografi sinar-X adalah persyaratan untuk
protein target dalam bentuk kristal. Sejauh ini terbukti sulit/tidak mungkin untuk
menginduksi sebagian besar protein untuk mengkristal. NMR adalah teknik analitik yang
juga dapat digunakan untuk menentukan struktur tiga dimensi molekul, dan tanpa keharusan
untuk kristalisasi. Selama bertahun-tahun, bahkan mesin NMR yang paling kuat dapat
menyelesaikan struktur tiga dimensi dari hanya protein yang relatif kecil (kurang dari 20-25
kDa). Namun, kemajuan analitik terbaru sekarang memungkinkan untuk menganalisis protein
yang jauh lebih besar dengan teknik ini dengan sukses.
Tujuan akhir dari genomik struktural adalah untuk memberikan deskripsi tiga dimensi
lengkap dari setiap produk gen. Juga, karena semakin banyak struktur protein dari fungsi
yang diketahui telah dijelaskan, maka semakin mungkin untuk menghubungkan atribut
fungsional spesifik dengan atribut struktural spesifik. Dengan demikian, pada akhirnya
terbukti layak untuk memprediksi fungsi protein jika strukturnya diketahui, dan sebaliknya.

7. FARMAKOGENETIKA
Farmakogenetika berkaitan dengan disiplin yang muncul dalam mengkorelasikan informasi
urutan DNA gen spesifik (khususnya variasi urutan) dengan respons obat. Dengan demikian,
pencarian obat pada akhirnya akan berdampak langsung pada proses pengembangan obat dan
harus memungkinkan dokter untuk membuat keputusan yang lebih baik tentang obat apa
yang harus diresepkan untuk masing-masing pasien.
Orang yang berbeda merespons secara berbeda terhadap obat yang diberikan, bahkan jika
mereka hadir dengan gejala penyakit yang pada dasarnya identik. Persyaratan dosis optimal,
misalnya, dapat sangat bervariasi. Selain itu, tidak semua pasien merespons secara positif
terhadap obat tertentu (mis. IFN-β bermanfaat secara klinis hanya pada satu dari tiga pasien
multiple sclerosis). Kisaran dan tingkat keparahan efek samping yang disebabkan oleh obat
juga dapat bervariasi secara signifikan dalam basis populasi pasien.
Sementara dasar dari tanggapan diferensial semacam itu kadang-kadang bisa bersifat non-
genetik (mis. keadaan kesehatan umum, dll.), Variasi genetik di antara individu tetap menjadi
faktor utama. Meskipun semua manusia menampilkan sekuens genom yang hampir identik,
beberapa perbedaan terbukti. Variasi tipe luas yang paling menonjol di antara individu
dikenal sebagai polimorfisme nukleotida tunggal (single nucleotide polymorphisms = SNP,
kadang-kadang diucapkan 'snips'). SNP terjadi pada populasi umum pada insiden rata-rata 1
dalam setiap 1000 basa nukleotida; karenanya, seluruh genom manusia menampung 3 juta
atau lebih. SNP bukan mutasi; yang terakhir muncul lebih jarang, lebih beragam dan
umumnya disebabkan oleh kesalahan spontan / yang disebabkan mutagen dalam

9
perbaikan/replikasi DNA. SNP yang terjadi pada gen struktural/sekuens pengatur gen dapat
mengubah tingkat asam amino/tingkat ekspresi protein dan, karenanya, mempengaruhi atribut
fungsionalnya. SNP sebagian besar menjelaskan variasi fisik alami yang terlihat pada
populasi manusia (mis. Ketinggian, warna mata, dll.).
Kehadiran SNP dalam daerah regulasi atau struktural gen yang mengkode protein yang
berinteraksi dengan obat jelas dapat mempengaruhi efek obat pada tubuh. Dalam konteks ini,
produk protein dapat, misalnya, menjadi target obat atau mungkin enzim yang terlibat dalam
metabolisme obat.
Identifikasi dan karakterisasi SNP dalam genom manusia, oleh karena itu, baik kepentingan
akademik dan terapan. Beberapa kelompok penelitian terus memetakan SNP manusia, dan
lebih dari 1,5 juta sejauh ini telah diidentifikasi.
Dengan mengidentifikasi dan membandingkan pola SNP dari sekelompok pasien yang
responsif terhadap obat tertentu dengan pola yang ditampilkan oleh sekelompok pasien yang
tidak responsif, dimungkinkan untuk mengidentifikasi karakteristik SNP spesifik terkait
dengan kemanjuran obat. Dengan cara yang sama, pola / karakteristik SNP yang terkait
dengan reaksi merugikan (atau bahkan kecenderungan terhadap suatu penyakit) dapat
ditemukan. Ini bisa mengantarkan era baru terapi obat di mana perawatan obat dapat
disesuaikan untuk masing-masing pasien. Lebih lanjut, obat yang berbeda dapat
dikembangkan dengan pengetahuan sebelumnya bahwa masing-masing akan berkhasiat bila
diberikan pada sub-jenis pasien tertentu (ditentukan SNP). Skenario futuristik (jauh) dapat
divisualisasikan di mana semua individu dapat membawa chip yang dikodekan dengan
rincian SNP yang berkaitan dengan genom spesifik mereka, memungkinkan staf medis untuk
memilih obat yang paling tepat untuk diresepkan dalam keadaan tertentu.
Namun, mengaitkan faktor-faktor penentu genetik spesifik dengan banyak penyakit
tampaknya tidak semudah yang disiratkan sejauh ini. Kemajuan sebagian besar penyakit, dan
efektivitas relatif dari pengobatan obat sekutu, tergantung pada banyak faktor, termasuk
interaksi dari berbagai produk gen. Faktor ‘Lingkungan’ seperti usia pasien, jenis kelamin
dan kesehatan umum juga memainkan peran penting.
Istilah 'farmakogenomik' adalah istilah yang telah memasukkan kosakata 'genomik'.
Meskipun kadang-kadang digunakan hampir secara bergantian dengan farmakogenetik, itu
lebih khusus merujuk pada mempelajari pola ekspresi produk gen yang terlibat dalam respons
obat.

8. KARAKTERISASI PRODUK AWAL


Sifat-sifat fisikokimia dan sifat-sifat lain dari setiap obat yang baru diidentifikasi harus
dikarakterisasi secara luas sebelum masuk ke dalam uji klinis. Karena sebagian besar
biofarmasi adalah protein, tinjauan ikhtisar pendekatan yang diambil untuk karakterisasi awal
biomolekul ini disajikan. Prasyarat untuk karakterisasi tersebut adalah pemurnian awal
protein. Pemurnian untuk homogenitas biasanya membutuhkan kombinasi tiga atau lebih
langkah kromatografi resolusi tinggi (Bab 6). Protokol pemurnian dirancang dengan hati-hati,
karena biasanya membentuk dasar dari sistem pemurnian skala pilot dan proses selanjutnya.
Produk yang dimurnikan kemudian mengalami serangkaian tes yang bertujuan untuk

10
mengkarakterisasi sepenuhnya. Selain itu, setelah karakteristik ini telah ditentukan, mereka
membentuk dasar dari banyak tes identitas QC yang secara rutin dilakukan pada produk
selama pembuatan komersial berikutnya. Karena tes identitas ini dibahas secara rinci dalam
Bab 7, hanya tinjauan singkat yang disajikan di sini, dalam bentuk Gambar 5.

Gambar 5. Pohon tugas untuk karakterisasi struktural dari protein terapeutik.


Uraian yang lebih rinci dari banyak studi karakterisasi ini dapat dilihat pada Bab 7

9. MEMATENKAN
Penemuan dan karakterisasi awal dari setiap zat aplikasi farmasi potensial diikuti oleh
patennya. Semakin detail yang relevan dengan karakteristik fisikokimia obat, metode sintesis
dan efek biologisnya, semakin besar peluang untuk berhasil mendapatkan paten. Dengan
demikian, paten tidak dapat terjadi sampai uji praklinis dan uji klinis fase I selesai. Paten,
setelah berhasil diselesaikan, tidak memberikan hak otomatis kepada pemegang paten untuk
memanfaatkan/menjual produk yang dipatenkan; pertama, harus terbukti aman dan efektif
dalam uji klinis berikutnya, dan kemudian disetujui untuk penggunaan medis umum oleh
pihak berwenang yang relevan.
9.1 Apa itu paten dan apa yang bisa dipatenkan?
Paten dapat digambarkan sebagai monopoli yang diberikan oleh pemerintah kepada penemu,
sehingga hanya penemu yang dapat mengeksploitasi penemuan/inovasi untuk jangka waktu
tertentu (hingga 20 tahun). Sebagai imbalannya, penemu menyediakan deskripsi teknis
terperinci dari penemuan/inovasi sehingga, ketika periode monopoli telah berakhir, ia dapat
dieksploitasi oleh orang lain tanpa izin penemu.

11
Paten, karenanya, mendorong inovasi dengan mempromosikan penelitian dan pengembangan.
Ini juga dapat dianggap sebagai aset fisik, yang dapat dijual atau dilisensikan kepada pihak
ketiga untuk mendapatkan uang tunai. Paten juga merupakan sumber unik informasi teknis
mengenai produk yang dipatenkan.
Filosofi yang mendasari hukum paten hampir serupa di seluruh dunia. Jadi, meskipun tidak
ada kantor paten di seluruh dunia, praktik paten di berbagai wilayah dunia sering sangat
mirip. Ini kebetulan, karena ada kecenderungan yang berkembang ke arah harmonisasi
hukum paten dunia, didorong oleh perjanjian perdagangan multinasional.
Agar dianggap dapat dipatenkan, sebuah penemuan/inovasi harus memenuhi beberapa
kriteria, empat yang paling penting adalah:
• kebaruan
• tidak jelas
• kecukupan pengungkapan
• utilitas
9.2 Mematenkan dalam bioteknologi
Banyak produk alam (mis. antibiotik spesifik, mikroorganisme, protein, dll) telah berhasil
dipatenkan. Dapat diperdebatkan bahwa hanya untuk menemukan zat apa pun yang terjadi
secara alami di Bumi dikategorikan sebagai penemuan dan tidak akan dapat diabaikan karena
tidak memiliki kebaruan atau langkah inventif apa pun. Namun, jika Anda memperkaya,
memurnikan, atau memodifikasi produk alam sedemikian rupa sehingga Anda menyediakan
zat tersebut untuk pertama kali dalam format yang bermanfaat secara industri, produk/proses
tersebut pada umumnya dapat dipatenkan. Dengan kata lain, mematenkan dimungkinkan jika
'tangan manusia' telah memainkan peran yang jelas dalam mengembangkan produk.
Di AS, kemurnian saja sering memfasilitasi pematenan produk alami (Tabel 1). US Patent
and Trademark Office (PTO) mengakui kemurnian sebagai perubahan bentuk bahan alami.
Sebagai contoh, walaupun vitamin B12 adalah produk alami selama bertahun-tahun, vitamin
B12 hanya tersedia dalam bentuk ekstrak hati mentah, yang tidak dapat digunakan secara
terapi. Pengembangan produksi yang sesuai (fermentasi) dan protokol pemurnian
memungkinkan produksi vitamin B12 murni kristalin yang dapat digunakan secara klinis.
Atas dasar ini, paten produk diberikan di AS.
Tabel 1. Beberapa produk alam yang umumnya dapat dipatenkan berdasarkan Undang-
Undang Paten AS.
Kultur mikroba murni
Virus yang terisolasi
Protein murni khusus (mis. EPO)
Urutan asam nukleat murni (termasuk gen yang terisolasi, plasmid, dll.)
Biomolekul murni lainnya (mis. antibiotik, vitamin, dll.)

Kriteria paten tambahan (mis. utilitas) juga harus dipenuhi. Untuk banyak produk,
paten akan mencakup perincian proses yang digunakan untuk memurnikan
produk. Namun, paten ‘proses’ dapat diajukan, seperti halnya ‘dapat
menggunakan’ paten. Lihat teks untuk detail lebih lanjut

12
Dengan menggunakan logika yang sama, PTO telah memberikan paten, misalnya, untuk
kultur murni mikroorganisme spesifik dan untuk protein yang penting secara medis (mis.
Faktor VIII yang dimurnikan dari darah dan EPO yang dimurnikan dari urin).
Kemajuan teknologi yang cepat dalam ilmu-ilmu biologi menimbulkan masalah-masalah
paten yang rumit, dan hukum paten seperti yang diterapkan pada bioteknologi modern masih
terus berkembang.
Pada akhir 1980-an, PTO mengkonfirmasi mereka akan mempertimbangkan mengeluarkan
paten untuk organisme multisel non-manusia, termasuk hewan. Hewan transgenik pertama
dipatenkan pada tahun 1988 oleh Universitas Harvard. 'Tikus Harvard' membawa gen yang
membuatnya lebih rentan terhadap kanker dan, karenanya, lebih sensitif dalam mendeteksi
kemungkinan karsinogen.
Bidang lain dari hukum paten bioteknologi terkait dengan paten gen dan sekuens DNA.
Sejauh ini, paten telah dikeluarkan untuk beberapa gen manusia, sebagian besar berdasarkan
penggunaan produk kloning mereka (mis. EPO dan tPA). Muncul konsensus bahwa
perlindungan paten hanya boleh dipertimbangkan untuk sekuens nukleotida yang dapat
digunakan untuk tujuan tertentu, mis. untuk urutan yang dapat berfungsi sebagai penanda
diagnostik atau kode untuk produk protein yang bernilai medis. Ini tampaknya menjadi
pendekatan yang wajar, karena menyeimbangkan masalah kepentingan publik dengan
mendorong inovasi di daerah tersebut.
Masalah paten materi genetik atau tanaman / hewan transgenik tetap menjadi perdebatan.
Debat ini tidak terbatas pada argumen teknis dan hukum: masalah etika dan politik, termasuk
opini publik, juga mempengaruhi proses pengambilan keputusan. Meningkatnya
kompleksitas teknis dan kecanggihan prinsip-prinsip / proses biologis yang mendasari inovasi
bioteknologi juga membuat penyelesaian masalah paten hukum menjadi lebih sulit.
Sebuah langkah besar dalam mengklarifikasi hukum seluruh Uni Eropa (EU) berkenaan
dengan paten dalam bioteknologi berasal dari diperkenalkannya Petunjuk Eropa tahun 1998.
Arahan ini (hukum UE) menegaskan bahwa bahan biologis (mis. Sel, protein, gen, sekuens
nukleotida, antibiotik, dll.) Spesifik yang sebelumnya ada di alam berpotensi dipatenkan.
Namun, agar benar-benar dapat dipatenkan, mereka harus (a) diisolasi/dimurnikan dari
lingkungan alami mereka dan/atau diproduksi melalui proses teknis (misalnya teknologi
rDNA dalam kasus protein rekombinan) dan (b) mereka harus sesuai dengan prinsip-prinsip
paten umum tentang kebaruan, ketidakjelasan, kegunaan dan kecukupan pengungkapan. Oleh
karena itu, kondisi 'utilitas' berlaku mencegah paten urutan gen/genome dari fungsi yang
tidak diketahui. Arahan juga melarang kemungkinan paten penemuan jika eksploitasi mereka
akan bertentangan dengan ketertiban umum atau moralitas. Dengan demikian, tidak mungkin
mematenkan:
• tubuh manusia;
• kloning manusia;
• penggunaan embrio manusia untuk tujuan komersial;
• memodifikasi identitas garis kuman pada manusia;
• memodifikasi komplemen genetik hewan jika modifikasi menyebabkan penderitaan
tanpa menghasilkan manfaat medis substansial bagi hewan/manusia.

13
10. PENGANTARAN BIOFARMASI
Masalah penting yang harus diatasi selama fase praklinis dari proses pengembangan obat
berkaitan dengan rute di mana obat akan diantarkan/diberikan. Sampai saat ini, sebagian
besar biofarmasi yang disetujui untuk penggunaan medis umum diberikan dengan injeksi
langsung (yaitu parenteral) biasanya dengan intravena (iv), subkutan (sc, yaitu langsung di
bawah kulit) atau rute intramuskuler (im, yaitu ke jaringan otot). Pemberian obat melalui rute
sc atau rute im biasanya diikuti oleh pelepasan obat secara lambat dari tempat depotnya ke
dalam aliran darah. Di antara beberapa pengecualian pada rute parenteral ini adalah enzim
DNase, yang digunakan untuk mengobati cystic fibrosis, dan faktor pertumbuhan turunan
trombosit (platelet-derived growth factor = PDGF), yang digunakan untuk mengobati bisul
kulit tertentu. Namun, tidak satu pun dari produk ini diperlukan untuk mencapai aliran darah
untuk mencapai efek terapeutiknya. Faktanya, dalam setiap kasus sistem pengantaran obat
mengantarkan biofarmasi langsung ke tempat kerjanya (DNase diantar langsung ke paru-paru
melalui inhalasi aerosol, dan PDGF diterapkan secara topikal, yaitu langsung pada
permukaan ulkus, sebagai gel).
Pemberian parenteral tidak dianggap sebagai masalah dalam konteks obat yang jarang
diberikan, atau sebagai dosis sekali pakai untuk pasien. Namun, dalam kasus produk yang
sering diberikan/setiap hari (mis. insulin ke penderita diabetes), rute pemberian non-
parenteral akan lebih disukai. Rute seperti itu akan lebih nyaman, kurang invasif, kurang
menyakitkan dan umumnya akan mencapai kepatuhan pasien yang lebih baik. Alternatif rute
pemberian potensial termasuk oral, nasal, transmucosal, transdermal atau rute pulmonal.
Meskipun rute tersebut telah terbukti mungkin dalam konteks banyak obat, pemberian rutin
biofarmasi dengan cara seperti itu telah terbukti secara teknis menantang. Hambatan yang
ditemui meliputi massa molekulnya yang tinggi, kerentanannya terhadap inaktivasi enzimatik
dan potensi agregatnya.
10.1 Sistem pengantaran secara oral
Pengantaran secara oral biasanya merupakan sistem yang lebih disukai untuk pemberian obat,
karena kenyamanannya dan tingkat kepatuhan pasien yang tinggi umumnya tercapai.
Pemberian biofarmasi melalui rute ini telah terbukti bermasalah karena sejumlah alasan:
• Inaktivasi karena asam lambung. Sebelum mengkonsumsi makanan, pH lambung
biasanya di bawah 2.0. Meskipun aksi buffering makanan dapat meningkatkan pH ke
netralitas, stimulasi sekresi asam lambung yang terkait selanjutnya mengurangi pH
sekitar kembali ke 3,0-3,5. Hampir semua biofarmasi adalah asam labil dan tidak aktif
pada nilai pH rendah.
• Inaktivasi karena protease pencernaan. Protein terapeutik akan mewakili target
potensial untuk protease pencernaan seperti pepsin, trypsin dan chymotrypsin.
• Ukurannya (relatif) besar dan sifat hidrofiliknya mempersulit perjalanan biofarmasi
utuh melintasi mukosa usus.
• Obat yang diserap secara oral mengalami metabolisme first-pass. Setelah masuk ke
dalam aliran darah, organ pertama yang ditemukan adalah hati, yang biasanya
menghilangkan sebagian besar obat yang diserap dari peredaran.
Mengingat kesulitan seperti itu, tidak mengherankan bahwa ketersediaan hayati di bawah 1
persen sering dicatat dalam konteks pemberian obat biofarmasi oral. Strategi yang

14
diupayakan untuk meningkatkan bioavailabilitas termasuk secara fisik melindungi obat
melalui enkapsulasi dan formulasi sebagai mikroemulsi / mikropartikulat, serta
dimasukkannya protease inhibitor dan peningkat permeabilitas.
Enkapsulasi dalam mantel enterik (tahan terhadap nilai pH rendah) melindungi produk
selama transit lambung. Mikrokapsul/bola yang digunakan telah dibuat dari berbagai zat
polimer, termasuk selulosa, polivinil alkohol, polimetilakrilat dan polistirena. Sistem
pengiriman berdasarkan penggunaan liposom dan mantel pelindung siklodekstrin juga telah
dikembangkan. Termasuk dalam beberapa sistem seperti itu adalah protease inhibitor, seperti
aprotinin dan ovomucoids. Peningkat permeasi yang digunakan biasanya adalah zat berbasis
deterjen, yang dapat meningkatkan penyerapan melalui lapisan gastrointestinal.
Baru-baru ini, peningkatan perhatian penelitian telah difokuskan pada penggunaan 'sistem
pengantaran mukoadhesif' di mana biofarmasi diformulasikan dengan/dienkapsulasi dalam
molekul yang berinteraksi dengan membran mukosa usus. Strateginya jelas untuk
mempertahankan obat di permukaan menyerap untuk jangka waktu lama. Interaksi non
spesifik (berbasis muatan) dapat dicapai dengan menggunakan asam poliakrilat, sedangkan
interaksi yang lebih biospecific dicapai dengan menggunakan lektin yang dipilih atau protein
adhesi bakteri. Meskipun ada upaya intensif, namun keberhasilan pengantaran biofarmasi
melalui rute oral masih jauh.
10.2 Pengantaran melalui paru-paru
Pengantaran melalui paru-paru saat ini merupakan alternatif yang paling menjanjikan untuk
sistem pengantaran parenteral untuk biofarmasi. Pengantaran melalui rute paru-paru pindah
dari konsep ke kenyataan pada tahun 2006 dengan persetujuan dari Exubera, produk insulin
yang dapat dihirup. Meskipun paru-paru tidak secara permeabel terhadap zat terlarut dengan
massa molekul rendah (mis. sukrosa atau urea), makromolekul dapat diserap ke dalam darah
melalui paru-paru dengan sangat baik. Faktanya, penyerapan makromolekul paru umumnya
tampaknya berbanding terbalik dengan massa molekul, hingga massa sekitar 500 kDa.
Banyak peptida/protein yang diantar ke paru-paru yang dalam terdeteksi dalam darah dalam
beberapa menit, dan bioavailabilitas yang mendekati/melebihi 50 persen (relatif terhadap
injeksi subkutan) telah dilaporkan untuk protein terapi seperti faktor-faktor yang merangsang
koloni dan beberapa interferon. Meskipun tidak sepenuhnya dipahami, bioavailabilitas paru-
paru yang tinggi dapat berasal dari:
• area permukaan paru-paru sangat besar;
• volume cairan permukaannya rendah;
• lapisan difusi tipis;
• pembersihan permukaan sel yang relatif lambat;
• adanya inhibitor proteolitik.
Keuntungan tambahan yang terkait dengan rute paru meliputi:
• penghindaran metabolisme first-pass;
• ketersediaan sistem pengantaran berbasis nebulizer yang andal dan berdasar yang
mampu memberikan dosis yang akurat, baik dalam bentuk bubuk atau cair;
• tingkat penyerapan dicapai tanpa harus memasukkan penambah penetrasi yang
umumnya terlalu menjengkelkan untuk penggunaan jangka panjang.

15
Meskipun jelas terjadi dalam praktiknya, makromolekul yang diserap melalui rute paru harus
melewati sejumlah hambatan biologis untuk masuk ke dalam darah. Hambatan biologis ini
adalah:
• lapisan pelindung dari fosfolipid yang tidak larut, disebut 'surfaktan paru-paru', dan
cairan lapisan permukaan yang mendasarinya, yang terletak tepat di atas sel-sel epitel
paru-paru;
• sel-sel epitel yang melapisi paru-paru;
• interstitium (ruang ekstraseluler), dan membran basal, terdiri dari lapisan bahan
berserat interstitial;
• endotelium pembuluh darah, yaitu monolayer sel yang membentuk dinding pembuluh
darah.
Melewati epitel dan hambatan seluler endotel sepertinya merupakan tantangan terbesar untuk
penyerapan. Meskipun detail molekuler masih belum jelas, proses penyerapan ini tampaknya
terjadi melalui salah satu dari dua cara yang mungkin: transcytosis atau transportasi
paracellular (Gambar 6).

Gambar 6. Mekanisme yang memungkinkan makromolekul melintasi penghalang seluler


untuk mencapai aliran darah dari (dalam hal ini) paru-paru.
Transcytosis melibatkan pengambilan langsung makromolekul pada satu
permukaan melalui endositosis, perjalanan vesikel endosom melintasi sel, dengan
rilis berikutnya pada wajah sel yang berlawanan melalui eksositosis. Transport
paracellular mensyaratkan jalannya makromolekul melalui persimpangan ketat
'bocor' yang ditemukan antara beberapa sel
10.3 Sistem pengantaran secara nasal, transmucosal dan transdermal
Rute pengantaran biofarmasi berbasis hidung (nasal) dianggap berpotensi menarik karena:
• mudah diakses;

16
• rongga hidung dilayani oleh kepadatan tinggi pembuluh darah;
• mikrovili hidung menghasilkan luas permukaan penyerapan yang besar;
• pengantaran melalui hidung memastikan obat mem-bypass metabolisme first-pass.
Namun, rute melalui hidung mempunyai beberapa kelemahan, termasuk:
• pembersihan proporsi obat yang diberikan terjadi karena deposisi pada selimut lendir
hidung, yang terus-menerus dibersihkan oleh aksi silia;
• adanya protease/peptidase hidung ekstraseluler;
• tingkat penyerapan rendah untuk peptida/polipeptida yang lebih besar.
Tingkat penyerapan peptida/protein di seluruh epitel hidung tergantung pada massa molekul.
Peptida yang relatif kecil (seperti analog oksitosin, desmopresin, dan hormon pelepas hormon
luteinisasi) yang bersilangan dengan relatif mudah, dan beberapa produk yang digunakan
secara medis diberikan secara rutin melalui hidung. Molekul yang lebih besar (dari massa
molekul lebih besar dari 10 kDa) umumnya tidak melewati penghalang epitel tanpa
pemberian serentak penambah serapan seperti deterjen. Penggunaan perangkat tambahan
jangka panjang dilarang karena efek selulernya yang merusak.
Upaya penelitian juga terus mengeksplorasi pengantaran melalui mukosa peptida/protein
melalui rute bukal, vagina dan dubur. Sekali lagi, bioavailabilitas yang tercatat rendah,
dengan peningkatan sederhana diamati setelah dimasukkannya peningkat permeasi.
Hambatan tambahan juga ada terkait, misalnya, untuk daerah permukaan rendah,
pembersihan relatif cepat dari rongga mulut (bukal) dan perubahan siklik karakteristik
jaringan vagina. Berbagai strategi telah diadopsi dalam upaya mencapai pengantaran
biofarmasi ke seluruh kulit (sistem transdermal). Sejauh ini, sebagian besar telah bertemu
dengan keberhasilan sederhana. Strategi yang digunakan termasuk penggunaan jet helium
atau penerapan tegangan rendah untuk mempercepat protein melalui kulit.

11. STUDI PRAKLINIS


Untuk mendapatkan persetujuan untuk penggunaan medis umum, kualitas, keamanan dan
kemanjuran produk apa pun harus ditunjukkan. Demonstrasi kesesuaian dengan persyaratan
ini, terutama keamanan dan kemanjuran, sebagian besar dicapai dengan melakukan uji klinis.
Namun, data awal, terutama data keamanan, harus diperoleh sebelum pemberian obat kepada
sukarelawan manusia. Persetujuan otoritas pengaturan untuk memulai uji klinis sebagian
besar didasarkan pada penilaian farmakologis dan toksikologi praklinis dari potensi obat baru
pada hewan. Studi praklinis semacam itu dapat memakan waktu hingga 3 tahun, dan dengan
biaya antara US $ 10 juta hingga US $ 30 juta. Rata-rata, sekitar 10 persen obat baru yang
potensial bertahan uji coba praklinis.
Dalam banyak kasus, tidak ada seperangkat aturan ketat yang mengatur berbagai tes yang
harus dilakukan selama studi praklinis. Namun, pedoman biasanya diberikan oleh otoritas
pengawas. Berbagai studi yang umumnya dilakukan berkaitan dengan obat-obatan berbasis
kimia tradisional dirangkum dalam Tabel 2. Sebagian besar tes ini sama-sama berlaku untuk
produk biofarmasi.

17
Tabel 2. Rentang tes utama dilakukan pada obat baru yang potensial selama uji praklinis.
Profil farmakokinetik
Profil farmakodinamik
Bioequivalence dan bioavailabilitas
Toksisitas akut
Toksisitas kronis
Toksisitas dan teratogenisitas reproduksi
Mutagenisitas
Karsinogenisitas
Imunotoksisitas
Toleransi lokal
Penekanan pada tahap proses pengembangan obat ini adalah pada penilaian
keamanan. Hasil farmakologis yang memuaskan, dan khususnya toksikologis,
harus diperoleh sebelum otoritas pengawas mengizinkan dimulainya uji coba pada
manusia

12. FARMAKOKINETIK DAN FARMAKODINAMIK


Farmakologi dapat digambarkan sebagai studi tentang sifat-sifat obat dan bagaimana mereka
berinteraksi dengan / mempengaruhi tubuh. Dalam disiplin yang luas ini terdapat subdisiplin
(agak artifisial), termasuk farmakokinetik dan farmakodinamik.
Farmakokinetik berkaitan dengan nasib suatu obat dalam tubuh, terutama ADME-nya, yaitu
penyerapannya (absorbsi) ke dalam tubuh, distribusinya di dalam tubuh, metabolisme oleh
tubuh, dan ekskresi dari tubuh.
Hasil penelitian tersebut tidak hanya membantu mengidentifikasi efek toksik, tetapi juga
menunjukkan metode pemberian obat yang paling tepat, serta rezim dosis yang paling efektif
untuk digunakan. Secara umum, studi ADME dilakukan dalam dua spesies, biasanya tikus
dan anjing, dan studi diulang pada berbagai tingkat dosis yang berbeda. Semua studi
dilakukan pada hewan jantan dan hewan betina.
Jika uji klinis awal mengungkapkan perbedaan dalam profil farmakokinetik model manusia
versus hewan, studi farmakokinetik tambahan mungkin diperlukan menggunakan primata.
Studi farmakodinamik membahas secara lebih spesifik bagaimana obat membawa efek
khasnya. Penekanan dalam penelitian tersebut sering ditempatkan pada bagaimana obat
berinteraksi dengan jenis sel/organ, efek dan efek samping yang diinduksi, dan mengamati
kurva respons dosis.
Ketersediaan hayati dan bioekivalensi juga biasanya dinilai pada hewan. Studi tersebut
dilakukan sebagai bagian dari studi farmakokinetik dan/atau farmakodinamik. Ketersediaan
hayati berkaitan dengan proporsi obat yang benar-benar mencapai tempat kerjanya setelah
pemberian. Karena sebagian besar biofarmasi dikirim secara parenteral (mis. dengan injeksi),
bioavailabilitasnya hampir 100 persen. Di sisi lain, pemberian biofarmasi melalui mulut akan,
dalam banyak kasus, menghasilkan ketersediaan hayati pada atau mendekati 0 persen. Studi
bioavailabilitas akan menjadi lebih kompleks jika, misalnya, peptida terapeutik diberikan
secara intranasal.

18
Studi bioequivalence berperan jika ada perubahan dalam sistem produksi/pengantaran produk
yang sedang dipikirkan. Studi-studi ini akan berusaha untuk mengidentifikasi apakah
modifikasi tersebut masih menghasilkan produk yang setara dengan yang asli dalam hal
keamanan dan kemanjuran. Modifikasi dapat mencakup formulasi atau metode pemberian
yang diubah, rejimen dosis, dll.
12.1 Farmakokinetik protein
Prasyarat untuk studi farmakokinetik/farmakodinamik adalah ketersediaan uji yang cukup
selektif dan sensitif. Pengujian harus mampu mendeteksi dan secara akurat mengukur protein
terapeutik dengan adanya sup kompleks molekul 'kontaminan' yang merupakan karakteristik
dari ekstrak jaringan/cairan tubuh. Protein spesifik biasanya terdeteksi dan diukur baik
melalui immunoassay atau bioassay. Pendekatan analitik tambahan yang kadang-kadang
digunakan termasuk kromatografi cair (mis. HPLC) atau penggunaan protein berlabel
radioaktif.
Struktur makromolekul obat dan fakta bahwa perubahan struktural yang relatif kecil
berpotensi memiliki pengaruh besar terhadap bioaktivitas sering merupakan faktor yang
menyulitkan. Sebagai contoh, suatu immunoassay mungkin buta terhadap oksidasi residu
asam amino, atau pemrosesan proteolitik yang sangat terbatas, meskipun peristiwa semacam
itu dapat mengaktifkan atau menurunkan bioaktivitas.
Seperti yang diuraikan sebelumnya, pemberian obat secara iv atau sc sejauh ini merupakan
pendekatan pengantaran obat yang paling umum dalam konteks biofarmasi. Studi distribusi
seluruh tubuh dilakukan terutama untuk menilai penargetan jaringan dan untuk
mengidentifikasi rute eliminasi utama. Berat molekul besar dari protein terapeutik, bersama
dengan sifat-sifat tambahan (mis. muatan), umumnya merusak jalurnya melalui biomembran;
karenanya, distribusi awal mereka biasanya terbatas pada volume ruang ekstraseluler
(terutama volume plasma). Volume distribusi biasanya kemudian meningkat, karena protein
diambil ke dalam jaringan selama metabolisme/eliminasi.
Metabolisme/eliminasi protein terapeutik terjadi melalui proses yang identik dengan yang
berkaitan dengan protein endogen asli. Pada akhirnya ini memerlukan degradasi proteolitik,
dengan residu asam amino dilepaskan baik yang dimasukkan ke dalam protein yang baru
disintesis atau lebih jauh terdegradasi oleh jalur metabolisme standar. Meskipun protein
terapeutik dapat mengalami proteolisis terbatas dalam darah, metabolisme yang luas dan
penuh terjadi secara intraseluler, setelah pengambilan produk seluler. Pembersihan obat-
obatan protein dari sirkulasi sistemik dimulai dengan perjalanan melintasi endotel kapiler.
Tingkat perjalanan tergantung pada sifat fisikokimia protein (mis. massa dan muatan).
Ekskresi produk akhir, utamanya, dimediasi renal dan/atau hepatik.
Banyak protein dengan massa molekul, 30 kDa dieliminasi oleh ginjal melalui filtrasi
glomerulus. Selain ukuran, filtrasi juga tergantung pada karakteristik muatan protein. Karena
adanya glikosaminoglikan, filter glomerular itu sendiri bermuatan negatif, sehingga protein
yang bermuatan negatif disaring dengan buruk karena tolakan muatan.
Setelah filtrasi awal, banyak protein secara aktif diserap kembali (endositosis) oleh tubulus
proksimal dan mengalami degradasi lisosom, dengan reabsorpsi asam amino berikutnya. Jadi,
sangat sedikit protein utuh yang benar-benar masuk ke urin.

19
Penyerapan protein oleh hepatosit dapat terjadi melalui salah satu dari dua mekanisme: (a)
endositosis yang dimediasi reseptor atau (b) pinositosis yang tidak selektif, lagi-lagi dengan
proteolisis protein berikutnya. Demikian pula, proporsi beberapa protein kemungkinan
terdegradasi di dalam jaringan target, karena pengikatan pada reseptor permukaan sel
fungsionalnya memicu internalisasi endositik dari kompleks ligan reseptor (Gambar 7).

Gambar 7. Proses endositosis yang dimediasi reseptor.


Pengikatan ligan, dalam hal ini protein terapeutik, pada reseptor permukaan
selnya (a) memicu invaginasi pada area yang mengelilingi membran plasma,
menginternalisasi reseptor dan ligandnya dalam vesikel intraseluler (b). Ini
biasanya diikuti oleh fusi vesikel internal dengan lisosom dan, oleh karena itu,
degradasi ligan dan reseptor oleh hidrolase lisosom (c). Dalam beberapa kasus,
bagaimanapun, variasi dapat terjadi di mana ligan terlepas dari reseptor (karena
pH yang lebih rendah dalam vesikel), dengan selanjutnya beranjak dari bagian
kecil vesikel yang mengandung reseptor, yang mengembalikan reseptor ke sel.
permukaan. Dalam situasi ini, hanya ligan yang tersedia untuk degradasi setelah
fusi vesikular berikutnya dengan lisosom (d)
Penyerapan seluler dari beberapa protein terapeutik glikosilasi terjadi melalui reseptor
permukaan sel pengikat gula tertentu. Reseptor mannose permukaan sel, misalnya, mampu
mengikat glikoprotein yang rantai samping gulanya berakhir pada manosa, fucosa, N-asetil
glukosamin atau N-asetil galaktosamin. Bukti menunjukkan bahwa bentuk spesifik hati dari
reseptor mannose memediasi pembersihan hormon luteinizing (LH). Rantai samping gula dari
banyak glikoprotein menunjukkan residu asam sialat terminal (tutup asam sialic). Reseptor
asialoglikoprotein hati mengikat glikoprotein yang kapsinya asam sialat telah dihilangkan,
kemungkinan memediasi pengangkatannya dari sirkulasi umum.
Farmakokinetik dan karakteristik farmakodinamik dari protein terapeutik dapat dibuat
(bahkan lebih) rumit oleh sejumlah faktor, termasuk:
• Adanya protein pengikat serum. Beberapa biofarmasi (termasuk insulin-like growth
factor (IGF), GH dan sitokin tertentu) terkenal karena darah mengandung protein yang

20
mengikatnya secara spesifik. Protein pengikat seperti itu dapat berfungsi secara alami
sebagai pengangkut atau aktivator, dan pengikatan dapat mempengaruhi karakteristik
seperti tingkat eliminasi serum.
• Imunogenisitas. Banyak, jika tidak sebagian besar, protein terapeutik berpotensi
imunogenik ketika diberikan kepada manusia. Kemungkinan bahwa protein non-
manusia (mis. antibodi monoklonal murine) adalah imunogenik pada manusia adalah
kemungkinan yang jelas. Namun, protein manusia juga bisa berpotensi imunogenik.
Antibodi yang ditumbuhkan dengan cara ini dapat mengikat protein terapeutik,
menetralkan aktivitasnya dan/atau mempengaruhi waktu paruh serumnya.
• Profil gula glikoprotein. Ekspresi glikoprotein terapeutik dalam sistem ekspresi
eukariotik yang berbeda menghasilkan produk yang menunjukkan perbedaan dalam
detail glikosilasi yang tepat. Pola glikosilasi yang tepat dapat mempengaruhi aktivitas
protein dan stabilitas in vivo, dan beberapa motif gula karakteristik sistem ekspresi
berbasis ragi, serangga dan nabati adalah imunogenik pada manusia.
12.2 Menyesuaikan profil farmakokinetik
Sejumlah pendekatan yang berbeda dapat digunakan untuk mengubah profil farmakokinetik
protein. Pendekatan ini dapat diinginkan untuk mencapai tujuan terapeutik yang telah
ditentukan, seperti menghasilkan produk yang bertindak lebih cepat atau lebih lambat,
memperpanjang waktu paruh serum produk atau mengubah profil distribusi jaringan produk.
Pendekatan yang diambil biasanya bergantung pada rekayasa protein, baik itu perubahan
urutan asam amino, perubahan modifikasi pasca-translasi asli (biasanya glikosilasi) atau
perlekatan bagian kimia ke tulang punggung protein (seringkali lampiran PEG, yaitu
PEGilasi) . Contoh spesifik protein terapi yang direkayasa dengan cara ini dibahas secara rinci
dalam berbagai bab berikutnya, dan dirangkum dalam Tabel 3.
Tabel 3. Protein terapeutik yang direkayasa dalam beberapa cara untuk mengubah
farmakokinetik atau karakteristik farmakologis lainnya.
Protein Detail / alasan Teknik
Antibodi chimeric dan Antibodi murine yang diturunkan lebih manusia secara
manusiawi berurutan, sehingga mengurangi imunogenisitasnya dan
meningkatkan waktu paruh serumnya
tPA direkayasa Meningkatkan waktu paruh serum, memungkinkan pemberian
dengan injeksi iv tunggal sebagai lawan infus selama 90 menit
Insulin yang bekerja cepat Penggantian asam amino menghasilkan produk yang masuk ke
aliran darah lebih cepat dari tempat injeksi, memfasilitasi
pemberian produk bersama dengan makanan daripada
pemberian 30-45 menit sebelum makan
Insulin yang bekerja lama Pergantian asam amino menghasilkan produk yang memasuki
aliran darah dengan sangat lambat dari tempat injeksi, sehingga
mempertahankan level darah basal insulin selama periode yang
lama.
Interferon PEGylated Penempelan kovalen pada PEG meningkatkan waktu paruh
interferon dari 3 jam menjadi 24 jam, sehingga menghasilkan
produk yang jadwal dosisnya memerlukan sekali seminggu
dibandingkan dengan pemberian harian

21
Macugen PEGylated PEGilasi meningkatkan berat molekul aptamer ini dari sekitar
10 kDa menjadi sekitar 50 kDa, sehingga meningkatkan waktu
paruh dalam humor vitreous
EPO yang dimodifikasi EPO menampilkan rantai samping gula tambahan,
karbohidrat meningkatkan waktu paruh plasma dan dengan demikian
memfasilitasi jadwal injeksi sekali seminggu dibandingkan
dengan jadwal injeksi tiga kali seminggu
Glukoserebrosidase yang Penghapusan enzimatik dari tutup asam sialat memperlihatkan
dimodifikasi karbohidrat residu manosa, memicu pengambilan produk selektif oleh
makrofag (tipe sel target)

12.3 Cara kerja protein dan farmakodinamik


Terapi protein yang berbeda menghasilkan efek terapeutik dengan cara yang berbeda (Gambar
8). Hormon dan molekul pengatur tambahan selalu mencapai efeknya dengan mengikat
reseptor permukaan sel tertentu, dengan ikatan reseptor yang memicu peristiwa transduksi
sinyal intraseluler yang akhirnya memediasi efek fisiologis yang diamati. Banyak antibodi, di
sisi lain, membawa efeknya dengan mengikat molekul target spesifik mereka, yang dapat
menonaktifkan / memicu penghancuran molekul target atau (dalam hal aplikasi diagnostik)
secara efektif menandai molekul target / sel. Enzim terapi membawa efeknya melalui
mekanisme katalitik. Cara kerja banyak biofarmasi spesifik akan diuraikan dalam Bab 8–14;
namun, penting untuk dicatat bahwa detail molekuler yang mendasari efek dari banyak obat
tersebut belum sepenuhnya dikarakterisasi.
Elemen penting dari studi praklinis, oleh karena itu, berpusat pada identifikasi mode aksi obat
pada tingkat molekuler, di samping menyelidiki berbagai efek fisiologis yang dihasilkan.
Studi farmakodinamik akan selalu mencakup efek pemantauan (dan waktu efek) dari protein
terapeutik pada konsentrasi obat yang diketahui berbeda dan jadwal pemberian obat.

22
Gambar 8. Gambaran umum cara kerja biofarmasi.
Beberapa biofarmasi memulai efek terapeutik mereka dengan mengikat reseptor
permukaan sel tertentu, dengan transduksi sinyal selanjutnya memicu inisiasi
respon intraseluler (mis. aktivasi enzim intraseluler atau perubahan ekspresi gen)
(a). Biofarmasi lain berfungsi dengan mengikat (dan dengan demikian biasanya
menonaktifkan) molekul target, mungkin yang berlebih
menyebabkan/memperburuk kondisi medis (b). Enzim terapeutik berfungsi
dengan mengkatalisis konversi molekul target spesifik menjadi produk (c)

23