“Comparación de técnicas de detección de

sulfonamidas en leche de vaca”

MÁSTER EN CIENCIA E INGENIERÍA

AGRARIAS

-TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS-

Celia Librán Cuervas-Mons

 ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN
2. ARTÍCULOS
3. RESULTADOS
4. CONCLUSIONES
5. BIBLIOGRAFÍA

TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
CELIA LIBRÁN CUERVAS-MONS
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1. INTRODUCCIÓN
2. ARTÍCULOS
3. RESULTADOS
4. CONCLUSIONES
5. BIBLIOGRAFÍA

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 INTRODUCCIÓN
 SULFONAMIDAS (SAs)
Agentes antibacterianos

 LECHE → Alimento importante presente el la dieta de

niños y adultos.

 LÍMITES LEGALES:
• F.D.A. : 10 ppb (ng/mL)
• U.E. : Límite máximo de residuos= 100 µg/kg
• Sulfametazina →Tumores en la tiroides

 HPLC y GC/MS
Métodos ampliamente usados en el análisis de muestras
biológicas TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
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1. INTRODUCCIÓN
2. ARTÍCULOS
3. RESULTADOS
4. CONCLUSIONES
5. BIBLIOGRAFÍA

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 ARTÍCULOS
• Wenjuan Xu, et al. Journal of Chromatography A, 1217 (2010) 7198–
7207. Determination of sulfonamides in bovine milk with column-
switching high performance liquid chromatography using surface
imprinted silica with hydrophilic external layer as restricted access and
selective extraction material.
OBJETIVO

Determinación de presencia de sulfonamidas por

inyección directa de leche en el HPLC → Empleo de
precolumna RAM (“Restricted acces material”)

HPLC + 2 bombas. Detector UV (Abs(SAs)=268nm;

MAT. Y MÉTODOS

Abs(BSA)=280nm). Válvula 10 pos. Columna C18

(5μm) (250mm x 4.6mm). Inyector loop 100μL.
Flujo=1mL/min
Preparación muestra → Dilución de SAs stock en
disolvente A y después en leche (25, 100 y 500
ng/mL)
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 ARTÍCULOS
• Valerie B. Reeves. Journal of Chromatography B, 723 (1999) 127–
137. Confirmation of multiple sulfonamide residues in bovine milk by
gas chromatography–positive chemical ionization mass spectrometry.
OBJETIVO

Desarrollo de un método de confirmación de la presencia

SFAs en leche fortificada y concentración de los mismos
hasta una concentración de 10 ng/mL mediante GC-MS

GC: Columna capilar DB-1 30m x 0.25mm. Inyector split-splitless.

Tª inyector=240ºC. 1 µL muestra. Vel=32 m/s. Grad Tª: 1 min a
40ºC, 30ºC/min hasta 200ºC, 6ºC/min hasta 280ºC, 10 min a
MAT. Y MÉTODOS

280ºC.
MS: Interfase directa. Inyector automático split-splitless. Ionización
química positiva. Tª cuadrupolo=100ºC
Obtención muestras: Alimentación vacas y ordeño hasta alcanzar
40 ng/mL (Almacenamiento=-80ºC)
Preparación muestras: Separación de fases en la leche.
Evaporación de solventes. Extracción en fase sólida
TÉCNICAS de
CROMATOGRÁFICAS
ciclohexil. Derivatización con N1-metil-NCELIA
4-trifluoriacetil
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4. CONCLUSIONES
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 RESULTADOS

• HPLC-UV:
– Separación total de la seroalbúmina bovina →
Precolumna RA-MIP-GS
– Detección de todas las sulfonamidas → Empleo de 3
disolventes

• GC-MS:
– Buena recuperación de las sulfonamidas con
respecto a las estándars, excepto la sulfaquinoxalina
→ Columna DB-1
– Fractura iónica buena con repeticiones en todas las
muestras de m/z 190 y 222 → Anilina trifluroacilada.
Correcta derivatización
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 CONCLUSIONES

• Ambos métodos suponen una mejora

frente a métodos anteriores
• El método GC/MS requiere un
pretratamiento más laborioso
• El método GC/MS no da un buen
resultado para la sulfaquinoxalina

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2. ARTÍCULOS
3. RESULTADOS
4. CONCLUSIONES
5. BIBLIOGRAFÍA

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 BIBLIOGRAFÍA

• Wenjuan Xu, et al. Journal of Chromatography A, 1217

(2010) 7198–7207. Determination of sulfonamides in
bovine milk with column-switching high performance liquid
chromatography using surface imprinted silica with
hydrophilic external layer as restricted access and
selective extraction material.

• Valerie B. Reeves. Journal of Chromatography B, 723

(1999) 127–137. Confirmation of multiple sulfonamide
residues in bovine milk by gas chromatography–positive
chemical ionization mass spectrometry.

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