PEMERIKSAAN AIR SECARA MIKROBIOLOGI

A. Tujuan : untuk menguji kualitas air secara mikrobiologi

B. Metode : Most Probable Number (MPN)
C. Tinjauan teori.

Untuk mengetahui aman tidaknya suatu air untuk dikonsumsi tidak cukup
bila hanya melihat adanya mikroorganisme patogen saja. Hal ini dikarenakan
patogen kemungkinan masuk ke dalam air secara sporadis, tetapi karena tidak
mampu bertahan hidup lama dalam air maka sangat mungkin patogen tersebut tidak
terdapat dalam contoh air yang diperiksa. Selain itu juga bila patogen dalam air
hanya terdapat dalam jumlah yang sedikit maka sangat mungkin patogen tersebut
tidak terdeteksi oleh prosedur laboratoris yang digunakan. Oleh karena itu maka
dalam menguji kualitas air secara mikrobiologis dipergunakan bakteri indikator yang
mampu mengindikasikan baik tidaknya kualitas air tersebut. Bakteri indikator yang
umumnya digunakan adalah bakteri coli.
Menurut Pelczar dan Chan (1988), beberapa ciri penting dari
mikroorganisme indikator adalah :
- Hanya terdapat dalam air yang tercemar.
- Keberadaannya selalu bersama patogen.
- Kemampuan hidupnya lebih besar daripada patogen.
- Jumlahnya lebih banyak daripada patogen.
- Jumlahnya berkorelasi dengan kadar pencemaran.
- Mudah dideteksi dengan teknik laboratorium yang sederhana.
- Tidak berbahaya bagi manusia dan hewan.
- Mempunyai sifat yang seragam dan mantap.
Dari seluruh bakteri yang ada, hanya bakteri coli yang dianggap dapat
memenuhi syarat-syarat sebagai mikroorganisme indikator seperti tersebut di atas.
Bakteri coli sebenarnya merupakan bakteri yang menghuni saluran pencernaan
(terutama usus besar) manusia dan hewan berdarah panas. Bakteri coli merupakan
bakteri berbentuk batang, gram negatif, tidak membentuk spora, bersifat aerobik dan
anaerobik fakultatif, dapat memfermentasikan laktosa dengan hasil asam dan gas
dalam waktu 48 jam pada suhu ± 37oC. Bakteri Coli merupakan indikator
pencemaran tinja yang dapat diandalkan. Adanya bakteri Coli pada suatu contoh air
menunjukkan bahwa contoh air tersebut telah terkontaminasi oleh tinja manusia atau
hewan berdarah panas. Oleh karena bakteri Coli keberadaannya selalu bersama
dengan patogen, maka hal ini berarti juga bahwa contoh air tersebut sangat
dimungkinkan terdapat mikroorganisme patogen (Pelczar dan Chan, 1988).
Metode pemeriksaan bakteri coli ada beberapa cara, salah satunya adalah
metode “Most Probable Number” (MPN) atau Jumlah Perkiraan Terdekat. Metode
MPN yang umumnya dipergunakan adalah yang menggunakan seri tiga tabung atau
lima tabung. Pada prinsipnya uji MPN terdiri dari tiga tahap yaitu uji duga
(perkiraan), uji penegasan (penetapan) dan uji lengkap. Uji duga merupakan uji yang
bertujuan untuk menduga atau memperkirakan ada atau tidaknya bakteri coli dalam
contoh air yang diperiksa. Uji penegasan bertujuan untuk lebih meyakinkan bahwa
bakteri yang ditemukan dalam uji duga benar-benar bakteri coli. Uji lengkap adalah
isolasi dan membuat piaraan murni dari koloni yang tumbuh pada uji penegasan.
Pada uji lengkap diamati tentang morfologi sel dari bakteri coli yang terdapat pada
uji penegasan.
Menurut Dwidjoseputro (1994), untuk mengetahui kualitas air secara
mikrobiologi ditinjau dari angka MPN coli maka cukup dilakukan dua tahapan uji
yaitu uji duga dan uji penegasan. Uji duga menggunakan media “Lactose Broth”
(LB), sedangkan uji penegasan menggunakan media “Brilliant Green Lactose Bile
Broth” (BGLB). Pengenceran dapat dilakukan sesuai dengan asal dan jenis dari
 sampel air yang diperiksa. Media LB dan BGLB ditempatkan dalam tabung reaksi
yang di dalamnya terdapat tabung Durham dengan posisi terbalik. Tabung Durham
berfungsi sebagai penampung gas yang dihasilkan oleh bakteri dalam sampel setelah
ditanam dalam media cair. Apabila di dalam tabung Durham terdapat gas, maka uji
dikatakan positif, sedangkan apabila tidak ada gas uji dikatakan negatif. Sampel air
dikatakan positif mengandung bakteri coli bila dalam media LB dan BGLB positif
(terdapat gas). Angka MPN Coli dapat dihitung dengan menggunakan tabel MPN
(terlampir).

D. Bahan :
- Contoh air
- Media Lactose Broth dengan tabung Durham (steril)
- Media Brilliant Green Lactose Bile Broth dengan tabung Durham (steril)
E. Alat :
– Botol contoh air
– Pipet ukur steril ukuran 10 ml dan 1 ml
– Pembakar Bunsen
– Inkubator
– Jarum ose
F. Prosedur Kerja (menggunakan seri tiga tabung).
Uji duga (perkiraan) :
- Inokulasi 3 tabung berisi masing-masing lactose broth konsentrasi 2 kali lipat
(double strength) dengan masing-masing 10 ml contoh air.
- Inokulasi 3 tabung berisi masing-masing lactose broth single strength dengan
masing-masing 1 ml contoh air.
- Inokulasi 3 tabung berisi masing-masing lactose broth single strength dengan
masing-masing 0,1 ml contoh air.
- Inkubasikan semua piaraan tersebut pada suhu 37oC selama 2x24 jam.
- Amati piaraan tersebut setiap 24 jam. Timbulnya gas dalam waktu 24 jam
menunjukkan uji positif, sedangkan setelah 24 jam menunjukkan hasil yang
meragukan. Apabila setelah 2x24 jam tidak terbentuk gas, maka uji dinyatakan
negatif yang berarti contoh air yang diperiksa tidak mengandung bakteri Coli.

Uji penegasan (penetapan) :

- Buat piaraan cair dengan menggunakan media BGLB dari uji duga yang positif
maupun meragukan dengan cara mengambil satu ose penuh dari hasil uji duga
tersebut kemudian diinokulasikan ke dalam media BGLB.
- Inkubasikan semua piaraan tersebut pada suhu 37oC selama 48 jam.
- Amati terbentuknya gas dalam tabung Durham. Uji dinyatakan negatif bila tidak
terbentuk gas, sedangkan bila terbentuk gas selama 48 jam maka uji dinyatakan
positif yang berarti contoh air yang diamati mengandung bakteri Coli. Untuk
mengetahui angka MPN Coli (MPN sebenarnya), dihitung dengan menggunakan
tabel MPN (terlampir).

1
MPN sebenarnya = MPN tabel x _____________________________
Pengenceran tabung yang di tengah
dari kombinasi MPN.
 TABEL MPN PER 100 ML SAMPEL MENGGUNAKAN 5 SERI TABUNG
UNTUK SETIAP PENGENCERAN

Tabung Positif MPN Tabung Positif MPN Tabung Positif MPN

10 ml 1 ml 0,1 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml
0 0 0 - 1 0 0 2,0 2 0 0 4,5
0 0 1 1,8 1 0 1 4,0 2 0 1 6,8
0 0 2 3,6 1 0 2 6,0 2 0 2 9,1
0 0 3 5,4 1 0 3 8,0 2 0 3 12
0 0 4 7,2 1 0 4 10 2 0 4 14
0 0 5 9,0 1 0 5 12 2 0 5 16
0 1 0 1,8 1 1 0 4,0 2 1 0 6,8
0 1 1 3,6 1 1 1 6,1 2 1 1 9,2
0 1 2 5,5 1 1 2 8,1 2 1 2 12
0 1 3 7,3 1 1 3 10 2 1 3 14
0 1 4 9,1 1 1 4 12 2 1 4 17
0 1 5 11 1 1 5 14 2 1 5 19
0 2 0 3,7 1 2 0 6,1 2 2 0 9,3
0 2 1 5,5 1 2 1 8,2 2 2 1 12
0 2 2 7,4 1 2 2 10 2 2 2 14
0 2 3 9,2 1 2 3 12 2 2 3 17
0 2 4 11 1 2 4 15 2 2 4 20
0 2 5 13 1 2 5 17 2 2 5 22
0 3 0 5,6 1 3 0 8,3 2 3 0 25
0 3 1 7,4 1 3 1 10 2 3 1 15
0 3 2 9,3 1 3 2 13 2 3 2 17
0 3 3 11 1 3 3 15 2 3 3 20
0 3 4 13 1 3 4 17 2 3 4 22
0 3 5 15 1 3 5 19 2 3 5 25
0 4 0 7,5 1 4 0 11 2 4 0 15
0 4 1 9,4 1 4 1 13 2 4 1 17
0 4 2 11 1 4 2 15 2 4 2 20
0 4 3 13 1 4 3 17 2 4 3 23
0 4 4 15 1 4 4 19 2 4 4 25
0 4 5 17 1 4 5 22 2 4 5 28
0 5 0 9,4 1 5 0 13 2 5 0 17
0 5 1 11 1 5 1 15 2 5 1 20
0 5 2 13 1 5 2 17 2 5 2 23
0 5 3 15 1 5 3 19 2 5 3 26
0 5 4 17 1 5 4 22 2 5 4 29
0 5 5 19 1 5 5 24 2 5 5 32

Tabung Positif MPN Tabung Positif MPN Tabung Positif MPN

10 ml 1 ml 0,1 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml
3 0 0 7,8 4 0 0 13 5 0 0 23
3 0 1 11 4 0 1 17 5 0 1 31
3 0 2 13 4 0 2 21 5 0 2 43
3 0 3 16 4 0 3 25 5 0 3 58
3 0 4 20 4 0 4 30 5 0 4 76
3 0 5 23 4 0 5 36 5 0 5 95
3 1 0 11 4 1 0 17 5 1 0 33
3 1 1 14 4 1 1 21 5 1 1 46
3 1 2 17 4 1 2 26 5 1 2 64
3 1 3 20 4 1 3 31 5 1 3 84
3 1 4 23 4 1 4 36 5 1 4 110
3 1 5 27 4 1 5 42 5 1 5 130
3 2 0 14 4 2 0 22 5 2 0 49
3 2 1 17 4 2 1 26 5 2 1 70
3 2 2 20 4 2 2 32 5 2 2 95
3 2 3 24 4 2 3 38 5 2 3 120
3 2 4 27 4 2 4 44 5 2 4 150
3 2 5 31 4 2 5 50 5 2 5 180
3 3 0 17 4 3 0 27 5 3 0 79
3 3 1 21 4 3 1 33 5 3 1 110
3 3 2 24 4 3 2 39 5 3 2 140
3 3 3 28 4 3 3 45 5 3 3 180
3 3 4 31 4 3 4 52 5 3 4 210
3 3 5 35 4 3 5 59 5 3 5 250
3 4 0 21 4 4 0 34 5 4 0 130
3 4 1 24 4 4 1 40 5 4 1 170
3 4 2 28 4 4 2 47 5 4 2 220
3 4 3 32 4 4 3 54 5 4 3 280
3 4 4 36 4 4 4 62 5 4 4 350
3 4 5 40 4 4 5 69 5 4 5 430
3 5 0 25 4 5 0 41 5 5 0 240
3 5 1 29 4 5 1 48 5 5 1 350
3 5 2 32 4 5 2 56 5 5 2 540
3 5 3 37 4 5 3 64 5 5 3 920
3 5 4 41 4 5 4 72 5 5 4 1600
3 5 5 45 4 5 5 81 5 5 5 >1600