TUGAS : ANFISKIM-III

KP : M-1 DAN M-2

HARI/TANGGAL : SENIN, 09 NOVEMBER 2020
SIFAT : BUKU TERTUTUP
DOSEN PENGUJI : RYANTO BUDIONO, Drs., MSi.
SOEDIATMOKO SOEDIMAN

MINGGU 12
Jawablah semua soal di bawah ini pada waktu praktikum !

01. Jelaskan masing-masing 2 (dua) dari 8 (delapan) kriteria/parameter validasi

metode analisis serta berilah contoh cara pelaksanaannya sesuai metode yang Sdr.
lakukan dengan singkat dan jelas !

a. akurasi
Akurasi adalah kedekatan kadar hasil analisis dibandingkan kadar
sesungguhnya.
Syarat bioanalisis = 80 % - 120% (% Recovery) menurut Gunawan I
= 70 % - 130 % menurut Reid
Non Bioanalisis = Tergantung kadar analit dalam sampel yang dianalisis.
Makin kecil kadar analit dalam sampel, maka rentang % recovery makin lebar,
demikian juga sebaliknya. (USP;ICH)
b. linieritas
Hubungan linier antara kadar dengan tanggap detektor.
Syarat = r  0,999 ; r2  0,998
c. rentang
Hubungan linieritas antara kadar rendah, kadar menengah sampai kadar tinggi.
Mencakup 80% - 120 % kadar analit yang diduga ada didalam sampel yang
dianalisis. Minimal 5 konsentrasi yang berbeda, tanpa 0 (nol).
Pada Spektro absorbansi blanko telah dihilangkan dengan cara melakukan
lamda scanning, tujuannya menghilangkan serapan dari pelarutnya sendiri.
Pada HPLC 0 (nol) nya juga dihilangkan,
Kecuali analisis menggunakan ICPS, tidak ada aktivitas menghilangkan
intensitas pelarut, sehingga 0 (nol) harus dimasukkan.
d. batas deteksi (LLOD)
Kadar terkecil yang masih dapat dideteksi oleh alat dan dapat dibedakan
terhadap blanko (tidak terkuantitasi).
e. batas kuantitasi (LLOQ)
Kadar terkecil yang masih dapat dideteksi oleh alat serta memberikan akurasi
dan presisi yang baik (terkuantitasi).

1
 Syarat Akurasi yang baik = Tergantung sampelnya
Syarat bioanalisis = 80 % - 120% (% Recovery) menurut Gunawan I
= 70 % - 130 % menurut Reid
Non Bioanalisis = Tergantung kadar analit dalam sampel yang dianalisis.
Syarat Presisi = KV  2 %
Perlakuan minimal 3 kadar yang berbeda, masing-masing diamati minimal 3 kali
replikasi.
f. robustness
Validasi atau verifikasi metode analisis yang dilakukan pada laboratorium yang
sama dengan perubahan parameter yang kecil.
Contoh = analis yang berbeda, alat yang berbeda, bahan kimia (merk berbeda),
bahan sekali pakai, pH, dll
g. ruggedness
Validasi atau verifikasi metode analisis yang dilakukan pada laboratorium yang
berbeda.
Contoh = suasana lab yang berbeda, analis yang berbeda,
h. stabilitas
Uji stabilitas garis besarnya ada 2 :
1. Intra Day Stability = uji stabilitas yang dilakukan pada hari yang sama
2. Inter Day Stability = uji stabilitas yang dilakukan pada hari yang berbeda
Tujuannya adalah untuk mengetahui seberapa lama analisis dapat dilakukan.
Dikatakan stabil bila dalam pengamatan ditemukan perbedaan tapi tidak
bermakna.

2. Laboratorium Analisis mendapatkan tugas melaksanakan validasi sebagian (verifikasi)

untuk analisis senyawa obat Carbamazepine dalam tablet. Menurut produsen, setiap
tablet mengandung Carbamazepine 5,0 mg. Dari percobaan, diketahui bobot
rata-rata tablet = 125,0 mg.

Validasi sebagian (verifikasi) dilakukan terhadap beberapa parameter, yaitu:

a. Linieritas; b. Presisi; c. Akurasi; d.LLOD; e. LLOQ.

Dari analisis yang telah dilakukan, didapatkan data-data sbb.:

Ditimbang baku Carbamazepine 20,0 mg + me-OH sampai tepat 100,0 mL ....... (1)
200,0 ppm

Dari (1) dibuat beberapa pengenceran untuk pembuatan baku kerja kadar rendah,
menengah dan tinggi, selanjutnya diamati secara HPLC pada : 285 nm; kolom ODS
(125 x 4,6 mm; 5 µm); fase gerak: ACN : TBAP 0,005 M, pH:7,5 = 20 : 80

2
 Baku kadar rendah:

dipipet + Me-
No. C (ppm) Area Area rata-rata KV (Y-Y1)2
(1) OH (%)
(µL) sampai
(mL)
1-a 20.022
1-b 100 5,0 4,0 20.009 20.016,00 0,03 18,1987
1-c 20.017
2-a 30.018
2-b 150 5,0 6,0 30.021 30.021,33 0,01 6,7496
2-c 30.025
3-a 40.030
3-b 200 5,0 8,0 40.000 40.018,00 0,04 0,6432
3-c 40.024
4-a 50.027
4-b 250 5,0 10,0 50.024 50.023,33 0,01 58,7675
4-c 50.019
5-a 60.009
5-b 300 5,0 12,0 60.000 60.007,33 0,01 46,2400
5-c 60.013
Total 130,5990

Jawab:
a = 23,334
b = 4.999,233
r = 0,9999
r2 = 0,9999
Y = 23,334 + 4.999,233X

Sy/x = (130,5990/3) = 6,5980

LLOD = (3x6,5980)/4.999,233 = 0,0039593 ppm = 3,96 ppb
LLOQ = (10x6,5980)/4.999,233 = 0,01320 ppm = 13,20 ppb

3
 Baku kadar menengah:

No. dipipet + Me- C (ppm) Area Area rata-rata KV

(1) OH (%)
(µL) sampai
(mL)
1-a 60.021
1-b 300 5,0 12,0 60.000 60.016,67 0,02
1-c 60.029
2-a 70.011
2-b 350 5,0 14,0 70.021 70.015,00 0,01
2-c 70.013
3-a 80.059
3-b 400 5,0 16,0 80.060 80.058,00 0,01
3-c 80.055
4-a 90.129
4-b 450 5,0 18,0 90.097 90.109,33 0,02
4-c 90.102
5-a 100.089
5-b 500 5,0 20,0 100.075 100.081,67 0,01
5-c 100.081

Jawab:
a = -123,33
b = 5.011,2165
r = 0,9999
r2 = 0,9999
Y = -123,33 + 5.011,2165X

Karena tidak diketahui komposisi matriks tabletnya, maka dilakukan pembuatan kurva
”sampel” sebagai pengganti matriks.

4
 Data pembuatannya sbb.:

Bobot + Me-
No. C Area Area rata-rata KV (%)
sampel OH Matriks
(mg) sampai (ppm)
(mL)
1-a 100,0 105.110
1-b 5,25 100,0 52,5 105.121 105.110,00 0,010
1-c 100,0 105.099
2-a 100,0 151.160
2-b 7,55 100,0 75,5 151.155 151.153,33 0,010
2-c 100,0 151.145
3-a 100,0 202.612
3-b 10,12 100,0 101,2 202.611 202.616,00 0,003
3-c 100,0 202.625
4-a 100,0 254.870
4-b 12,73 100,0 127,3 254.865 254.871,67 0,002
4-c 100,0 254.880
5-a 100,0 309.721
5-b 15,32 100,0 153,2 306.750 307.740,00 0,560
5-c 100,0 306.749

a = -629,4737
b = 2.010,2773
r = 0,9999
r2 = 0,9999
Y = -629,4737 + 2.010,2773X

5
 Sedangkan untuk menentukan akurasi metode dilakukan dengan standard addition method sbb.:

+ lar. + Me- C KV Area C Area Adisi C %

Bobot
No. sampel baku OH Matriks Area Area (%) Matriks Adisi (Area Total Adisi Recovery
(100 sampai (ppm) Total Total (ppm) – Area hasil
(mg)
ppm)- (mL) rata-rata Matriks) analisis
(mL) (ppm)
1-a 10,0 100,0 184.200
1-b 6,71 10,0 100,0 67,1 184.275 184.244,67 0,02 134.260,1331 10,0 49.984,5369 9,9937 99,94
1-c 10,0 100,0 184.259
2-a 10,0 100,0 212.231
2-b 8,11 10,0 100,0 81,1 212.244 212.243,67 0,01 162.404,0199 10,0 49.839,6501 9,9647 99,65
2-c 10,0 100,0 212.256
3-a 10,0 100,0 321.750
3-b 13,62 10,0 100,0 136,2 321.789 321.806,67 0,02 273.170,3022 10,0 48.636,3678 9,7240 97,24
3-c 10,0 100,0 321.881

Y = -629,4737 + 2.010,2773X
= -629,4737 + 2.010,2773 (67,1)
Y = 134.260,1331

Berilah satu contoh perhitungan akurasi dari data di atas !

Contoh perhitungan akurasi:
Y = 23,334 + 4.999,233X
49.984,5369 = 23,334 + 4.999,233X
X = 9,9937 ppm

Rentang % Recovery hasil analisis = 97,24% - 99,94%

Rerata % Recovery = 98,94%
Syarat Akurasi (% Recovery) = 95%-105%  Memenuhi Persyaratan

6
Tentukanlah hasil dari validasi metode sebagian (verifikasi) ini, manakah yang
memenuhi syarat dan yang tidak memenuhi syarat, dilengkapi dengan alasannnya.

a. Linieritas;
Kurva baku rendah, menengah dan kurva matriks memenuhi persyaratan, karena r
 0,999 ; r2  0,998

b. Presisi;
Presisi memenuhi syarat, karena KV  2 %

c. Akurasi;
Rentang % Recovery hasil analisis = 97,24% - 99,94%
Rerata % Recovery = 98,94%
Syarat Akurasi (% Recovery) = 95%-105%  Memenuhi Persyaratan