The 6th University Research Colloquium 2017

Universitas Muhammadiyah Magelang

Profil Pelepasan Antikanker kombinasi Doksorubisin dan Analog

Kurkumin dari Nanopartikel Kitosan
Anita Sukmawati*, Muhammad Da’i, Fardha Zulinar, Armetha Hanik
Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Indosnesia
Email: anita.sukmawati@ums.ac.id

Abstrak
Keywords: Sistem penghantaran obat menggunakan enkapsulasi obat dalam matrik
Kitosan, polimer dapat digunakan untuk menghantarkan obat antikanker kombinasi
nanopartikel, doksorubisin dan PGV-1, suatu analog kurkumin yang memiliki aktivitas
antikanker, antikanker. Kitosan digunakan dalam penelitian ini sebagai matrik dalam
doksorubisin, PGV-1 pembuatan nanopartikel yang mengandung kombinasi doksorubisin dan
PGV-1 (DOX-PGV-1). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui profil
pelepasan obat dari nanopartikel dengan berbagai variasi onsentrasi
kitosan. Nanopartikel kitosan dibuat dengan konesentrasi kitosan 0.025,
0.05 dan 0.1% b/v dalam formulasi menggunakan metode gelasi ionic.
Profil pelepasan DOX-PGV-1 dievaluasi dengan metode dialysis pada
medium dapar fosfat+0.5% tween 80 dan dianalisis menggunakan
spektrofotometer UV. . Profil pelepasan DOX-PGV-1 dari nanopartikel
kitosan mengikuti model orde 0 dan Higuchi. Laju pelepasan obat yang
paling lambat terdapat pada nanopartikel dengan konsentrasi kitosan
0.05%.

1. PENDAHULUAN Salah satu upaya untuk menurunkan

Penghantaran obat antikanker dalam
terapi kanker seringkali menjadikan masalah
karena mayoritas obat-obat antikanker tidak
dapat spesifik tertarget pada sel kanker. Salah
satu strategi dalam penghantaran obat
antikanker adalah menggunakan sistem nano
dimana obat antikanker secara spesifik
diselubungi oleh pembawa serupa polimer [1].
Penggabungan obat dalam sistem nano-
polimer ini dapat melindungi obat dari
degradasi enzimati dalam tubuh dan dapat
memperbaiki penetrasi obat melintasi barrier
mukosa dengan mekanisme endositosis [2, 3].
Selain itu, mekanisme pelepasan obat yang
terkontrol untuk waktu yang panjang juga
dapat dicapai dengan menggunakan sistem
polimer ini.
toksisitas obat antikanker adalah dengan
menggunakan kombinasi obat antikanker yang
poten sehingga dapat menurunkan dosis yang
diperlukan untuk masing-masing obat. Pada
penelitian ini digunakan kombinasi
doxorubicin (DOX) dengan [2,5-bis-(4-
hydroxi,3,5-dimethyl)-benzylidin-
cylopentanone)] atau pentagamavunon-1
(PGV-1), suatu senyawa analog kurkumin,
yang telah terbukti dapat meningkatkan
apoptosis pada sel kanker [4,5]. Untuk
meningkatkan permeabilitas dan retensi obat
terhadap sel kanker, kombinasi obat ini
dihantarkan dengan menggunakan
nanopartikel berbasis kitosan. Kitosan
nanopartikel sendiri diketahui dapat
menghantarkan obat ke dalam sel kanker dan

ISSN 2407-9189 139

 The 6th University Research Colloquium 2017
Universitas Muhammadiyah Magelang
dan menunjukkan efek antikanker melalui
mekanisme antiangionenic dan apoptosis serta
peningkatan aktivitas caspase [6, 7].
Efek kitosan pada sel sangat dipengaruhi
oleh proses formulasi nanopartikel seperti
yang dijelaskan pada penelitian Nasti, dkk dan
Zhang, dkk [8, 9]. Pada penelitian ini, proses
pembuatan nanopartikel dilakukan dengan
metode gelasi ionik dimana rasio polimer dan
natrium tripolifosfat (Na TPP) sebagai bahan
penggelasi dapat mempengaruhi karakteristik
nanopartikel yang dihasilkan.
Penelitian yang dilakukan sebelumnya
menunjukkan bahwa penggunaan konsentrasi
kitosan yang berbeda dalam proses formulasi
nanopartikel kombinasi doksorubisin dan
PGV-1 (DOX-PGV-1) dapat mempengaruhi
ukuran partikel yang dihasilkan. Ukuran
nanopartikel yang dihasilkan dalam formulasi
nanopartikel menggunakan kitosan
konsentrasi 0.025, 0.05 dan 0.1 % b/v adalah
berturut-turut 1118,70 nm ± 50,25, 812 nm ±
11,94, dan 1150,25 nm ± 25,10 [10]. Selain
ukuran partikel, profil pelepasan obat dari
nanopartikel kitosan juga perlu untuk
diketahui. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui pengaruh variasi konsentrasi
kitosan dalam proses pembuatan nanopartikel
terhadap profil pelepasan DOX-PGV-1 dari
sistem nanopartikel kitosan.
2. METODE
2.1 Pembuatan DOX-PGV-1
nanopartikel
Kitosan 100 mg (94% terdeasetilasi, 150
kDa, dari CV ChiMultiguna) dilarutkan dalam
0.5% asam asetat (Bratachem) 400 ml, 200 ml
dan 100 ml untuk menghasilkan larutan
kitosan dengan konsentrasi berturut-turut
0.025, 0.05 dan 0.1 % b/v. Kedalam larutan
tersebut ditambahkan 1 ml DOX 2 mg/ml
(Sigma Aldrich) dan 1 ml PGV-1 10 mg/ml
(Fakultas Farmasi UGM) dan diaduk
menggunakan magnetic stirrer selama 3 menit
pada skala 7. Larutan yang terbentuk diatur
140
pH nya hingga 4 menggunakan natrium
hidroksida (NaOH) (Bratachem).
Pembentukan nanopartikel terjadi dengan
penambahan Na TPP 0.1% (Bratachem)
sebanyak 20 ml kedalam larutan kitosan
dengan kecepatan 1 tetes tiap 10 detik dengan
tetap diaduk menggunakan magnetic stirrer.
Pengadukan pada larutan dilanjutkan hingga 4
jam. Larutan kemudian dibekukan dan di
freeze drying untuk mendapatkan nanopartikel
kitosan. Partikel yang dihasilkan disimpan
pada suhu 4°C pada wadah kaca gelap.
2.2 Uji pelepasan obat dari
nanopartikel
Evaluasi pelepasan obat dari nanopartikel
kitosan dilakukan dengan metode dialysis
menggunakan medium disolusi dapar fosfat
yang mengandung 0.5% tween 80. Sejumlah
25 mg nanopartikel kitosan didispersikan
dalam 5 ml medium disolusi dan dimasukkan
kedalam dialysis bag. Proses dialysis
dilakukan dalam beker glass yang berisi 50 ml
medium disolusi pada suhu 37°C dengan
pengadukan menggunakan magnetic stirrer
pada skala 4. Sampel sebanyak 5 ml diambil
pada titik tertentu dalam kurun waktu 24 jam.
Dilakukan pergantian volume medium
disolusi dengan medium yang baru setiap kali
pengambilan sampel. Larutan sampel yang
diambil pada tiap waktu dianalisis kadar
bahan aktifnya pada λ 231 nm untuk DOX
dan λ 210 nm untuk PGV-1 menggunakan
spektrofotometer UV. Absorbansi sampel
kemudian diplotting pada kurva kalibrasi
DOX dan PGV-1 untuk menghitung jumlah
obat yang terlepas tiap waktu. Jumlah obat
yang terlepas tiap waktu kemudian digunakan
untuk menentukan mekanisme pelepasan obat
menggunaan persamaan orde 0 (nol) dan
persamaan Higuchi seperti pada persamaan 1
dan 2.
…………………pers.1
……………..pers.2
ISSN 2407-9189
 The 6th University Research Colloquium 2017
Universitas Muhammadiyah Magelang

Dimana C adalah kadar obat bahwa nanopartikel kitosan yang dibuat dengan
terlepas, K0=konstanta orde 0, Q=jumlah konsentrasi kitosan 0.05% menghasilkan
obat terlepas pada waktu t, KH= konstanta pelepasan obat yang paling rendah.
Higuchi dan t adalah waktu dalam jam. Dari hasil tersebut dapat diketahui bahwa
peningkatan konsentrasi kitosan dalam
3. HASIL DAN PEMBAHASAN pembuatan nanopartikel dapat menurunkan
Metode gelasi ionik digunakan dalam jumlah obat yang terlepas. Penelitian yang
pembuatan nanopartikel kitosan karenarelati dilakukan oleh Yeo dan Park (2004)
mudah, tidak menggunakan pemanasan sehingga menyebutkan bahwa konsentrasi polimer yang
dapat menghindari rusaknya zar aktif. Perbedaan tinggi akan mempercepat proses pemadatan
konsentrasi larutan kitosan yang digunakan partikel dan viskositas polimer yang tinggi
dalam pembuatan nanopartikel menghasilkan sehingga dapat menghambat proses pelepasan
rendemen nanopartikel yang berbeda. Rendemen obat [11]. Tetapi hal ini tidak berlaku untuk
nanopartikel yang dihasilkan adalah berturut- nanopartikel kitosan 0.1%.
turut 97.3, 83.9 dan 64.0 % untuk konsentrasi Proses pelepasan obat yang lambat pada
kitosan 0.025, 0.05 dan 0.1%. Rendemen PGV-1 ini disebabkan karena obat terlindung
nanopartikel yang dihasilkan semakin menurun dalam matrik kitosan. Pelepasan obat yang
dengan meningkatnya konsentrasi kitosan yang lambat diharapkan dapat menjaga kadar obat
digunakan dalam formulasi. dalam sel untuk waktu yang lama dan dapat
Profil pelepasan obat dari nanopartikel menjaga stabilitas obat dalam sirkulasi sistemik.
menunjukkan bahwa pelepasan DOX hampir Untuk mengetahui kinetika pelepasan obat
mendekati 100 % pada menit ke 10, pada dari sistem nanopartikel kitosan, dilakukan
nanopartikel kitosan yang dibuat dengan plotting dengan model persamaan orde nol
konsentrasi kitosan 0.025 dan 0.1%. Sedangkan (persamaan 1) dan persamaan Higuchi
pada nanopartikel kitosan 0.05% pelepasan DOX (persamaan 2).
belum mencapai 100% hingga jam ke-24 Tabel 1. harga R2, Konstanta Orde Nol (K0) dan
(Gambar 1). Dari profil pelepasan obat tersebut, Konstanta Higuchi (KH) pada pelepasan DOX
DOX mengalami pelepasan yang segera atau dan PGV-1 dari nanopartikel dengan berbagai
“burst release”. Hal ini kemungkinan disebabkan konsentrasi kitosan
karena penggunaan bahan aktif DOX dalam Model Konsentrasi K0
R2
bentuk garam HCl, yang memiliki kelarutan Khitosan (mg/menit)
DOX
tinggi dalam medium disolusi.
0.025% 0,8491 0,0158
Pelepasan PGV-1 berlangsung lebih lambat 0.05% 0,9085 0,0132
pada ketiga formula nanopartikel. Hingga jam ke- Orde 0.1% 0,9986 0,0271
24, kurang dari 20% PGV-1 dapat terlepas dari nol (0) PGV-1
kitosan nanopartikel. Persentase kumulatif PGV- 0.025% 0,9855 0,7004
1 yang terlepas dari kitosan nanopartikel dengan 0.05% 0,9979 0,5586
0.1% 0,9762 0,7020
konsentrasi kitosan 0.025, 0.05 dan 0.1% adalah
Konsentrasi KH
berturut-turut 16,46% ± 0,03, 7,82% ± 0,02, dan R2
Khitosan (mg/menit1/2)
4,71% ± 0,03. Profil pelepasan obat PGV-1 dari DOX
matriks nanopartikel kitosan ini menunjukkan 0.025% 0,9814 0,0651
adanya profil “sustained release” yang dapat Higuchi
0.05% 0,9729 0,0525
melepaskan obatnya dalam jangka waktu yang 0.1% 0,9614 0,0817
PGV-1
lama. Tetapi, dalam penelitian ini, profil
0.025% 0,9546 0,0030
pelepasan obat hanya dievaluasi dalam jangka 0.05% 0,9573 0,0024
waktu 24 jam. Dari profil pelepasan obat terlihat 0.1% 0,9285 0,0019

ISSN 2407-9189 141

 The 6th University Research Colloquium 2017
Universitas Muhammadiyah Magelang
(Diagram Terlampir Dibawah.)
Berdasarkan plotting pelepasan obat,
diketahui bahwa pelepasan DOX dari
nanopartikel kitosan lebih mengikuti model
Higuchi, sedangak PGV-1 mengikuti kinetika
orde 0, yang terlihat dari harga R2 yang
mendekati 1 (Tabel 1). Pada model Higuchi,
diasumsikan bahwa obat terlepas dengan
mekanisme difusi terkontrol, sedangkan pada
orde nol, pelepasan obat tidak tergantung pada
konsentrasi awal. Oleh karena itu, sistem
nanopartikel kitosan ini dapat digunakan sebagai
sistem lepas lambat untuk pengobatan kanker.
Harga konstanta Higuchi pada DOX
menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi
kitosan dari 0.025 ke 0.1% pada formulasi
nanopartikel dapat meningkatkan laju pelepasan
obat, sedangkan pada peningkatan konsentrasi
kitosan dari 0.025 ke 0.05% justru menurunkan
laju pelepasan obat. Pada PGV-1, penurunan laju
pelepasan obat menurut orde 0 mengalami
penurunan dari konsentrasi kitosan 0.025% ke
0.05%, tetapi antara 0.025% dan 0.01% tidak
memiliki perbedaan yang bermakna (p > 0.05)
4. KESIMPULAN
Mekanisme pelepasan kombinasi DOX
dan PGV-1 mengikuti model kinetika orde 0
dan Higuchi. Peningkatan konsentrasi kitosan
pada pembuatan nanopartikel dari 0.025% ke
0.05% dapat menurunkan laju pelepasan obat
UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih kepada Universitas
Muhammadiyah Surakarta (UMS) c.q
Lembaga Penelitian dan Pengadian
Masyarakat (LPPM) yang telah
mendanai penelitian ini melalui skema
Doctoral Research Grant. Terimakasih
juga disampaikan untuk Fakultas Farmasi
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
yang telah menyediakan bahan aktif
analog kurkumin.
142
REFERENSI
[1] S. Bisht and A. Maitra, “Nanoparticles for
Solid Tumor,” Cancer, vol. 1, no. 4, pp.
415–425, 2009.
[2] A. Rampino, M. Borgogna, P. Blasi, B.
Bellich, and A. Cesàro, “Chitosan
nanoparticles: Preparation, size evolution
and stability,” Int. J. Pharm., vol. 455, no.
1–2, pp. 219–228, 2013.
[3] K. A. Janes, M. P. Fresneau, A.
Marazuela, A. Fabra, and M. J. Alonso,
“Chitosan nanoparticles as delivery
systems for doxorubicin,” J. Control.
Release, vol. 73, no. 2–3, pp. 255–267,
Jun. 2001.
[4] A. Hermawan, A. Fitriasari, S. Junedi, M.
Ikawati, S. Haryanti, B. Widaryanti, M.
Da’i, and E. Meiyanto, “PGV-0 and PGV-
1 Increased Apoptosis Induction of
Doxorubicinon MCF-7 Breast Cancer
Cells,” Pharmacon, vol. 12, no. 2, pp. 55–
59, 2011.
[5] E. Meiyanto, D. D. P. Putri, R. A.
Susidarti, R. Murwanti, S. Sardjiman, A.
Fitriasari, U. Husnaa, H. Purnomo, and M.
Kawaichi, “Curcumin and its Analogues
(PGV-0 and PGV-1) Enhance Sensitivity
of Resistant MCF-7 Cells to Doxorubicin
through Inhibition of HER2 and NF-kB
Activation,” Asian Pacific J. Cancer
Prev., vol. 15, no. 1, pp. 179–184, 2014.
[6] Y. S. Wimardhani, D. F. Suniarti, H. J.
Freisleben, S. I. Wanandi, N. C. Siregar,
and M. Ikeda, “Chitosan exerts anticancer
activity through induction of apoptosis
and cell cycle arrest in oral cancer cells,”
vol. 56, no. 2, pp. 119–126, 2014.
[7] Y. Xu, Z. Wen, and Z. Xu, “Chitosan
Nanoparticles Inhibit the Growth of
Human Hepatocellular Carcinoma
Xenografts through an Antiangiogenic
Mechanism,” Anticancer Res., vol. 30, pp.
5103–5110, 2010.
[8] A. Nasti, N. M. Zaki, P. De Leonardis, S.
Ungphaiboon, P. Sansongsak, M. G.
Rimoli, and N. Tirelli, “Chitosan/TPP and
chitosan/TPP-hyaluronic acid
nanoparticles: Systematic optimisation of
the preparative process and preliminary
biological evaluation,” Pharm. Res., vol.
26, no. 8, pp. 1918–1930, 2009.
ISSN 2407-9189
 The 6th University Research Colloquium 2017
Universitas Muhammadiyah Magelang

[9] H. Zhang, M. Oh, C. Allen, and E. International Seminar on Knowledge

Kumacheva, “Monodisperse Chitosan Advancement, 2017.
Nanoparticles for Mucosal Drug Delivery [11] K. Park and Y. Yeo, “Microencapsulation
Monodisperse Chitosan Nanoparticles for Technology,” in Encyclopedia of
Mucosal Drug Delivery,” Biomacromol, Pharmaceutical Technology, Third., vol.
vol. 5, pp. 2461–2468, 2004. 4, J. Swarbrick, Ed. New York: Informa
[10] Sukmawati, A, Da’i, M, Yuliani, R, Healthcare, 2007, pp. 2315–2327.
Anggraeni, S.N, Wahyuningsih,
“Characterization of Chitosan
Nanoparticle containing Combination
Doxorubicin and Curcumin Analogue,” in

ISSN 2407-9189 143

 The 6th University Research Colloquium 2017
Universitas Muhammadiyah Magelang

LAMPIRAN

(a)

(b)

(c)

Gambar 1. Profil pelepasan DOX dan PGV-1 dari kitosan nanopartikel dengan variasi
konsentrasi kitosan 0.025% (a), 0.05% (b) dan 0.1% (c) (Terlampir)

144 ISSN 2407-9189